Nghiên cứu bào chế viên nén isosorbid mononitrat 60 mg tác dụng kéo dài

Mục lục Danh mục các ký hiệu, các chữviết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình MỞ ĐẦU .........................................................................................................1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN..........................................................................3 2.1. Tổng quan về isosorbid mononitrat .........................................................4 2.2. Viên nén phóng thích kéo dài ..................................................................9 2.3. Tổng quan về đánh giá tương đương sinh học ........................................13 2.4. Thẩm định phương pháp phân tích trong dịch sinh học ..........................20 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .............25 2.1. Nguyên liệu, hoá chất và thiết bị.............................................................25 2.2. Phương pháp nghiên cứu .........................................................................26 2.2.1. Phương pháp nghiên cứu bào chế.........................................................26 2.2.2. Khảo sát tính chất viên ISMN 60 mg....................................................30 2.2.3. Sản xuất viên ISMN 60 mg PTKD với cỡlô 10.000 viên ....................32 2.2.4. Xây dựng tiêu chuẩn cơsởviên ISMN 60 mg PTKD ..........................33 2.2.5. Nghiên cứu độ ổn định và ước tính tuổi thọ.......................................34 2.2.6. Nghiên cứu tương đuơng sinh học .......................................................34 CHƯƠNG 3. KẾT QUẢNGHIÊN CỨU ......................................................45 3.1. Nghiên cứu bào chế..................................................................................45 3.1.1. Xây dựng và thẩm định qui trình định lượng ISMN.............................45 3.1.2. Khảo sát viên đối chiếu .........................................................................49 3.1.3. Nghiên cứu xây dựng công thức viên ISMN 60 mg PTKD.................51 3.1.4. Sản xuất thửviên bao phim ISMN 60 mg ởqui mô 10.000 viên ........59 3.2. Dựthảo tiêu chuẩn cơsởviên bao phim ISMN 60 mg PTKD ................64 3.3. Khảo sát độ ổn định và ước tính tuổi thọ................................................70 3.3.1. Tính chất sản phẩm nghiên cứu trước khi thử độ ổn định ....................70 3.3.2. Kết quảthử độ ổn định trong điều kiện bảo quản dài hạn ....................71 3.3.3 .Kết quảthử độ ổn định trong điều kiện lão hoá cấp tốc .......................72 3.4. Nghiên cứu đánh gia tương đương sinh học .........................................76 3.4.1. Xây dựng và thẩm định phương pháp phân tích ISMN trong huyết tương .................................................................................76 3.4.2. Đánh giá tương đương sinh học viên nén ISMN 60 mg so với viên đối chứng Imdur ® 60 mg...............................................................89 BÀN LUẬN ....................................................................................................105 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ........................................................................109 TÀI LIỆU THAM KHẢO

BÁO CÁO KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN ISOSORBID MONONITRAT 60 MG

TÁC DỤNG KÉO DÀI

Cơ quan chủ trì đề tài: Đại Học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Lê Hậu

TP Hồ Chí Minh - 2011

BÁO CÁO KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN ISOSORBID MONONITRAT 60 MG

TÁC DỤNG KÉO DÀI

Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ trì đề tài

(ký tên) (ký tên và đóng dấu)

I THÔNG TIN CHUNG

1 Tên đề tài/dự án SXTN:

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN ISOSORBID MONONITRAT 60 MG

TÁC DỤNG KÉO DÀI Thuộc: Đề tài độc lập cấp Bộ (tuyển chọn) năm 2006

- Chương trình (tên, mã số chương trình):

2 Chủ nhiệm đề tài/dự án SXTN:

Họ và tên: LÊ HẬU

Ngày, tháng, năm sinh: 14-02-1959 Nam/ Nữ: Nam

Học hàm, học vị: Phó giáo sư – Tiến sĩ

Chức danh khoa học: Giảng viên chính Chức vụ: Phó trưởng bộ môn

Điện thoại: Tổ chức: 38295641 Nhà riêng: 35118870 Mobile: 0913100449

Tên tổ chức đang công tác: Đại học Y Dược TP.HCM

Địa chỉ tổ chức: 217 Hồng Bàng, Quận 5, Tp Hồ Chí Minh

Địa chỉ nhà riêng: 321 đường D2 nối dài, P 25, Bình Thạnh , Tp Hồ Chí Minh

3 Tổ chức chủ trì đề tài/dự án:

Tên tổ chức chủ trì đề tài: Đại học Y Dược Tp.HCM

Điện thoại: 38295651 Fax: 38225435

E-mail: duockhoa@saigonnet.vn

Website: yds.edu.vn ; uphcm.edu.vn

Địa chỉ: 41 Đinh Tiên Hoàng Quận 1, Tp.HCM

Họ và tên thủ trưởng tổ chức: GS.TS Lê Quan Nghiệm

Số tài khoản: Đại học Y Dược TP Hồ chí Minh, số 931010500007

Ngân hàng: Kho bạc nhà nước, Quận 5, TP Hồ Chí Minh

Tên cơ quan chủ quản đề tài: Bộ Y Tế

- Được gia hạn (nếu có):

Thời gian (Tháng, năm)

Kinh phí (Tr.đ)

Ghi chú

(Số đề nghị quyết toán)

c) Kết quả sử dụng kinh phí theo các khoản chi:

Đối với đề tài:

Số

TT

Số, thời gian ban hành

văn bản Tên văn bản

Ghi chú

1 2632/QĐ-BYT

Ngày 26/07/2006

Quyết định về việc phê duyệt đề tài khoa học công nghệ cấp bộ

Isosorbide dinitrat thành isosorbide mononitrat

Công văn cho phép gia hạn đề tài

4 Tổ chức phối hợp thực hiện đề tài, dự án:

Nội dung tham gia chủ yếu

Sản phẩm chủ yếu đạt được

Ghi chú*

1

2

- Lý do thay đổi (nếu có):

5 Cá nhân tham gia thực hiện đề tài, dự án:

(Người tham gia thực hiện đề tài thuộc tổ chức chủ trì và cơ quan phối hợp, không quá 10 người kể cả chủ nhiệm)

Nội dung tham gia chính

Sản phẩm chủ yếu đạt được

Ghi chú*

tham gia vào tất cả các nội dung

2 PGS TS Hoàng

Minh Châu

DS Bủi Thiện Tin

Đánh giá tương đương sinh học

Xác định được tương đương sinh học của thuốc

- Lý do thay đổi (nếu có):

- PGS TS Hoàng Minh Châu: Thôi tham gia đề tài do nghỉ hưu

- DS Lê Thị Bạch Quyên, TS Nguyễn Thiện Hải, Th.S Nguyễn Ngọc Vinh, DS Dương Công Minh: không tham gia do bận công tác

6 Tình hình hợp tác quốc tế:

Số

TT

Theo kế hoạch

(Nội dung, thời gian, kinh phí,

địa điểm, tên tổ chức hợp tác,

số đoàn, số lượng người tham

1

2

- Lý do thay đổi (nếu có):

7 Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị:

(Nội dung, thời gian,

kinh phí, địa điểm )

4.180.000 đồng Khoa Dược- ĐH Y Dược TP.HCM

2 Công nghệ bao phim trong

nghiên cứu thuốc phóng thích

6.190.000 đồng Khoa Dược- ĐH Y Dược TP.HCM

- Lý do thay đổi (nếu có):

1 Khảo sát viên phóng

thích kéo dài chứa

isosorbid mononitrat

06/2006 – 12/2006

Đã khảo sát hàm lượng, tốc

độ phóng thích của viên phóng thích kéo dài lưu hành trên thị trường và chọn được sản phẩm đối chiếu

Chọn được polymer phù hợp

để bào chế viên có tốc độ phóng thích tương đương thuốc đối chiếu

-Dự thảo tiêu chuẩn cơ sở 07/2010 -12/2010

Th.S Lê thị Thu Vân –

DS Bùi Thiện Tin

5 Nghiên cứu xây dựng

qui trình định lượng

thuốc trong dịch sinh

học

07/2008 12/2008

-Xây dựng và thẩm định được qui trình định lượng

isosorbid mononitrat trong huyết tương

07/2009 -12/2009

Bùi Thiện Tin, Lê Hậu

6 Nghiên cứu độ ổn định

sản phẩm ở điều kiện

lão hoá cấp tốc và điều

kiện bảo quản dài hạn

12/2008

01/2008-Ước tính được tuổi thọ của sản phẩm

04/2009-04/2010

Lê Hậu, Lê Thị Thu Vân

7 Đánh giá tương đuơng

sinh học

12/2008

01/2008-Đánh giá tương đương sinh học trên 14 người tình nguyện, kết luận thuốc tương đương sinh học với sản phẩm Imdur 60 mg 09/2010-10/2010

Lê Hậu, Bùi Thiện Tin

- Lý do thay đổi (nếu có): Các nội dung nghiên cứu nêu trên được thực hiện trên isosorbid mononitrat Tiến độ thực hiện các nội dung đều chậm Nguyên nhân là khi

III SẢN PHẨM KH&CN CỦA ĐỀ TÀI, DỰ ÁN SXTN

1 Sản phẩm KH&CN đã tạo ra:

Thực tế đạt được

1 Qui trình công nghệ sản

xuất viên phóng thích

kéo dài

Sản phẩm có tốc độ phóng thích so sánh được với thuốc mẫu

Sản phẩm có tốc độ phóng thích tương đương với thuốc mẫu (tính toán theo f 2 )

2 Hồ sơ về qui trình sản

xuất thử ở qui mô pilot

Thực hiện trên 03 lô

để chứng minh qui trình sản xuất có tính

ổn định

Sản phẩm từ 03 lô pilot có chất lượng đồng nhất

3 Hồ sơ nghiên cứu độ ổn

định ở điều kiện lão hoá

cấp tốc và điều kiện bảo

quản dài hạn

Thiết kế phù hợp với ICH và FDA

Hoàn thành nghiên cứu

độ ổn định và ước tính được tuổi thọ sản phẩm

4 Hồ sơ và kết quả nghiên

cứu tương đương sinh

học

Nghiên cứu thiết kế theo tiêu chuẩn Châu

Âu hoặc ASEAN

Đã nghiên cứu trên 14 NTN và kết luận được tương đuơng sinh học

- Lý do thay đổi (nếu có):

TT Tên sản phẩm Theo

kế hoạch

Thực tế đạt được

Proceeding of the six Indochina conference on pharmaceutical

sciences,2009, pp 321-325

2

Định lượng isosorbid

mononitrat trong huyết

tương người bằng phương

pháp sắc ký lỏng hiệu năng

cao

Không đăng ký

Tạp Chí Y Học TP.HCM, Phụ bản tập 15, số 1, 2011,

141-145

- Lý do thay đổi (nếu có):

d) Kết quả đào tạo:

Số lượng

Số

TT

Cấp đào tạo, Chuyên

ngành đào tạo Theo kế hoạch Thực tế đạt

được

Ghi chú (Thời gian kết thúc)

- Lý do thay đổi (nếu có):

đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp, quyền đối với giống cây

Ghi chú

(Thời gian kết thúc)

dụng)

1

2

2 Đánh giá về hiệu quả do đề tài, dự án mang lại:

a) Hiệu quả về khoa học và công nghệ:

(Nêu rõ danh mục công nghệ và mức độ nắm vững, làm chủ, so sánh với trình độ công nghệ so với khu vực và thế giới…)

Phát triển công nghệ bào chế thuốc phóng thích kéo dài, đây là hướng nghiên cứu tập trung của các nhà nghiên cứu trong và ngoài nước hiện nay

b) Hiệu quả về kinh tế xã hội:

(Nêu rõ hiệu quả làm lợi tính bằng tiền dự kiến do đề tài, dự án tạo ra so với các sản phẩm cùng loại trên thị trường…)

Góp phần nâng cao chất lượng thuốc sản xuất trong nước, đáp ứng nhu cầu điều trị thay thế thuốc ngoại nhập

3 Tình hình thực hiện chế độ báo cáo, kiểm tra của đề tài, dự án:

Số

TT Nội dung

Thời gian thực hiện

Mục lục

Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt

Danh mục các bảng

Danh mục các hình

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 3

2.1 Tổng quan về isosorbid mononitrat 4

2.2 Viên nén phóng thích kéo dài 9

2.3 Tổng quan về đánh giá tương đương sinh học 13

2.4 Thẩm định phương pháp phân tích trong dịch sinh học 20

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25

2.1 Nguyên liệu, hoá chất và thiết bị 25

2.2 Phương pháp nghiên cứu 26

2.2.1 Phương pháp nghiên cứu bào chế 26

2.2.2 Khảo sát tính chất viên ISMN 60 mg 30

2.2.3 Sản xuất viên ISMN 60 mg PTKD với cỡ lô 10.000 viên 32

2.2.4 Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở viên ISMN 60 mg PTKD 33

2.2.5 Nghiên cứu độ ổn định và ước tính tuổi thọ 34

2.2.6 Nghiên cứu tương đuơng sinh học 34

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 45

3.1 Nghiên cứu bào chế 45

3.1.1 Xây dựng và thẩm định qui trình định lượng ISMN 45

3.2 Dự thảo tiêu chuẩn cơ sở viên bao phim ISMN 60 mg PTKD 64

3.3 Khảo sát độ ổn định và ước tính tuổi thọ 70

3.3.1 Tính chất sản phẩm nghiên cứu trước khi thử độ ổn định 70

3.3.2 Kết quả thử độ ổn định trong điều kiện bảo quản dài hạn 71

3.3.3 Kết quả thử độ ổn định trong điều kiện lão hoá cấp tốc 72

3.4 Nghiên cứu đánh gia tương đương sinh học .76

3.4.1 Xây dựng và thẩm định phương pháp phân tích ISMN trong huyết tương 76

3.4.2 Đánh giá tương đương sinh học viên nén ISMN 60 mg so với viên đối chứng Imdur® 60 mg 89

BÀN LUẬN 105

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 109 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

AUC Area Under the Curve Diện tích dưới đường cong

Tmax Time passed since administration at

which the maximal plasma concentration occurs

Thời gian thuốc đạt nồng độ tối đa

bào chế và kiểm nghiệm 25

Bảng 2.2 Danh sách thiết bị 26

Bảng 2.3 Thành phần công thức viên nén ISMN 60 mg phóng thích kéo dài 27

Bảng 2.4 Tiêu chuẩn đánh giá lưu tính của khối hạt dựa vào tỉ trọng 33

Bảng 2.5 Nồng độ các dung dịch chuẩn và thể tích dung dịch chuẩn làm việc 38

Bảng 2.6 Nồng độ các mẫu chuẩn kiểm tra và thể tích dung dịch chuẩn làm việc 39

Bảng 2.7 Mô hình thiết kế chéo đôi, 2 thuốc, 2 trình tự, 2 thời kỳ 41

Bảng 3.1 Các thông số sắc ký tương ứng với mẫu chuẩn 46

Bảng 3.2 Các thông số sắc ký tương ứng với mẫu thử 46

Bảng 3.3 Kết quả khoảng tuyến tính của qui trình định lượng 47

Bảng 3.4 Kết quả khảo sát độ chính xác của phương pháp định lượng ISMN bằng phương pháp HPLC 48

Bảng 3.5 Kết quả thẩm định độ đúng của phương pháp HPLC định lượng ISMN 48

Bảng 3.6 Phần trăm ISMN phóng thích từ viên Imdur ® 60 mg ở các môi trường khác nhau 49

Bảng 3.7 Nghiên cứu sàng lọc công thức với ethyl cellulose 51

Bảng 3.8 Các công thức sàng lọc với Eudragit RL 100, Eudragit RS 100 52

Bảng 3.9 Các công thức sàng lọc với Eudragit RSPO dập thẳng 53

Bảng 3.13 Thành phần và khối lượng nguyên liệu cho cỡ lô 10.000

viên nhân ISMN 60 mg 59

Bảng 3.14 Chỉ số nén và tỉ số Hausner của khối bột trước và sau khi thêm tá dược trơn bóng 61

Bảng 3.15 Kết quả thử nghiệm độ cứng viên nhân ISMN 62

Bảng 3.16 Kết quả độ mài mòn 3 lô viên nhân ISMN 62

Bảng 3.17 Kết quả độ đồng đều khối lượng viên nhân ISMN 62

Bảng 3.18 Kết quả khảo sát hàm lượng trung bình của viên nhân ISMN 63

Bảng 3.19 Hàm lượng các lô thuốc trước khi thử độ ổn định 71

Bảng 3.20 Độ phóng thích hoạt chất của các lô thuốc trước khi thử độ ổn định 71

Bảng 3.21 Kết quả định lượng ISMN trong điều kiện bảo quản dài hạn 71

Bảng 3.22 Kết quả thử độ phóng thích dược chất của sản phẩm trong điều kiện bảo quản dài hạn 72

Bảng 3.23 Sự thay đổi hàm lượng dược chất ở điều kiện lão hoá cấp tốc 72

Bảng 3.24 Kết quả ước tính tuổi thọ của sản phẩm ISMN 60 mg PTKD 74

Bảng 3.25 Kết quả thử độ phóng thích hoạt chất của lô NC0010510 trong điều kiện bảo quản lão hoá cấp tốc 75

Bảng 3.26 Kết quả thử độ phóng thích hoạt chất của lô NC0030510 trong điều kiện bảo quản lão hoá cấp tốc 75

Bảng 3.27 Kết quả thử độ phóng thích hoạt chất của lô NC0050510 trong điều kiện bảo quản lão hoá cấp tốc 75

Bảng 3.30 Tương quan giữa nồng độ và tỷ lệ diện tích đỉnh của isosorbid

mononitrat và guaifenesin 83

Bảng 3.31 Kết quả độ đúng và độ chính xác trong ngày của phương pháp HPLC định lượng ISMN trong huyết tương người 84

Bảng 3.32 Kết quả độ đúng và độ chính xác khác ngày của phương pháp HPLC định lượng ISMN trong huyết tương người 85

Bảng 3.33 Độ đúng – độ chính xác trong ngày và khác ngày của phương pháp HPLC định lượng ISMN trong huyết tương người 86

Bảng 3.34 Kết quả khảo sát tỷ lệ thu hồi của ISMN trong huyết tương (n=6) 87

Bảng 3.35 Tỷ lệ thu hồi của chuẩn nội 87

Bảng 3.36 Kết quả độ ổn định của ISMN trong huyết tương khi bảo quản ở nhiệt độ phòng sau 24 giờ 87

Bảng 3.37 Kết quả độ ổn định của ISMN sau 3 chu kỳ đông – rã đông 88

Bảng 3.38 Kết quả độ ổn định của ISMN sau bảo quản 30 ngày ở nhiệt độ -20oC 88

Bảng 3.39 Kết quả độ ổn định mẫu sau xử lý 12 giờ ở nhiệt độ phòng 88

Bảng 3.40 Kết quả độ ổn định dung dịch gốc 89

Bảng 3.41 Các thông số nhân chủng học của người tình nguyện 92

Bảng 3.42 Kết quả chia nhóm ngẫu nhiên và thời kỳ uống thuốc 92

Bảng 3.43 Nồng độ ISMN từng cá thể sau khi uống thuốc thử nghiệm 95 Bảng 3.44 Nồng độ ISMN từng người tình nguyện

Bảng 3.47 Diện tích dưới đường cong (AUC0-∞) 99 Bảng 3.48 Các thông số dược động học trung bình của

thuốc thử nghiệm và thuốc đối chứng 100 Bảng 3.49 Phân tích phương sai các thông số AUC0-t , AUC0-∞ và Cmax

(dữ liệu đã chuyển dạng ln) 101 Bảng 3.50 Kết quả xác định khoảng tin cậy 90% 102 Bảng 3.51 So sánh giá trị Tmax theo phương pháp thống kê phi tham số

(Wilcoxon Signed Rank Test) 102 Bảng 3.52 Hằng số tốc độ thải trừ, thời gian bán thải

và tỷ lệ AUC 0-t /AUC0-∞ 103

Hình 2.1 Sơ đồ điều chế viên nén ISMN bằng phương pháp xát hạt ướt 28

Hình 2.2 Sơ đồ điều chế viên nén ISMN bằng phương pháp dập thẳng 29

Hình 3.1 Sắc ký đồ của ISMN trong phương pháp HPLC 45

Hình 3.2 Sự liên quan tuyến tính giữa nồng độ ISMN và diện tích đỉnh 47

Hình 3.3 Đường biểu diễn lượng ISMN phóng thích từ viên đối chiếu ở 3 môi trường pH khác nhau .50

Hình 3.4 Đường biểu diễn phóng thích ISMN từ viên Imdur ® 60 mg theo căn bậc 2 của thời gian 50

Hình 3.5 Độ phóng thích hoạt chất của viên I11, I12 .53

Hình 3.6 Độ phóng thích hoạt chất của viên I15 so với Imdur 54

Hình 3.7 Độ phóng thích hoạt chất của viên I15 ở các môi trường pH 1,2; pH 4,5 và pH 6,8 55

Hình 3.8 So sánh độ hòa tan của viên ISMN trước và sau khi bao 58

Hình 3.9 Sơ đồ qui trình sản xuất viên bao phim ISMN 60 mg PTKD 60

Hình 3.10 So sánh độ hòa tan của viên nhân cỡ lô 10.000 viên và qui mô phòng thí nghiệm 63

Hình 3.11 Đường biểu diễn lượng dược chất phóng thích theo thời gian của các lô sản xuất ở qui mô 10.000 viên 64

Hình 3.12 So sánh độ hòa tan của viên ISMN và viên đối chiếu ở môi trường pH 6,8 65

Hình 3.13 So sánh độ hòa tan của viên ISMN và viên đối chiếu ở môi trường pH 4,5 65

PTKD lô số NC 0010510 .73

Hình 3.16 Sự thay đổi hàm lượng của viên Isosorbid mononitrat 60 mg PTKD lô số NC 0030510 .73

Hình 3.17 Sự thay đổi hàm lượng của viên Isosorbid mononitrat 60 mg PTKD lô số NC 0050510 .74

Hình 3.18 Sắc ký đồ mẫu huyết tương trắng .80

Hình 3.19 Sắc ký đồ mẫu huyết tương trắng có ISMN 80

Hình 3.20 Sắc ký đồ mẫu huyết tương trắng, ISMN và chuẩn nội 81

Hình 3.21 Sắc ký đồ mẫu huyết tương chứa ISMN ở nồng độ LLOQ và chuẩn nội guaifenesin .81

Hình 3.22 Sắc ký đồ mẫu huyết tương của người tình nguyện uống ISMN 60 mg phóng thích kéo dài sau 4 giờ 82

Hình 3.23 Đường biểu diễn tương quan nồng độ ISMN trong huyết tương người và tỉ lệ diện tích đỉnh ISMN: guaifenesin 83

Hình 3.24 Đồ thị biểu diễn nồng độ thuốc trong máu theo thời gian của thuốc thử nghiệm và thuốc đối chứng (theo trung bình, dạng dữ liệu thường) .93

Hình 3.25 Đồ thị biểu diễn nồng độ thuốc trong máu theo thời gian của thuốc thử nghiệm và thuốc đối chứng (theo trung bình, dạng dữ liệu logarit) 94

Để kiểm soát một cách chặt chẽ nồng độ ISMN trong máu giúp tăng hiệu quả điều trị và tránh sự dung nạp thuốc thường xảy ra khi dùng nitrat hữu cơ, cần có một hệ thống trị liệu có thể kiểm soát được sự phóng thích hoạt chất trong một khoảng thời gian nhất định Dạng bào chế phóng thích kéo dài là rất thích hợp và cần thiết Các thuốc isosorbid mononitrat phóng thích kéo dài đã được sử dụng rất nhiều trong trị

dụng ISMN phóng thích kéo dài ở Việt Nam khá lớn và là thuốc nhập khẩu từ nước ngoài

Giả thiết nghiên cứu của đề tài

Qua kinh nghiệm thực tiễn trong nghiên cứu phát triển thuốc phóng thích kéo dài

đã đạt được ở nước ta, với các trang thiết bị hiện có tại Đại học Y dược TP.HCM

và các cơ quan hợp tác, việc nghiên cứu xây dựng được một công thức và hoàn chỉnh qui trình công nghệ để có thể sản xuất được thuốc phóng thích kéo dài chứa

Isosorbid mononitrat 60 mg tương đương sinh học với thuốc ngoại nhập là hướng nghiên cứu có tính khả thi cao

Mục tiêu nghiên cứu

Nhằm đáp ứng nhu cầu điều trị và nâng cao chất lượng thuốc sản xuất trong nước

tác già chọn đề tài “Nghiên cứu bào chế viên nén ISMN 60 mg tác dụng kéo dài” với các mục tiêu nghiên cứu như sau:

Mục tiêu tổng quát

Nghiên cứu bào chế viên nén isosorbid mononitrat 60 mg tác dụng kéo dài có tốc

60 mg

Mục tiêu cụ thể

- Nghiên cứu bào chế viên Isosorbid mononitrat 60 mg phóng thích kéo dài có độ

nam

- Nghiên cứu độ ổn định và xác định tuổi thọ của thuốc

- Nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học so sánh với thuốc đối chiếu

- Khối lượng phân tử: 191,14

- Bột kết tinh trắng, không mùi, tan trong nước, methanol, ethanol, aceton, và diclorometan Ít tan trong cloroform và ether Bền trong không khí và trong dung dịch

định lượng ISMN trong nguyên liệu và chế phẩm [8],[10 ], [15],[32[,[33] Phương pháp cũng được nhiều tác giả sử dụng để định lượng ISMN phóng thích trong thử nghiệm giải phóng hoạt chất [7],[28] hoặc trong dịch sinh học [23] Để xác định các chất phân huỷ và tạp chất [27], phương pháp sắc ký khí được sử dụng nhiều do phuơng pháp có độ nhạy cao [39],[49],[50]

- Để định lượng ISMN trong dịch sinh học, phương pháp sắc ký lỏng – khối phổ [29],[51] được sử dụng rất phổ biến; một số tác giả đã sừ dụng phương pháp sắc ký khí để định lượng ISMN trong huyết tương để ứng dụng trong nghiên cứu sinh khả dụng hoặc tương đương sinh học của các thuốc ISMN qui ước hoặc thuốc phóng thích kéo dài [6], [22], [25], [31],[49] Himanshu và cộng sự (2009) đã nghiên cứu ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để ứng dụng trong nghiên cứu tương đương sinh học viên nén ISMN phóng thích kéo dài, độ nhạy của phương pháp đã được xác định là 50 ng/ ml [18]

- Dược lý: Các nitrat tác động chủ yếu trên hệ tĩnh mạch, với liều cao làm giãn cả

hệ động mạch và cả mạch vành Giãn hệ tĩnh mạch làm giảm lượng máu về tim (giảm tiền gánh), hậu quả là giảm áp lực trong các buồng tim Giãn các động mạch

dẫn đến giảm sức cản ngoại vi (giảm hậu gánh), kết quả làm giảm huyết áp nhất là huyết áp tâm thu, tuy không nhiều nhưng có thể gây phản xạ giao cảm làm mạch hơi nhanh và tăng sức co bóp cơ tim Các nitrat còn có tác dụng ức chế kết tập tiểu cầu

Trong suy vành, giảm tiền gánh, giảm hậu gánh sẽ làm giảm công và mức tiêu thụ oxy của cơ tim, cung và cầu về oxy của cơ tim được cân bằng sẽ nhanh chóng cắt cơn đau thắt ngực Thuốc cũng làm giãn động mạch vành, làm mất co thắt mạch, dùng lâu dài còn có tác dụng phân bố lại máu có lợi cho các vùng dưới nội tâm mạc

và làm phát triển tuần hoàn bàng hệ

Trong suy tim, nitrat do làm giảm lượng máu về tim nên đã cải thiện được tiền gánh, làm giảm áp lực thất phải và áp lực tuần hoàn phổi, như vậy giảm các dấu hiệu ứ máu, với liều thích hợp, thuốc lại làm giảm hậu gánh, tạo điều kiện cho tim tống máu tốt hơn, tăng thể tích tâm thu và cung lượng tim

Tuy nhiên, sử dụng lâu dài các thuốc nitrat dùng đường uống và kể cả miếng thuốc dán chứa nitroglycerin có thể gây nên hiện tượng quen thuốc; khi đó, hiệu lực chống thiếu máu cục bộ và chống đau thắt ngực sẽ giảm [44], nguyên nhân được xác định tác động của thuốc trên cơ trơn giảm [19] Để tránh hiện tuợng nay, các thuốc chứa nitrat không nên dùng liên tục trong thời gian dài mà chỉ nên dùng ngắt quãng [45],[46]

- Dược động học: Các nghiên cứu dược động học đã cho thấy ISMN được hấp thu nhanh khi dùng bằng đường uống [40], sinh khả dụng đạt gần 100% và không bị ảnh hưởng bởi thức ăn [1] Nồng độ thuốc đạt đến mức tối đa chi sau

1 giờ Thuốc hầu như không bị chuyển hoá qua gan lần đầu, thời gian bán thải của thuốc khoảng 5 giờ, thể tích phân bố đạt 0,62 lít/kg và thanh thải toàn thân

15 ml/phút Chỉ có khoảng 1-2% liều dùng bằng đường uống được đào thải qua

đường tiểu dưới dạng chưa chuyển hoá, phần còn lại được đào thải dưới dạng chuyển hoá không có hoạt tính Các thông số dược động học của ISMN gần như

tỉ lệ với liều dùng Tính chất dược động học của thuốc rất ổn định và có tính lập lại cao; hầu như không thay đổi ở nguời cao tuổi, người bị bệnh mạch vành, suy thận, hoặc xơ gan

Isosorbid mononitrat hấp thu dễ dàng qua đường uống [9], nồng độ tối đa trong huyết tương đạt được sau khi uống khoảng 0,6 – 0,7 giờ đối với dạng quy ước và 3,1 – 4,5 giờ đối với dạng phóng thích kéo dài Isosorbid mononitrat được thải trừ chủ yếu qua nước tiểu ở dạng denitrat thành isosorbid và liên hợp glucuronic ở dạng mononitrat, sự thải trừ không bị ảnh hưởng của sự khác biệt về tuổi tác, tình trạng bệnh

1.1.4 Chỉ định

Isosorbid có trong danh mục thuốc thiết yếu Việt Nam ban hành lần thứ 5 năm

2005 [3] Thuốc được chỉ định để phòng và điều trị cơn đau thắt ngực và điều trị suy tim sung huyết (phối hợp với các thuốc khác)

Khi dùng liều cao, không nên giảm thuốc đột ngột

Vì chưa có đủ thông tin về ảnh hưởng của thuốc đối với phụ nữ có thai và thuốc có

qua được sữa mẹ hay không, không nên dùng thuốc cho phụ nữ đang cho con bú

1.1.7 Tác dụng không mong muốn

Những ngày đầu điều trị thường có nhức đầu (25% người dùng), do tác dụng giãn mạch của thuốc Triệu chứng này hết sau một tuần

- Tim mạch: Giãn mạch ngoại vi làm da bừng đỏ nhất là ở ngực và mặt, giãn các mạch trong mắt dễ gây tăng tiết dịch và làm tăng nhãn áp, giãn các mạch trong não

có thể gây tăng áp lực nội sọ và làm đau đầu

- Hạ huyết áp thế đứng, choáng váng, chóng mặt hay xảy ra khi dùng thuốc cho những người bệnh có huyết áp thấp, người già

- Ngoài da: Có thể có nổi ban, viêm da tróc vảy, rối loạn tiêu hóa

- Máu: Với liều cao hơn liều điều trị, có thể có methemoglobin máu do thuốc oxy

oxygen

- Tiêu hóa: Buồn nôn

1.1.8 Liều lượng và cách dùng

- Ðiều trị cơn đau thắt ngực:

- Ngậm dưới lưỡi hoặc nhai: 2,5-10 mg/lần, 2-3 giờ một lần cho đến hết cơn đau,

có thể dùng dạng phun (spray) 1,25 mg/lần, phun 1-3 lần vào dưới lưỡi không hít, mỗi lần cách nhau 30 giây [1], [30] Các nghiên cứu về hiệu quả trị liệu đã cho thấy khi dùng liều không đối xứng (lần uống thứ 2 trong ngày cách lần thứ nhất 7 giờ) thuốc sẽ cho hiệu quả chống đau thắt ngực trong khoảng 8-12 giờ [24],[47]

- Phòng cơn đau thắt ngực: Uống 10-20 mg/lần, 3-4 lần mỗi ngày, có thể dùng dạng giải phóng chậm 20-40-60 mg để giảm số lần uống

- Ðiều trị suy tim sung huyết:

Ngậm dưới lưỡi hoặc nhai 5-10 mg, hoặc uống 10-20 mg/lần hoặc hơn, 3-4 lần mỗi ngày rồi giảm xuống liều duy trì, lúc này có thể dùng viên giải phóng chậm

Người cao tuổi: Không có chỉ dẫn đặc biệt, tuy nhiên cần thận trọng, nhất là với người mẫn cảm với thuốc gây hạ huyết áp

Ðộ an toàn và hiệu quả của thuốc đối với trẻ em chưa được xác định, nên không được dùng ISMN cho trẻ em

- Dạng phóng thích kéo dài: Hiện nay có rất nhiều dạng thuốc phóng thích kéo dài với các hàm lượng khác nhau 30 mg, 50 mg, 60 mg, 100 mg, 120 mg Các nghiên cứu về dược lý đã chứng tỏ dạng thuốc ISMN phóng thích kéo dài kiểm soát rõ rệt các triệu chứng đau thắt ngực và tăng thời gian vận động đáng kể ở người bệnh đau thắt ngực [38], hạn chế được tình trạng quen thuốc [16], [17], [34] Do các thuốc phóng thích kéo dài có thể duy trì được nồng độ ISMN trong huyết tương ở mức cao hơn liều trị liệu trong suốt 24 giờ [26] Liều khởi đầu là 30

mg hoặc 60 mg/lần mỗi ngày Sau vài ngày có thể tăng liều lên 120 mg/lần hàng ngày Nên uống thuốc vào mỗi buổi sáng

Nghiên cứu của Adrea và cộng sự [5] trên các bệnh nhân bệnh mạch vành đã cho thấy viên nén ISMN phóng thích kéo dài cho hiệu quả điều trị thiếu máu cục bộ trên cơ tim với thời gian tác động đến 24 giờ

Do những ưu điểm của dạng thuốc phóng thích kéo dài, các nghiên cứu xây dựng công thức và tương đương sinh học đã được nghiên cứu rất nhiều [11],[12]

1.1.9 Tương tác thuốc

Tác động giãn mạch của isosorbid mononitrat có thể làm tăng tác động của các thuốc giãn mạch khác Bệnh nhân đang được điều trị bằng isosorbid mononitrat không được dùng sildenafil [37]

Điều chỉnh liều phù hợp khi dùng chung với các thuốc chẹn kênh calci để tránh

Cách xử trí: Ðiều trị hạ huyết áp cần để người bệnh ở tư thế nằm nâng cao 2 chân,

có thể tiêm truyền dịch, điều trị chứng xanh tím do methemoglobin huyết bằng cách tiêm tĩnh mạch chậm xanh methylen với liều 1-2 mg/kg thể trọng Rửa dạ dày ngay lập tức nếu dùng thuốc qua đường uống [1], [30]

1.2 Viên nén phóng thích kéo dài

Thuốc PTKD là những chế phẩm có khả năng kéo dài quá trình giải phóng và hấp thu dược chất từ dạng thuốc nhằm duy trì nồng độ thuốc trong máu trong một thời gian dài hơn so với dạng thuốc qui ước với mục đích giảm số lần dùng thuốc cho người bệnh, giảm tác dụng phụ không mong muốn, nâng cao hiệu quả điều trị của

thuốc Thuốc PTKD ít nhất phải giảm nửa số lần dùng thuốc cho người bệnh

Thuốc PTKD đã được nghiên cứu và được đưa ra thị trường từ đầu thập niên 1950, khởi đầu là viên spansule chứa amphetamin sulfat Trong khoảng 1950-1970, đã có nhiều thuốc PTKD được sản xuất với tá dược phổ biến là các tá dược tạo khung thân nước Sự phát triển dạng thuốc PTKD trong giai đoạn này có những giới hạn nhất định do thiếu những nghiên cứu sâu về được động học và sinh dược học Đến những năm 1970-1990, những kiến thức về dược động học và sự hấp thu của thuốc được phát triển, các nhà khoa học đã xác định được những nhược điểm của dạng

thuốc qui ước và nghiên cứu các dạng thuốc mới có hiệu quả trị liệu tốt hơn Trong khoảng thập niên 1980, chỉ có hai chuyên luận thuốc PTKD trong dược điển Mỹ (USP 24 năm 1985) Cho đến nay thuốc PTKD đã phát triển nhanh chóng Dược điển Mỹ năm 2007 (USP 30) đã có 39 chuyên luận thuốc PTKD

Thuốc tác dụng kéo dài dùng để uống thuờng được trình bày dưới dạng viên nén có thể có cấu trúc cấu trúc khung và cấu trúc màng bao

Viên nén PTKD dạng khung matrix là dạng thuốc được nghiên cứu và phát triển nhiều nhất do phương pháp sản xuất đơn giản, có thể áp dụng các kỹ thuật kinh điển như tạo hạt, dập viên để nén hỗn hợp gồm hoạt chất, chất mang tạo tác dụng kéo dài và các tá dược khác thành viên

Viên nén khung được phân loại theo tính chất vật lý của khung, tính chất hóa học của khung, động học phóng thích hoạt chất, cơ chế phóng thích hoạt chất

Theo cách phân loại cơ chế phóng thích hoạt chất, viên khung có 2 loại là hệ thống khung khuếch tán và hệ thống khung hòa tan- bào mòn Tuy nhiên cách phân loại này chỉ có tính chất tương đối, một số viên nén điều chế từ các polyme thân nước tạo thành hệ thống khung trương nở phóng thích hoạt chất theo 2 cơ chế phối hợp khuếch tán và bào mòn-hòa tan

Các tá dược tạo khung để kiểm soát tóc độ phóng thích hoạt chất hiện nay phát triển khá nhiều, bao gồm các nhóm tá dược sau:

- Nhóm tá dược tạo khung trơ không tan đã được sử dụng từ cuối những năm 1950

và đã cho ra đời một số chế phẩm thuốc viên tác dụng kéo dài cho các hoạt chất như methamphetamin (Dexosyn–Abbott), sắt sulfat (Ferro-Gradumet- Abbot), tripelennemide HCl (PBZ-SR–Novartis), procainamide HCl (Procan SR- Pfizer),… Các tá dược đầu tiên được sử dụng trong viên nén PTKD là poly ethylen, poly vinyl clorid, nên nhóm này còn được gọi là nhóm chất dẻo không tan (insoluble

plastics) Dicalci phosphat là chất vô cơ duy nhất được sử dụng như tá dược tạo khung PTKD Các arcrylat copolyme (Eudragit RL, Eudragit RS), ethyl cellulose (Ethocel), poly vinyl acetat (Kollidon SR) được nghiên cứu nhiều nhất trong nhóm này Tỉ lệ tá dược được sử dụng tạo khung trơ thay đổi 10- 50% và có thể đến 80% Dicalci phosphat nếu dùng riêng rẻ là 90 – 95% cho hoạt chất có độ tan cao

- Các tá dược thân dầu dùng bào chế thuốc PTKD gồm các sáp, các chất béo và dẫn xuất Dược chất trong các khung sáp và chất béo phóng thích theo cơ chế khuếch tán và bào mòn Hai tiêu chuẩn đầu tiên để chọn các tá dược thuộc nhóm này là điểm chảy và thể chất, tá dược có điểm chảy thấp và thể chất mềm thì không sử dụng làm khung cho thuốc viên nén PTKD vì không đảm bảo tính chất vật lý của viên nén Các chất trong nhóm thường được sử dụng cho viên nén PTKD là sáp carnauba, stearyl alcol, acid stearic, sáp thầu dầu, sáp ong, dầu thực vật hydrogen hoá, poly ethylen glycol monostearat, triglycerid, Mặc dù có điểm chảy thấp nhưng các tá dược thân dầu cũng khá bền với nhiệt: sáp thầu dầu không bị biến tính

này thuận lợi trong phương pháp bào chế có gia nhiệt

Các tá dược thân dầu có thể dùng riêng lẻ hay phối hợp với các tá dược tạo khung khác cùng nhóm hay khác nhóm Hỗn hợp dầu thầu dầu hydrogen hóa: propylene glycol monostearat (1:1), sáp carnauba: stearyl alcol (1:1), sáp carnauba: acid stearic (1:1) là tá dược tạo khung cho cả dược chất tan trong nước và không tan trong nước Sáp carnauba còn được phối hợp với các tá dược khác như hypromellose, hydroxypropyl cellulose, alginate/pectin-gelatin, Eudragit để điều chế viên nén PTKD Sự phóng thích dược chất có thể điều chỉnh hiệu quả hơn bằng cách thêm chất diện hoạt hoặc chất tạo kênh như natri clorid, đường, polyol, polyme thân nước để làm gia tăng tốc độ thấm của nước vào khung và sau đó bị

bào mòn Sự lựa chọn các chất phối hợp phải căn cứ vào tính chất hoạt chất và tốc

độ phóng thích hoạt chất dự kiến Do có nhiệt độ nóng chảy thấp nên nhiệt sinh ra trong quá trình dập viên có thể làm chảy các sáp tạo khung và gây nên hiện tượng dính chày Vì vậy khi sử dụng các tá dược sáp, cần thêm vào công thức chất chống dính, thích hợp nhất là talc (4-6%), coloidal silicon dioxid (0,5-1%) và nên dập viên ở môi trường có nhiệt độ thấp Các chất chống dính còn đóng vai trò tá dược trơn chảy trong công thức Không cần thêm tá dược trơn bóng vì các tá dược thân dầu sẽ tạo ra một màng phim bóng khi dập viên Vì vậy, magie stearat, nếu có trong công thức chỉ đóng vai trò tá dược chống dính

Nhược điểm chủ yếu của khung thân dầu là sự phóng thích dược chất không lập lại giống nhau trong cơ thể vì các chất dầu có thể bị tác động của các men tiêu hóa như lipase, nhiệt độ, tác động cơ học khác trong đường tiêu hóa

- Nhóm tá dược thân nước chiếm một tỉ lệ khá lớn trong tổng số các tá dược tạo khung Các tá dược thân nước bao gồm:

- Các polyme thiên nhiên và bán tổng hợp không thuộc dẫn chất cellulose như natri alginat, gôm xanthan, gôm guar, chitosan, tinh bột biến tính,…

- Polyme của acid acrylic là carbome và tên thương mại là carbopol Carbopol 934

là chất được nghiên cứu nhiều nhất để tạo khung Polyme này có tính ion hóa nên

pH là một yếu tố cần quan tâm khi chọn tá dược này

- Các cellulose ether như methyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose (HPMC) là các chất tạo khung không ion hóa và natri carboxymethyl cellulose là chất tạo khung ion hóa Nhóm này được sử dụng nhiều nhất và HPMC

Chất tạo khung HPMC không tương tác với các dược chất có tính acid hoặc kiềm

và dễ dàng phối hợp với các tá dược tạo khung khác HPMC có nhiều loại với độ

nhớt khác nhau, loại dùng để tạo khung cho thuốc PTKD thường là loại K100, K15M, Metolose 60SH và 90SH với tỉ lệ trong khoảng 10-80% tuỳ thuộc vào tính tan của hoạt chất và các tá dược khác có trong viên

Động học phóng thích dược chất từ khung polyme thân nước phụ thuộc vào tính chất hóa lý của lớp gel, độ tan trong nước của dược chất, sự mài mòn của khung trong môi trường thử

Tốc độ phóng thích chỉ đạt được tuyến tính khi tốc độ trương nở và tốc độ mài mòn của khung bằng nhau Do đó, nhiều tá dược khác thường được phối hợp cùng các polyme thân nước để điều chỉnh tốc độ phóng thích dược chất Các tá dược như tá dược trơn bóng, tá dược độn, chất diện hoạt, chất làm thay đổi pH, đặc biệt là tính chất tan hay không tan của tá dược độn làm thay đổi đáng kể tốc độ phóng thích dược chất vì tá dược độn chiếm tỉ lệ khá cao trong công thức

1.3 Tổng quan về đánh giá tương đương sinh học

Nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học là nghiên cứu so sánh sinh khả dụng của hai thuốc có cùng dạng bào chế, chứa một lượng dược chất như nhau, trong cùng điều kiện thử nghiệm Hai dược phẩm là tương đương sinh học khi có sinh

khả dụng không khác nhau có ý nghĩa thống kê [13], [41] Nghĩa là hai chế phẩm

xem là không có ý nghĩa lâm sàng Đánh giá tương đương sinh học được xem là phương pháp thích hợp nhất để xác định mức độ tương đương của thuốc thử nghiệm so với thuốc đối chiếu

1.3.1 Phương pháp nghiên cứu

Phương pháp được ưu tiên chọn lựa để xác định tương đương sinh học là phương pháp định lượng dược chất trong huyết tương Thời điểm lấy mẫu và khoảng thời

gian lấy mẫu được thiết lập sao cho có thể ước lượng được tương đối chính xác các

theo thời gian, đủ để ước lượng chính xác mức độ hấp thu

Thời gian nghỉ giữa hai giai đoạn dùng thuốc phải đủ dài để thuốc ở thời kỳ đầu được thải trừ hoàn toàn khỏi cơ thể (washout) nhằm loại trừ hiệu quả chồng do sự tồn dư từ giai đoạn trước lên kết quả của giai đoạn kế tiếp

Thời gian nghỉ đủ để thuốc được thải trừ ít nhất là 5 lần thời gian bán thải của thuốc

1.3.2 Các loại nghiên cứu tương đương sinh học

Nghiên cứu đơn liều, tình trạng đói

So sánh mức độ và tốc độ hấp thu của dạng thử nghiệm và dạng đối chiếu khi dùng một liều duy nhất trong tình trạng đói

Người tình nguyện phải không ăn trong ít nhất 10 giờ, dùng thuốc với 240 ml nước,

4 giờ sau được ăn sáng với suất ăn tiêu chuẩn

Loại nghiên cứu này được xem là nhạy nhất nhằm đánh giá và so sánh tính chất phóng thích, hấp thu của hai chế phẩm

Nghiên cứu đơn liều, tình trạng có thức ăn

Đánh giá tương đương sinh học của dạng thử nghiệm so với dạng đối chiếu trong tình trạng có thức ăn

Phải không ăn trong ít nhất 10 giờ, dùng suất ăn sáng có nhiều lipid theo tiêu chuẩn trong ít hơn 30 phút và uống thuốc đúng 30 phút kể từ khi ăn

Áp dụng trong trường hợp thực phẩm có ảnh hưởng đến phóng thích và hấp thu dược chất

Nghiên cứu đa liều ở trạng thái ổn định

Nhằm xác định tương đương sinh học sau khi dùng thuốc nhiều lần và đạt trạng

thái ổn định Nghiên cứu này được khuyến cáo áp dụng khi xác định tương đương sinh học trong những trường hợp như:

- Có sự khác nhau về tốc độ hấp thu nhưng không khác nhau về mức độ hấp thu

- Có sự biến thiên quá lớn về sinh khả dụng giữa các đối tượng

- Nồng độ thuốc quá nhỏ không thể định lượng chính xác nếu dùng đơn liều

- Xác định tương đương sinh học của các dạng phóng thích kéo dài

Cho đối tượng dùng thuốc liên tục nhiều lần theo liều chỉ định cho đến khi đạt trạng thái ổn định thường trong khoảng thời gian 5 lần thời gian bán thải, kiểm tra bằng cách lấy mẫu xác định nồng độ đáy 3 lần liên tục ở 3 ngày kế tiếp nhau Cho

sử dụng thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu theo thiết kế

1.3.3 Các mô hình nghiên cứu

Mô hình nghiên cứu thông dụng nhất trong thử nghiệm đánh giá tương đương sinh học là thiết kế chéo và thiết kế song song Chọn mô hình nghiên cứu phù hợp sao cho có thể phân biệt được ảnh hưởng của thuốc với các ảnh hưởng khác

- Thiết kế chéo là cách thiết kế chia thành nhóm ngẫu nhiên có một hoặc nhiều đối tượng Mỗi nhóm sẽ nhận nhiều hơn một loại thuốc ở các thời kỳ khác nhau Đối tượng trong cùng nhóm nhận một trình tự thuốc liên tiếp giống nhau

Mô hình thiết kế chéo trong thử nghiệm đánh giá tương đương sinh học được coi là phù hợp nhất khi so sánh 2 chế phẩm là mô hình thiết kế chéo, 2 trình tự, 2 thời kỳ

- Mô hình thiết kế song song là kiểu thiết kế trong đó mỗi đối tượng nhận một và chỉ một loại thuốc một cách ngẫu nhiên Thiết kế song song đơn giản là thiết kế 2 nhóm so sánh 2 công thức, mỗi nhóm có số đối tượng giống nhau hoặc ba nhóm khi cần nhóm chứng

Mô hình thiết kế song song kém phù hợp trong nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học vì sự khác biệt quan sát được bao gồm cả sự biến thiên giữa các đối tượng,

trong cùng đối tượng lẫn sự khác biệt giữa hai công thức

1.3.4 Người tình nguyện

Cần phải có đủ số người tình nguyện cho nghiên cứu Số người tình nguyện phải đạt tối thiểu là 12 theo qui định của ASEAN [13] hoặc Cộng đồng Châu Âu [14] Người tình nguyện được lựa chọn sao cho có thể hạn chế tới mức tối thiểu sự biến thiên và cho phép phát hiện được sự khác nhau giữa các thuốc Do đó, người tình nguyện thường được chọn là phái nam (nếu là nữ không chọn người trong tình trạng có thai, kinh nguyệt), khoẻ mạnh, không có tiền sử bệnh, chức năng gan, thận bình thường, độ tuổi từ 18 – 55, có chỉ số BMI từ 18 – 25 Người tình nguyện cần được kiểm tra lâm sàng, xem xét tiền sử bệnh và các xét nghiệm cơ bản Có thể phải kiểm tra y tế đặc biệt trước, trong và sau khi hoàn thành nghiên cứu Tốt nhất chọn người tình nguyện không hút thuốc, không có tiền sử nghiện rượu hoặc các chất gây nghiện

Người tình nguyện phải được biết đầy đủ về thử nghiệm và tự nguyện cam kết tham gia nghiên cứu bằng văn bản

Thử nghiệm đánh giá tương đương sinh học phải tuân theo quy định về thực hành lâm sàng tốt và đạo đức trong nghiên cứu y sinh học

Người tình nguyện phải không được dùng thuốc loại kê đơn trong vòng 2 tuần và thuốc thường trong vòng 1 tuần

Trong nghiên cứu tình trạng đói, đơn liều: người tình nguyện phải không ăn trong ít nhất 10 giờ trước khi dùng thuốc

Khi nghiên cứu ảnh hưởng của thực phẩm: người tình nguyện phải không ăn trong

ít nhất 10 giờ, dùng suất ăn sáng có nhiều lipid theo tiêu chuẩn trong ít hơn 30 phút

và uống thuốc đúng 30 phút kể từ khi ăn

Có thể uống nước theo nhu cầu nhưng không được uống trong vòng 1 giờ trước và

sau khi dùng thuốc Không được uống thức uống có chứa cafe, cồn …

Các bữa ăn trong ngày phải giống nhau theo tiêu chuẩn Mọi sinh hoạt, hoạt động được quản lý để tránh ảnh hưởng tạo sự khác biệt trong hoà tan và hấp thu thuốc

1.3.5 Thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu

Trong trường hợp thuốc dùng đường uống, dạng rắn tác dụng toàn thân, thuốc thử nghiệm được sản xuất với cỡ lô tối thiểu bằng 1/10 lô công nghiệp hoặc ít nhất 100.000 đơn vị

Thuốc đối chiếu là thuốc phát minh đầu tiên có đầy đủ hồ sơ nghiên cứu về lâm sàng, FDA Mỹ quy định thuốc đối chiếu trong Sách Cam (Orange Book)

Thuốc thử và thuốc đối chiếu có chênh lệch hàm lượng không quá 5%

1.3.6 Lấy mẫu

Thời điểm lấy mẫu và khoảng thời gian lấy mẫu phải thiết lập sao cho có thể ước

nồng độ thuốc trong huyết tương theo thời gian, đủ để ước lượng chính xác mức độ

Thời gian nghỉ giữa hai giai đoạn dùng thuốc phải đủ dài để thuốc ở giai đoạn trước được thải trừ hết trước khi dùng thuốc ở giai đoạn sau Thời gian này thường tính bằng ít nhất 5 lần thời gian bán thải

Mẫu sinh học phải ổn định trong thời gian chờ phân tích, điều kiện lưu mẫu phải

1.3.7 Phương pháp phân tích

Phương pháp phân tích phải được thẩm định về tính ổn định của dung dịch gốc và của chất phân tích trong dịch sinh học trong điều kiện xử lý mẫu cũng như trong

quá trình bảo quản, tính chọn lọc, khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng, độ đúng

Từ nồng độ trong huyết tương, xác định được các thông số sau đây:

thời gian từ 0 - t, với t là điểm cuối cùng có thể định lượng được

2

CC

i 1 i n

1 i

1 i

=

−

Xác định khoảng tin cậy (confidence interval - CI)

So sánh giá trị trung bình bằng trắc nghiệm “two one sided t- tests”, là so sánh khoảng tin cậy 90% của tỷ lệ hai giá trị trung bình của các thông số dược động học của thuốc thử và thuốc đối chiếu [35], [43]

Chế phẩm thử và đối chiếu được xem là tương đương sinh học nếu khoảng tin cậy

thuốc đối chiếu nằm trong khoảng 80-120% (khi dữ liệu chưa chuyển sang dạng

logarit) hoặc 80-125% (nếu số liệu chuyển sang dạng logarit)

Công thức tính khoảng tin cậy:

N

MSE

2

t(0,5; n) Kết quả tra từ bảng Student với mức ý nghĩa 0,5 và n là bậc tự

do

MSE Bình phương sai số trung bình thu được từ kết quả phân tích ANOVA

1.3.9 Nghiên cứu viên

Nghiên cứu viên phải tuân thủ các quy định và tôn trọng nguyên tắc GCP (thực hành tốt về lâm sàng) và nguyên tắc về đạo đức, phải đảm bảo chăm sóc y tế đầy đủ cho người tình nguyện trong tất cả các trường hợp Nghiên cứu viên phải nhanh chóng thông báo cho Hội đồng đạo đức tất cả các trường hợp có phản ứng bất lợi hoặc các thông tin về sự an toàn khác liên quan đến nghiên cứu y sinh học

Trước khi tiến hành thử lâm sàng, nghiên cứu viên phải có bản phê duyệt chấp thuận cho phép thử nghiệm lâm sàng của Hội đồng đạo đức trong nghiên cứu y sinh học [4]

1.3.10 Hội đồng đạo đức trong nghiên cứu y sinh học

Thử nghiệm trên lâm sàng phải được hội đồng đạo đức trong nghiên cứu y sinh học chấp thuận Hội đồng đạo đức sẽ xem xét các vấn đề về đạo đức trong nghiên cứu y sinh học của quá trình nghiên cứu nhằm đảm bảo quyền lợi, an toàn và sức khoẻ cho những người tham gia nghiên cứu [2]

1.3.11 Giấy tình nguyện chấp thuận tham gia nghiên cứu

Giấy tình nguyện chấp thuận tham gia nghiên cứu phải do người tình nguyện ký Nội dung của giấy này bao gồm thông tin về người tình nguyện, mục đích thử nghiệm, các thông tin về thuốc thử nghiệm (tác dụng dược lý, chỉ định, chống chỉ định, thận trọng, tác dụng không mong muốn, liều dùng, tương tác thuốc, quá liều…), các nội dung người tình nguyện phải thực hiện khi tham gia nghiên cứu, quyền lợi người tình nguyện được hưởng …[2]

Người tình nguyện tự nguyện tham gia, được quyền rút lui bất cứ lúc nào mà không phải bồi thường hay bị phạt

Các thông tin phải đảm bảo rõ ràng và dễ hiểu, thông tin về người tình nguyện được giữ bí mật trong hồ sơ nghiên cứu

1.3.12 Theo dõi an toàn trong quá trình thử nghiệm

Thử nghiệm thuốc trên lâm sàng cần có bác sĩ có đủ năng lực để theo dõi và chăm sóc về y tế trong suốt quá trình người tình nguyện tham gia thử nghiệm và theo dõi sau đó

Các phản ứng bất lợi và các thuốc dùng đồng thời trong quá trình thử nghiệm phải được báo cáo trong suốt thời gian tham gia nghiên cứu Dữ liệu an toàn phải được ghi lại trong hồ sơ nghiên cứu Tuỳ theo tác dụng của thuốc nghiên cứu mà có những kiểm tra y tế phù hợp, bảo đảm phát hiện và ngăn ngừa nguy cơ cho người tình nguyện [2]

1.4 Thẩm định phương pháp phân tích trong dịch sinh học

Phương pháp phân tích được sử dụng trong thử nghiệm các dịch sinh học phải được thẩm định để đảm bảo sự phù hợp của phương pháp định lượng hoạt chất và chất chuyển hoá của nó trong dịch sinh học như máu, huyết tương, huyết thanh hoặc nước tiểu Phương pháp phân tích nhạy và chọn lọc là đóng góp lớn vào sự thành

công của nghiên cứu trên lâm sàng Cơ sở để xây dựng và thẩm định qui trình phân tích hoạt chất trong dịch sinh học dựa vào các chỉ tiêu về tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính hay miền giá trị, giới hạn dưới của định lượng (lower limit of quantitation, LLOQ), độ chính xác, độ đúng, độ phục hồi (hiệu suất chiết) và độ ổn định của dược chất trong dịch sinh học [36], [42]

1.4.1 Tính chọn lọc (đặc hiệu)

Tính chọn lọc của một phương pháp phân tích là khả năng xác định được chính xác chất phân tích trong sự hiện diện của những thành phần khác có trong mẫu thử Để xác định tính chọn lọc cần phân tích mẫu trắng của dịch sinh học tương ứng từ nhiều nguồn khác nhau và thử sự ảnh hưởng của những thành phần có trong dịch sinh học như chất nội sinh, chất chuyển hoá, sản phẩm phân huỷ và một số thuốc thường dùng chung với thuốc cần phân tích

1.4.2 Tính tuyến tính

Là sự liên quan tuyến tính giữa đáp ứng của thiết bị đo và nồng độ đã biết của chất phân tích Đường chuẩn phải được xây dựng cho mỗi lần phân tích mẫu Số lượng các điểm phải đủ để xác định sự liên quan giữa yếu tố đáp ứng và nồng độ mẫu Các mẫu chuẩn được chuẩn bị bằng cách pha một số lượng chất chuẩn vào trong dịch sinh học tương ứng với dịch sinh học dự định phân tích để có nồng độ đã biết Tiến hành xử lý mẫu và phân tích như dự định Dãy nồng độ phải nằm trong khoảng đo dự định của nghiên cứu này

Giới hạn định lượng dưới (lower limit of quantification - LLOQ) là giá trị thấp nhất trong khoảng tuyến tính được chấp nhận nếu:

- Đáp ứng của chất phân tích ở LLOQ phải ít nhất bằng 5 lần so với đáp ứng của mẫu trắng

- Đáp ứng đỉnh (peak) của chất phân tích phải có sự tái lặp với độ chính xác có CV