nghiên cứu phân lập nấm purpureocillium lilacinum để phòng trừ tuyến trùng bướu rễ meloidogyne sp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Ngô Thị Thu Hà NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP NẤM PURPUREOCILLIUM LILACINUM ĐỂ PHÒNG TRỪ TUYẾN TRÙNG BƯỚU RỄ MELOIDOGYNE SP LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Ngô Thị Thu Hà NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP NẤM PURPUREOCILLIUM LILACINUM ĐỂ PHÒNG TRỪ TUYẾN TRÙNG BƯỚU RỄ MELOIDOGYNE SP Chuyên ngành: VI SINH VẬT HỌC Mã số: 60 42 01 07 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN HỮU PHÚC Thành phố Hồ Chí Minh - 2013 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên em xin gửi lời cảm ơn đến TS Nguyễn Hữu Phúc, Th.s Dương Đức Hiếu, người thầy tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ em trình làm luận văn Em xin cảm ơn thầy cô môn vi sinh giảng dạy, dẫn cho em suốt trình học tập Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, anh chị làm việc tạiviện Sinh học Nhiệt Đới tạo điều kiện thuận lợi cho em thực đề tài Con xin gửi lời cảm ơn đến cha mẹ, người xin nuôi nấng, dạy dỗ động viên lúc gặp khó khăn Cuối em xin gửi lời cảm ơn đến bạn khoá vi sinh vật 22 em chia khó khăn trình học tập MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC BẢNG CHỮ CÁI VIẾT TẮT MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nhiệm vụ Đối tượng nghiên cứu Thời gian địa điểm nghiên cứu Ý nghĩa khoa học đề tài nghiên cứu 7 Ý nghĩa thực tiễn đề tài nghiên cứu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung nấm Purpureocillium lilacinum 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Lịch sử nghiên cứu 1.1.3 Đặc điểm sinh học 1.1.4 Vai trò Purpureocillium lilacinum 10 1.1.5 Tình hình ứng dụng nấm Purpureocillium lilacinum phòng trừ tuyến trùng Việt Nam giới .12 1.2 Tuyến trùng sần rễ Meloidogyne spp 13 1.2.1 Đặc trưng sinh học 13 1.2.2 Các loài quan trọng .15 1.2.3 Cơ sở phòng trừ tuyến trùng 15 Các yếu tố ảnh hưởng lên khả sinh trưởng nấm sợi 22 1.3.1 Các phương pháp nuôi cấy nấm sợi .22 1.3.2 Môi trường nuôi cấy 24 1.3.3 Các hợp chất cung cấp nguồn cacbon 24 1.3.4 Các hợp chất cung cấp nguồn nitrogen 24 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 Vật liệu 25 2 Thiết bị dụng cụ 25 Hóa chất 25 2 Môi trường 26 2.4.1 Môi trường phân lập, giữ giống nấm Purpureocillium lilacinum (môi trường potato glucose agar-PGA ) 26 2.4.2 Môi trường khảo sát ảnh hưởng pH, nguồn nitơ, nguồn cacbon, đến sinh khối số lượng bào tử nấm Purpureocillium lilacinum (môi Czapek-Dox Broth) 26 2.4.3 Môi trường quan sát vi thể nấm Purpureocillium lilacinum (môi trường YEA) 26 Các phương pháp nghiên cứu 26 2.5.1 Phương pháp phân lập 26 2.5.2 Phương pháp giữ giống thạch nghiêng 27 2.5.3 Phương pháp quan sát hình thái định danh nấm sợi 28 2.5.4 Phương pháp định danh nấm sợi sinh học phân tử 28 2.5.5 Phương pháp lọc tĩnh thu tuyến trùng 29 2.5.6 Phương pháp đếm tuyến trùng .29 2.5.7 Phương pháp định danh tuyến trùng hình thái 30 2.5.8 Phương pháp đánh giá khả kiểm soát tuyến trùng nấm Purpureocillium lilacinum điêù kiện in vitro 31 2.5.9 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy lên sinh khối số lượng bào tử nấm Purpureocillium lilacinum 32 2.5.10 Phương pháp xác định sinh khối theo Egorov 33 2.5.11 Phương pháp xác định số lượng tế bào vi sinh vật 33 2.5.11 Các phương pháp khác 33 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 34 3.1 Phân lập định danh chủng nấm có khả diệt tuyến trùng 34 3.1.1 Phân lập 34 3.1.2 Định danh 34 3.2 Kết định danh tuyến trùng 38 3.3 Kết khảo sát khả kiểm soát tuyến trùng Meloidogyne sp diều kiện in vitro 40 3.3.1 Kết khảo sát khả kiểm soát tuyến trùng loài Meloidogyne sp điều kiện in vitro 40 3.3.2 Kết thử nghiệm in vitro nấm Purpureocillium lilacinum trứng tuyến trùng Meloidogyne sp chuối 42 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng điều kiện môi trường đến sinh khối số lượng bào tử nấm Purpureocillium lilacinum 45 3.4.1 Ảnh hưởng pH 45 3.4.2 Ảnh hưởng nguồn Nitơ nguồn Cacbon .49 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 PHỤ LỤC 64 BẢNG CHỮ CÁI VIẾT TẮT C: cacbon N: nitơ PGA: potato glucose agar MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Việt Nam nước có nông nghiệp lâu đời Hàng năm cung ứng nhiều mặt hàng nông sản cho nhu cầu thương mại nước xuất sang nước Các mặt hàng nông sản xuất tiêu biểu như: gạo, cà phê, cao su hay mặt hàng nông sản trái với sản lượng lớn góp phần làm giàu cho kinh tế đất nước Tuy nhiên, sản lượng nông sản thu hoạch hàng năm không ổn định có thất thoát Nguyên nhân gây thực trạng ảnh hưởng khí hậu, thiên tai đặc biệt dịch bệnh Dịch bệnh trồng tác nhân sinh học gây như: virut, nấm, tuyến trùng số đối tượng vấn đề bệnh tuyến trùng gây chưa nghiên cứu nhiều dẫn đến việc phòng bệnh gặp nhiều khó khăn Tác hại tuyến trùng gây thực vật thường tương đối nhẹ, nhiên mật độ ký sinh lớn chúng gây hại nghiêm trọng, chí chúng gây chết thực vật Tuyến trùng ký sinh làm giảm 12,5 % sản lượng trồng thiệt hại tuyến trùng ký sinh trồng nông nghiệp ước tính hàng trăm tỷ USD năm Tuyến trùng thực vật sống ký sinh tất phần thực vật phát triển, hoa, lá, hạt, thân rễ, rễ nơi gặp nhiều nhóm tuyến trùng ký sinh Tiểu biểu nhóm tuyến trùng nốt sưng Meloidogyne spp ký sinh rễ số cà phê, hồ tiêu, cà chua, cà rốt gây tổn thất đáng kể đặc biệt mặt hàng nông sản mạnh cà phê, hồ tiêu Để phòng trừ bệnh tuyến trùng rễ đối tượng trồng có biện pháp như: dùng tác nhân học, hoá học, sinh học Trong số biện pháp biện pháp phòng trừ tuyến trùng tác nhân sinh học dùng loại vi khuẩn Pasteuria penetrans, nấm (Nematoctonus concurrens N haptocladus, Purpureocillium lilacinum ) quan tâm Xuất phát từ thực tế tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu phân lập nấm Purpureocillium lilacinum để phòng trừ tuyến trùng bướu rễ Meloidogyne sp.” Mục tiêu đề tài - Góp phần nghiên cứu khả phòng trừ tuyến trùng bướu rễ Meloidogyne sp.bởi tác nhân sinh học nấm Purpureocillium lilacinum Nhiệm vụ - Phân lập nấm Purpureocillium lilacinum từ côn trùng bị bệnh - Phân loại đến loài chủng nấm Purpureocillium lilacinum - Phân loại đến giống tuyến trùng Meloidogyne sp - Thử nghiệm in vitro khả kiểm soát tuyến trùng Meloidogyne sp nấm Purpureocillium lilacinum - Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến phát triển sinh khối hình thành bào tử nấm Purpureocillium lilacinum Đối tượng nghiên cứu - Chủng nấm Purpureocillium lilacinum phân lập từ côn trùng bị bệnh - Tuyến trùng Meloidogyne sp phân lập từ đất rễ chuối bị bệnh tuyến trùng Thời gian địa điểm nghiên cứu Địa điểm: Công ty TNHH Gia Tường, chi nhánh số đại lộ Độc Lập, khu công nghiệp Sóng Thần 1, huyện Dĩ An , tỉnh Bình Dương Viện sinh học nhiệt đới, Số 9/621 Xa Lộ Hà Nội, KP 6, P Linh Trung, Quận Thủ Đức, TP.HCM Thời gian thực hiện: từ tháng 10/2012 đến tháng 9/2013 Ý nghĩa khoa học đề tài nghiên cứu Góp phần tìm hiểu đặc điểm sinh học,điều kiện nuôi cấy khả diệt tuyến trùng bướu rễ Meloidogyne sp Purpureocillium lilacinum Ý nghĩa thực tiễn đề tài nghiên cứu Trên sở kết thu trình khảo sát khả phòng trừ tuyến trùng bướu rễ chủng vi sinh Purpureocillium lilacinum từ ứng dụng vào sản xuất chế phẩm đặc trị tuyến trùng bướu rễ Meloidogyne sp cho trồng CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung nấm Purpureocillium lilacinum 1.1.1 Vị trí phân loại − Giới (Kingdom) : Nấm − Ngành (Division): Ascomycota − Lớp (Class): Sordariomycetes − Bộ (Order): Hypocreales − Họ (Family): Ophiocordycipitaceae − Chi (Genus) : Purpureocillium (theo Luangsa-ard, Hywel-Jones, Houbraken & Samson (2011)) − Loài: Purpureocillium lilacinum (Thom) Luangsa-ard, Hou- braken, Hywel-Jones & Samson (2011) Tên đồng nghĩa: Paecillium Luangsa-ard, Hywel-Jones & Samson (2007); Penicillium lilacinum Thom (1910); Penicillium amethystinum Wehmer (1923) Spicaria rubidopurpurea Aoki (1941) Purpureocillium lilacinum (Thom) Samson (1974) Purpureocillium chi nấm họ Ophiocordycipitaceae Chi đơn loài có chứa loài Purpureocillium lilacinum, loài nấm sợi hoại sinh phổ biến Nó đựơc phân lập từ loạt môi trưòng sống bao gồm đất trồng đất bỏ hoang, rừng, đồng cỏ, sa mạc, trầm tích cửa sông, bùn cặn nứơc thải côn trùng Nó đựơc tìm thấy trứng giun tròn, tuyến trùng nang Ngoài đựơc phát thường xuyên vùng rễ nhiều loại trồng Chúng phát triển phạm vi nhiệt độ rộng từ 8-38 oC, nhiệt độ sinh trưỏng tối ưu khoảng 26-30 oC Nó có khả chịu đựng pH rộng 2-10 phát triển nhiều loại bề mặt khác Purpureocillium lilacinum đựơc cho có tiềm sử dụng để kiểm soát phát triển tuyến trùng rễ [16],[19] CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận - Từ 30 mẫu côn trùng bị nhiễm nấm bệnh thu chủng nấm A Đã nghiên cứu đặc điểm sinh học phân loại đến loài chủng A, kết luận chủng thuộc loài Purpureocillium lilacinum - Từ chủng tuyến trùng thu rễ chuối bị bệnh tuyến trùng tách định loại đến giống tuyến trùng Meloidogyne sp - Đã tiến hành thử nghiệm in vitro khả kiểm soát tuyến trùng Meloidogyne sp chủng nấm Purpureocillium lilacinum với tỉ lệ lây nhiễm 10 bào tử/ cá thể thấy tỉ lệ lây nhiệm sau ngày thấp khoảng 11% sau ngày lây nhiễm đạt 31% - Đã tiến hành thử nghiệm in vitro trứng tuyến trùng Meloidogyne sp chủng nấm Purpureocillium lilacinum với tỉ lệ lây nhiễm 105 bào tử/ 100 trứng tuyến trùng với tỉ lệ trứng không nở 70% số tỉ lệ trứng không nở ký sinh nấm Purpureocillium lilacinum 25% - Bước đầu khảo sát ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến sinh khối số lượng bào tử nấm Purpureocillium lilacinum: - Với thay đổi giá trị ph từ 6, 6.5, 7, 7.5 ảnh hưởng nhiều đến sinh khối số lượng bào tử nấm Purpureocillium lilacinum - Với thay đổi nguồn Nitơ: sinh khối nấm Purpureocillium lilacinum đạt giá trị cao nuôi cấy nguồn Nitơ cao nấm men (0.714022g/ 100ml) Số lượng bào tử nấm Purpureocillium lilacinum đạt giá trị cao sử dụng nguồn Nitơ KNO3 (3525926 bào tử/ ml) - Với thay đổi nguồn Cacbon: sinh khối nấm Purpureocillium lilacinum đạt giá trị cao nuôi cấy nguồn cacbon saccharose (0.929056 g/ 100ml) đạt số lượng bào tử cao (24200000 bào tử/ ml) 4.2 Kiến nghị - Tiếp tục khảo sát khả kiểm soát tuyến trùng Meloidogyne sp nấm Purpureocillium lilacinum điều kiện nhà lưới để làm sở ứng dụng 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Ngọc Châu, Nguyễn Hữu Thanh (2000), Động vật chí Việt Nam - Tuyến trùng ký sinh thực vật, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 7, tr 36-37, tr 210-211 Nguyễn Ngọc Châu (2003), Tuyến trùng thực vật sở phòng trừ, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 10-15 Trần Thị Minh Định (2011), Nghiên cứu khả sinh kháng sinh chủng Aspergillus sp phân lập từ rừng ngặp mặn Cần Gìơ, Luận văn Thạc sĩ Sinh Học, Trường ĐH Sư Phạm TP HCM, tr 35-37 Đặng Văn Giáp (1997), Phân tích liệu khoa học chương trình MS-EXCEL, Nhà xuất Giáo Dục Dương Đức Hiếu (2008), Khảo sát khả kiểm soát tuyến trùng bướu rễ hồ tiêu từ bánh dầu neem phối trộn với compost nấm T harzianum, Báo cáo nghiệm thu, tr 4-10 Vũ Triệu Mân (2007), Giáo trình bệnh đại cương, Trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội, tr Trần Thị Thanh (2007), Công nghệ vi sinh, Nhà xuất Giáo Dục, tr 45-60 Trần Thanh Thuỷ (1999), Hướng dẫn thực hành vi sinh vật học, Nhà xuất Giáo Dục, tr 54-56, tr 70-71 Tiếng Anh Alamgir KHAN, Keith L WILLIAMS and Helena Nevalainen (2003), “Testing the nematophagous biological control strain Purpureocillium lilacinum 251 for paecilotoxin production”, Elsevier, pp 107-111 10 Alamgir KHAN, Keith L WILLIAMS and Helena K.M NEVALAINEN (2006), “Control of purpureocillium lilacinumant-parasitic nematodes by Paecilomyces lilacinus and Monacrosporium lysipagum in pot trials”, Biocontrol 51, pp 643-658 11 Chen Guan Pau, Chan Teck Stephen Leong, Sing King Wong, Lily Eng, Make Jiwan, Franklin Ragai Kundat, Zakry Fitri Bin AB Aziz, Osumanu Haruna Ahmed and Nik Muhamamad Majid (2012), “Isolation of indigenous strains of Purpureocillium lilacinum with antogonistic activity aganinst Meloidogyne incognita”, International jounal of Agriculture & Biology, 14: pp 197-203 60 12 Christos I Rumbos and Sebastian Kiewnk (2006), “Effect of purpureocillium lilacinumantspecies on persistence of Purpureocillium lilacinum strain 251 in soil and on root colonization by the fungus”, Purpureocillium lilacinumant and Soil 283, pp 25-31 13 CMPT Mycology Purpureocillium lilacinumus Program (2011), “Sinus aspiratePaecilomyces species (lilacinus)”, Challenge 1109-3 14 F.A Zaki and D.S Bhatuyến trùngi (1990), “In vivo parasitism of Meloidogyne javanica by an oviparasitic fungus, Purpureocillium lilacinum”, Departermant of Nematology, Haryana Agricultural University – Hisar 125004, India, 18: pp 141-143 15 Hajer Regaieg, Aurelio Ciancio, Najet Horrrigue Raouani, Gaetano Grrasso, Laura Rosso (2010), “Effects of culture filtrates from the nematophagous fungus, Verticillium leptobactrum on viability of the root-knot nematode Meloidogyne incognita”, Springer Science and Business Media B.V 16 Imran A Siddiqui, Shanmin A Qureshi, V Sultana, S Ehteshamul-Haque and Abdul Ghaffar (2000), “Biological control of rot-root knot disease compurpureocillium lilacinumex of tomato”, Kluwer Academic Publishers, Purpureocillium lilacinumant and Soil 227, pp 163-169 17 Jian Xin Deng, Narayan Chandra Paul, Huyn Kyu Sang, Ji Hye Lee, Young Soo Hwang and Seung Hun Yu (2012), “Frist report on isolation of Penicillium adametzioides and Purpureocillium lilacinum from decayed fruit of Cheongsoo grapes in Korea”, The Korean Society of Mycology 40(1), pp 66-70 18 Li Gao and Xing Zhong Liu (2010), “Sporulation of several biocontrol fungi as affected by carbon and nitrogen sources in a two-stage cultivation system”, The Journal of Microbiology, Vol 48, No 6, pp 767-770 19 M Nasr Esfahari and B Ansari Pour (2006), “The effects of Purpureocillium lilacinum on the pathogenesis of Meloidogyne javanica and tomato purpureocillium lilacinumant growth parameters, Iran Agricultural Research”, Vol 24, No and Vol 25, No 20 Nic Smol (2007), Lectura book of the Postgraduate Unternational Nematology CourseGeneral techniques, Ghent University 21 Poornima Sharma and Rakesh Pandey (2009), “Bological control of root-knot nematode; Meloidogyne incognita in the medicinal purpureocillium lilacinumant; Withania sominifera 61 and the effect of biocontrol agents on purpureocillium lilacinumant growth”, African Journal of Agricultural Research, Vol 4(6), pp 564-567 22 Xiaoli Liu, Xizhuo Wang, Laifa Wang, Qinglong Shu, Zhihua Cao (2013), “Generatiom of green fluorenscent protein vector transfomed Purpureocillium lilacinum strains”, Academic journals, Vol 7(13), pp 1114-1120 23 Yuzuru Mikami, Katsukiyo Yazawa, Kazutaka Fukushima, Tadashi Arai, Shunichi Udagawa and Robert A Samson (1989), “Paecilotoxin production in clinical or terrestrial isolates of Purpureocillium lilacinum strains”, Kluwer Academic Publishers, Mycopathologia 108, pp 195-199 24 Zaneta Fiedler and Danuta Sasnowska (2007), “Nematophagous fungus Purpureocillium lilacinum (Thom) Samson is also a biological agent for control of greenhouse insects and mite pests”, Biocontrol 52, pp 547-558 Web 25.htuyếntrùngp://tusach.thuvienkhoahoc.com/wiki/Tuy%E1%BA%BFn_tr%C3%B9ng_h%E1 %BA%A1i_th%E1%BB%B1c_v%E1%BA%ADt 26.htuyến trùngp://hydrology1.nmsu.edu/teaching/soil698/Student_Reports/lightmicroscope/light_microscope/microscopic-microorganisms.html\ 27.htuyến trùngp://agronovida.blogspot.com/2011/04/el-cultivo-de-lasmandarinas_1178.htmlhtuyến trùngp://www.agirpourlabiodiversite.fr/spip.php?article24 28.htuyếntrùngp://zipcodezoo.com/Photographers/Agroscope%20FAL%20Reckenholz%20Arc hives.asp 29.htuyến trùngp://www.vipesco.com.vn/tintucchitiet.php?Idtin=6338 30.htuyến trùngp://www.khuyennongtphcm.com/?mnu=4&s=600012&id=2785 31.htuyếntrùngp://www.apsnet.org/edcenter/intropp/lessons/Nematodes/Pages/RootknotNemat ode.aspx 32.htuyến trùngp://www.nature.com/nbt/journal/v26/n8/fig_tab/nbt.1482_F1.html 33.http://vegetablemdonline.ppath.cornell.edu/Images/Carrots/Root-Knot/Root-KnotCycle.jpg 62 34.htuyến trùngp://tapchitre.com/kham-pha/ngam-cac-loai-nam-ky-quai-tu-kinh-hien-vi20120926031033229.tct 35.htuyến trùngp://thunderhouse4-yuri.blogspot.com/2012/06/paecilomyces-lilacinus.html 36.htuyến trùngp://agriviet.com/home/threads/5705-Cong-Ty-Tnhh-Nong-Sinh 37.htuyến trùngp://www.gaanvn.com/news.php5?NewsID=111 38.htuyến trùngp://www.greenmaxagrotech.com/paecilomyces-lilacinus.html 39.htuyến trùngp://trade.indiamart.com/search.mp?search=paecilomyces+lilacinus 40.htuyến trùngp://agriviet.com/home/threads/5705-Cong-Ty-Tnhh-Nong-Sinh 41.htuyến trùngp://www.doctor-obregon.com/siteimages/paecilomyces1.jpg 42.htuyếntrùngp://origin-ars.els-cdn.com/content/image/1-s2.0 S0038071710001422-gr1.jpg 63 PHỤ LỤC Kết xử lý số liệu phần mềm Stargraphic Ảnh hưởng pH đến sinh khối nấm Purpureocillium lilacinum Summary Statistics Count Average Standard deviation pH6 1.00877 0.204854 pH6.5 0.99335 0.31488 pH7 0.83671 0.227628 pH7.5 1.04954 0.37276 Total 36 0.97209 0.28736 Stnd kurtosis pH6 -0.973109 pH6.5 -1.22625 pH7 -0.342502 pH7.5 -1.09884 Total -1.12136 ANOVA Table Source Sum of Squares Between 0.235116 groups Within groups 2.65504 Total (Corr.) 2.89015 Multiple Range Tests Coeff of variation 20.3074% 31.6986% Minimum Maximu Range Stnd m skewness 0.7486 1.2953 0.5467 0.331128 0.669 1.456 0.787 0.459758 27.2051% 0.5422 1.2245 0.6823 0.386119 35.5164% 29.5609% 0.5895 0.5422 1.6044 1.6044 1.0149 0.374244 1.0622 1.15181 Df Mean F-Ratio Square 0.0783721 0.94 P-Value 0.4307 32 0.0829699 35 Method: 95.0 percent LSD Count Mean pH7 pH6.5 pH6 pH7.5 Contrast 9 Homogeneou s Groups 0.83671 X 0.99335 X 1.00877 X 1.04954 X ph6 - ph6_5 ph6 - ph7 ph6 - ph7_5 ph6_5 - ph7 ph6_5 ph7_5 ph7 - ph7_5 Sig Difference +/- 64 Limits 0.0154111 0.276587 0.172056 0.276587 0.276587 0.0407778 0.156644 0.276587 0.276587 0.0561889 -0.212833 0.276587 * denotes a statistically significant difference Ảnh hưởng pH đến số lượng bào tử nấm Purpureocillium lilacinum Summary Statistics Count Average Số lượng bào tử _pH Số lượng bào tử _pH 6.5 Số lượng bào tử _pH Số lượng bào tử _pH 7.5 Total 27 27 27 27 108 Standard deviation 1.36593E 1.51168E7 1.06741E 8.44387E6 1.21481E 1.20962E7 1.24296E 1.33039E7 1.22278E 1.23512E7 Stnd skewness Số lượng bào tử _pH 3.65545 Số lượng bào tử _pH 2.14632 6.5 Số lượng bào tử _pH 3.01232 Số lượng bào tử _pH 2.11917 7.5 Total 6.30008 ANOVA Table Source Sum of Df Squares Between 1.21776E14 groups Within groups 1.62013E16 104 Total (Corr.) 1.63231E16 Multiple Range Tests Coeff of variation 110.67% Minimum Maximu Range m 2.E6 5.16E7 4.96E7 79.1063% 2.6E6 99.5726% 800000 4.6E7 4.52E7 107.034% 1.E6 3.9E7 101.009% 800000 5.16E7 Stnd kurtosis 2.06987 -0.679829 1.34052 -0.794559 3.04224 Mean F-Ratio Square 4.0592E13 0.26 P-Value 0.8536 1.55782E1 107 Method: 95.0 percent LSD Số lượng bào tử _pH 6.5 Số lượng bào tử _pH Số lượng bào tử _pH 7.5_ Số lượng bào tử _pH Count Mean Homogeneous Groups 27 27 27 27 1.06741E7 1.21481E7 1.24296E7 1.36593E7 X X X X 65 2.66E7 4.E7 2.4E7 5.08E7 Contrast Sig Difference +/- Limits Số lượng bào tử _pH 6_- Số lượng bào tử 2.98519E 6.73633E _pH 6.5 6 Số lượng bào tử _pH 6- Số lượng bào tử 1.51111E 6.73633E _pH 6 Số lượng bào tử _pH 6- Số lượng bào tử 1.22963E 6.73633E _pH 7.5 6 Số lượng bào tử? _pH 6.5- Số lượng bào tử 6.73633E bào t? _pH 1.47407E 6 Số lượng bào tử _pH 6.5 - Số lượng bào tử 6.73633E _pH 7.5 1.75556E 6 Số lượng bào tử _pH - Số lượng bào tử -281481 6.73633E _pH 7.5 * denotes a statistically significant difference Ảnh hưởng nguồn N đến sinh khối nấm Purpureocillium lilacinum Summary Statistics Count Average Standard Coeff of Minimum Maximum deviation variation cao nấm 0.71402 0.0916788 12.8398% 0.5246 0.8193 men (NH4)2SO4 0.17781 0.0262158 14.7436% 0.1444 0.2261 KNO 0.18297 0.0710664 38.8388% 0.104 0.3298 NaNO3 0.14806 0.0515726 34.8307% 0.0812 0.2445 Total 36 0.30571 0.247348 80.907% 0.0812 0.8193 cao nấm men (NH4)2SO4 KNO3 NaNO3 Total Stnd kurtosis 0.699889 -0.107829 0.740693 -0.0145503 -0.381397 66 Range 0.2947 Stnd skewness -1.27799 0.0817 0.582444 0.2258 1.5441 0.1633 0.637726 0.7381 2.91598 ANOVA Table Source Sum of Squares Between 2.00692 groups Within groups 0.13442 Total (Corr.) 2.14134 Multiple Range Tests Df Mean Square 0.668975 cao nấm men (NH4)2SO4 cao nấm men KNO3 cao nấm men NaNO3 (NH4)2SO4- KNO3 P-Value 159.26 0.0000 32 0.00420061 35 Method: 95.0 percent LSD Count Mean NaNO3 0.14806 (NH4)2SO4 0.17781 KNO3 0.18297 cao nấm 0.71402 men Contrast F-Ratio Homogeneous Groups X X X X Sig Difference +/Limits * 0.536211 0.062234 * 0.531044 0.062234 * 0.565956 0.062234 0.062234 0.0051666 (NH4)2SO4- NaNO3 0.0297444 0.062234 KNO3 - NaNO3 0.0349111 0.062234 * denotes a statistically significant difference Ảnh hưởng nguồn N đến số lượng bào tử nấm Purpureocillium lilacinum Summary Statistics Count Average Standard Coeff of Minimum Maximum deviation variation cao nấm 27 3.22222E 1.41349E6 43.8669% 1.E6 5.8E6 men KNO3 27 3.52593E 2.01697E6 57.2038% 800000 7.8E6 NaNO3 27 3.40741E 1.67376E6 49.1213% 1.2E6 8.E6 67 Range 4.8E6 Stnd skewness 0.268604 7.E6 0.854775 6.8E6 1.58345 (NH4)2SO4 27 Total 108 814815 1.05965E6 2.74259E 1.92087E6 130.047% 70.0386% 200000 200000 3.8E6 8.E6 Stnd kurtosis -1.0372 cao nấm men KNO3 -1.00715 NaNO3 0.406629 (NH4)2SO4 3.54731 Total -1.10586 ANOVA Table Source Sum of Squares Between 1.35053E14 groups Within groups 2.59751E14 Total (Corr.) 3.94804E14 Multiple Range Tests Df Mean F-Ratio Square 4.50177E1 18.02 104 2.49761E1 107 Method: 95.0 percent LSD Count Mean (NH4)2SO4 27 cao nấm 27 men NaNO3 27 KNO3 Contrast 27 Homogeneous Groups 814815 X 3.22222E X 3.40741E X 3.52593E X Sig Difference +/Limits -303704 852957 cao nấm men KNO3 cao nấm men NaNO3 cao nấm men * (NH4)2SO4 KNO3 - NaNO3 KNO3 - (NH4)2SO4 * NaNO3 * -185185 852957 2.40741E6 852957 118519 852957 2.71111E6 852957 2.59259E6 852957 68 P-Value 0.0000 3.6E6 7.8E6 4.4659 2.0689 (NH4)2SO4 * denotes a statistically significant difference Ảnh hưởng nguồn C đến sinh khối nấm Purpureocillium lilacinum Summary Statistics Count Average Standard Coeff of Minimum Maximum deviation variation Glucose 0.757578 0.108659 14.343% 0.632 0.9686 saccharose 0.929056 0.221359 23.8263% 0.6926 1.4147 tinh bột 0.624344 0.115439 18.4896% 0.4827 0.7597 Total 27 0.770326 0.197394 25.6248% 0.4827 1.4147 Stnd kurtosis Glucose 0.16557 saccharose 1.44244 tinh bột -1.41498 Total 3.37441 ANOVA Table Source Sum of Squares Between 0.420014 groups Within groups 0.593063 Total (Corr.) 1.01308 Multiple Range Tests Df Mean Square 0.210007 Contrast P-Value 8.50 0.0016 24 0.024711 26 Method: 95.0 percent LSD Count Mean tinh bột glucose saccharose F-Ratio Homogeneous Groups 0.624344 X 0.757578 X 0.929056 X Sig Difference +/Limits * -0.171478 0.152942 glucose saccharose glucose - tinh 0.133233 0.152942 bột saccharose - tinh * 0.304711 0.152942 bột * denotes a statistically significant difference 69 Range Stnd skewness 0.3366 1.02536 0.7221 1.59533 0.277 -0.261205 0.932 2.71398 Ảnh hưởng nguồn C đến số lượng bào tử nấm Purpureocillium lilacinum Summary Statistics Count Average Standard Coeff of Minimu Maximu Range deviation variation m m glucose 27 3.22222 1.41349E6 43.8669% 1.E6 5.8E6 4.8E6 E6 saccharose 27 2.42E7 7.37397E6 30.4709% 1.14E7 3.7E7 2.56E7 tinh bột 27 1.27926 4.99491E6 39.0454% 4.8E6 2.12E7 1.64E7 E7 Total 81 1.34049 1.0044E7 74.9273% 1.E6 3.7E7 3.6E7 E7 ANOVA Table Source Sum of Df Mean F-Ratio P-Value Squares Square Between 5.95609E15 2.97805E1 109.86 0.0000 groups Within groups 2.11439E15 78 2.71075E1 Total (Corr.) 8.07048E15 80 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean glucose 27 tinh bột 27 saccharose 27 Homogeneo us Groups 3.22222E6 X 1.27926E7 2.42E7 X X Contrast Sig Difference +/- Limits glucose * -2.09778E7 2.82109E saccharose glucose - tinh bột * -9.57037E6 2.82109E saccharose - tinh * 1.14074E7 2.82109E bột * denotes a statistically significant difference 70 Stnd skewness 0.268604 0.377893 -0.195049 2.31962 Kết định danh nấm Purpureocillium lilacinum 71 72 73 [...]... sở phòng trừ tuyến trùng Mục tiêu phòng trừ là: giảm mật độ quần thể tuyến trùng ban đầu và giảm số cây trồng bị nhiễm tuyến trùng 15 Nội dung phòng trừ tuyến trùng bao gồm: i) Giết tuyến trùng bằng làm mất nguồn dinh dưỡng để tuyến trùng chết đói; ii) Giết trực tiếp tuyến trùng bằng hóa chất hoặc bất kỳ một kỹ thuật khác được áp dụng trước khi gieo trồng; iii) Sử dụng các hóa chất một cách hợp lý để. .. soát tuyến trùng cái Meloidogyne sp bởi nấm Purpureocillium lilacinum trong điều kiện in vitro − Tiến hành nuôi cấy huyền phù bào tử nấm Purpureocillium lilacinum (105 bào tử/ml) trên các đĩa Petri môi trường PGA − Sau 5 ngày nuôi cấy nấm Purpureocillium lilacinum trên môi trường PGA tiến hành cấy tuyến trùng cái Meloidogyne sp (5 tuyến trùng cái/ 1 đĩa PGA) vào mép khuẩn lạc nấm Purpureocillium lilacinum. .. của một tác nhân phòng trừ sinh học 20 Hình 1.8: Nấm bẫy tuyến trùng Nấm nội ký sinh tuyến trùng: đây là các loài nấm có khả năng dính và xâm nhập vào cơ thể tuyến trùng để ký sinh gây bệnh cho tuyến trùng Một số loài nấm như Nematoctonus spp., Meria coniospora đã được thử nghiệm và cho kết quả nhất định Có thể phân biệt 2 nhóm nấm nội ký sinh là: • Nấm nội ký sinh cơ thể tuyến trùng sản xuất ra các... xenopurpureocillium lilacinumax Tuy nhiên, hiện tại rất ít kết quả áp dụng thực tế 21 Hình 1.9: Nấm nội ký sinh tuyến trùng Nematoctonus sp [34] • Nấm nội ký sinh trứng tuyến trùng có khả năng ký sinh tuyến trùng cái và trứng của một số tuyến trùng bào nang và tuyến trùng sần rễ trước khi ấu trùng nở ra Tuy nhiên, những nấm này không có khả năng giết ấu trùng dạng hoạt động trong đất Hầu hết trứng tuyến. .. nhiều loại nấm (theo Fukushima et al 1983 a,b) Tuy nhiên trong cơ chế kiểm soát tuyến trùng không có sự tham gia của loại độc tố này [9] 11 1.1.5 Tình hình ứng dụng nấm Purpureocillium lilacinum trong phòng trừ tuyến trùng ở Việt Nam và trên thế giới a Các sản phẩm diệt tuyến trùng từ nấm Purpureocillium lilacinum trên thế giới Một số chế phẩm diệt tuyến trùng được sản xuất từ nấm Purpureocillium lilacinum. .. 3.1 Phân lập và định danh chủng nấm có khả năng diệt tuyến trùng 3.1.1 Phân lập Chúng tôi tiến hành phân lập chủng nấm từ các mẫu xác côn trùng bị nhiễm nấm theo mục 2.5.1 Tiến hành định danh sơ bộ bằng các phương pháp ở mục 2.5.3 và căn cứ vào đặc điểm hình thái, màu sắc khuẩn lạc chúng tôi phân lập được 1 chủng nấm Hình 3.1: Khuẩn lạc nấm Purpureocillium lilacinum 3.1.2 Định danh Sau khi phân lập. .. của tuyến trùng Meloidogyne javanica bị nhấn chìm bởi sợi nấm Purpureocillium lilacinum b Sản xuất một số enzym Nhiều enzym đựơc sản xuất bởi Purpureocillium lilacinum đã đựơc nghiên cứu như: serine protease một loại enzym chống lại trứng của tuyến trùng Meloidogyne hapurpureocillium lilacinuma: protease và chitinase có thể làm suy yếu vỏ trứng của tuyến trùng [16],[19] c Kháng khuẩn Purpureocillium lilacinum. .. lạc nấm Purpureocillium lilacinum (hình bên trái), cấu tạo vi thể nấm Purpureocillium lilacinum (hình bên phải) [36] 1.1.4 Vai trò của Purpureocillium lilacinum a Tác nhân kiểm soát tuyến trùng Purpureocillium lilacinum là một loài nấm bông phổ biến với phạm vi phân bố rộng trên toàn thế giới (Samson, 1974) và đã được thử nghiệm rộng rãi nhất cho sự kiểm soát của bệnh sần rễ và u nang tuyến trùng Purpureocillium. .. soát tuyến trùng bởi nấm Purpureocillium lilacinum trong điêù kiện in vitro a Phương pháp đánh giá khả năng kiểm soát sự nở của trứng tuyến trùng Meloidogyne sp bởi nấm Purpureocillium lilacinum Cách tiến hành: − Chuẩn bị huyền phù trứng tuyến trùng: • Dùng kim mũi mác tách lấy khối trứng tuyến trùng cho vào ống nghiệm chứa nước cất Cho thêm 4-5 ml NaClO 1,05% vào lắc trong vòng 5 phút Sau đó để yên... khuẩn, nấm, Ricketuyến trùngsia, đơn bào, Tardigrade, Tuberlaria, Enchytraeid, ve bét, côn trùng và tuyến trùng ăn thịt Vì vậy, nghiên cứu sử dụng thiên địch 18 của tuyến trùng có tầm quan trọng rất lớn trong việc làm giảm mật độ quần thể để hạn chế tác hại do tuyến trùng ký sinh gây ra cho cây trồng Có 2 dạng phòng trừ sinh học (PTSH): PTSH nhân tạo bằng cách nhân nuôi các tác nhân sinh học để đưa ... trừ tuyến trùng bướu rễ Meloidogyne sp. ” Mục tiêu đề tài - Góp phần nghiên cứu khả phòng trừ tuyến trùng bướu rễ Meloidogyne sp. bởi tác nhân sinh học nấm Purpureocillium lilacinum Nhiệm vụ - Phân. .. tượng nghiên cứu - Chủng nấm Purpureocillium lilacinum phân lập từ côn trùng bị bệnh - Tuyến trùng Meloidogyne sp phân lập từ đất rễ chuối bị bệnh tuyến trùng Thời gian địa điểm nghiên cứu Địa điểm:... TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Ngô Thị Thu Hà NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP NẤM PURPUREOCILLIUM LILACINUM ĐỂ PHÒNG TRỪ TUYẾN TRÙNG BƯỚU RỄ MELOIDOGYNE SP Chuyên ngành: VI SINH VẬT HỌC Mã số: 60 42 01