Nghiên cứu bào chế viên nang chứa hạt bao acyclovir tác dụng kéo dài

Vì vậy chúng tôi thực hiện đề tài: “Nghiên cứu bào ch ế viên nang chứa hạt bao acyclovir tác dụng kéo dài” với mục tiêu: Bào c h ế được viên nang acyclovir 200mg tác dụng kéo dài 12 giở

BỘ Y T Ễ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI

DƯƠNG NGỌC NGÀ

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NANG CHỨA HẠT

BAO ACYCLOVIR TÁC DỤNG KÉO DÀI

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DUỢC s ĩ KHOÁ 2002 - 2007)

/ ỷ ^ ^ o 0 X J \

íi ♦ * * V • V ■ * ’

- Người hướng dẫn: TS Phạm Thị M inh H uệ

ThS Vũ Thị Thu G iang

- Nơi thực hiện: Bộ m ôn Bào ch ế

Trường đại học Dược H à N ội

- Thời gian thực hiện: Tháng 0 8 /2 0 0 6 - 05/2007

JÍỜ9 ticÂM ƠQl

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tôi xin được bày tỏ lỏng biết ơn vô hạn đến:

TS P h ạm T hị M in h H u ệ ThS Vũ T hị Thu G ian g

những người thầy đ ã tận tình hướng dẫn, giúp đ ỡ và c h ỉ bảo tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn.

Tôi cũng xỉn bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến các thầy cô PGS.TS Nguyễn

Văn Long, GS TS Võ Xuân Minh, TS Nguyễn Đăng Hoà, TS Nguyễn Trần Linh, Th.s Nguyễn Thị M ai Anh, Ds Nguyễn Thạch Tùng, và các bạn k ĩ thuật

viên bộ môn bào c h ế đã luôn sẵn lòng giúp đỡ, khích lệ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình thực nghiệm.

Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, phòng Đào tạo đ ã hết sức quan tâm và giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu.

Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đối với những người thân trong gia đình

và bạn bè đã luôn tạo điều kiện thuận lợi, động viên và nhiệt tình giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện luận văn.

MỤC LỤC

Trang phụ bìa

Lòi cảm ơn

Mục lục

Danh mục các bảng

Danh mục các hình

Chú giải chữ viết tất

ĐẶT VẤN Đ Ể 1

Phần 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Sơ lược về acyclovỉr 2

1.1.1 Công thức hoá học 2

1.1.2 Tính chất lí hoá 2

1.1.3 Dược động h ọ c 2

1.1.4 Tác dụng dược l í 3

1.1.5 Chỉ định 3

1.1.6 Liều d ù n g 4

1.1.7 M ột sô ch ế phẩm acyclovir trên thị trường 4

1.1.8 M ột sô nghiên cứu về acyclovỉr tác dụng kéo d à i 4

1.2 Một vài nét về kỹ thuật tạo hạt và bao h ạ t 9

1.2.1 K ỹ thuật tạo hạt 9

1.2.2 K ỹ thuật bao hạt 11

1.3 Sơ lược về thuốc tác dụng kéo d à i 13

1.3.1 Khái niệm vê thuốc tác dụng kéo dài 13

1.3.2 Ưu nhược điểm của thuốc tác dụng kéo d à i 13

1.3.3 Các hệ thuốc tác dụng kéo dài dùng qua đường u ố n g 14

Phần 2: THựC NGHIỆM VÀ KẾT Q U Ả 15

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị nghiên cứu và phương pháp thực n gh ỉệm 15

2.1.1 Nguyên vật liệ u 15

2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 15

2.1.3 Phương pháp nghiên cứu 15

2.2 Kết quả thực nghiệm và nhận x é t 22

2.2.1 Khảo sát môi tương quan giữa nồng độ và mật độ quang của dung dịch 22

2.2.2 Nghiên cứu bào ch ế hạt acyclovir 24

2.2.3 Nghiên cứu bào ch ế hạt acyclovir tác dụng kéo d à i 29

2.2.4 Nghiên cứu bào c h ế viên nang acyclovir tác dụng kéo d à i 41

2.3 Bàn luận 43

2.3.1 Về nghiên cứu bào chê hạt acyclovir 43

2.3.2 Về bào ch ế hạt acyclovir tác dụng kéo d à i 44

2.3.3 Về nghiên cứu bào ch ế viên nang acyclovir tác dụng kéo dài 44

KẾT LUẬN 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 2.1 Nguyên vật liệ u 15

Bảng 2.2 Các thông số kỹ thuật bao bằng thiết bị tầng sôi 18

Bảng 2.3 Nồng độ và mật độ quang của dung dịch ACV trong môi trường nước cất ở bước sóng 250 nm 23

Bảng 2.4 Thành phần của các mẫu h ạ t 25

Bảng 2.5 Một số đặc tính của các mẫu hạt với các tá dược độn khác nhau (n=3) 25

Bảng 2.6 Thành phần tá dược dính của các mẫu h ạ t 26

Bảng 2.7 Một số đặc tính của các mẫu hạt với thành phần tá dược dính khác nhau (n=3) 27

Bảng 2.8 Một số đặc tính của hạt ACV trước và sau khi bao màng PVA (n=3) 28 Bảng 2.9 Một số đặc tính và dự kiến tiêu chuẩn cho hạt ACV (n=3) 29

Bảng 2.10 Thành phần các cồng thức bao khảo sá t 30

Bảng 2.11 Phần trăm dược chất giải phóng theo thời gian từ hạt bao của các công thức bao khảo sát 30

Bảng 2.12 Các mức của biến độc lập 31

Bảng 2.13 Các biến phụ thuộc 31

Bảng 2.14 Bảng thiết kế thí ngh iệm 32

Bảng 2.15 Khối lượng riêng biểu kiến, tốc độ chảy và hàm lượng dược chất của các hạt b ao 33

Bảng 2.16 Phần trăm ACV giải phóng theo thời gian từ hạt b a o 34

Bảng 2.17 Một số đặc tính của hạt bao ACV theo công thức 29 40

Bảng 2.18 Phần trăm ACV giải phóng từ hạt bao theo thời gian của công thức tối ưu (công thức 2 9 ) 40

Bảng 2.19 Tiêu chuẩn hạt bao acyclovir TDKD dùng đóng n a n g 41 Bảng 2.20 Phần trăm ACV giải phóng theo thời gian từ hạt bao và viên nang

acyclovir T D K D 42

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1 Nguyên lý hoạt động của thiết bị tầng sôi W urster 13 Hình 1.2 Sơ đồ cấu tạo thiết bị tầng sôi W urster 13 Hình 2.1 Sơ đồ các giai đoạn bào chế hạt ACV bằng phương pháp xát hạt

ư ớ t 17

Hình 2.2 Phổ hấp thụ của dung dịch ACV 10 ng/ml trong môi trường nước

c ất 22

Hình 2.3 Đồ thị biểu diễn sự liên quan giữa mật độ quang và nồng độ dung

dịch ACV trong nước cất 23

Hình 2.4 Đồ thị biểu diễn tốc độ giải phóng ACV theo thời gian từ hạt bao

của các công thức bao khảo sát 30

Hình 2.5 Mặt đáp của Y6 theo khối lượng EC và PVP ( TEC =1 g; magnesi

CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT

TEC : Triethyl citrat

TKHH : Tinh khiết hoá học

ĐẶT VẪN ĐẾ

Các dạng thuốc quy ước là những chế phẩm mà khi sử dụng, dược chất giải phóng nhanh để được hấp thu ngay Đa số trường hợp hiệu quả của thuốc phụ thuộc nồng độ dược chất trong máu hoặc huyết tương Với những dược chất có thời gian bán thải ngắn thì khoảng thời gian duy trì nồng độ dược chất trong máu trong phạm

vi điều trị cũng ngắn và để đạt được hiệu quả điều trị liên tục thường phải dùng thuốc lặp lại nhiều lần trong ngày gây phiền phức cho bệnh nhân Sự ra đời của nhiều dạng bào chế mới trong đó có thuốc tác dụng kéo dài đã khắc phục nhược điểm trên

Acyclovir là một dãn chất tổng hợp của acid nucleosid- guanosine có tác dụng mạnh và chọn lọc trên các virus gây bệnh ở người bao gồm virus Herpes simplex loại 1 và loại 2; các virus Varicella-Zoster, Epstien-baư và cytomegalo virus Ngoài

ra acyclovir còn có tác dụng ức chế virus viêm gan B Acyclovir được chỉ định nhiều hơn các thuốc kháng vivus khác nhờ độc tính thấp hơn và tác dụng phụ nhẹ hơn Tuy nhiên acyclovir có thời gian bán thải ngắn (2 đến 3 giờ) khiến cho bệnh nhân phải uống thuốc nhiều lần trong ngày Mặt khác, sự hấp thu thuốc qua đường tiêu hoá chậm và không hoàn toàn Gần đây đã có nhiều công trình nghiên cứu bào chế acyclovir dưới dạng thuốc tác dụng kéo dài nhưng cho đến nay vẫn chưa có biệt acyclovir tác dụng kéo dài có mặt ở thị trường Việt Nam Vì vậy chúng tôi thực hiện

đề tài:

“Nghiên cứu bào ch ế viên nang chứa hạt bao acyclovir tác dụng kéo dài”

với mục tiêu: Bào c h ế được viên nang acyclovir 200mg tác dụng kéo dài 12 giở từ

các hạt bao acyclovir tác dụng kéo dài.

Để thực hiện được mục tiêu trên, luận văn gồm những nội dung sau:

1 Bào chế hạt acyclovir bằng phương pháp xát hạt ướt

2 Nghiên cứu bào chế hạt bao acyclovir tác dụng kéo dài bằng phương pháp bao màng

3 Khảo sát ảnh hưởng của một số yếu tố trong công thức màng bao tới phần trăm dược chất giải phóng từ hạt bao acyclovir tác dụng kéo dài

4 Lựa chọn công thức hạt bao acyclovir tối ưu để bào chế viên nang acyclovir tác dụng kéo dài

• Nhiệt độ nóng chảy khoảng 230°c, sau đó bị phân huỷ [5].

• Các hằng số phân tích: acyclovir có 2 hằng số phân ly:

pKa,= 2,41± 0,27 ; pKa2 = 9,06±0,88

1.1.3 Dược động học

• Sinh khả dụng theo đường uống thấp, khoảng 20% (15-30%) Thức ăn không

làm ảnh hưởng đến hấp thu thuốc [2], [23]

• Nồng độ đỉnh trong huyết tương đạt được sau khi uống là 1,5-2 giờ, tiêm tĩnh mạch sau 1 giờ [2]

• Phân bố: acyclovir phân bố trong dịch cơ thể và các cơ quan như: não, thận, phổi, ruột, gan, lách, cơ, tử cung, niêm mạc, dịch âm đạo, nước mắt, thuỷ dịch, tinh dịch, dịch não tuỷ Nồng độ trong dịch não tuỷ đạt tới 50% nồng độ huyết tương

Liên kết protein thấp (9-33%) Thuốc qua được rau thai và phân bố trong sữa với nồng độ gấp 3 lần trong huyết thanh mẹ [2], [8], [23].

• Chuyển hoá và thải trừ:

+ Phần lớn thuốc được đào thải qua thận dưới dạng không biến đổi 9-carboxy methoxy methyl guanine là chất chuyển hoá đáng kể duy nhất của acyclovir chiếm khoảng 14% tổng lượng thuốc thấy trong nước tiểu [23]

+ Thời gian bán thải [2], [8], [23]:

Người lớn khoảng 3 giờ Trẻ em 2-3 giờ Trẻ sơ sinh 4 giờ

ở bệnh nhân suy thận mãn t1/2 =19,5 giờ

• Điều trị khởi đầu và tái phát nhiễm Herpes sinh dục

• Thuỷ đậu xuất huyết, thuỷ đậu ở người suy giảm miễn dịch, thuỷ đậu ở trẻ sơ sinh [2], [8]

1.1.6 Liều dùng

• Thông thường người lớn: 200 mg/lần X 5 lần/ngày (người suy giảm miễn dịch

400 mg/lần) [2]

• Trẻ em dưới 2 tuổi: Nửa liều người lớn

• Trẻ em trên 2 tuổi: Bằng liều người lớn

1.1.7 M ột sô' chê phẩm acyclovir trên thị trường

- Viên nén: Apo-Acyclovir, Cyclovir, Herpevir, Herpex, Medovir, Vacrax 200

mg, viên Acyclovir Stada, Zovirax 200 mg, 400 mg, 800 mg

- Lọ bột pha tiêm: Zovirax 200 mg/5ml

- Thuốc mỡ dùng ngoài Zovirax 5%, thuốc mỡ tra mắt Zovirax 3% w/w

- Dịch truyền : Zovirax I.v

- Viên TDKD: Genvir 600mg

1.1.8 M ột sô nghiên cứu về acyclovir tác dụng kéo dài

Rokhade A p và cộng sự đã nghiên cứu bào chế vi cầu bằng phương pháp vi nhũ tương với chất mang là chitosan và sản phẩm đồng trùng hợp giữa acrylamide với dextran Sản phẩm đồng trùng hợp của dextran và acrylamide được điều chế bằng phương pháp đồng trùng hợp gốc tự do ở 6 0 °c trong 6 giờ với xúc tác là muối ceri nitrat Dược chất được hoà tan trong dung dịch acid acetic 2% chứa chất đồng trùng hợp và chitosan Nhũ hoá dung dịch này với dầu parafin có chứa 1% (w/w) span-80 và khuấy với vận tốc 400 vòng/phút trong 10 phút tạo nhũ tương nước/ dầu Thêm từ từ glutaraldehyd và khuấy tiếp 2 giờ Vi cầu tạo thành được lọc, rửa với n- hexan và sấy chân không 24 giờ Tác giả đã khảo sát ảnh hưởng của các yếu tố đến một số đạc tính vật lý (kích thước, hình dạng và cấu trúc tiểu phân, khả năng trương nở) và khả năng giải phóng dược chất của vi cầu Kết quả cho thấy khi tăng tỉ lệ polyme hoặc tỉ lệ dược chất đều làm tăng tốc độ giải phóng dược chất từ vi cầu Khi tăng lượng glutaraldehyd làm giảm tốc độ giải phóng dược chất Trong 2 giờ đầu, dược chất giải phóng nhanh (20 - 40%), và kéo dài được 12 giờ nhưng không giải phóng được 100% sau 12 giờ [27]

Với mục đích bào chế dạng thuốc tiêm trực tiếp vào mắt, Sancho C.M và cộng

sự nghiên cứu ảnh hưởng của sự khử trùng bằng tia gamma đến đặc tính của vi cầu acyclovir poly (D,L - lactic - co - glycolic) acid giải phóng có kiểm soát Tác giả bào chế vi cầu bằng phương pháp bốc hơi dung môi như sau: hoà tan polyme vào diclomethan sau đó phân tán dược chất vào dung dịch polyme Hoà tan gelatin vào dung dịch PVA 0,1%, rót từ từ dung dịch polyme vào dung dịch gelatin để tạo thành nhũ tương, khuấy 3 giờ ở nhiệt độ phòng Tiếp đó bốc hơi dung môi, lọc chân không

và rửa vi cầu Vi cầu đem khử trùng bằng tia Ỵ cường độ 25 kGy, giữ nhiệt độ thấp trong suốt quá trình để tránh phân huỷ poly (D,L - lactic - co - glycolic) acid So sánh đặc tính của vi cầu trước và sau khử trùng nhờ các kỹ thuật phân tích kích thước tiểu phân, dùng kính hiển vi điện tử quét, phương pháp nhiễu xạ tia X, nghiên cứu phổ IR, phân tích nhiệt và thử invitro Qua nghiên cứu cho thấy khử trùng bằng tia gamma không làm thay đổi đặc tính của vi cầu Dược chất giải phóng kéo dài 73 ngày và sự giải phóng tuân theo động học bậc 0 từ ngày thứ nhất đến ngày thứ 63 Kết quả này mở ra khả nãng bào chế ACV dưới dạng thuốc tiêm trực tiếp vào mắt và kéo dài hấp thu [24]

Cheu s J và cộng sự đã bào chế vi cầu acyclovir giải phóng kéo dài bằng phương pháp bốc hơi dung môi từ nhũ tương với chất mang là EC và dung môi là diclomethan Acyclovir được hoà tan trong dung dịch diclomethan có chứa EC Thêm từ từ dung dịch này vào 750ml dung dịch PVA và đem khuấy với vận tốc

2000 vòng/phút trong 1,5 giờ Vi cầu thu được rửa với nước và sấy 50°c trong 24 giờ Tác giả khảo sát ảnh hưởng của các thông số như: độ nhớt của EC (45cps, lOOcps); tỷ lệ EC/ACV (1/1, 2/1); tỷ lệ CH2C12/EC (15/1, 20/1) Qua đó nhận thấy

để tăng hiệu suất tạo vi cầu có thể tăng độ nhớt của EC hoặc tăng tỷ lệ CH2C12/EC hoặc giảm tỷ lệ EC/ACV Đối với khả năng giải phóng dược chất, khi tăng độ nhớt

EC hoặc tăng tỷ lệ CH2C12/EC hoặc giảm tỷ lệ EC/ACV đều làm tăng tỷ lệ giải phóng dược chất từ vi cầu [15]

Lê Hoàng Anh đã nghiên cứu bào chế vi cầu nổi ACV TDKD với chất mang là hỗn hợp hai polyme EC và Eudragit L I 00 đồng thời nghiên cứu ảnh hưởng của một

số yếu tố trong công thức đến một số đặc tính của vi cầu Nhận thấy, khi tăng tỷ lệ EC-Eudragit làm chậm tỷ lệ giải phóng dược chất và làm tăng các giá trị như: hiệu suất tạo vi cầu, tỷ lệ dược chất được vi cầu hoá và tỷ lệ vi cầu nổi sau 6 giờ Tăng tỷ

lệ Aerosil làm tăng khả năng giải phóng dược chất, giảm hiệu suất và tỉ lệ ACV được vi cầu hoá nhưng không ảnh hưởng đến khả năng nổi Qua nghiên cứu, tác giả

đã đưa ra công thức tối ưu để bào chế vi cầu acyclovir TDKD 12 giờ [1]

Nguyễn Thị Hồng nghiên cứu bào chế vi nang ACV TDKD với chất mang là

EC và dung môi dicloromethan Aerosil thêm vào để chống dính giữa các vi nang và chống bám dính vào cánh khuấy Nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố: tỷ lệ ACV/

EC, thể tích dichloromethan, % Aerosil đến hiệu suất tạo vi nang, tỷ lệ vi nang hoá

và khả năng giải phóng dược chất cho thấy khả năng giải phóng dược chất và tỉ lệ vi nang hoá tăng khi tăng tỉ lệ ACV/ EC nhưng hiệu suất lại giảm; thêm Aerosil làm tăng tỉ lệ giải phóng dược chất nhưng ảnh hưởng khá phức tạp đến tỷ lệ vi nang hoá

và hiệu suất tạo vi nang; tăng thể tích dichloromethan làm giảm tỷ lệ dược chất được

vi nang hoá, hiệu suất tạo vi nang và tỷ lệ giải phóng dược chất [7]

Law S.L và cộng sự nghiên cứu bào chế dạng liposome với các chất mang phosphatidylcholin, sterylamin, dicetylphosphat, cholesterol và nồng độ ACV là 5 mg/ml Dược chất và chất mang được hoà tan trong dung môi hữu cơ trong một bình nón sau đó bốc hơi dung môi hữu cơ tạo lớp phim mỏng Hydrat hoá phim bằng dung dịch đệm pH 7,6 thu được liposome Kết quả thử nghiệm invitro trên bề mặt da thỏ cho thấy sự phân bố ACV qua lớp sừng của dung dịch ACV lớn nhất, tiếp đó đến dạng liposome ACV tích điện âm và thấp nhất là liposome ACV tích điện dương Nghiên cứu invivo trên bề mặt da thỏ cho thấy với dung dịch ACV và liposome ACV mang điện âm, nồng độ cực đại trong huyết tương đạt được lần lượt sau 1 giờ và 1,5 giờ Trong khi đó dạng liposome mang điện dương không đạt được nồng độ cực đại sau 1 giờ và 1,5 giờ và trở thành các túi dự trữ, kiểm soát việc giải phóng, hấp thu ACV qua lớp chất sừng [22]

Groning R và cộng sự nghiên cứu bào chế viên nén ACV TDKD và sử dụng từ tính để kéo dài thời gian khu trú của thuốc trong dạ dày Tá dược được lựa chọn để kéo dài giải phóng là HPMC với hai tỷ lệ 10% và 15% Quá trình bào chế viên được tiến hành như sau: lõi nam châm được bao màng sáp camauba bằng cách nhúng vào dung dịch sáp đun chảy Sau đó lõi này được nén với hỗn hợp bột tạo lớp trong và lớp ngoài Hỗn hợp bột tạo lớp trong gồm HPMC, magnesi stearat và 160 mg ACV Hỗn hợp bột tạo lớp ngoài gồm HPMC, lactose, magnesi stearat và 40 mg ACV Nghiên cứu invitro cho thấy từ tính không làm ảnh hưởng đến sự giải phóng dược

chất Khi sử dụng 10% HPMC ở lớp ngoài, 80% ACV giải phóng trong 5 giờ, khi sử dụng 15% HPMC, 80% ACV giải phóng trong 8 giờ Dược chất giải phóng hết sau

12 giờ ở cả hai trường hợp Viên nén chứa 10% HPMC được dùng để nghiên cứu in vivo trên 5 người tình nguyện và đối chiếu với viên Zovirax 200 mg Kết quả cho thấy dưới tác dụng của từ tính, diện tích dưới đường cong biểu diễn nồng độ dược chất trong huyết tương theo thời gian trong 24 giờ thu dược là 2802,7 ng.h/ml, còn không sử dụng từ tính thì giá trị này là 1598,8 ng.h/ml Như vậy sử dụng từ tính để điều khiển thời gian khu trú của thuốc trong dạ dày có thể cải thiện mức độ hấp thu dược chất từ viên nén ACV TDKD [18]

Fuertes I và cộng sự đã nghiên cứu bào chế viên nén dạng cốt với tá dược HPMC K4M và đánh giá tính thấm của hệ cốt này Tác giả lựa chọn 5 tỉ lệ dược chất khác nhau (60%, 70 %, 80%, 90% và 95%) để dập viên với HPMC K4M mà không

sử dụng tá dược độn nào khác Viên nén được dập với hàm lượng 500 mg, đường kính 12 mm Kết quả nghiên cứu cho thấy tỷ lệ tá dược trong viên tăng làm giảm tốc

độ giải phóng dược chất Khi tỷ lệ HPMC K4M trên 10% (w/w) có thể kéo dài giải phóng dược chất Với tỉ lệ HPMC 10% dược chất giải phóng được 50% sau 5 giờ,

với tỉ lệ HPMC 5% dược chất giải phóng được 100% sau 5 giờ Tác giả đã chứng

minh được sự khác biệt rõ rệt của tốc độ giải phóng dược chất và khả năng thấm ẩm của viên chứa 90% và 95% ACV Từ đó xác định được ngưỡng tính thấm của tá dược Với kết quả này có thể rút ngắn được thời gian khảo sát để bào chế hệ cốt ACV TDKD dựa trên ngưỡng tính thấm của tá dược [17]

Tuncer Degim và cộng sự đã bào chế viên nén kết dính niêm mạc miệng để điều trị nhiễm trùng tại miệng do Herpes simplex gây ra với các thành phần: Carbopol-934 (C-934), Polycarbophil (PC) và Sodium Taurocholat (ST) Kết quả nghiên cứu cho thấy độ tan và giá trị log của hệ số phân bố octanol/nước của acyclovir thay đổi theo pH Các giá trị này thay đổi theo xu hướng giống nhau trong khoảng pH từ 2,2 đến 7,4 Đánh giá ảnh hưởng của các thành phần trong công thức viên nén cho kết quả: tăng lượng C-934 trong công thức làm tăng khả năng bám dính niêm mạc, ngược lại khả năng này giảm khi tăng lượng PC Việc thêm ST vào công thức có hiệu quả làm tăng sự hấp thu của acyclovir qua niêm mạc Qua khảo sát khả năng hoà tan dược chất từ viên nén trong môi trường dịch nước bọt nhân tạo, công thức thích hợp nhất cho các thử nghiệm tiếp theo có thành phần: C-934 (64,4

%), PC (34,4 %), ST (0,8 %) Viên nén bào chế theo công thức này giải phóng dược chất theo mô hình động học bậc 0 với tốc độ 9,708 mg/h, thời gian giải phóng dược chất kéo dài được 6 giờ Tác giả cũng đã xây dựng được một mô hình động học để phân tích, dự đoán quá trình hấp thu của acyclovir trên chó thử nghiệm Mô hình này có thể được phát triển để áp dụng mô phỏng quá trình động học của thuốc trong

cơ thể con người [30]

Tallury p và cộng sự đã sử dụng sản phẩm đồng trùng hợp ethylen-co-vinyl acetat (EVA) để bào chế hệ cốt chứa hỗn hợp ACV và clohexidin EVA và dược chất (40:1) được hoà tan vào dicloromethan trong bình nón, dung dịch khuấy qua

đêm, sau đó rót vào đĩa petri và để khô, sấy chân không qua đêm ở nhiệt độ phòng

Từ tấm phim trên cắt ra màng polyme kích thước 3 X 3 X 0,07 cm được và nhúng vào dung dịch EVA (VA 32%), để khô qua đêm Nghiên cứu in vitro cho thấy khi không phối hợp dược chất thì tốc độ giải phóng dược chất của hệ cốt chứa ACV cao hơn Khi phối hợp hai dược chất trong cốt với tỉ lệ bằng nhau thì tốc độ giải phóng ACV cao hơn clohexidin 30% Còn nếu phối hợp dược chất với tỉ lệ khác nhau thì dược chất có tỉ lệ cao hơn có tốc độ giải phóng dược chất cao hơn Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ vinyl acetat đến tốc độ giải phóng dược chất cho thấy nồng độ vinyl acetat tăng làm tăng tốc độ giải phóng dược chất từ cốt Với nồng độ vinyl acetat 28% tốc độ giải phóng của ACV là 0,10 /Ầg /cm 2 ngày, với nồng độ vinyl acetat 40%, giá trị này là 2,87 |ig /cm2 ngày Khi bao cốt bằng màng polyme, tốc độ giải phóng dược chất cũng giảm Sử dụng màng EVA có nồng độ vinyl acetat là 32%, tốc độ giải phóng của ACV và clohexidin lần lượt là 0,29 |ig /cm 2 ngày và 0,94|ig/ cm2 ngày Còn nếu không bao màng EVA thì các giá trị này là 2,87 và 2,58 |!g /cm2 ngày [28]

Tu J và cộng sự đã sử dụng phương pháp tạo hạt nóng chảy với PEG để tạo hạt ACV Hạt tạo thành được bao với công thức dịch bao gồm EC, magnesi stearat, PVP, dầu thầu dầu, aceton, isopropanol để kiểm soát giải phóng sau đó đóng nang Tác giả khảo sát ảnh hưởng của kích thước tiểu phân dược chất và nồng độ EC trong dịch bao đến tốc độ giải phóng dược chất từ viên nang Sử dụng ACV có kích thước tiểu phân trung bình 17,2 ± 5,5 |am và 176,3 ±104,6 |am cho thấy tốc độ giải phóng dược chất tăng khi kích thước tiểu phân trung bình giảm Sử dụng dịch bao có nồng

độ EC lần lượt là 10%, 16%, 24% cho thấy tỷ lệ EC trong dịch bao tăng thì phần

trăm dược chất giải phóng giảm Với tỷ lệ EC là 16%, sau 2 giờ dược chất giải phóng được 40%, sau 6 giờ giải phóng được 50%, sau 8 giờ giải phóng được 75% và sau 12 giờ giải phóng được 95% Sự giải phóng dược chất từ viên nang tuân theo mồ hình Higuchi [29].

Trên cơ sở đó, tác giả Ngô Thị Thu Hằng nghiên cứu bào chế viên nang ACV TDKD chứa hạt bao ACV bằng phương pháp đun chảy với PEG và đánh giá ảnh hưởng của một số yếu tố trong công thức màng bao đến khả năng giải phóng dược chất Trong đó EC là nhân tố chính ảnh hưởng đến khả năng giải phóng dược chất

EC tăng làm chậm tốc độ giải phóng dược chất Sử dụng TEC làm chất hoá dẻo làm tăng tốc độ giải phóng dược chất còn DBP làm chậm tốc độ giải phóng dược chất Talc và titan dioxyd ảnh hưởng không nhiều đến tốc độ giải phóng dược chất [6]

1.2 Một vài nét về kỹ thuật tạo hạt và bao hạt

Trong bào chế dược phẩm có thể tạo hạt bằng các phương pháp: tạo hạt ướt (tạo hạt bằng thiết bị tầng sôi, xát hạt, phun sấy, đùn và tạo pellet ), tạo hạt khô (cán ép), và các phương pháp khác (tạo hạt nóng chảy, ) Trong đó phương pháp tạo hạt ướt được áp dụng phổ biến nhất Ngoài những lợi ích của việc tạo hạt nói chung, phương pháp này còn có những ưu điểm riêng như: làm cho bề mặt sơ nước trở nên thân nước, có thể phân tán chất màu hoặc dược chất tan được dễ dàng bằng cách hoà tan vào tá dược dính, hạn chế bụi trong quá trình bào chế Nhược điểm chủ yếu của phương pháp này là quá trình bào chế gồm nhiều giai đoạn, kiểm soát khó khăn; yêu cầu cao về thời gian, thiết bị và mặt bằng sản xuất; có thể làm phân huỷ các dược chất nhạy cảm với ẩm và nhiệt; và gây hao hụt nguyên liệu trong quá trình bào chế[3], [11]

Quá trình tạo hạt ướt phổ biến nhất gồm 3 giai đoạn chính: nhào ẩm, xát hạt, sấy hạt Tuỳ từng phương pháp, các giai đoạn này có sự thay đổi Ở qui mô sản xuất lớn, hỗn hợp bột được nhào trộn với tá dược dính trong máy nhào trộn cao tốc, sau đó rây hạt ướt và sấy hạt Với cách này, hạt tạo thành ngay trong quá trình nhào trộn, ở qui

mô sản xuất nhỏ, khối ẩm được nhào trộn trong máy nhào trộn thường, sau đó xát qua rây hoặc máy xát và sấy khô Cũng có thể tạo hạt ướt trong thiết bị tầng sôi bằng cách phun tá dược dính lỏng vào hỗn hợp bột làm cho các tiểu phân liên kết với nhau thành hạt đồng thời sấy hạt ngay do tác động của không khí nóng Phương pháp sau cùng yêu cầu ít thao tác, tiết kiệm thời gian, mặt bằng sản xuất, hạn chế thời gian dược chất tiếp xúc với ẩm và nhiệt và có thể tự động hoá được [11]

Trong quá trình tạo hạt ướt, các tiểu phân liên kết với nhau bằng cầu nối lỏng giữa các tiểu phân rắn, lực liên kết giữa các phân tử, lực Van der Waals và lực hút tĩnh điện Trong đó cầu nối lỏng giữa các tiểu phân rắn đóng vai trò chủ yếu Quá trình hình thành hạt trong phương pháp dùng lực nhào trộn được mô tả qua sự biến đổi lớp phim chất lỏng xung quanh các tiểu phân từ trạng thái tĩnh sang trạng thái động tương ứng với sự tăng dần của tá dược dính và quá trình nhào trộn Khi tá dược dính còn ít, chất lỏng hình thành đai hình thấu kính ở điểm tiếp xúc giữa các tiểu phân Các tiểu phân liên kết với nhau bằng sức căng bề mặt chung rắn- lỏng-khí và sức hút thuỷ tĩnh của cầu chất lỏng Nhờ quá trình nhào trộn, lượng chất lỏng xung quanh mỗi tiểu phân tăng lên, liên kết giữa các tiểu phân chặt chẽ hơn Đến một giai đoạn nào đó, khoảng trống giữa các tiểu phân trong hạt được lấp đầy chất lỏng, các tiểu phân liên kết với nhau bằng sức căng bề mặt của hai pha rắn - lỏng, hạt được hình thành [11]

Khi tạo hạt ướt bằng các phương pháp tạo hạt khác nhau, đặc tính của hạt (độ trơn chảy, tỷ trọng, độ xốp, độ bền cơ học, đặc tính bề mặt ) rất khác nhau Hạt tạo thành bằng phương pháp đùn và tạo pellet hoặc bằng thiết bị tầng sôi có hình cầu, độ bền cơ học cao và bề mặt nhẵn Trong khi đó phương pháp xát hạt qua rây làm hạt xốp, bề mặt không nhẩn và hình dạng hạt không đồng đều Tá dược dính có ảnh hưởng đáng kể đến đặc tính của hạt Trong quá trình bào chế, các vấn đề cần được khảo sát là ảnh hưởng của sự phân bố tá dược dính lên khối bột, nồng độ, tính chất vật lí của tá dược dính cũng như tương tác giữa tá dược dính với các thành phần khác trong công thức tạo hạt Bởi vì, các yếu tố này liên quan, tác động lẫn nhau rất khó

để dự đoán ảnh hưởng của chúng đến đặc tính của hạt nếu khồng qua nghiên cứu thực nghiệm [11].

1.2.2 K ỹ thuật bao hạt

Bao hạt nhằm mục đích bảo vệ dược chất; hạn chế sự tương tác giữa các thành phần khi đóng nang, dập viên ; cải thiện sinh khả dụng của dược chất (bao tan trong ruột, bao giải phóng dược chất kéo dài) Phương pháp bao phổ biến và phát triển nhất hiện nay là phương pháp bao phim Bao phim là quá trình tạo một lớp màng mỏng đồng nhất bao gồm polyme, chất hoá dẻo, chất màu và các chất phụ gia khác lên bề mặt nhân bao Phương pháp này có ưu điểm là màng bao rất mỏng, quá trình bao nhanh, ít ảnh hưởng đến nhân bao, dễ tự động hoá [4], [16]

Hiện nay, thiết bị bao tầng sôi là thiết bị phù hợp nhất dùng để bao màng nhờ năng lực sấy và đảo nhân cao Nguyên tắc hoạt động dựa trên patent thiết kế của Wurster:

Không khí nóng (điều chỉnh được nhiệt độ) được nén dưới một áp lực nào đó

đi qua một tấm có các lỗ phân phối khí ở phần đáy của thiết bị, các nhân nằm trong vùng bao được luồng khí này đẩy chuyển động từ dưới lên và đi vào vùng phun dịch, tại đây các nhân sẽ được nhận các giọt dịch phun một cách ngẫu nhiên, đồng thời tiếp tục bị đẩy lên phía trên của thiết bị, tại đó áp lực khí nén giảm một cách đột ngột (do thể tích của buồng bao tăng lên), dưới tác dụng của lực trọng trường các nhân sẽ rơi từ trên xuống Các nhân chuyển động xáo trộn liên tục dưới tác dụng của hai lực ngược chiều nhau và được treo trong luồng không khí nóng, dung môi bay hơi nhanh và thoát ra ngoài cùng luồng khí thải [4], [16]

Khi bao bằng thiết bị tầng sôi, quá trình bao phim gồm 3 quá trình xảy ra đồng thời: quá trình phun dịch bao, quá trình sấy và quá trình treo nhân bao trong vùng phun dịch Để đảm bảo chất lượng màng bao, quá trình bao phải được tiến hành trong các điều kiện sao cho:

• Đảm bảo sự cân bằng giữa tốc độ phun dịch và tốc độ sấy

• Đảm bảo sự đồng nhất trong việc phân phối dịch bao lên bề mặt nhânbao

Do đó, chất lượng màng bao có thể bị ảnh hưởng bởi các thông sô kỹ thuật sau:

> Tốc độ thổi khí:

Tăng tốc độ thổi khí nhân bao sẽ bị đẩy lên cao Tốc độ thổi khí quá cao sẽ làm các nhân bao có khối lượng và kích thước nhỏ bay quá cao, không nhận được dịch bao Xu hướng này là do ảnh hưởng của luồng khí hình phễu lên khối hạt đang chuyển động [14]

> Khoảng cách từ lưới phân phối khí đến mép dưới của buồng bao:

Thông số này ảnh hưởng đến mật độ của nhân bao được treo ở vùng phun dịch Tăng khoảng cách này lượng nhân bao được treo ở vùng phun dịch tăng lên đến cực đại sau đó giảm dần Nếu khoảng cách này quá lớn, không đủ chênh lệch áp suất để kéo nhân bao lên khỏi buồng bao, giảm khoảng cách này nhân bao sẽ chuyển động nhanh qua khe giữa buồng bao và lưới phân phối khí lên vùng phun dịch Tuy nhiên nếu quá hẹp hạn chế sự bay lên của nhân bao [14]

> Kích thước nhân bao và khối lượng nhân bao trong một mẻ bao:

Ảnh hưởng của các yếu tố này có liên quan đến tốc độ thổi khí và khoảng cách

từ lưới phân phối khí đến mép dưới buồng bao Nếu kích thước nhân bao và khối lượng nhân bao quá lớn hay quá nhỏ thì tốc độ thổi khí và khoảng cách trên phải phù hợp để nhân bao có thể treo trong vùng phun dịch

Nguyên lý hoạt động và cấu tạo thiết bị tầng sôi W urster được minh hoạ ở hình 1.1 và 1.2 [14], [16]

Hình 1.1 Nguyên lý hoạt động của thiết bị tầng sôi Wurster

Nói bao

ị Bu 0113 bao

—— Cột ctõ' -Lưới ịMina

[Miổi iilii -V òì pliuu

Hình 1.2 Sơ đồ cấu tạo thiết bị tầng sôi Wurster

1.3 Sơ lược về thuốc tác dụng kéo dài

1.3.1 Khái niệm về thuốc tác dụng kéo dài

Thuốc tác dụng kéo dài là những chế phẩm có khả năng kéo dài quá trình giải phóng và hấp thu dược chất từ dạng thuốc nhằm duy trì nồng độ dược chất trong máu trong vùng điều trị trong thời gian dài với mục đích kéo dài thời gian điều trị, giảm số lần dùng thuốc cho người bệnh, giảm tác dụng không mong muốn, nâng cao hiệu quả điều trị của thuốc [4]

1.3.2 ưu nhược điểm của thuốc tác dụng kéo dài

• Duy trì nồng độ dược chất trong máu trong vùng điều trị, giảm dao động nồng độ thuốc trong máu, do đó giảm tác dụng không mong muốn của thuốc.

• Giảm được số lần dùng thuốc cho người bệnh, tránh phiền phức, bỏ thuốc, quên thuốc, đảm bảo được sự tuân thủ chế độ điều trị của bệnh nhân

• Nâng cao sinh khả dụng của thuốc, do thuốc được hấp thu đều đặn và triệt để hơn Trong nhiều trường hợp tập trung được nồng độ thuốc cao tại nơi điều trị, phát huy tối đa tác dụng của thuốc

• Giảm tổng liều thuốc cho cả đợt điều trị do đó giảm bớt hoặc loại trừ phản ứng bất lợi, giảm bớt sự tích luỹ của thuốc khi điều trị các bệnh mạn tính và nâng cao hiệu quả điều trị [4]

• Nếu có hiện tượng ngộ độc, tác dụng phụ hay không chịu thuốc sẽ nguy hiểm

vì thuốc không thải trừ ngay khỏi cơ thể được

• Thuốc tác dụng kéo dài là những dạng bào chế đòi hỏi kĩ thuật cao Khi uống, quá trình giải phóng dược chất trong đường tiêu hoá lại phụ thuốc rất nhiều yếu tố Do đó nếu có sai sót trong kĩ thuật bào chế hay những thay đổi sinh học ở cá thể người bệnh đều có thể dẫn đến thất bại trong đáp ứng lâm sàng so với ý đổ thiết

kế ban đầu

• Chỉ có một số ít dược chất chế được dưới dạng tác dụng kéo dài [4]

1.3.3 Các hệ thuốc tác dụng kéo dài dùng qua đường uống

Có nhiều hệ tác dụng kéo dài dùng theo đường uống với các cơ chế giải phóng dược chất khác nhau [4], [19], [20]:

• Hệ khuếch tán gồm 2 loại: hệ màng bao khuếch tán và hệ cốt trơ khuếch tán

• Hệ hoà tan gồm 2 loại: hệ màng bao hoà tan và hệ cốt thân nước và sơ nước ăn mòn

• Hệ trao đổi ion

• Hệ thẩm thấu

Phần 2: THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị nghiên cứu và phương pháp thực nghiệm

2.1.1 Nguyên vật liệu

Bảng 2.1 Nguyên vật liệu

2.1.2 Thiết bị nghiên cứu

- Bộ rây phân tích kích thước hạt Trung Quốc

- Cân kỹ thuật Satorius

- Cân phân tích SATORIUS

- Máy đo quang Hitachi u 1800

- Máy bao tầng sôi UNIGLATT

- Máy siêu âm ƯLTRASONIC LC 60H

- Hệ thống thử hoà tan VANKEL- VARIAN

- Máy đo độ trơn chảy ERWEKA GWF

- Máy đo khối lượng riêng biểu kiến ERWEKA SVM

- Máy đo độ mài mòn PHARMATEST PTF E

- Cân xác định độ ẩm nhanh SATORIUS MA 30

2.1.3 Phương pháp nghiên cứu

■ Phương pháp xây dựng đường chuẩn

Xây dựng đường chuẩn ACV trong môi trường nước cất

- Cân chính xác 100 mg ACV, hoà với 60ml nước cất, siêu âm khoảng 1 giờ, thêm nước cất vừa đủ 100 ml dung dịch Sau đó pha loãng thành các dung dịch có

nồng độ lần lượt 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 |ig/ml Tiến hành đo mật độ quang các dung

dịch trên ở bước sóng 250nm

Từ kết quả thu được xây dựng phương trình hồi quy thực nghiệm, vẽ đồ thị

biểu thị sự tương quan giữa mật độ quang và nồng độ dược chất

Tá dược độn (thay đổi theo mục đích nghiên cứu) : 20 (g)

Tá dược dính (thay đổi theo mục đích nghiên c ứ u ): vừa đủ

Quy trình bào chế hạt ACV gồm các giai đoạn mô tả bằng sơ đồ ở hình 2.1

Hạt sau khi sấy được rây để chọn hạt có kích thước trong khoảng từ 0,5 đến 1

mm Phần bột mịn để bào chế tiếp mẻ sau

<$> Bao hạt bằng dung dịch PVA 3% trong ethanol 70 %

-Chuẩn bị dịch bao:

Phân tán 3 g PVA trong khoảng 15 ml nước cất, đun cách thuỷ 30 phút, khuấy

cho tan hết Thêm cồn 80 % vừa đủ 100 ml

-Tiến hành bao hạt với dịch bao trên với tỉ lệ khối lượng hạt: thể tích dịch bao

là 1:1 bằng máy bao tầng sôi với các thông số trình bày ở bảng 2.2.

Sau khi phun hết dịch bao, cho máy hoạt động với các thông số trên 15 phút

rồi lấy hạt ra Hạt sau khi bao được rây lấy hạt có kích thước 0,5 - 1 mm

Hình 2.1 Sơ đồ các giai đoạn bào chê hạt ACV bằng phương pháp xát hạt

ướt

> Bào chê hạt ACV TDKD

Hạt ACV thu được ở trên được bao một lớp màng TDKD với polyme tạo màng

là EC

- Chuẩn bị dịch bao

Ngâm và hoà tan hoàn toàn EC trong một lượng ethanol 96% Thêm chất hoá dẻo DBP hoặc TEC và PVP vào dung dịch EC (a) Nghiền kỹ magnesi stearat, rây qua rây 125 |_im, thêm ethanol vào nghiền kỹ, kéo dần vào cốc chứa dịch (a) Khuấy trên máy khuấy từ khoảng 1 giờ Lọc qua rây 125 |im thu được hỗn dịch bao đồng nhất Thêm ethanol 96% vừa đủ thể tích Quá trình khuấy được tiến hành liên tục trong suốt quá trình bao

- Tiến hành bao hạt theo công thức dịch bao như trên bằng m ^b Ịp crtần g sôi với các thông số của máy bao được thiết lập như bảng 2.2, riéng/đọ mò' cửa tlĩộr

7 1,1 4—Ig/đọrnò' cửa thộuư

khí: nghiêng 60° Sau khi phun hết dịch bao, cho máy hoạt động với các thông số trên 15 phút rồi lấy hạt đã bao ra sấy ở 50° c trong 1 giờ để ổn định màng.

Bảng 2.2 Các thông sô kỹ thuật bao bằng thiết bị tầng sôi

> Bào c h ế viên nang cứng ACV TDKD

Hạt sau khi bao được đóng vào nang cứng bằng thiết bị đóng nang thủ công Hàm lượng ACV trong mỗi viên nang là 200 mg

■ Phương pháp đánh giá tiêu chuẩn chất lượng

• Phương pháp phân tích kích thước hạt

Sử dụng các rây có kích thước mắt rây 500, 800, 1000 I^m Mẫu hạt đem xác định được cho rây qua các loại rây có kích thước lỗ rây nhỏ dần, cân lượng hạt giữ lại trên mỗi cỡ rây, từ đó xác định phần trăm lượng hạt ở mỗi phân đoạn

• Phương pháp xác định hiệu suất tạo hạt

Hiệu suất tạo hạt (H) được tính theo công thức sau:

• Phương pháp xác định độ trơn chảy

Tốc độ chảy của hạt ACV chưa bao và hạt bao TDKD được đo trên máy đo ERWEKA GWF với đường kính lỗ phễu 12 mm Tốc độ chảy được tính theo công thức:

v = tg(pv: Tốc độ chảy (g/giây)

(p: Góc giữa đường thẳng biểu diễn sự phụ thuộc của khối lượng hạt chảy theo thời gian và trục hoành (trục thời gian)

• Phương pháp đo khối lượng riêng biểu kiến

Thể tích biểu kiến của hạt ACV và hạt bao ACV TDKD được đo trên máy đo ERWEKA SVM Cân một lượng hạt (g) cho vào ống đong, rung đến thể tích không đổi V (ml) Khối lượng riêng biểu kiến được tính theo công thức:

d = m /vTrong đó:

d: Khối lượng riêng biểu kiến (g/ml)

m: Khối lượng hạt hoặc hạt bao TDKD (g)

V: Thể tích biểu kiến của hạt (ml)

• Phương pháp xác định độ mài mòn (đối với hạt chưa bao)

Tiến hành trên máy đo độ mài mòn PHARMATEST Cân chính xác khoảng 5

g hạt cho vào trống quay, quay 100 vòng Sau đó lấy hạt ra, rây qua rây 315 |im để loại bột mịn Cân lại mẫu hạt sau khi rây Kết quả được tính như sau:

„ iTLi - m2

X ( % ) = X 100

X : độ mài mònm,: khối lượng hạt trước khi bị mài mòn (g)

m2: khối lượng hạt sau khi bị mài mòn (g)

• Phương pháp xác định độ ẩm

Tiến hành trên cân xác định độ ẩm nhanh Sartorius MA 30 Cân khoảng 5 g hạt, nghiền mịn, đặt vào đĩa cân, đặt nhiệt độ là 105°c, theo dõi và đọc kết quả

• Phương pháp xác định độ bền cơ học khi bao trên thiết bị tầng sôi

Cho hạt vào máy tầng sôi với các thông số như ghi ở bảng 2.2 Sau 30 phút mẫu hạt được lấy ra, rây qua rây 500 |im rồi cân khối lượng hạt trên rây, tính phần trăm so với tổng khối lượng hạt ban đầu Tỉ lệ hạt trên rây càng lớn, độ bền cơ học của hạt càng cao

• Phương pháp định lượng dược chất từ hạt [13], [29]

Tiến hành theo phương pháp đo quang ở bước sóng X = 250 nm

- Mẫu thử: nghiền kỹ hạt ACV bằng máy nghiền bi Cân chính xác một lượngbột chứa khoảng 100 mg ACV, siêu âm khoảng 30 phút với 60 ml dung dịch NaOH 0,1 M để hoà tan hết ACV Chuyển vào bình định mức 100 ml thêm dung dịchNaOH 0,1M đến vạch, ỉắc kỹ, lọc Bỏ 30 ml dịch lọc đầu, lấy chính xác 1 ml dịch

lọc cho vào bình định mức lOOml, thêm nước cất đến vạch, lắc đều Đem đo quang ở

bước sóng 250 nm Song song tiến hành mẫu chuẩn

- Mẫu chuẩn: cân chính xác khoảng lOOmg ACV, siêu âm khoảng 30 phút với

60 ml dung dịch NaOH 0,1 M sau đó tiến hành tương tự thu được dung dịch chuẩn

có nồng độ khoảng 10 |ig/ml

Hàm lượng ACV được tính theo công thức sau:

Y(%) = D,.mc/Dc.mt X 100Trong đó:

Y: hàm lượng acyclovir (%)

Dt: Mật độ quang của dung dịch thử

Dc: Mật độ quang của dung dịch chuẩn

mt: khối lượng bột mẫu thử (mg)

mc: khối lượng ACV mẫu chuẩn (mg)