2. Thiết bị và dụng cụ
2.5.8. Phương pháp đánh giá khả năng kiểm soát tuyếntrùng bởi nấm Purpureocillium
a. Phương pháp đánh giá khả năng kiểm soát sự nở của trứng tuyến trùng
Meloidogyne sp. bởi nấm Purpureocillium lilacinum
Cách tiến hành:
− Chuẩn bị huyền phù trứng tuyến trùng:
• Dùng kim mũi mác tách lấy khối trứng tuyến trùng cho vào ống nghiệm chứa nước cất. Cho thêm 4-5 ml NaClO 1,05% vào lắc trong vòng 5 phút. Sau đó để yên cho các mãnh vở lắng xuống trong 30 giây.
• Dùng pipet hút phần trong ở phía trên của ống nghiệm chuyển lên ray lọc kích thước 15 μm. Sau đó dùng nước cất vô trùng rửa sạch NaClO.
• Chuyển ray lọc chứa trứng tuyến trùng vào đĩa Petri chứa dung dịch ampicilline 0.1% để khử trùng trong 10 phút. Sau đó dùng nước cất vô trùng rửa lại [14]. Bố trí thí nghiệm: lô thí nghiệm: 1ml huyền phù bào tử nấm Purpureocillium lilacinum
(105 bào tử/ml) + 0.5ml huyền phù trứng tuyến trùng (khoảng 100 trứng/ 0.5ml) cho vào ống nghiệm.
− Lô đối chứng: 1ml nước cất vô trùng + 0.5ml huyền phù trứng tuyến trùng (khoảng 100 trứng/ 0.5ml). Tiến hành thí nghiệm trong thời gian 1 tuần.
− Thu kết quả: quan sát và đếm số lượng trứng không nở, IJ2 chết, IJ2 sống trong các đĩa đếm tuyến trùng dưới kính lúp sôi nổi. Đối với trứng tuyến trùng bị ký sinh bởi nấm Purpureocillium lilacinum dùng kim tiêm 500cc thu ngẫu nhiên 100 trứng tuyến trùng chuyển lên lam nhuộm bằng xanhmethylen loffer và quan sát bằng kính hiển vi
[10], [14].
− Cách đánh giá kết quả:
Tỉ lệ trứng không nở= số trứng không nở/ (trứng + IJ2)X 100 Tỉ lệ IJ2 chết= IJ2 chết/ tổng IJ2x100
b. Phương pháp đánh giá khả năng kiểm soát tuyến trùng cái Meloidogyne sp.
bởi nấm Purpureocillium lilacinum trong điều kiện in vitro
− Tiến hành nuôi cấy huyền phù bào tử nấm Purpureocillium lilacinum (105 bào tử/ml) trên các đĩa Petri môi trường PGA.
− Sau 5 ngày nuôi cấy nấm Purpureocillium lilacinum trên môi trường PGA tiến hành cấy tuyến trùng cái Meloidogyne sp. (5 tuyến trùng cái/ 1 đĩa PGA) vào mép khuẩn lạc nấm Purpureocillium lilacinum. Tiến hành thí nghiệm trong thời gian 4 ngày.
− Sau mỗi ngày thu kết quả thí nghiệm bằng cách dùng nước cất vô trùng cho vào các đĩa Petri rồi dùng kim mũi mác thu tuyến trùng cái. Quan sát sự lây nhiễm nấm
Purpureocillium lilacinum trên tuyến trùng cái bằng cách làm tiêu bản nhuộm với xanh metylen loffer và soi dưới kính hiển vi [10].