thực hiện bộ tiêu bản cố định tập đoàn volvox

TÓM LƯỢC Trong thời gian từ tháng 10/2012 đến 05/2013, tiến hành thử nghiệm các nghiệm thức trữ mẫu, nhuộm mẫu, khử nước,… tại phòng thí nghiệm thực vật bộ môn Sinh học khoa Sư phạm trườ

NĂM 2013

CẢM TẠ

Với vốn kiến thức còn hạn hẹp nên trong quá trình thực hiện đề tài, tôi gặp rất nhiều khó khăn Tuy nhiên, những khó khăn đó dần dần được khắc phục và vượt qua với với sự giúp đỡ tận tình của quý Thầy Cô cùng các bạn trong bộ môn

Sư phạm Sinh học đã giúp tôi hoàn thành tốt đề tài luận văn này Để đáp lại sự giúp

đỡ đó, tôi xin chân thành gửi lời cảm tạ đến:

Cô Phạm Thủy Bích Thủy đã tận tình hướng dẫn và cung cấp nhiều tài liệu giúp tôi hoàn thành tốt đề tài này

Cô Phùng Thị Hằng đã tận tình giúp đỡ và cho nhiều ý kiến giúp tôi hoàn thành đề tài

Cán bộ phòng thí nghiệm thực vật đã giúp đỡ và tạo mọi điều kiện tốt cho tôi trong suốt thời gian làm luận văn

Quý Thầy Cô đã truyền đạt kiến thức quý báo cho tôi suốt bốn năm học qua Anh Nguyễn Phú Cường và tất cả các bạn học cùng khóa đã giúp đỡ động viên tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Bạn Trần Thị Ngọc Giàu, Phạm Thị Bích Ngọc đã giúp đỡ tôi trong quá trình thu mẫu

Cha Mẹ đã ủng hộ cả tinh thần lẫn vật chất giúp cho con vượt qua những khó khăn trong học tập cũng như trong cuộc sống

Rất mong quý Thầy Cô, bạn bè và Cha Mẹ nhận lời cảm tạ chân thành và đầy thân ái này

Cần Thơ, ngày 29 tháng 04 năm 2013

Sinh viên thực hiện

Sơn Thị Mỹ Nương

TÓM LƯỢC

Trong thời gian từ tháng 10/2012 đến 05/2013, tiến hành thử nghiệm các nghiệm thức trữ mẫu, nhuộm mẫu, khử nước,… tại phòng thí nghiệm thực vật bộ môn Sinh học khoa Sư phạm trường Đại học Cần Thơ, đã tìm ra được quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi cố định tập đoàn tảo lục Volvox, nhuộm mẫu với thuốc nhuộm Methyl Green (1 giờ 30 phút), rửa lại với nước cất (30 giây), khử nước qua các nồng độ cồn, n- butanol (30 giây), làm trong mẫu với dung dịch xylen (30 giây), dán mẫu bằng Baume canada pha trong xylen (1 : 1) Hoàn thành được 30 tiêu bản hiển vi đạt yêu cầu về hình thức và nội dung, tiêu bản bắt màu tương đối đẹp, quan sát rõ các cấu trúc của tập đoàn Volvox: các tập đoàn con, cầu nối nguyên sinh chất, đồng thời thực hiện được bộ mẫu ngâm gồm 5 lọ 50 ml tập đoàn Volvox trong formol 5%

MỤC LỤC

CẢM TẠ i

TÓM LƯỢC ii

MỤC LỤC iii

DANH SÁCH HÌNH vi

CHƯƠNG I GIỚI THIỆU 1

1 Đặt vấn đề 1

2 Mục tiêu đề tài 1

CHƯƠNG I LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2

1 Đặc điểm chung của ngành tảo lục 2

1.1 Tổ chức cơ thể 2

1.2 Cấu tạo tế bào 2

1.3 Sinh sản 3

1.4 Phân loại 3

1.5 Volvox 4

2 Kỹ thuật thực hiện tiêu bản hiển vi cố định 7

2.1 Cố định mẫu 7

2.2 Nhuộm mẫu 8

2.3 Khử nước 8

2.4 Dán lamelle 9

3 Tình hình nghiên cứu 9

CHƯƠNG III PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11

1 Phương tiện 11

1.1 Mẫu vật 11

1.2 Thiết bị và dụng cụ 11

1.2.1 Thiết bị 11

1.2.2 Dụng cụ 11

1.3 Vật tư và hóa chất 12

1.3.1 Vật tư 12

1.3.2 Hóa chất 12

2 Phương pháp 13

2.1 Thu mẫu 13

2.2 Trữ mẫu 13

2.3 Nhuộm mẫu 14

2.4 Khử nước 15

2.5 Làm trong mẫu 16

2.6 Dán mẫu 17

2.7 Dán nhãn 18

CHƯƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19

1 Thu mẫu và trữ mẫu 19

2 Nhuộm mẫu 19

3 Khử nước 21

4 Làm trong mẫu 23

5 Dán mẫu 23

6 Quy trình tổng quát thực hiện tiêu bản cố định 24

7 Tổng số tiêu bản đã thực hiện 25

8 Một số hình ảnh từ tiêu bản hiển vi cố định 26

8.1 Hình ảnh từ các nghiệm thức thử nghiệm 26

8.2 Hình ảnh thu được từ qui trình thực hiện tiêu bản 29

CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 31

1 Kết luận 31

2 Đề nghị 31

TÀI LIỆU THAM KHẢO 32

DANH SÁCH BẢNG

Bảng 1: Nghiệm thức nhuộm mẫu với thuốc nhuộm Methyl Green và Fast green 15

Bảng 2: Các nghiệm thức khử nước sau khi nhuộm mẫu 16

Bảng 3: Các nghiệm thức làm trong mẫu bằng xylen 16

Bảng 5: Kết quả nghiệm thức nhuộm mẫu với thuốc nhuộm Methyl Green và Fast Green 20

Bảng 6: Kết quả các nghiệm thức khử nước mẫu nhuộm 22

Bảng 7: Kết quả nghiệm thức làm trong mẫu bằng xylen 23

Bảng 8: Quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi cố định tập đoàn Volvox với thuốc nhuộm Methyl Green 24

DANH SÁCH HÌNH

Hình 1: Cấu tạo của Volvox 5

Hình 2: Leodorina californica 5

Hình 3: Một phần tập đoàn Volvox globator với các tế bào sinh sản hữu tính 6

Hình 4: Sinh sản vô tính và hữu tính noãn giao ở Volvox 7

Hình 5: Volvox năm 2013 ở vật kính 10X 11

Hình 6: Volvox năm 2004 ở vật kính 4X 11

Hình 7: Nơi thu mẫu ở Huyện Phong Điền – Thành Phố Cần Thơ 13

Hình 8: Cách đậy lamelle 17

Hình 9: Hình ảnh tiêu bản hiển vi cố định sau khi hoàn thành 18

Hình 10: Bộ mẫu ngâm Volvox 26

Hình 11: Volvox trữ năm 2004 nhuộm với Fast Green 26

Hình 12: Volvox thu năm 2013 nhuộm với Methyl Green trong thời gian 1 giờ 30 phút 26

Hình 13: Volvox năm 2004 nhuộm với Fast Green dễ bị vỡ khi tiến hành qui trình thực hiện tiêu bản 27

Hình 14: Volvox năm 2013 nhuộm với Fast Green 27

Hình 15: Volvox bị đen do khô xylen trước khi dán Baume Canada 27

Hình 16: Volvox năm 2004 nhuộm với Methyl Green trong thời gian 5 phút 27

Hình 17: Volvox bắt màu rất nhạt với thuốc nhuộm Methyl Green ở thời gian 20 phút 28

Hình 18: Volvox bắt màu nhạt với thuốc nhuộm Methyl Green ở thời gian 60 phút……… 28

Hình 19: Volvox nhuộm với Methyl Green ở thời gian 20 phút mất màu sau 2 tháng……28

Hình 20: Volvox nhuộm với Methyl Green ở thời 60 phút mất màu sau 2 tháng 28

Hình 21: Volvox bị nhòe màu do khử nước chưa sạch 29

Hình 22: Volvox bị teo 29

Hình 23: Cấu tạo tập đoàn Volvox ở vật kính 10X 29

Hình 24: Cầu nối nguyên sinh chất ở vật kính 40X 29

Hình 25: Các tộc đoàn con của Volvox 30

hình thức vô tính và hữu tính Đặc biệt tảo lục Volvox có lối sống tập đoàn, tập

đoàn hình cầu có kích thước 0,5 - 2 mm, phân bố hầu hết trong các ao hồ Ngày nay, khi nền công nghiệp ngày càng phát triển, đất nông nghiệp càng thu hẹp, thì

khả năng tìm thấy Volvox ngày càng hiếm Hơn nữa, tiêu bản cố định có nhiều ưu

điểm như có thể giữ mẫu trong thời gian dài, quan sát rất tiện lợi và không mất thời gian để thực hiện tiêu bản nhiều lần Bên cạnh đó, do nhu cầu sinh viên năm cuối cần được trang bị một số kiến thức về kỹ thuật hiển vi, để khi ra trường biết cách chủ động chuẩn bị mẫu vật, phục vụ cho bài giảng lý thuyết cũng như các bài thí nghiệm thực hành sinh học ở trường phổ thông Với những ý nghĩ trên đã thôi thúc

tôi chọn đề tài: “THỰC HIỆN BỘ TIÊU BẢN CỐ ĐỊNH TẬP ĐOÀN VOLVOX”

2 Mục tiêu đề tài

Với đề tài “Thực hiện bộ tiêu bản cố định tập đoàn Volvox” nhằm bổ sung

cho phòng thí nghiệm thực vật lượng tiêu bản hiển vi cố định, phục vụ cho các sinh viên học tốt các học phần phân loại thực vật, thực vật học và giảng dạy lý thuyết của giáo viên Đề tài được thực hiện với những mục tiêu sau:

Thực hiện bộ mẫu ngâm Volvox khoảng 5 lọ

Tìm ra quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi cố định Volvox

Hoàn thành được ít nhất 30 tiêu bản hiển vi cố định

CHƯƠNG II

LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU

1 Đặc điểm chung của ngành tảo lục

Ngành tảo lục là một ngành tảo lớn nhất, đa dạng nhất trong tất cả các ngành tảo hiện nay đã biết Cho đến nay người ta đã tìm thấy trong ngành này có khoảng

8000 loài, phần lớn là sống trong nước ngọt, còn ở nước mặn chủ yếu là những chi

sau: Enteromorpha, Ulva, Ulothrix, Cladophora, Valonia, Boergessenia, Caulerpa, Bryopsis, Codium…Sự khác biệt giữa tảo lục với các tảo khác ở chỗ cơ thể luôn

luôn có màu xanh lục và chất dự trữ là tinh bột (bắt màu với iod) (Đặng Minh Quân, 2011)

1.1 Tổ chức cơ thể

Tản có cơ thể đơn bào, tập đoàn hay đa bào hình sợi đơn, phân nhánh hoặc hình bản mỏng, có khi có cấu tạo cộng bào (tản hình ống thông, trong chứa nhiều nhân) (Hoàng Thị Sản, 1999)

1.2 Cấu tạo tế bào

Vách tế bào thường bằng celluloz, pectin hóa nhầy, một số ít dạng nguyên thủy nhất mới là tế bào trần (màng ngoài là màng nguyên sinh chất), lạp có nhiều hình dạng khác nhau: hình chuông, hình phiến, hình hạt, hình sao nhiều cạnh, đai vành móng ngựa (hình nhẫn), xoắn lò xo, mắt lưới…, sắc tố (pygment) chủ yếu là diệp lục tố a, diệp lục tố b, carotene, xanthophin (với 10 loại chất khác nhau), trong

đó diệp lục tố a,b chiếm ưu thế so với các sắc tố phụ trội khác nên tản bao giờ cũng

có màu xanh lục Chất dự trữ là tinh bột quanh hạch lạp nằm trong lục lạp, đôi khi chất dự trữ là những giọt dầu (giọt lipit) Tế bào tảo lục chứa một hay nhiều nhân, nhân thường nằm giữa khoang túi dịch bào, hay sát bên thành lớp nguyên sinh Một

số tảo lục đơn bào hoặc là tộc đoàn có thể di động được ở trạng thái dinh dưỡng nhờ có roi, còn các tảo lục khác chỉ có bào tử hay giao tử mới có roi di động được (Đặng Minh Quân, 2011)

1.3 Sinh sản

Tảo lục sinh sản sinh dưỡng bằng phân đôi tế bào (đơn bào) bằng khúc tản (dạng sợi), sinh sản vô tính bằng động bào tử, hình thành trong túi bào tử Động bào tử có cấu tạo rất giống với trùng roi: hình quả lê, có roi, mắt và không bào co rút Khi rời khỏi túi bào tử, các động bào tử bơi lội một thời gian trong nước, sau định cư lại, mất roi, tự tạo lấy màng và nảy mầm thành cơ thể mới (Lương Ngọc Toản và Võ Văn Chi, 1978)

Sinh sản hữu tính bằng cả ba hình thức: đẳng giao, dị giao và noãn giao, một

số sinh sản theo kiểu tiếp hợp giữa hai tế bào sinh dưỡng Hợp tử hình thành thường tiết ra màng bọc, sau một thời gian nghỉ, nảy mầm và phân chia giảm nhiễm cho ra tản mới (Hoàng Thị Sản, 1999)

Tảo lục có quan hệ với tảo mắt vì động bào tử và chất màu của chúng giống nhau (Hoàng Thị Sản, 1999)

* Đặc điểm chung của lớp tảo lục

Tản có thể là sống đơn bào, sống đơn độc hay tộc đoàn; hình sợi (chia nhánh hoặc không), hình phiến mỏng (Đặng Minh Quân, 2011)

Lạp thường có hình chuông ở các tản đơn bào (ở Chlamydomonas, Chlorella) hay hình sao (ở Asterococus) với hạch lạp ở giữa tế bào và nhiều nhánh

ra ngoại biên; hoặc lạp hình phiến quấn tròn, hình chiếc nhẫn (ở Ulva); hình sợi tiếp giao cùng nhau (ở Oedonium) Mỗi lạp đều có hạch lạp trong lạp Lạp ở đây là

lục lạp, có cơ cấu chi noãn cơ thực vật (Đặng Minh Quân, 2011)

Nhân: tế bào có một hoặc nhiều nhân (Đặng Minh Quân, 2011)

Sinh sản vô tính bằng động bào tử có hai hoặc bốn tiêm mao, và bất động bào tử, hình thành từ tế bào dinh dưỡng thông thường hay ở túi chuyển hóa với số

lượng ít hoặc cả một tập đoàn kiểu Volvox, gồm rất nhiều bào tử trong một túi (bào

tử phòng) (Đặng Minh Quân, 2011)

Sinh sản hữu tính bằng hình thức thụ tinh giữa các giao tử đực, cái giống nhau về hình dạng, kích thước (đồng giao), giống nhau về hình dạng nhưng khác kích thước (dị giao) hay giữa tinh trùng với trứng (noãn giao) Hợp tử trực tiếp phát sinh từ cơ thể mới (sporophyte), nhưng thường chuyển thành bào tử nghỉ (Zygospore), sau thời gian nằm im sẽ phát sinh hoặc lại hình thành bào tử động rồi sau đó mới phát sinh thành cá thể mới (Đặng Minh Quân, 2011)

Hình 1: Cấu tạo của Volvox

http://www.jochemnet.de/fiu/bot4404/BOT4404_28.html

Tập đoàn có sự phân cực, ở cực chuyển động tập trung các cá thể dinh dưỡng kích thước nhỏ, có điểm mắt và hai roi có cơ quan tử chuyển vận Cả tập đoàn chuyển vận theo hướng này Ở cực đối diện, cực sinh sản, tập trung các cá thể sinh sản có cấu tạo khác nhau gồm các thể sinh sản vô tính và các cá thể sinh sản hữu tính (Đặng Ngọc Thanh, Trương Quang Học và ctv, 2001)

Hình 2: Leodorina californica

(theo Phạm Hoàng Hộ, 1967)

http://rainer-weiher.de/bio/gruenalgen.htm

Sự chuyên hóa ở đây rõ rệt vì khi sinh dục, tất cả các tế bào nhỏ của lớp ngoài của tộc đoàn không thụ, mà chỉ có những tế bào to thường chôn ở trong, thụ và cho giao tử hay bào tử Vậy không thụ, không phân cắt được, các tế bào lớp ngoài phải chết đi, và vì rong

do lớp tế bào này làm ra, nên rong cũng chết theo (Đặng Minh Quân, 2011)

Volvox sinh sản vô tính khi gặp điều kiện thuận lợi, tế bào làm nhiệm vụ sinh sản

phân chia hình thành bản rồi uốn cong lại hình thành tộc đoàn hình cầu con Tộc đoàn

Volvox mẹ có thể chứa tới 10 ngàn tộc đoàn con (Đặng Minh Quân, 2011) Cá thể sinh sản

vô tính thường có kích thước lớn (20- 30µm) (Đặng Ngọc Thanh và Trương Quang Học và ctv, 2001) Khi màng tộc đoàn mẹ vỡ tộc đoàn con chui ra ngoài (Đặng Minh Quân, 2011)

Các tế bào sinh sản hữu tính cũng có cấu tạo tương tự như các cá thể sinh sản vô tính Các cá thể này sinh ra các giao tử đực và cái Giao tử đực được hình thành do sự phân cắt nhiều lần của các cá thể sinh sản (khoảng 100 giao tử từ một

cá thể) và có dạng dài với hai roi ở đỉnh Giao tử cái là một tế bào sinh dục có kích thước lớn (60- 75µm), nằm đơn độc và có màu xanh nâu Giao tử đực và cái (của cùng hay không cùng một tập đoàn) kết hợp thành hợp tử và được bao bọc trong một lớp vỏ chắc Khi một tập đoàn mẹ chết vỡ ra, hợp tử thoát ra ngoài và phát triển thành tập đoàn mới (Đặng Ngọc Thanh, Trương Quang Học và ctv, 2001)

Hình 3: Một phần tập đoàn Volvox globator với các tế bào sinh sản hữu tính

1 giao tử cái, 2 giao tử đực

(theo Đặng Ngọc Thanh, 1980)

http://medbiol.ru/medbiol/dog/00127ae8.htm

Hình 4: Sinh sản vô tính và hữu tính noãn giao ở Volvox

(theo Thái Trần Bái và Nguyễn Văn Khang, 2009)

http://www.biocyclopedia.com/index/general_zoology/representative_types.php

* Ý nghĩa của tảo Volvox trong thiên nhiên

Tảo lục là nguồn thức ăn và nguồn cung cấp oxygen cho động vật trong thủy vực nước ngọt, mặn Tảo lục rất dễ tạo nên hiện tượng hoa nước như các giống loài

Chlorella, chlamydomonas, Ankistrodesmus, Scenedesmus hoa do tập đoàn Eudorina, Volvox làm nước có màu lục hay Dunaliella làm nước màu đỏ Cedogonium, Spirogyra, Zygnema, Hydrodictyon phát triển mạnh làm cản trợ hoạt

động của cá tôm Tảo phát triển mạnh trong ruộng lúa làm hại lúa (Lam Mỹ Lan, 2000)

Volvox sống trôi nổi trên bề mặt môi trường nước làm thức ăn cho các động

vật nhỏ sống trong nước và những động vật nhỏ này cùng với tảo là nguồn thức ăn chủ yếu cho cá Trong quá trình quang hợp tảo tiết oxi vào nước, nhờ đó mà cá và các động vật khác ở nước có thể hô hấp được (Lương Ngọc Toản, 1977)

2 Kỹ thuật thực hiện tiêu bản hiển vi cố định

2.1 Cố định mẫu

Cố định là giữ nguyên cấu trúc của mô cũng như của tế bào bằng cách giết chết tức khắc đối tượng thực vật đang sống Qua đó mà hình thái cấu tạo của nó ít

bị thay đổi nhất, còn giữ được trong tình trạng gần với lúc sống nhất Một số nguyên tắc khi cố định mẫu vật:

- Mẫu vật cố định phải thật tươi, làm ngay sau khi cắt khỏi cây (thực vật bậc cao) hoặc tách khỏi nơi sống của nó (thực vật bậc thấp như tảo, nấm… )

- Dung dịch cố định cần đúng nồng độ và thể tích (thể tích dung dịch cố định gấp 50- 100 lần thể tích vật cố định)

- Dùng dung dịch formol 4 - 5% để làm chất cố định hoặc ngâm các nguyên liệu thực vật Thời gian cố định thay đổi tùy theo mẫu vật, từ 30 phút (đối với tảo nấm) đến 24 giờ (đối với thực vật bậc cao) (Trần Công Khánh, 1980)

2.2 Nhuộm mẫu

khác nhau, cách nhuộm khác nhau, nhằm làm nổi rõ một số thành phần cấu tạo của từng tế bào hoặc của từng mô trong cơ thể thực vật Một số phương pháp nhuộm màu (Trần Công Khánh, 1980):

- Nhuộm đơn: Chỉ dùng một loại chất màu

- Nhuộm tăng dần: vật nhuộm đặt vào dung dịch màu cho đến khi màu sắc đạt yêu cầu thì dừng lại, sau đó rửa hết chất màu dính rồi quan sát

- Nhuộm giảm dần: vi phẫu được nhuộm màu quá đậm so với yêu cầu, sau đó dùng chất lỏng thích hợp để tẩy bớt màu thừa cho đến khi màu sắc vừa đúng thì dừng lại

2.3 Khử nước

Sau khi nhuộm mẫu, nếu cần làm tiêu bản cố định thì phải khử nước trên mẫu vật bằng cách ngâm các lame có dán mẫu vào các dung dịch sau (Trần Công Khánh, 1980):

Xylen - Cồn tuyệt đối Thời gian 5 phút

Xylen (lần thứ hai) Thời gian 10 phút

3 Tình hình nghiên cứu

Năm 1972, Phạm Hoàng Hộ với quyển “Tảo học”, ông đã mô tả đặc điểm hình thái, cấu tạo cũng như phân loại của các loài tảo Năm 1980, cuốn sách “Thực tập động vật không xương sống” do Đặng Ngọc Thanh (chủ biên) trình bày hình thái, giải phẫu ở mức độ cơ thể, cơ quan các động vật đại diện các nhóm phân loại

từ thấp tới cao trong hệ thống phân loại động vật, trong đó có đề cập đến Volvox

Dương Đức Tiến và Võ Hành, năm 1997, đã viết cuốn sách “Tảo nước ngọt Việt Nam” đi sâu phân loại các loài trong bộ tảo lục (Chlorococales) đồng thời nói lên được mặt tích cực và tiêu cực của tảo đối với môi trường sống

Kính hiển vi là một thiết bị dùng để quan sát các vật thể có kích thước nhỏ

bé mà mắt thường không thể quan sát được bằng cách tạo ra các hình ảnh phóng đại của vật thể đó Muốn qua sát được dưới kính hiển vi chúng ta phải thực hiện tiêu bản hiển vi Với tiêu bản hiển vi tạm thời, dễ thực hiện, quan sát ngay sau khi thực hiện tiêu bản, tuy nhiên có hạn chế không thể lưu giữ lại, tốn thời gian thực hiện tiêu bản để quan sát lại nếu cần Vì thế, một số tác giả đã đưa ra phương pháp thực hiện tiêu bản hiển vi cố định hay còn gọi là tiêu bản hiển vi “vĩnh viễn”, trong

đó có Trần Công Khánh, năm 1980, đã viết “Kỹ thuật hiển vi”, quyển sách đã mô

tả từng bước để thực hiện được một tiêu bản hiển vi cố định Từ đó, đề tài tiêu bản hiển vi cố định đã thu hút người người nghiên cứu thực hiện trên nhiều đối tượng khác nhau Ở trường Đại học Cần Thơ, có một số đề tài luận văn tốt nghiệp đại học tiến hành trên đối tượng tảo như năm 2001, Nguyễn Thị Thanh Tú thực hiện luận

văn tốt nghiệp với đề tài “Thực hiện tiêu bản phương pháp dán vài đại diện trùng

với đề tài “Thực hiện tiêu bản hiển vi cố định một số giống thuộc hai ngành tảo lam (Cyanophyta) và tảo lục (Chlorophyta) nước ngọt”,…

CHƯƠNG III

PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

1 Phương tiện

1.1 Mẫu vật

Mẫu tảo tộc đoàn Volvox được trữ trong dung dịch Formol 5% của phòng thí

nghiệm thực vật từ năm 2004 và mẫu thu được trên địa bàn thành phố Cần Thơ

2 Phương pháp

2.1 Thu mẫu

Volvox sống trôi nổi ở các thủy vực nước ngọt, trong các ao nuôi ếch, cá …

Dùng lưới phiêu sinh vớt trên mặt nước vào buổi sáng lúc trời nắng trong khoảng thời gian từ 9 giờ đến 11 giờ Kéo lưới phiêu sinh nhiều lần để được mật độ tảo nhiều nhất

Thu mẫu ở các quận, huyện trên địa bàn thành phố Cần Thơ với số lượng khoảng 30 ao, cụ thể:

- Các ao trong trường Đại học Cần Thơ

- Các ao nuôi cá giống ở các quận huyện như Ninh Kiều, Bình Thủy, Cái Răng, Phong Điền, Ô Môn

Các mẫu thu được trữ trong lọ có nắp đậy và ghi ngày thu nơi thu

Hình 7: Nơi thu mẫu ở Huyện Phong Điền – Thành Phố Cần Thơ

2.2 Trữ mẫu

Sau khi thu, mẫu được mang về phòng thí nghiệm, tiến hành làm tiêu bản

tạm thời quan sát dưới kính hiển vi, nếu thấy có xuất hiện tảo lục Volvox thì cố định và trữ trong formol 5%

Theo dõi thời gian mất màu của lục lạp để từ đó đưa ra thời gian sử dụng mẫu là tốt nhất để tiến hành thí nghiệm