B O Y TE TRl/ễNG DAI HOC Dl/OC H NễI KHĩCfNG THI MAI LAN NGHIấN CUfU IMH HUONG CĩA NHIấT Dễ DấN FLAVONOID TRONG HOẩ HOA KHO LUN TễT NGHIấP Dl/OC SI KHO 1998 - 2003 NgUdi huụng dan : TS PHNG HO BẽNH TS Bễ NGOC THANH Nai t!u(c hiờn : Bễ MON DUDC HOC CO TRUYEN Bễ MON HO DUOC Thdi gian ợhi(c hiờn: 3/2003 -5/2003 t t c m an Trong quõ trợnh thuc hiờn v hon thnh khoõ luõn tụt nghiờp em d õ nhõn duac su huụng dan, chợ bõo, gụp y v tao dieu kiờn thuõn lai cỹa nhiờu thõy cụ giõo, dõc biờt l su huụng dõn truc tiờ'p cỹa hai thdy giõo: TS Phựng Ho Binh TS Dụ Ngoc Thanh Vụi long biột an sõu sac em xin cdm an cõc thdy! Em cỹng xin trõn cdm an cõc thdy giõo, cụ giõo v cõn bụ cụng nhõn viờn bụ mon Duac hoc co truyờn, bụ mon Hoõ duac d õ tao dieu kiờn thuõn lai v giỷp d õ em hon thnh khoõ luõn tụt nghiờp ny.l H Nụi, thõng nõm 2003 Sinh viờn Khuang Thi M Lan MUC LUC T rang DAT VAN Dấ Phnl TễNGQUAN 1.1 Phuang phõp hoõ chộ 1.1.1 Dai cuong vộ phuang phõp hoõ chộ 1.1.2 Anh huang cỹa nhiờt dụ dộn vi thuoc 1.2 Vi thuoc hoố hoa 1.2.1 Thnh phn hoõ hoc 1.2.2 Kiờm nghiờm hoõ hoc 1.2.3 Tõc dung diroc l 1.2.4 Tõc dung theo YDHCT 1.2.5 Cõc phirong phõp chộ biộn hoố hoa v nhựng biộn 12 dụi vờ tõc dung sinh hoc Phn THlTC NGHIấM V KẫT QU 15 2.1 Nguyờn lieu v phucmg phõp thuc nghiờm 15 2.1.1 Nguyờn lieu 15 2.1.2 Thiột bi nghiờn cuu 15 2.1.3 Phuomg phõp nghiờn ciợu 15 2.2 Kột quõ thuc nghiờm v nhõn xột 17 2.2.1 Chuan bi mõu 17 2.2.2 Chiột xuõt 19 2.2.3 Dinh tinh 2.2.4 Khõo sõt nh huong cựa nhiờt dụ dộn Rutin v 20 22 Quercetin chuan bng phuang phõp nghiờn cuu 2.2.5 Dinh luong 2.3 Bn luõn 25 31 2.3.1 Cõmquan 31 2.3.2 Anh hucmg cỹa nhiờt dụ dộn thnh phõn Flavonoid hoố hoa Phn KẫT LUN V Dẫ XUAT 35 3.1 Kột luõn 35 3.2 Dờ xuõt 36 CHĩ V K HIấU VIẫT TT CPNC: Chộ pham nghiờn cou dd: Dung dich HPLC: Sõc k long hiờu nõng q/s: Quan sõt VD: Vf du VTMP: Vitamin P YDHCT: Y duoc hoc co truyộn DT VAN DE Trong quõ trùnh che biờn, nhiờt dụ õnh huụng truc tiờp dộn thnh phõn hoõ hoc, dõn dộn su thay doi tac dung cỹa vi thuoc Vợ võy, sir dung nhiờt dụ mot cõch hỗfp l doi vụi tựng vi thuoc eu thộ l yộu tụ quan lm tng hiờu lue diờu tri v tng dụ an ton cho ngudi dựng Rutin - mot thnh phn chỹ yộu v dụng vai tro quan dộn tac dung v cụng dung cỹa hoố hoa Tuy nhiờn, mot sụ cụng trinh nghiờn cuu dõ chỷng minh rang, quõ trinh chộ biờn hoố hoa, nhiờt dụ cụ õnh huụng rat Ion dộn hm luong rutin Thộo Pham Xuõn Sinh, Hong Kim Huyờn v CS cho thõy rng hm luong rutin giõm dõn tự dang sụng (34,7%), dang vng (28,9%), dang chõy (18,5%) SV Cụng Viờt Hõi nghiờn cuu õnh huụng cỹa nhiờt dụ dộn Rutin hoố hoa dõ chỹng minh rng: + Nhiờt dụ sõy cng cao, hm luong rutin cng giõm + Cựng mue nhiờt dụ (tự 200C trụ lờn) thụi gian sõy cng di rutin cng giõm Dộ cụng trùnh nghiờn cuu duỗfc dõy dỹ v hon thiờn hem, tụi dõ thuc hiờn de ti Nghiờn curu õnh hirong cỹa nhiờt dụ dộn flavonoid hoố hoa voi cõc mue tiờu: + Tiộp tue khõo sõt õnh huụng cỹa nhiờt dụ dộn Quercetin + Dõnh giõ moi liờn quan giỹa su biộn thiờn hm luong Rutin vụi hm luong Quercetin mõu nghiờn cỹu s PHAN TễNG QUAN 1.1 PHliONG PHP HO CHấ ( phuang phõp chộ biộn chợ dựng lua) 1.1.1 Dai cirang vố phirong phõp hoõ chộ Khõi niờm L phuang phõp chộ biộn sir dung su tõc dụng cỹa nhiờt dụ truc tiộp hoõc giõn tiộp qua võt lieu trung gian cõc mỹc nhiờt dụ khõc Nhiờt dụ hoõ chộ: ~ 80 - ~ 1000C Nhiờt dụ sao: ~ 80- 250C Nhiờt dụ nung: ~ 500 - 1000C + Sao qua: Nhiờt dụ < 100C dụi vụi hu hột cõc vi thuục + Sao vng: Vi thuục "Cõu truc mụng manh" nhiờt dụ tir 110C/15' - 140C/20' [11.15] Vi thuục "Cõu truc Cellulose" nhiờt dụ tự 120C/25',30' - 140C/20' [11.15] Vi thuục "Cõu truc tinh bot" nhiờt dụ saol50 - 160C [11,15] + Sao chõy: Vi thuục "Cõu truc mụng manh" nhiờt dụ 200-210C/20' [11,15] Vi thuục "Cõu truc Cellulose" nhiờt dụ 200 - 210C/20',30' [11,15] Vi thuục "Cõu truc tinh bot" nhiờt dụ tự 210 - 220C/20',30' [11,15] Hoõ chộ l phuang phõp duac su dung rụng rõi dụi vụi hu hột cõc vi thuục, hoõ chộ thuc chõt l su dung nhiờt dụ v thụi gian khõc nhõm thay doi tmh vi tự dụ thay doi cụng nõng chỹ tri cỹa vi thuục Tu thuục vo mue dich su dung m chon phuang phõp khõc nhau: - Lm khụ, on dinh thnh phn thuục trõnh mục mot -> bõo quõn thuục: qua t = 50-80C [2,17] V VD: Hoố hoa qua nhm ỷc chộ su hoat dụng enzym glycosidase trõnh thu phõn Rutin >Quercetin v Rutinose - Truyờn nhiờt dụng dờu v trõnh kột dmh thuục: cõch cõt, cõch hoat thach hoõc cap, nhiờt dụ 200 - 220C [2,17] - Tõng mựi thdm, tõng tõc dung kiờn t: cõch gao, cõch cõm hoõc vng, nhiờt dụ 100 - 140 C, theo quan diởm cỷa YDHCT mu vng quy vo tang t phỹ vi [2,17] VD: Hong k, bach truõt, hoi son, d ợ - Tõng tõc dung cõm mõu: den, chõy nhiờt dụ 180 - 240C, mu den quy vo tang thõn, theo quan diởm YDHCT "Den chợ huyờt" [2,17] VD: Trõch bõch diờp, hoố hoa, ngõi diờp - Giõm dục tmh, giõm tõc dung quõ manh cỹa vi thuục: Dựng nhiờt dụ cao dộ phõn hu cõc chat gõy dục cỹa thuục (Crotonin/ ba dõu, Strychnin/ mõ tiờn) [2,17] VD: Mõ tiờn cõch cõt nhiờt dụ 200 - 250 C, rõn dõu lac, dõu vựng 200 C Ba dõu den nhiờt dụ 200 - 240 C - Phõn chia thuục: Nung thuục nhiờt dụ cao, nhiờt luong Ion, phõ vụ cõu truc co hoc cỹa thuục nhu phuong phõp vụ co hoõ [2,17] VD: chờ' cỹu khong, mõu lờ - Tinh chờ- thuục: Mot s thuục cụ nguụn goc khoõng võt, hoat chat l chõt vụ co cụ tmh chõt thõng hoa, nhiờt dụ cao, hoat chõt thõng hoa, tõch khụi tap chõt khõc [2,17] VD: Luu hunh, thu ngõn, arsen 1.1.2 nh hirụng cỹa nhiờt dụ den vi thuoc - Trong quõ trinh chộ bien, tiờu chuan dõnh giõ sn phõm dira trờn cõm quan: mu sõc, mựi vi, khụi thuục do thnh phõn hoõ hoc cỷa vi thuục thucmg khụng on dinh, õnh huụng den tõc dung cỹa vi thuục Nhiờu cụng trùnh nghiờn cỹu dõ chỹng minh su õnh cỹa nhiờt dụ dộn thnh phõn hoa hoc v hm luong cõc chat, tu vo mur nhiờt dụ khõc m su thay doi hm luong cõc chõt theo cõc xu huụng khõc (tng lờn hoõc giõm di) + Hoat chõt tng lờn bụi nhiờt dụ Tanin (Ngỹ bụi tuf) ụ cõc mire nhiờt dụ 80 - 120C/10',15',20' hm luong tng cao hon mõu sụng -12% [13] + Hoat chõt giõm bụi nhiờt dụ Hoat chõft cụ tmh chõt thng hoa: Liru hunh, coumarin, cafein, antranoid ụ nhiờt dụ cao cõc chõt ny thõng hoa ằ lm giõm hm luong hoat chõ't vi thuoc Anthranoid ton phn (Dai hong): ụ nhiờt dụ 140C/30' giõm 46% ụ nhiờt dụ 200C/30' giõm %, nhiờt dụ 220C/30' giõm 77% so vụi mõu sụng [19] Anthranoid (Thõo quyờt minh): ụ 100C hm luong Anthranoid ton phn thay doi khụng dõng kở so vụi mõu sụng, ụ nhiờt dụ > 160C/30' hm luong Anthranoid ton phn giõm 30 - 60% so vụi mõu sụng, ụ 220C/30' Anthranoid ton phn chuyởn hon ton sang dang oxy hoõ [15] Hoat chõt cụ tmh chõt bay hoi: Tinh dõu, nhiờt dụ cao lm giõm hm luong hoat chõt vi thuoc Huong phu vng, hm luong tinh dõu giõm 40 - 50% (Vỹ Võn Diộn v CS) Trn bợ qua, hm luong tinh dõu giõm 30% [2] Hoat chõt bi phõn hu bụi nhiờt Strychnin (hat Mõ tiờn) cõch cõt hm luỗmg giõm l %, rõn dõu vựng giõm 22,3% so vụi mõu sụng [2] Glycosid cyanogen (Hanh nhõn) chộ bien giõm 12- 52% so vụi mõu sụng (tu thuục vo phuong phõp chộ biờn) giai doan vng giõm nhiộu nhõt (Pham Xuõn Sinh, Hong Kim Huyờn v CS) Tanin (Ngỹ bụi tir) nhiờt dụ > 160C hm luong giõm - 50% (tu vo timg mire nhiờt dụ sao) [13] Tuy nhiờn, mire nhiờt dụ v thefi gian khõc su thay doi hm luong l khõc + Dụi vụi cõc chõt dờ thõng hoa, bay hỹi hm luong cõc chõt mõt di cõ mire nhiờt dụ thõp (tinh du giõm hm luong qua, vng, Anthranoid hm luong giõm nhiờu mire nhiờt dụ 100C/20' [15], 140C/20' [19]) + Dụi vụi cõc chõt khõc, hm luong hoat chõt bi mõt di mut nhiờt dụ cao hon: Rutin (hoố hoa) giõm mire nhiờt dụ >180C [11], Tanin giõm ụ nhiờt dụ 160C/30' v > 180C/20' [13], cụn ụ mire nhiờt dụ < 140C hm luong cõc chõt thay doi rõt ft so vụi mõu sụng - ễ mire nhiờt dụ cao: + Tự 160C -180C thnh phõn hoõ hoc cỹa vi thuục ft bi õnh huụng bụi thụi gian tiộp xỹc nhiờt + ễ mire nhiờt dụ > 200C thụi gian cng di hm luong hoat chõt cng giõm (Rutin sau 5' hm luong giõm 30% [11], Anthranoid (Dai hong) sau 10' hm luong giõm 16% [19], Tanin (Ngỹ bụi tỹ) sau 10' hm luong giõm 14 25% [13]) 1.2 vi THUễC HOẩ HOA Hoố hoa Flos Sophorae l nu cỹa cõy Hoố Sophora japonica L ho Dõu Fabaceae 1.2.1 Thnh phn hoõ hoc Hoố hoa cụ thnh phn chỹ yeu l Rutin, duoc diởn Viờt nam quy dinh cụ ft nhõt 20% [ ], phn Aglycol cỹa Rutin l Quercetin(Quercetol - thuục nhụm Flavonol), phn duụng l Rutinose( - O- a L rhamnopyranosyl-{3- D6 glycopyranose) [3,5,6,16] OH OH O-Rutinose QUERCETIN Ngoi hoa hoố cụn cụ betulin l dõn chõt cỷa triterpenoid nhụm Lupan, sophoradiol l dõn chõt cỹa nhụm olean [12,21], sophorin A,B,C [21,15] H J CH2OH + Rutin: Bot kột tinh nhụ mu vng hay vng lue khụng mựi bay hoi cụ mựi dõc trung, dộ ngoi õnh sang mu hoi sõm lai Dờ tan pyridin, tan methanol (l/7methanol sụi) v cõc dung dich kiờm loõng, hoi tan glycerin, khụ tan ethanol v isopropanol (1/650) nhung tan ethanol sụi 1/60 [16,31], ft tan nuục lanh (1/8000), hoi tan nuục sụi ( / 0 ), khụng tan ether, chloroform, ether dõu hoõ, benzen v cacbon sulfid [5, , 21, 31] 6 dinh mire 0 ml, trõng cục bng ethanol nụng, gụp vo bợnh dinh mire, dộ nguụi pha loõng bng ethanol vựra du dộn vach, lõc dờu Xõc dinh dụ hõp thu cỷa dung dieh thu duoc cục thach anh dy cm ụ buục sụng ,362>5nm v buục sụng A,375nm mõu trang l ethanol Goi dụ hõp thu duoc buục sụng 362,5nm l D2, buục sụng 375nm l D, Nộu A ~z~ < 0,879 -> dieh chiột khụng chỹa Quercetin D{ ~ > 0,879 -> dieh chiột cụ chỹa Quercetin Bng 2.4 Mõt dụ quang cỹa cõc CPNC CPNC ^362,5 (D2) đ375(đl) Di/D Sụng 0,910 0,810 0,890 80C/10 0,927 0,824 80C/15 0,944 0,839 80C/20 0,979 0,870 120C/10 0,980 0,872 120C/15 0,953 0,847 120C/20 0,918 140C/10 , 8 , 8 , 8 0,889 , 8 0,816 , 8 0,928 0,828 0,891 140C/15 0,939 0,845 0,899 140C/20 0,905 0,814 0,899 180C/10 0,915 0,823 0,899 180C/15 0,894 0,865 0,900 26 180C/20 0,807 0,731 0,905 200C/10 0,736 0,678 0,921 200C/20 0,707 0,655 0,926 210C/10 0,691 0,644 0,932 210C/15 0,690 0,647 0,937 210C/20 0,614 0,594 0,967 220C/10 0,675 0,661 0,979 220C/15 0,689 0,998 220C/20 0,480 0,499 , 8 1,039 Tự giõ tri bng 2.4 ta thay: Tõt cõ cõc CPNC dờu cụ D,/D2> 0,879 v t lờ ny tõng dn theo mire nhiờt dụ -> cõc mõu nghiờn cựu dờu chỷa Quercetin Hm luong Rutin v Quercetin duoc tmh theo cụng thuc: 5,943 Dj - , ^-'Quercetin p Ê > 14,6D -1 ,1 D, C = ^Rutin p p: Khụi luỗmg mõu duoc liờu D,: Mõt dụ quang cỷa CPNC tai buục sụng ,375nm D2: Mõt dụ quang cỹa CPNC tai buục sụng A 5nm ,3 27 Bõng 2.5 Hm litomg % Rutin v Quercetin CPNC CPNC P Cr Sụng 0,938 27,23 80C/10 0,947 28,12 0,81 80C/15 0,938 28,94 081 80C/20 0,956 29,43 0,83 120C/10 0,966 29,30 0,89 120C/15 0,956 28,64 0,81 120C/20 0,947 27,85 140C/10 0,947 27,83 0,94 140C/15 0,947 27,05 1,46 140C/20 0,975 25,38 1,34 180C/10 0,956 26,13 1,38 180C/15 0,975 24,95 1,38 180C/20 0,938 22,81 1,57 200C/10 0,947 19,03 2,13 200C/20 0,947 17,77 2,27 210C/10 0,966 16,51 2,41 210C/15 0,984 15,65 210C/20 0,947 11,94 3,55 220C/10 0,947 4,40 220C/15 0,947 10,29 5,24 220C/20 0,937 4,58 5,00 CR: Hm luong % Rutin CQ: Hm luỗmg % Quercetin 28 , C , , , BNG 2.6 Nhiờt dụ sõy (C) 80 SU BIEN THIấN CĩA RUTIN V QUERCETIN TRONG CPNC THEO NHIấT Bễ V THễI GIAN SAY 10 Phut Hm luong Rutin (%) 15 phut 20 phut 28,12 28,94 29,43 0,81 0,82 29,03 28,64 27,85 0,89 0,81 142 27,83 27,05 25,38 0,94 1,46 1,34 180 26,13 24,95 22,81 1,38 1,38 1,57 17,77 2,13 19,63 Hm luong Quercetin tõng hiờu suõt chiột) - ễ nhiờt dụ 140C/10',15',20' hm luong Quercetin tõng, tai 140C/20' hm luofng Rutin bõt dõu giõm - Tự 180C/10' - 220C/20' hm luong Rutin giõm manh, hm luong Quercetin tõng nhanh so vụi mõu sụng + Cựng thụi gian sõy, nhiờt dụ cng cao hm luong Rutin cng giõm, hm luỗfng Quercetin cng tõng + Cựng nhiờt dụ sõy, thụi gian cng di hm luỗmg Rutin cng giõm, hm luỗfng Quercetin cng tõng 2.3 BN LUN 2.3.1 Cõm quan - ễ mue nhiờt dụ 80C/10',15',20' tuong duong phuong phõp qua cỷa YDHCT, mu sõc vi thuục ft thay doi so vụi mõu sụng - ễ miic nhiờt dụ 120C/10' - 140C/20' tuong duong phuong phõp vng cỹa YDHCT, duofe lieu cụ mu vng tuoi > vng dõm - ễ mut nhiờt dụ 200C/15' - 220C/20' tuong duong phuong phõp chõy cỹa YDHCT, sõn phõm cụ mu nõu den ằ den Nhu võy, thụng sụ mu sõc nhu mot giõ tri tham khõo dở dõnh giõ cõm quan tiộn hnh sõy hoố hoa 31 2.3.2 Anh hiromg cỹa nhiờt dụ den thnh phn Flavonoid hoố hoa * Sõc kv - Khi sõy Rutin tinh khiột mire nhiờt dụ > 140C trờn sõc k dụ hinh thnh vờt moi cụ Rf tucmg duong vụi vờt Quercetin + ễ nhiờt dụ 140C/20', 160C/20': t le diờn tich vờt R/Q lụn [ Hùnh 6] + ễ nhiờt dụ 180C/20, 200C/20, 210C/20, 220C/20' t le diờn tich vờt R/Q giõm dan ằ Rutin giõm, Quercetin tõng [Hợnh 2.7] Kột quõ ny tuong duong vụi kột quõ sõc k dụ cỹa cõc mõu CPNC + Mõu nghiờn cuu ụ 80C/20', 120C/20', 140C/20 cụ t le diờn tich vờt R/Q lụn v tuong duong vụi mõu sụng [ Hinh 2.3] + Mõu nghiờn cuu 180C/20', 200C/20', 210C/20', 220C/20' t le diờn tich vột R/Q giõm dan chỹng tụ hm luong Rutin giõm, hm luong Quercetin tõng (Diờu ny phự hop vụi tfnh chõt cỷa Rutin cụ tnc= 210C kốm theo su phõn hu) - Quercetin tinh khiột sõy cõc mue nhiờt dụ khõc nhau, cao nhõt l 220C/20' nhung kột quõ sac k dụ chợ cụ vờt nhõt trựng vụi vờt Quercetin chuan, nhu võy tai mire nhiờt dụ nghiờn cỹu, Quercetin khụng bi biộn doi vợ Quercetin cụ tnc= 317C cao hon nhiờu so vụi nhiờt dụ sõy thụng thuụng (220C) * Dinh luong Rutin + Hm luong Rutin mỹc nhiờt dụ 80C/15', 80C/20', 120C/10', 120C/15' tõng - % so vụi mõu sụng, kột quõ ny phự hop vụi kột quõ dinh luong Tanin dờ ti "Nghiờn cỹu su õnh huụng cỷa nhiờt dụ dộn thnh phn Tanin Ngỹ Bụi Tỹ" [13], tai mỹc nhiờt dụ 80C/10',20' 30', 100C/10',20',30'; 120C/10',20', 30' v 140C/10 hm luong Tanin tõng % so vụi mõu sụng (xem phu lue) 32 + Hm luong Rutin ụ mỷc nhiờt dụ 140C/20'; 180C/10',15',20'; 200C/10',15',20'; 210oC/10',15',20'; 220oC/10',15',20' giõm -80% so vụi mõu sụng, nhiờt dụ cng cao hm luỗmg Rutin cng giõm Quercetin + Hm lirong Quercetin thay doi khụng dõng kờ ụ cõc mỹ'c nhiờt dụ 80C/10,,15,,20'; 120oC/10',15',20; 140C/10' + Hm lirong Quercetin tõng ụ cõc mỹc nhiờt dụ 140C/15',20'; 180C/10',15',20'; 200oC/10',15',20'; 210C/10',15',20'; 220C/10',15',20 nhiờt dụ cng cao hm lirỗmg Quercetin tõng cng manh, ụ 220C Quercetin tõng 500 - 600% so vụi mõu sụng -> cụ thộ YDHCT dõ su dung tõc dung cỹa Quercetin diờu tri bờnh dira trờn co sụ chộ biộn ny, viờc chiột xuõt v diờu chộ Quercetin chua duoc biột dộn Tự kột quõ trờn ta thõy rng: - ễ mỹc vng (120 - 140C): Hm luong hoat chõt tõng quõ trinh giõi phụng hoat chõt tự tộ bo duoc lieu tõng (cụ thộ ụ mỹc nhiờt dụ ny lm dụ bờn co hoc cỹa tộ bo duoc lieu giõm, chõt nguyờn sinh bi dụng von, giõm mot sụ chõt gõy cõn trụ cho quõ trinh giõi phụng hoat chõt: chõt nhy, pectin, gụm ) dụ tõng tõc dung nguyờn thu cỹa vi thuoc - ễ mỷc chõy (200 - 220 C): cụ su biờn doi rụ rờt thnh phn v hm luong cõc chõt dụ thay doi tõc dung cỷa vi thuoc -ằ tu thuục vo mue dieh diờu tri m sỹ dung cõc phuong phõp chộ biờn khõc - Hm luong Rutin giõm tự 27,73% cụn 4,58%, hm luong Quercetin tõng tự 0,86% dộn 5%, cụ thộ duụi tõc dung cỹa nhiờt dụ Rutin bi nhiờt phõn thnh Quercetin Tuy nhiờn, hm luong Rutin mõt di khụng tuong dụng vụi hm luong Quercetin tõng lờn bụi nhiờu l do: + Khụi luong phõn tỹ cỹa Rutin = 610, khụi luong phõn tỹ cỹa Quercetin = 302 tuong duong 1/2 khụi luong phõn tỹ Rutin 33 + Mot phõn chõt trung gian tao thnh chua rụ cõu truc, co chộ >cn tiộp tue nghiờn cỹu + Dirụi tõc dung cỹa nhiờt dụ Rutin cụ thộ bi oxy hoõ tao thnh chõt mụi, chõt ny cụ thộ cụ dụ phõn eue thõp ằ bi ho tan dung mụi loai tap Tụm lai, duụi tõc dụng cỷa nhiờt dụ, duoc lieu cụ nhỹng hoat chõt bi mõt di (Rutin, tanin, antranoid, Berberin, Palmatin ), cụ nhỹng hoat chõt mụi duoc hợnh thnh, cụ nhỹng hoat chõt tõng lờn Vi võy, tu thuục vo mue dich diờu tri m sỹ dung nhiờt dụ v thụi gian sõy hop l dộ tõng hiờu quõ diờu tri v an ton cho bờnh nhõn 34 PHAN KẫT LUN V DE XUAT 3.1 KET LUN Cõc kột quõ nghiờn cuu trờn cho thõy tfnh quy luõt õnh hucmg cỹa nhiờt dụ v thụi gian dộn mu sõc v thnh phn Flavonoid hoố hoa - ễ miic nhiờt dụ 80C/10',15',20' (tuong duong phuang phõp qua) + Mu sõc ft thay doi so vụi mõu sụng + Sõc k giõy cụ vờt, diờn tich vờt tuong duong sõc k dụ cỷa mõu sụng + Hm luong Rutin, Querrcetin ft thay doi so vụi duoc liờu sụng - ễ mực nhiờt dụ 120C/10' -> 140C/20' (tuong duong phuang phõp vng) + Mu sõc duoc liờu vng tuai -> vng dõm + Sac k dụ tuong duong mõu sụng, dụ dõm mu cõc vờt ft thay doi + Tai nhiờt dụ 140C/20' hm luong Rutin giõm ~ 9%, hm luong Quercetin tõng ~ 50% so vụi mõu sụng - ễ mỷc nhiờt dụ 200C/15' -> 220C/20' (tuong duong phuong phõp chõy) + Mu sõc duoc liờu nõu den -> den + Sac k dụ vờt nhung dụ dõm mu cõc vờt thay dụi rụ rờt, t le diờn tfch vột R/Q giõm so vụi mõu sụng, Rutin giõm dõn, Quercetin tõng dan + Hm luỗmg Rutin giõm manh 30% -> 80%, hm luong Quercetin tõng cao 150% -> 500% Nhu võy, ụ nhiờt dụ v thụi gian sõy khõc su tõc dụng cỹa nhiờt dụ dộn thnh phn Flavonoid hoố hoa l khõc nhau, vù võy tu thuục vo mue dfch dieu tri m lua chon phuong phõp sõy cho phự hop 35 3.2 DE XUAT - Tien hnh sc k cụt xõc dinh cõu truc trung gian tao thnh - Thỹ mot sụ tõc dung duoc l dộ tùm moi tuong quan giua su bien thiờn cỹa thnh phõn hoõ hoc vụi tõc dung sinh hoc cỷa hoố hoa diùụi su õnh huụng cỷa nhiờt dụ TILIấU THAM KHO A TIENG VIấT Dm Trung Bõo (2000) "Tiờm nng cõc Flavonoid" - Thụng tin duac lõm sng 2000 s ụ 1, truụng DH Duoc, trang 39 Bụ mon Duac hoc co truyờn (2002) Bi giõng duac hoc cụ truyộn- NXB y hoc trang 306 - 307, 398 - 399 Bụ mon duac lieu (1998) Bi giõng duac lieu tõp I - trung DH Duac HN Bụ mon phõn tich (1998) Thuc tõp hoõ phõn tich I - DH Duoc HN trang 89-91 Bụ y tộ (1994) Duac diờn Viờt Nam II tõp 3, NXB Y hoc trang 199 Bụ y tộ (2002) Duac diờn Viờt Nam III, NXB Y hoc, trang 251, 378 - 379 Nguyờn Thuong Dong (2000) Kột quõ nghiờn cỹu thnh phõn hoa hoc loi Gộranium repalense var thunbergii - Cụng trinh NCKH 1987-2000 (Viờn dirac lieu) NXB Khoa hoc k thuõt, trang 314-316 Nguyờn Võn Dn, Nguyờn Viột Tuu (1985) Phuang phõp nghiờn cỹu hoõ hoc cõy thuoc - NXB Y hoc trang 243-290 Nguyờn Võn Dõu (2001) "Dụng gụp vo viờc nghiờn cỹu cõc Flavonoid nu hoa hoố", Tap chợ duac hoc thõng 8/2001 trang 13-14 10 Lờ Trõn Dỷc (1997) Cõy thuoc Viờt Nam hõi chờ'biờh tri bờnh ban dõu, NXB Nụng nghiờp, trang 420 - 422 11 Cụng Viờt Hõi (1999), Buục dõu nghiờn cỷu õnh huụng cỹa nhiờt dụ dộn Flavonoid hoố hoa, Khụa luõn tụt nghiờp duoc s khoõ 1994 -1999 Dai hoc Duoc H Nụi, trang 14,23 12 Pham Hong Hụ (1997) Tựdiờn cõy thuoc - NXB Y hoc trang 372 23 Dộlia Loggia; Rugazzi E (1998) Anti inflammatory acợivity of benzopyrones ợhat are inhibitor of cyclo anh lypooxygenase Pharmacol Ref commun, page 91 -94 24 Dewhalley CV (1990) Flavonoid inhibit the oxydative modification oflow density lypoprotein - Biochem pharmacol, page 1734 -1749 25 Kaul TN, Middleton E Jr (1985) Antiviral effect o f flavonoidson human viuses J Med virol, page 71-79 26 Kee Chang Huang (1999) The pharmacology of chinesse herbs second Edition CRC Press, page 351 27 Kim HP, Mani I, Ziboh VA (1998), effects o f maturally occusing flavonoids anh biflavonoids on epiderman cyclooxygennase froms guinea pig Prostaglandins jeukot esent fatty acid, page 17-24 28 Manach C, Regerat F, texien et al (1996) Biovailability metabolisen and physiological infact of4000 - Flavonoids- Nutrition Research, Page 517-534 29 Miodini P, Firoavanti L, Di Franzo G (1999), The two phyto-oestrogens genistein and quercetin exert diffirent effects on estrogen receptor function Br J cancer, page 80 30 Stoewsand Gs, Andeson JL (1984) Quercetin a mutagen, not a carcinogen in Fisches rats J toxico environ Health, Page 105 -140 31 The Merck index vol II Merck Research Laboratories, page 8118,8386 C TIENG NGA 13 Nguyờn Quục Huy (2002) Nghiờn cỹu anh huụng cỹa nhiờt dụ dộn thnh phn Tanin Ngỹ Bụi Tỹ, Khoõ luõn duoc s khoõ 1997- 2002, Dai hoc Duoc H Nụi, trang 24 - 25 14 Hong Tich Huyen - Trn Luu Võn Hiờn (2002) "Thuoc chụng viờm ỹc chộ Lypooxygenase v cyclooxygenase dựng du phụng v diờu tri ung thu", Thụng tin duỗfc lõm sng 2002 so - DH Duoc HN, trang 24 15 Hong Thj Thu Huong (2001) Buục du nghiờn cỹu õnh huụng cỹa nhiờt dụ dộn Anthranoid thõo quyờ't minh, Khụa luõn tụt nghiờp duoc s khoõ 1996 - 2001, Dai hoc Duoc H Nụi trang 22, 30 - 32 16 Dụ Tõt Loi (1999) Cõy thuoc v vi thuoc Viờt Nam - NXB Y hoc trang 299 17 Pham Xuõn Sinh (1999) Phuong phõp chờ'biờh thuụ'c cụ9truyờn- NXB Y hoc, trang 124-125 18 Trung tõm thụng tin thuục Dai hoc Duoc H Nụi (1999) Tự diờn Bõch khoa duỗfc hoc - NXB Tự diờn bõch khoa, trang 306 - 307 19 Vỹ Huong Thu (2000) Nghiờn cỹu õnh huụng cỹa nhiờt õụ dộn thnh phõn Anthranoid Dai Hong, Khoõ luõn tụt nghiờp duoc s khoõ 1996 2000 Dai hoc Duoc H Nụi, trang - 33 20 Nguyờn Quang Thucmg (2000), "Quercetin hoat hoõ" - Thụng tin Duoc Lõm sng 2000 so 2, trang 21 Viờn duoc liờu (1993) Ti nguyờn cõy thuoc - NXB Khoa hoc k thuõt, trang 525-528 B TIENG ANH 22 Chaudry PS; Cabera J; Juliceni HR, Varmaso (1983) Inhibition of human lens aldose reductase by Flavonoid sulindae, and indomethacin Biochem pharmacol, page 1995 - 1998 i PHU LUC Hm lirong Tanin mot so mõu nghiờn cuti ụ nhiờt dụ 80 - ẻ ^ C /I O '^ O ^O Thụi gian 10 phỷt 30 phut 20 phut Hm luong So vofi mõu Hm luong So vụi mõu Hm luỗmg (%) sụng (%) (%) sụng (%) (%) So vụi mõu sụng(%) 80 83,33 11238 82,49 111,25 81,66 111,24 100 82,62 111,41 82,16 110,80 81,16 109,45 120 80,44 108,55 78,32 105,63 77,99 105,18 140 75,32 108,32 73,65 99,32 73,98 99,77 Nhiờt dụ (C) N [...]... vng, khụng mựi, vi hoi dõng tan nhiộu trong dung dieh kiờm v aeid, ft tan trong ethanol (1/290) tan trong ethanol soi (1/23), tan trong methanol, butanol, ethylacetat, khụng tan trong chloroform, ether ethylic [7, 31] Quercetin cụ dụ hõp thu eue dai tỹ ngoai tai buục sụng 275 nm v 375 nm/ethanol [5,6], 370 nm/ methanol [ ] 8 1.2.2 Kiởm nghiờm hoa hoc 1.22.1 Dinh tinh Flavonoid (Phuong phõp ong nghiờm)... huyột: Dựng trong truụng hop huyột nhiờt gõy xuõt huyột nhu: chõy mõu cam, tri chõy mõu, phu nỹ bõng huyột, dai tiởu tiờn ra mõu [2,5,6] + Thanh nhiờt bợnh can: Dựng trong truụng hop can hoõ thuong viờm: dau mõt dụ, dau du [2,16] + Bùnh can ha õp: Hoố hoa sao vng dựng trong truụng hop huyột õp cao, ngoi ra cụ thở dựng trong truụng hop dau thõt dụng mach vnh [2,18] + Thanh phộ chụng viờm: Dựng trong truụng... bien hoố hoa v nhftng bien doi vờ tõc dung sinh hoc 12.5.1 Cõc phuong phõp chộ bien: [17 ] - Sao vng: Dựng lira nhụ sao dộn khụ hoi vng hoõc vng dõm - Sao den: Dựng lira nhụ dộn khi bờn ngoi cụ mu den - Thõn sao (hoố hoa thõn): sao dộn khi bờn ngoi cụ mu den hoi chõy bờn trong cụ mu nõu, phun nuục trự hoõ dục - Hoố hoa trfch mõt Hoố hoa: 1kg Mõt ong: 2kg 12 Dem mõt ong dun dộn soi, cho hoố hoa vo trụn... mu hoi vng phun thờm nuục sao tiộp dộn khụ - Hoố hoa trợch giõm Hoố hoa 1kg Giõm 2kg Cho giõm vo hoố hoa, trụn dờu, phụi õm can, sao nhụ lỹa dộn hoi vng - Hoố hoa trfch muoi Dựng lựa nhụ sao hoố hoa dộn khi ton bụ bờn ngoi cụ mu den, phun ft nuục muụi vo tiộp tue sao dộn khụ 1.2.5.2 Nhợtng bien doi vờ tõc dung sinh hoc - Tõc dung trờn huyờ't õp: Hoố hoa chộ duụi 3 dang (sao qua, sao vng, sao chõy)... sõt anh huõng cỹa nhiờt dụ den musac cỷa duỗfc liờu - Hoố hoa, sõy mire nhiờt dụ tỹ 80C - 220C trong3 mỹc thụi gian 10,15', 20' 15 - Xõc dinh nhiờt dụ sao cho sõn pham tuang duong vụi sõn pham sao co truyốn biởu hiờn qua thụng sụ mu sc cỷa du'Oc lieu 2.1.3.2 Khõo sõt õnh huụng cỹa nhiờt dụ dộn Flavonoid trong hoố hoa a Dinh tinh + Dinh tmh Flavonoid (phuong phõp ong nghiờm) - P/ỹ Cyanidin - P/ir dd... nhau de tim ra moi tuong quan b Dinh luffng - Chiờt Rutin v Quercetin bng methanol: vi Rutin v Quercetin tan tụt trong methanol (dụ tan cỹa Rutin trong methanol 1/7) vi võy chon methanol l dung mụi chiột xuõt - Pha loõng dieh chiột bng ethanol - Dinh luong Rutin v Quercetin trong CPNC Duac chõt trong ethanol duac do mõt dụ quang tai 2 buục sụng 5nm ,3 6 2 v X3V5nm [32] Goi D Goi D Nộu 3 6 2 3 7 5 5 l... duong phuong phõp sao chõy cỹa YDHCT, sõn phõm sao cụ mu nõu den ằ den Nhu võy, thụng sụ mu sõc nhu mot giõ tri tham khõo dở dõnh giõ cõm quan khi tiộn hnh sao sõy hoố hoa 31 9 2.3.2 Anh hiromg cỹa nhiờt dụ den thnh phn Flavonoid trong hoố hoa * Sõc kv - Khi sõy Rutin tinh khiột mire nhiờt dụ > 140C trờn sõc k dụ hinh thnh vờt moi cụ Rf tucmg duong vụi vờt Quercetin + ễ nhiờt dụ 140C/20', 160C/20': t... tim mach [24] - Chụng di ựng, chụng viờm: Quercetin tõc dung nhiờu giai doan cỹa chuyởn hoõ eicosanoid, ực chộ hoat tmh cỹa phospholipase A2\ phong bộ con duụng COX, LOX cỹa chuyờn hoõ acid arachidonic vụi nụng dụ < 15 - 40juM, quercetin ực chộ hoat tmh cỹa COX gõy ra bụi TGF a tự dụ ực chộ hoat tmh cỷa cõc chõt trung gian gõy 2 viờm: Leucotrien, prostaglandin v su giõi phụng histamin tự tộ bo Mast... sao vng l nhu nhau, cụn hoố hoa sao chõy cụ tõc dung ha huyột õp tụt han 2 loai trờn [16,18,21] - Tõc dung giõn mach trờn tai thụ cụ lõp: Cõ 3 dang chộ cỷa hoố hoa dờu cụ tõc dung giõn mach tai thụ, tõc dung cỹa hoố sụng v sao vng l nhu nhau, dang sao chõy cụ tõc dung tụt han 2 loai kia [16,18,21] - Tõc dung trờn thdi gian chõy mõu cỹa duụi chuụt: Chuụt cụng uụng dieh nuục sc hoa hoố sao vng v sao chõy... duoc võn chuyộn bụi Albumin, tai dụ duoc chuyộn hoa nhụ phõn ỹ'ng methyl hoõ v phõn ỹng hydroxyl hoõ [28] Liờu dựng: 200 -500mg/24h, 2- 31õn/24h - Tõc dung khụng mong muụn 11 Quercetin tao khụi u chuụt thi nghiờm v gõy dụt bien nhiờm sõc thộ vi khuõn trong ong nghiờm ễ nguụi cõc tõc dung ny chua duoc biộu hiờn rụ rng [30] 1.2.4 Tõc dung theo YDHCT Hoố hoa - Tmh vi: Vi dõng tmh hoi hn [2,16,18,21] - ... võt, hoat chat l chõt vụ co cụ tmh chõt thõng hoa, nhiờt dụ cao, hoat chõt thõng hoa, tõch khụi tap chõt khõc [2,17] VD: Luu hunh, thu ngõn, arsen 1.1.2 nh hirụng cỹa nhiờt dụ den vi thuoc - Trong. .. sụng -12% [13] + Hoat chõt giõm bụi nhiờt dụ Hoat chõft cụ tmh chõt thng hoa: Liru hunh, coumarin, cafein, antranoid ụ nhiờt dụ cao cõc chõt ny thõng hoa ằ lm giõm hm luong hoat chõ't vi thuoc... thờm nuục tiộp dộn khụ - Hoố hoa trợch giõm Hoố hoa 1kg Giõm 2kg Cho giõm vo hoố hoa, trụn dờu, phụi õm can, nhụ lỹa dộn hoi vng - Hoố hoa trfch muoi Dựng lựa nhụ hoố hoa dộn ton bụ bờn ngoi cụ