Nghiên cứu bào chế viên nén acyclovir tác dụng kéo dài

BOY TE TRÜÔNG BAI HOC DÜOC HÀ NOI ----------------B D C S Ô B O e g ------------------- PHAM HOANG DIEU LINH NGHIÊN CtJtJ BÀO CHÊ VIÊN NÉN ACYCLOVIR TAC DUNG KÉO DÀI (KHOÂ LUÂN TÔT NGHIÊP DlTOC SŸ KHOÂ 2002 - 20(17) l ü i 'v v M -1 0 -ftrj Nguiri hirông dân : TS. PHAM THIMINH HUÊ DS. NGUYÊN THACH TÙNG Noi lliuc hie» : BÔ MÔN BÀO CIIK Thôi gian thirc hiên : 02/2007 - 05/2007 HA NÔI, THANG 05 NÂM 2007 ./ LOI CÂM ON Trong suot thài gian làm khoâ luân, em ââ nhân âuçfc rat nhiêu su quan tâm, huông dân giûp ââ em hoàn thành khoâ luân này. Vôi long kinh trong và biét an sâu sâc, em xin bày to ldi câm on tâi: TS. Pharn Thi Minh Hue DS. Nguyên Thach Tùng là nhiïng ngiïài thây ââ tân tïnh huông âân , chî bâo và giûp ââ em rat nhiêu trong suot quâ trînh làm khoâ luân làm khoâ luân. Dông thài em cüng xin âuçfc câm on câc thây, cô, câc kÿ thuât viên Bô mon Bào ché ââ tao âiêu kiên thuân lai và giûp ââ em hoàn thành khoâ luân tôt nghiêp này. Cuoi cùng, em xin güi ldi câm an âac biêt tâi gia âinh, ban bè, nhûng nguâi ââ khuyen khich, âông viên, giûp ââ em rat nhiêu vê mât tinh thân trong suot khoâng thài gian vùa qua. Hà Nôi, thâng 5 nâm 2007 Sinh viên Pham Hoàng Dieu Linh MUC LUC Trang DAT VAN DE.............................................................................................................1 PHÀNI: TÔNG QUAN......................... ...................................................................2 1.1. Dai cirong vê thuô'c TDKD...............................................................................2 1.1.1. Khâi niêm thuô'c TDKD......................................................................... 2 1.1.2. Phân loai thuoc TDKD...........................................................................2 1.1.3. Üu nhiroc diëm cüa thuô'c TDKD...........................................................3 1.1.4. Câu tao cüa câc hê thuoc TDKD dùng qua diicmg uong và ccf chê' giâi phong dirofc chat................................. .......................................3 1.2. Vài nét vê Acyclovir.........................................................................................4 1.2.1. Công thûc hoâ hoc..................................................................................4 1.2.2. Tmh chât................................................................................................ 4 1.2.3. Tac dung duoc lÿ....................................................................................4 1.2.4. Diïoc dông hoc....................................................................................... 5 1.2.5. Chî dinh và diêu tri.................................................................................5 1.2.6. Chong chî dinh....................................................................................... 6 1.2.7. Thân trong..............................................................................................6 1.2.8. Tac dung không mong muon..................................................................6 1.2.9. Liêu luong và câch dùng........................................................................ 6 1.2.10. Tuong tac thuoc................................................................................... 6 1.2.11. Môt sô' ché pham ACV trên thi truomg.................................................7 1.2.12. Mot sô' nghiên cüu vê bào ché ACV TDKD.........................................7 1.2.13. Câc phuong phâp dinh lirçmg ACV..................................................... 9 PHÀNII: THÜC NGHIÊM VÀ KÊT QUÂ 2.1. Nguyên lieu và phuotog phâp thuc nghiêm........................................... ............ 13 2.1.1. Nguyên lieu và phirong tien nghiên ctiu...............................................13 2.1.2. Phuorng phâp nghiên curu......................................................................14 2.2. Két quâ thuc nghiêm và nhân xét......................................................................17 2.2.1. Xây dung duômg chuân ACV........................................................... .17 2.2.2. Khâo sât lua chon tâ duac dé xây dung công thûc bào ché viên nén ACV TDKD 12h..................................... 19 2.2.3. Thiét ké thi nghiêm và tôi tfu hoâ công thûc........................................25 2.2.4. Khâo sât và xây dung mot sô chî tiêu chat hïçmg cho viên nén ACV TDKD..................................................35 PHÀN III: KET LUÂN VÀ DE XUAT.................................................................. 40 TÀI LIEU THAM KHÂO. CHtJ T H I C H C H Ü VIET T Â T ACV BP CT DCP EC HPMC LGVV TDKD USP Acyclovir Dirac diën Anh Công thuc Dicalci phosphat Ethyl cellulose Hydroxy propyl methyl cellulose Luc gây vô viên Tac dung kéo dài Duoc diën Mÿ DAT VAN DE Trong nhüng nâm gân dây, mot van dê durac câ thé giôi dâc biêt quan tâm, dô là nan ô nhiêm môi trucmg. Hâu quâ cüa viêc môi tnrcmg sông cüa con nguài bi ô nhiêm là vô cùng nghiêm trong, trong dô cô viêc câc vi sinh vât gây bênh cô diêu kiên phât triën thuân lçfi, do dô dân dén tî le nguài bi mâc câc bênh do virus cô xu huông tâng cao, ành huông dén suie khoè cüng nhu chât luçmg cuôc sông cüa con nguài. Acyclovir là mot dân chât t6ng hap cüa nucleosid cô tâc dung üc ché manh và chon loc trên câc virus gây bênh à nguài, bao gôm: virus Herpes simplex loai 1 và loai 2, câc virus Varicella Zoster, Epstein - barr, cytomegalo virus và virus viêm gan B. Tuy nhiên, acyclovir cô thài gian bân thài ngân (t 1/2= 2-3h) nên bênh nhân phâi uông thuoc nhiêu làn trong 1 ngày (4-6 làn), gây nhiêu phiên phiïc cho bênh nhân. Ngày nay, vôi su phât triën và tien bô cüa ngành sân xuât duç/c pham, bên canh câc dang thuôc quy uôc, câc dang bào ché hiên dai cüng ngày duçfc chu trong nghiên cüru.Thuôc tâc dung kéo dài ra dcfi nhûng nâm 50 duac coi là thé hê câc dang thuôc thu* 2 sau câc dang thuôc quy uôc dang duç/c tiép tue phât triën vôi nhiêu triën vong môi. Nham khâc phuc nhûng nhuôc diëm cüa acyclovir, giâm sô làn dùng thuôc cho bênh nhân, han ché tâc dung phu cüa thuôc và cô thë kiëm soât toc dô giâi phông duorc chât, chüng tôi tién hành "Nghiên ctni bào ché viên nén acyclovir tâc dung kéo dài" vôi nhüng mue tiêu sau: - Lua chon tâ duac dë xây dung công thürc bào ché viên nén ACV TDKD 12 gicf. - Khâo sât ânh hucmg cüa tâ duac tôi toc dô giâi phông duac chât tù viên ACV TDKD. - Xây dung tiêu chuân cho viên ACV TDKD dâ bào ché. 1 PHAN I TÔNG QUAN 1.1. DAI Cl/ONG VÊ THUÔC TÂC DUNG KÉO DÀI [3] 1.1.1. Khâi niêm thuoc TDKD: Thuoc TDKD là nhûng ché pham cô khâ nâng kéo dài quâ trinh giâi phông và hâp thu duac chât tù dang thuoc nhàm duy tri nông dô duac chât trong mâu trong vùng diêu tri mot thài gian dài vôi mue dfch kéo dài thài gian diêu tri, giâm sô lân dùng thuôc cho nguài bênh, giàm tâc dung không mong muôn, nâng cao hiêu quâ diêu tri cüa thuôc. 1.1.2. Phân loai thuôc TDKD: Hiên nay trong câc tài liêu chuyên mon cô rât nhiêu thuât ngû de chî thuôc TDKD trong dô câch phân biêt cüng chua hoàn toàn thông nhât và rô ràng. Théo câc tài liêu chmh thông, cô thé chia ra câc loai sau: - Thuôc giâi phông kéo dài. - Thuôc giài phông cô kiëm soât. - Thuôc giâi phông theo chuong trinh. - Thuôc giâi phông nhâc lai. - Thuôc giài phông tai dfch. 1.1.3. Uu nhtïoc diëm cüa thuôc TDKD * Uu diëm - Duy tri nông dô duac chât trong mâu vùng diêu tri, giàm duac dao dông nông dô mâu cüa thuôc (trânh hiên tuong dinh - dây), do dô giâm tâc dung phu cüa thuôc. - Giâm sô làn dùng thuôc, giâm phiên phiic cho nguài bênh, trânh quên thuôc, bô thuôc.... gôp phân nâng cao hiêu quâ diêu tri cüa thuôc, dâc biêt à nhûng nguài bênh man tmh. 2 - Nâng cao sinh khâ dung cûa thuoc do duç/c chât duac hâp thu dêu dân, triêt dê han. - Giâm luong thuôc dùng cho câ dot diêu tri nên giâ thành dot diêu tri giâm. * Nhiroc diëm: - Néu co hiên tuang ngô dôc, tâc dung phu hay không chiu thuoc thr không thài trù ngay thuoc khôi ca thë duac. - Là nhüng dang bào ché doi hôi kÿ thuât cao. Khi uong, quâ trinh giâi phông duac chât trong duàng tiêu hoâ lai phu thuôc vào nhiêu yéu tô. Do dô, néu cô sai sot trong kÿ thuât bào ché hay nhüng thay doi sinh hoc à câ thë nguài bênh cô thé dân dén nhüng thât bai trong dâp uïig lâm sàng so vôi ÿ dô thiét ké ban dâu. - Chî cô môt sô ft duac chât ché duac duôi dang TDKD. 1.1.4. Câu tao cüa hê thuoc TDKD dùng qua duàng uong và co ché giâi phông ducrc chât. Gôm cô 2 hê: - Hê côt: + Hê côt tra khuyéch tân. + Hê côt an mon. - Hê màng bao: + Hê màng bao khuyéch tân. + Hê màng bao ân mon. Ô dây chî trinh bày vê hê côt. + Hê côt tro khuyéch tân: * Nguyên tac câu tao: Duac chât duac phân tân vào môt côt tra xôp, không tan trong duàng tiêu hoâ dông vai trô nhu môt bô khung mang thuôc. * Ca ché giâi phông duoc chât: Sau khi uong thuôc, duac chât khuyéch tân tù côt ra dich tiêu hoâ và côt duac dào thài nguyên ven ra ngoài. + Hê côt ân mon: 3 * Nguyên tâc câu tao: Phôi hop duac chât vôi môt polyme thân nufôc hoàc sâp hay chât béo, dong vai trô 1 côt mang thuôc. Sau khi uong, côt së hoà * Co ché giâi phông duoc chât: - Côt thâm nuôc và hoà tan lôp duac chât à bê mât côt. - Polyme truang na tao hàng rào gel kiëm soât su giâi phông duac chât. - Môi truông hoà tan khuéch tan qua lôp gel thâm vào côt hoà tan dirac chât. - Dung dich duac chât khuyéch tan qua lôp gel ra môi truôfng bên ngoài. 1.2. VÀINÉT VÊ ACYCLOVIR [5], [6], [10], [18] 1.2.1.Công thufc hoâ hoc O » Công thiîc phân tir: ClgH, ,n 5o 3 Khôi luang phân tuf: 225,2 Tên khoa hoc: 2- amino- 9-[(2-hydroxyethoxy)-methyl]-1,9- dihydro- 6H- purin- 6- one. 1.2.2. Tmh chât Acyclovir là dang bôt két tinh màu trang hay gàn nhu trâng, tan tu do trong dimethyl sulfoxid, rât ft tan trong con, tan trong dung dich acid hay kiêm loâng. - Rât bên vüng, trong môi truôfng kiêm on dinh han trong môi truông acid. - Nhiêt dô nông chây là 230 °C và bi phân huÿ. - Acyclovir co hai hâng sô phân ly: pKal= 2,41 ± 0,27 và pK,^ 9,06 ± 0,88. 1.2.3.Tâc dung dirac lÿ Acylovir (ACV) là mot dân chât cüa guanosin co tâc dung ûc ché in vitro và in vivo trên câc nhom virus nhu: Herpes simplex (HSV) loai 1 và loai 4 2, Varicella-zoster (VZV), Epstein - barr (EBV), và cytomegalovirus (CMV). Trong mâu cây té bào ACV cô tâc dung khâng virus manh nhât vôi HSV-1 sau dô là HSV-2, VZV, EBV và CMV (theo thu”tu giâm dân vê hiêu lue tâc dung ûc ché), tâc dung ûc ché cüa ACV doi vôi câc virus trên cô tmh chon loc cao. Acyclovir ûc ché quâ trinh sinh tong hop DNA cüa siêu vi khuân khi chüng xâm nhâp vào té bào, nhô tâc dông cüa câc men do virus sinh ra acyclovir duac chuyën thành acyclovir monophosphat, acyclovir diphosphat roi acyclovir triphosphat - chât cuôi cùng cô tâc dung ûc ché câc men polymerase DNA cüa virus. Acylovir triphosphat duac thu nhân vào DNA virus và tâc dông nhu là nhânh cuôi cùng vi trong câu tao cüa nô không cô nhôm 3’ hydroxy, và do vây làm gian doan quâ trinh tong hop DNA cüa virus. Acyclovir ûc ché tong hop DNA và su nhân lên cüa virus mà không ânh huang dén chuyën hoâ cüa té bào bînh thuông. 1.2.4. Duroc dông hoc * Sinh khâ dung theo duông uong cüa ACV thâp chî khoàng 20% (1530%). Thüc ân không làm ânh huang dén hâp thu cüa thuôc. Nông dô dînh trong huyét tuang dat duac sau khi uong là 1,5 - 2 giô, tiêm tînh mach sau 1 giô. * Phân bô: ACV phân bô rông trong dich ca thë và câc ca quan nhu nâo, phôi, ruôt, gan, lâch, ca, tü cung, niêm mac, dich âm dao, nuôc mât,... Liên két vôi protein huyét tuang thâp (9-33%). * Chuyén hoâ và thâi triï: - Phân lôn thuôc duac thâi trù qua thân duôi dang không bién doi. Chât chuyën hoâ duy nhât cô tâc dung cüa ACV là 9-carboxymethylguanin, chiém khoàng 10-15% liêu dùng. - Thôi gian ban thâi ngàn: t1/2 = 2-3 giô à trè em > 1 tuôi và nguôi lôn, à trê sa sinh là 4 giô và à bênh nhân suy thân mân tmh là 19,5 giô. 1.2.5. Chî dinh và dieu tri - Diêu tri khôi dâu và du phông tâi nhiêm HSV-1 và HSV-2 à da và niêm mac, viêm nâo HSV. - Diêu tri nhiêm HBV câp tmh ô mât và viêm phôi à nguôi lôn. 5 - Diêu tri khôi dâu và tâi phât Herpes sinh duc. - Diêu tri thuÿ dâu xuât huyét, thuÿ dâu à nguài suy giâm miën dich, thuÿ dâu à trè sa sinh. 1.2.6. Chông chî dinh Chông chî dinh cho nhûng bênh nhân mân câm thuoc. 1.2.7. Thân trong - Thân trong voi bênh nhân suy thân, phu nü co thai, cho con bü. - Tiêm truyên tmh mach châm dë trânh két tüa ACV trong thân. 1.2.8. Tâc dung không mong muon - Co thë gàp buôn non, tiêu chây, non, dau bung, noi ban, câc phân ûng vê thân kinh nhu chong mât, âo giâc, buôn ngü. - Duàng tiêm truyên tînh mach cô thë gàp câc phân ûng nhu: viêm, viêm tînh mach à vi tri tiêm. - Kem bôi: Cô khi gàp câm giâc nông bông à hay nhôi nhe à vi tri bôi kèm theo ban dô nhe. 1.2.9. Liêu lirong và câch dùng - Nguài lôn: 200 mg/làn, 5 lân trong mot ngày (nguài suy giâm miên dich dùng 400 mg/làn). - Trê em duôi 2 tuéi dùng bàng 1/2 liêu cüa nguài lôn, trè em trên 2 tuôi dùng bàng liêu nguài lôn. Doi vôi nguài suy thân, phài hiêu chînh liêu theo dô thanh thâi creatinin. 1.2.10. Tuang tâc thuôc - Dùng dông thài Zidovudin và ACV cô thë gây trang thâi ngü lim và la ma. - Probenecid ûc ché canh tranh dào thài ACV qua ong thân nên làm tàng thài gian bân thâi cüa ACV và giàm thâi trù qua nuôc tiëu. - Interferon làm tàng tâc dung chông virus in vitro cüa ACV. Thân trong vôi nguôi bênh truôc dây dâ cô phân ûng vê thân kinh vôi interferon. - Amphotericin B và ketoconazol làm tàng hiêu lue chông virus cüa ACV. 6 1.2.11. Môt so ché pham AVC trên thi trirông (1). Acyclovir NocKwoo: viên nén 200mg (Korea Green Pharm) (2). Acyclovir Stada Tab: viên nén 200mg, 400mg, 800mg (Stada) (3). Herpevir viên nén 200mg (Sanofi - Sinthelabo) (4). Zovirax : + Viên nén 200mg, 800mg. + Hôn dich 250mg/5ml, chai 125ml. + Kem bôi da 5%, ông 2g. + Thuoc mô tra mât 3% ông 4,5g. + Lo bot pha dung dich tiêm truyên tînh mach 250mg . (5). Acyclovir viên nén 200mg (Cty Traphaco). Dang kem Avircrem 5% ông 5g (Cty Traphaco). (6). Viên tâc dung kéo dài Zenvir 600mg. 1.2.12. Mot so nghiên curu vê bào ché Acyclovir TDKD * Viên nén [11]: Tuncer Degim và công su dâ bào ché viên nén két dmh niêm mac miêng dë diêu tri nhiêm trùng tai miêng do Herpes Simplex gây ra. Viên nén duac bào ché voi câc thành phân: Carbopol - 934, Polycarbophil (PC), và Sodium Taurocholat (ST). Két quâ nghiên curu: - Dô tan và giâ tri log cüa hê s6 phân bô octanol/ nuôc cüa acyclovir thay doi theo pH. Câc giâ tri này thay doi theo xu hirông giong nhau trong khoàng pH tù 2,2 dén 7,4. - Khâ nâng bâm dmh niêm mac cüa viên tàng khi tàng lirçmg C - 934 và nguofc lai, giàm khi tàng lirçmg PC. - Viêc thêm ST vào cô hiêu quâ làm tàng su hâ'p thu cüa acyclovir qua niêm mac. 7 - Khâ nâng hoà tan dugc chat tir viên nén dirac khâo sât trong môi tnrcfng dich nuôc bot nhân tao dë tim ra công thurc tôi uu giâi phông duac chât theo mô hînh dông hoc bâc O. - Công thûc bao gôm: C - 934 (64,4%), PC (34,4%), ST (0,8%) cô toc dô giâi phông duac chât 9,708mg/h, thài gian giâi phông duac chât kéo dài dén 6h, duac lua chon là công thuc thich hgp nhât cho câc thü nghiêm invivo. - Tâc giâ cüng dâ xây dung duac môt mô hînh dông hoc dë phân tfch, du doân quâ trînh hâp thu cüa acyclovir trên chô. Mô hînh này cô thë duac phât triën dë âp dung mô phông quâ trînh dông hoc cüa thuôc trong ca thë con ngucri. *Viên nang [14]: J. Tu và công su dâ bào ché viên nang ACV giài phông cô kiëm soât qua 3 buôc: Tao hat (công thirc tao hat ACV 100g, PEG 6000 20g), bao hat (công thirc dich bao EC, PVP, dâu thâu dâu, aceton, isopropanol, Mg stearat), dông nang. Qua nghiên cuu khâ nâng giâi phông duac chât vôi câc dich bao cô nông dô EC lân lugt là 10%, 16 %, 24%, két quâ cho thây: tî lê EC trong dich bao tâng lên thî phân tràm giâi phông duac chât giâm. Vôi tÿ lê EC 16% : sau 2h duac chât giâi phông duac 40%, sau 6h giâi phông duçfc 50%, 8h giài phông dugc 75% và sau 12h giài phông duac 95%. * Vi nang [20]: Cheu. ST và công su dâ bào ché vi nang ACV TDKD bàng phircmg phâp bôc hai dung môi tù nhü tuang vôi chât mang là EC, dung môi hoà tan là dicloromethan. Tâc giâ dâ nghiên cûu ành huôfng cüa mot sô yéu tô dén khà nâng giâi phông duac chât tù vi nang: dô nhôt cüa EC (45,100cps), tÿ lê CH2C12/EC (15/1, 20/1), tÿ lê EC/ACV (1/1; 2/1) cho két quâ nhu sau: - Dô nhôt cüa EC tâng :khâ nâng giâi phông dugc chât tâng. - Tÿ lê EC/ACV tâng: khà nâng giâi phông dugc chât giâm. 8 - Tÿ lê CH2C12/EC tâng: khâ nâng giâi phông dugc chât tàng. * * Vi càu noi [19]: - Supapon Ponsuwanapha dâ nghiên cûu bào ché vi câu noi ACV TDKD bàng phuong phâp boc hoi dung môi tù nhü tuang. Polyme kiëm soât giâi phông dugc chât là Eudragit SI 00, hê dung môi pha nôi gôm 3 dung môi vôi tÿ lê ethanol: isopropanol: dicloromethan = 8 : 2: 5. Két quâ nghiên cuu: + Khi tâng tÿ lê ACV/Eudragit : kfch thuôc vi câu tâng, hiêu suât tao vi câu giâm, tÿ lê vi câu hoâ tâng, % vi càu noi sau 12h giâm và % dugc chât dugc vi càu hoâ tàng. + Khâ nâng giâi phông dugc chât tù vi càu dugc nghiên cun trong câc môi trucmg pH = 1,2, pH = 6,8 và pH = 7,2. Két quâ cho thây khà nâng giâi phông dugc chât tù vi càu phu thuôc vào pH : à pH = 1,2 % dugc chât giâi phông rât thâp, giâ tri này tâng lên à pH 6,8 và cao nhât à pH 7,2 . Diêu này cô thë giâi thich do Eudragit S100 không tan trong môi truômg acid mà tan trong môi trucfng pH > 7. - Lê Hoàng Anh cüng dâ tién hành mot nghiên cùu vê bào ché vi càu noi ACV TDKD bàng phuong phâp bôc hai dung môi tù nhü tuang, ta dugc kéo dài là hôn hgp EC và Eudragit L100 dugc hoà tan trong pha nôi là hôn hgp 2 dung môi ethanol và dicloromethan. Chât nhü hoâ dugc dùng dë tao và on dinh nhü tuang là gôm xanthan. Aerosil dugc thêm vào công thûc nhàm mue dfch chông dmh giüa câc vi câu. Két quâ nghiên cùu: Tÿ lê EC- Edg /ACV là nhân té chrnh ânh hurong dén moi tînh chât cüa vi càu. Tÿ lê này tàng làm châm toc dô giài phông dugc chât và làm tàng câc giâ tri nhu: hiêu suât tao vi càu, tÿ lê ACV dugc vi càu hoâ và % vi câu noi sau 6h. [1] 1.2.13. Câc phirong phâp dinh lirçmg ACV trong câc ché pham bào ché: 1.2.13.1. Phirong phâp sac kÿ long hiêu nâng cao (HPLC): 9 * Paraskevas D. Tzanavaras và công sir dâ nghiên cuu dinh lirong dông thcd ACV và tap chfnh cüa nô là guanine trong câc ché pham bào ché. [12] + Sü dung mây HPLC Hewlett Packard (HP 1100) + Côt monolithic RP - 18e (100 mm x 4,6 mm); nhiêt dô côt: 25°C + Pha dông: acid acetic 0,2% (v/v) + D2 chuân:. pha dung dich ACV chuân cô nông dô 1000mg/l . pha dung dich guanine chuân cô nông dô 100mg/l + D2thü: tfnh toân pha dung dich cô nông dô tuang üng vôi dung dich chuân + Detector quang pho DAD buôc sông 254nm. + Toc dô dông: 2,0ml/phüt + Thë tfch tiêm: 20 jol Két quâ: thôti gian luu cüa guanine là 1,25 phüt, côn thôi gian luu cüa ACV là 3,51 phüt. * Môt phuong phâp môi sü dung HPLC dë dinh luong ACV dâ dugc K.Basavaiah bao cao [16]. Phuong phâp này dan giân han, nhanh hon và dàc hiêu hon câc bao cao vê phuong phâp HPLC truôc dây và cà phuong phâp quang phô. - Tien hành: phuong phâp sac kÿ pha dâo: + Mue dfch: dinh lugng ACV trong ché pham. + Mây HPLC Agilent 1100 (Dire). + Côt: 5(j.m Hypersi]|ODS~Q^25cm x4,6 mm). + Pha dông: Hôn hgp acetonitril 20 mM - dêm ammonium acetat (pH 4,5) theo tî lê 40: 60. + D2 pha loâng: Trôn acetonitril vôi nuôc theo tî lê 40:60. + D2 chuân và dung dich thü: cô nông dô 198 |ug/ml, trong quâ trînh pha dêu dugc diêu chînh thë tfch bàng dung dich pha loâng à trên. + Detector UV buôc sông 250 nm. + Toc dô dông: 0,8 ml/ phüt. 10 4- Thë tfch tiêm: 20 jllI. Két quâ: Sü dung côt ODS pha dâo cho thôi gian luu cüa ACV khoàng 3 phüt và tong thôi gian phân tfch ft hem 5 phüt. 1.2.13.2. Phtfong phâp quang pho * M.Sultan dâ tién hành dinh lugng ACV trong câc ché pham bào ché bàng phuong phâp quang pho hàp thu khâ kién (VIS): [21] Tién hành: - Thuoc thü: + 3 - methylbenzothiazolin - 2- one hydrazone (MBTH) + Dung dich FeCl3.6H20 - Dung dich chuân: Hoà tan 25mg ACV chuân bàng nuôc cât, cho vào bînh dinh mire 50ml, diêu chînh thë tfch dén vach bàng nuôc cât. - Xây dung duông cong dinh lugng (duông chuân cüa dung dich ACV): Lây 1ml dung dich MBTH cho vào 1 loat câc bînh dinh mure 10ml. Mot thë tfch dâ dugc tfnh toân truôc cüa dung dich ACV chuân dugc thêm vào câc bïnh dë dugc nông dô nàm trong khoàng 20-200|ng/ml, sau dô cho thêm lml FeCl3 vào. Dung dich dugc lâc dêu và siêu âm trong 20 phüt. Diêu chînh thë tfch dén vach dinh mure bàng nuôc cât. Dem do dô hâp thu à buôc sông 616nm, mâu tràng là mâu chüra câc thuôc thü không cô ACV. Tù két quâ thu dugc, vê duông cong dinh lugng biëu thi môi quan hê giûa dô hâp thu và nông dô ACV, hoàc suy ra phuong trinh hôi quy. - Pha dung dich thü: cân 10 viên, dem nghiên. Cân 1 lugng bôt tuong üng vôi 25mg ACV, cho vào binh dinh mire 50ml, lâc, dem siêu âm trong 15 phüt. Diêu chînh thë tfch dén vach bàng nuôc cât, lâc, dem loc, sau dô tién hành nhu dâ trinh bày à phân xây dung duông chuân. * P.Ugandhi và công su dâ sü dung phuong phâp quang pho hâp thu UV dë dinh lugng ACV trong viên nén: [24] Mue dfch cüa nghiên cuu là cài tién tfnh don giân, nhanh, chfnh xâc và tin cây cüa phuong phâp quang pho trong xâc dinh hàm lugng ACV bàng 11 phuong phâp quang pho hâp thu tù ngoai (UV). Cuc dai hâp thu cüa ACV trong môi truôfng nuôc cât là 253nm và tai dâ)7no tuân theo dinh luât Beer ô khoàng nông dô 2-20|ng/ml. Sü dung mây quang pho UV-1700 Shimadza vôi cuvet 1cm dugc sü dung dë do dung dich chuân cô nong dô 100|ag/ml dugc pha trong nuôc cât. Dung dich thü dugc tién hành nhu sau: cân 20 viên ACV, nghiên, cân 1 lugng bôt tuong üng lOmg ACV cho vào binh dinh mire 100ml, lâc, siêu âm 20 phüt, diêu chînh thë tich dén vach bàng nuôc cât. Dë xây dung duôfng chuân cüa ACV trong môi truôfng nuôc cât: pha 1 dây dung dich cô nông dô tir 2-20 |a.g/ml tù dung dich chuân, dem do dô hâp thu à buôc sông 253nm. Tù két quâ thu dugc vê dugc duông chuân và rut ra dugc phuong trînh hôi quy. Tuong tu tién hành vôi dung dich thü. Phuong phâp này dugc cho là don giân hôn câ. 12 PHAN 2: THlTC NGHIÊM VÀ KET QUÂ STT 1 2 3 4 5 6 7 8 9 2.1. NGUYÊN LIÊU VÀ PHUONG PHÀP THUC NGHIÊM 2.1.1. Nguyên liêu và phuong tien nghiên curu * Nguon goc và tiêu chuan chât Iiïçmg cüa câc nguyên liêu Nguyên liêu Nguon goc Tiêu chuân chât luong Acyclovir Trung Quoc USP26 Dicalci phosphat Trung Quoc BP 2001 HPMCE15 Trung Quoc BP 2000 Ethyl cellulose lOcp Nhât BP 2000 Lactose Trung Quoc Eur.Ph 2000 Talc Trung Quoc BP 1998 Magnesi stearat Phâp Eur.Ph 2000 Natri hydroxyd Trung Quoc TKHH Ethanol 96° Viêt Nam DDVN * Phuong tien nghiên curu - Mây dâp viên ERWEKA (Dure). - Mây do LGVV ERWEKA. - Mây trâc nghiêm hoà tan Vankel Varian 7010 (Mÿ). - Mây quang ph6 UV- VIS Hitachi (Nhât). - Cân xâc dinh dô âm Satorius MA 30 (Dire). - MâyHPCL Thermo Finnigan (Mÿ). - Mây nhào trôn và mây xât hat lâc ERWEKA. - Mây xâc dinh dô bd, dô mài mon Pharmatest PTE 20E. 13 « * 2.1.2. Phirong phâp nghiên cini 2.1.2.1. Phirong phâp bào che viên nén ACV TDKD Viên nén ACV TDKD duac bào ché bàng phirong phâp xât hat irort: - ACV và ta duac duac cân theo công thurc, nghiên min, trôn dêu theo nguyên tàc trôn bôt kép. - Thêm côn vào hôn hop bôt de nhào âm. - Xât hat qua rây 1mm. Sây se à 50°C trong khoâng 10 phüt. - Sua hat qua rây 0,8mm. Sây à 50°C dén dô àm cüa hat không quâ 3%. - Trôn ta duac trcfn voi tÿ le: Mg stearat 0,5% Talc 1% - Dâp viên voi bô chày coi (|) = 12mm. Khôi luang viên 500mg, hàm luang ACV 200mg. Môi me dâp 150 viên. 2.1.2.2. Phirong phâp xây dumg diràng chuan ACV * Xây dirng dirèng chuân bàng phirong phâp do quang - Ducmg chuan ACV duçfc xây dung trong môi trucmg nuôc cât. - Câch tien hành: Cân chmh xâc lOOmg ACV, hoà tan bàng nuac cât cho vào binh dinh mure 100ml, thêm nuôc cât dên vach, làc kÿ. Sau do pha loâng bàng nuac cât thu duac câc dung dich cô nông dô lân lugt là 4, 6, 8, 10, 12 (ag/ml. R6i dem do quang à buorc song 252nm. Tir két quâ thu duac, xây dung phuong trinh hôi quy thuc nghiêm, vê do thi biëu hiên su tuang quan giîîa mât dô quang và nông dô duac chat. * Xây dung dirông chuân bàng phirong phâp sac kÿ long hiêu nâng cao (HPLC) - Duàng chuân ACV duac xây dung bàng phuong phâp HPLC voi câc diêu kiên sau: + Pha dông: dung dich acid acetic 0,02M. . + Côt: C18 ( 250mm x 4,6mm ), duông kmh hat: 5|j,m, nhiêt dô côt: 25°C. 14 • + Toc dô dông: l,5ml/phüt. + Detetor UV, buôc sông 254nm. + The tich tiêm mâu: lOjul. + Dung dich thu: cân chmh xâc lOOmg ACV, hoà tan trong 10ml NaOH 0,1N cho vào bînh dinh mue 100ml, thêm nirôc cât dén vach, làc kÿ. Sau do pha loâng bàng nirâc cât thu dirac câc dung dich cô nông dô làn luçft là 10,20,50, 100,150 fxg/ml. Két quà thu duçfc tùf câc sâc kÿ dô, xây dung phuüng trînh hôi quy thuc nghiêm, vê dé thi biëu thi su tuong quan giûa diên tich pic và nông dô duoc chât. 2.I.2.3. Câc phirong phâp dânh giâ viên nén ACV TDKD * Phirong phâp dânh giâ khâ nàng giâi phông ACV tir viên nén TDKD - Sir dung mây trâc nghiêm hoà tan Vankel 7010 (Mÿ) de dânh giâ %ACV giâi phong tùT viên nén sau nhüng khoâng thori gian nhât dinh, vôi câc thông s6: + Mây cânh khuây ^ , + Nhiêt dô môi trucmg thü: 37 ± 0,5°C j v>^ ^ v^ ' + Môi truômg hoà tan: 900ml nirefe cât (, v '1 + Toc dô khuây: 100 ± 1 vong/phüt - Câc buôc tien hành: + Khi mây dâ dat câc thông sô yêu càu: cho viên nén vào môi truefng hoà tan trong côc. + Sau nhüng khoâng thoi gian nhâ't dinh: 1 giôr, 2 giôf, 3 gid, 4 giôr, 5 giô, 6gicf, 7 giôf, 8 gid hüt 10ml môi trucmg hoà tan, loc qua giây loc. Bô sung 10ml môi truômg vào. + Mâu rut ra duofe do quang à buôc sông 252 nm, su dung mâu trâng là nuefe cât, mâu chuân là dung dich ACV trong nuée co nông dô 10 ng/ml. * Phirong phâp âânh giâ LGVV Sir dung mây do dô cung ERWEKA. Thir 10 viên, lây giâ tri trung binh. 15 * Phucrng phâp dânh giâ dô dong deu khôi luotig [2] Thu vôi 20 viên, dô lêch chuân cho phép là 5%. Không duçfc quâ 2 viên cô dô lêch chuân vuoft quâ giôi han cho phép, không cô viên nào gâp dôi giôi han dô. * Phuong phâp dânh giâ dô bô cüa viên [23] Lay mot sô luofng viên nén tuofng ûng vôi 6,5g, dem sàng loai bôt dmh à viên. Cân chînh xâc khôi luofng sô viên dâ lâ'y, xong chuyën sô' viên dô vào trông. Cho trông quay 100 làn, lây viên ra, dem rây dë loai bôt bj mât di tir viên trong quâ trînh trông quay, rôi dem cân lai khô'i luofng sô' viên vùfa lâ'y ra. Yêu càu: dô bcf cüa viên không quâ 1,0%. * Phuong phâp dinh luofng - Xâc dinh hàm luofng ACV trong viên theo 2 phuofng phâp: + Phuong phâp do quang: theo BP 2005 + Phuofng phâp HPLC : theo USP 29 Yêu câu: Hàm luofng ACV trong viên chûa tù 90,0- 110,0% so vôi hàm luofng ghi trên nhân. (a) Dinh Iticfng bàng phucmg phâp do quang: Lâ'y 20 viên nén ACV dem nghiên trong cô'i sü. Cân môt luofng bôt viên tucfng üng vôi 0,1g ACV, cho vào bînh dinh mûc 100ml. Thêm 60ml dung dich NaOH 0,1N, dem di siêu âm 15 phüt. Diêu chînh thë tfch dê'n vach bàng dung dich NaOH, lâc dêu, loc. Hüt 15ml dung dich loc cho vào bînh dinh mûc 100ml. Cho thêm 50ml nuôc và 5,8ml dung dich HC1 2M vào bînh. Thêm nuôc vùa dû 100ml. Hüt 5ml dung dich trên cho vào bînh dinh müc 50ml. Diêu chînh thë tich dê'n vach bàng dung dich HC1 0,1M. Dem dung dich này di do dô hâp thu + Diêu kiên sâc kÿ ghi à mue 2.1.2.2. + Dung dich chuân: tmh toân cân môt luçfng ACV dé pha voi nuôc dat duac nông dô 0,lmg/ml. + Dung dich thu: nghiên 10 viên nén ACV, cân môt luang bôt tuong ûng voi lOmg ACV, hoà tan trong 10ml NaOH 0,1N, chuyên vào bînh dinh mure 100ml, diêu chînh bàng nuôc dén vach. Tïnh toân kêt quâ dua vào diên tich pic mâu thur (S^) và mâu chuan (Sc). 2.2. KÊT QUÂ THlTC NGHIÊM VÀ NHÂN XÉT 2.2.1. Xây dimg durcmg chuân ACV 2.2.1.1. Xây dirng dirông chuân ACV trong môi triràng nuofc cât bàng phuong phâp do quang - Tien hành nhu dâ mô ta à mue 2.1.2.2. - Két quâ duac trinh bày à bàng 1 và hinh 2 Bang 1: Suphu thuôc mât dô quang (D) voi nông dô (C) cüa ACV trong môi truùng nuâc cât C (ng/ml) D 4 6 8 10 12 0,265 0,350 0,461 0,548 0,647 Y = 0.048 lx + 0.0694 R2= 0.9986 O^ n \ °-5 ! ; • 0.4 -] o.3 ■ ] 0.2 °.l | O -1--------1--- -- .-T--.—.—>------------7--- .H ! 4 6 8 10 12 Nông dô (mcg/ml) Hinh 1: Dit&ng chuan cüa dung dich ACV trong môi truùng nuâc cât * Nhân xét: Giâ tri R2xâp xî bàng 1, chüng tô trong môi trircmg hoà tan, dô hàp thu phu thuôc tuyén trnh vào nông dô ACV trong khoâng khâo sât. De-vâyv co thé sü dung phuong phâp do quang à X = 252nm vdi câc khoâng nông dô trên dë dinh luong ACV trong mâu thü và trong môi truàng hoà tan. 2.2.I.2. Xây dung dirôrng chuân ACV bàng phirong phâp HPLC - Tien hành nhu dâ mô tâ à mue 2.1.2.2. - Két quâ duac trînh bày à bàng 2 và hinh 3. Bàng 2: Su phu thuôc diên tich pic (Sp) vâi nông dô (C) cüa ACV 150 100 10 20 50 C (ng/ml) Sp 1723688 804968 9746788 4934933 15269448 Hinh 2: Duùng chuân dung dich ACV duac xây dung bàng phuong phâp HPLC 350 A 300 250 j I l 200 150 \ l l I \ I 100' r g 50 \ \ 10%) thî su giài phông ACV diên ra châm. Nhu vây sü dung câc tâ duoc riêng rë khô cô thë bào ché dugc viên ACV TDKD theo yêu câu. Do vây, chüng tôi dinh huông tiép theo là phôi hgp EC vôi HPMC dë diêu hoà tôc dô giâi phông dugc chât. 24 2.2.3. Thiet ké thi nghiêm và üm công thtéc bào ché viên nén ACV TDKD Tien hành bo tri thi nghiêm bào ché câc công thrïc viên nén ACV TDKD co chiîa ta duac HPMC phoi hop vciti EC nhàm tîm ra tî lê HPMC - EC phù hop de bào ché viên nén ACV TDKD. 2.2.3.I.Bo tri thi nghiêm * Câc thông so duoc giûf hàng dinh: - Khôl luong viên: 500mg - Tÿ lê duac chât: 40% (200mg) - Tÿ lê ta duac tran: Mg stearat 0,5% Talc 1% - Luc gây vô viên: 7- 8kP - Luong côn 80° dùng dê xât hat. 0 * Câc bién dôc lâp và khoâng bién thiên: Càn ciî vào mue dich nghiên curu, câc bién dôc lâp duac lua chon à bâng 9: Bâng 9: Câc bien dôc lâp và khoâng khâo sât. STT Bién dôc Kÿhiêu Giôi han Giôi han Mire ca lâp duori (%) trên (%) bân (%) 1 HPMC 2 EC X2 0 40 20 0 20 10 Khoi luong lactose thêm vào vùra dû 500mg, dao dông trong khoâng tù" 0- 60% khoi luong viên. * Câc bien phu thuôc: Cân eu: vào tiêu chuân chung cüa thuôc TDKD và tài liêu tham khâo, câc bién phu thuôc duoc lua chon à bâng 10. 25 Bàng 10: Câc bien phu thuôc và dieu kiên Bien phu thuôc Kÿ hiêu Yêu câu %ACV giâi phông sau lh 15-25 Y, %ACV giâi phông sau 4h 55- 65 y4 %ACV giâi phông sau 8h >80 y8 Giâ tri f2 >50 ^2 Sir dung phuomg phâp bo tri thf nghiêm theo mang don hînh voi su tro giüp cüa phàn mêm MODE 5.0, câc thf nghiêm duoc trinh bày à bàng 11. Bang 11: Câc công thûc thuc nghiêm Tên ACV HPMC EC Lactose STT thf nghiêm (%) (%) (%) (%) 1 40 0 0 60 N, 2 40 40 20 0 n2 3 n3 40 40 0 20 4 n4 40 0 20 40 5 n5 40 0 10 50 6 n6 40 20 0 40 7 n7 40 40 10 10 8 n8 40 20 20 20 9 n9 40 20 10 30 10 N10 40 20 10 30 11 Nu 40 20 10 30 26 • Tien hành dâp viên theo phuang phâp ghi à mue 2.1.2.1. Trong quâ trinh bào che, nhüng công thûc phoi hop HPMC và EC viên dâp rât dê dàng, viên nhân, dep, lue nén cüa mây vùra phài dâ cho viên cô dô cüng dat yêu câu (78kP). Nhüng công thüc không cô EC thî quâ trinh dâp khô khân han, lue nén phài tâng cao thi viên moi dat dô cûng, cô thé là do trong công thüc không cô tâ duac chiu nén tôt ( vf du: CT NI ). Câc mâu viên thu duac dem thü hoà tan theo phuang phâp ghi a mue 2.1.2.3. Ket quâ duac trinh bày à bàng 12. Bâng 12: Phàn trârn duac chât giâi phông tù câc viên thuc nghiêm CT Y1 Y2 Y3 Y4 Y5 Y6 Y7 Y8 NI 90.15 100 100 100 100 100 100 100 N2 20.45 31.58 47.09 59.74 73.47 86.83 91.95 91.32 N3 23.95 35.61 50.14 64.41 74.18 90.33 95.62 96.16 N4 15.7 18.49 20.54 22.45 23.86 25.66 27.45 28.79 N5 14.44 19.02 21.8 26.01 26.82 30.41 30.14 34.72 N6 60.01 91.32 93.56 91.59 100 100 100 100 N7 21.26 31.14 65.66 80.28 90.06. 98.58 96.7 96.34 N8 48.02 90.18 93.89 87.73 91.56 92.15 91.92 92.33 N9 89.52 90.5 91.5 92.57 93.05 93.11 92.63 93.23 N10 93.83 93.83 93.83 92.21 92.57 92.39 91.32 90.51 N il 91.14 92.39 92.39 91.95 100 100 100 100 * Nhân xét: Toc dô giâi phông duac chât tü câc viên nén thuc nghiêm rât khâc nhau, cho thây su phoi hop EC và HPMC dâ câi thiên rô rêt quâ trinh giâi phông duac chât. 27 2.2.3.2. Dânh giâ ânh hirông cüa câc bien dôc lâp toi su giâi phông dugc chât cüa viên ACV TDKD Chüng tôi lua chon mô hînh mang thân kinh nhân tao (nhd phân mêm Inform 3.2) dë xü lÿ sô lieu thu dugc à bâng 12. Két quâ dugc thë hiên à bâng 13. Bâng 13: Két quâ xüly so liêu bàng mang thân kinh nhân tao lân R Sai sô Bién phu thuôc Sô nüt ân Sô luyên 0.75 1000 0.082 2 Y, y4 2 1000 0.06 0.74 y8 2 1000 0.01 0.99 ^2 2 0.01 0.97 * Nhân xét: Giâ tri R cüa Y8 = 0,99 nên quan hê giùa câc bien dâu ra và bien dâu vào là khâ chat chê. Cô thë sü dung mô hînh mang thân kinh nhân tao dë phân tfch ânh hucmg cüa câc bien dôc lâp dén khâ nâng giâi phông dugc chât tü viên nén ACV TDKD thông qua câc mât dâp sau: 98.72 0.04 HPMC Hinh 7: Anh hitông cüa ty lê EC và HPMC tâi Y8 28 Hinh 8: Ânh huàng cüa ty lê EC và lactose tâi Y8 (*) Ânh htrông cüa tÿ lê EC: Tir hinh 7 và hinh 8 cô thé thày: khi tÿ le EC tâng së làm giâm % giâi phông duac chat khôi viên, dàc biêt khi tÿ lê EC > 12% thi toc dô giâi phông duçfc chat sau 8 giô giâm rô rêt, khi tÿ lê EC < 10% thi toc dô giâi phông ACV tàng dâng ké. Nguyên nhân là do EC là polyme tao côt kiém soât quâ trinh giâi phông duoc chat theo co ché khuéch tan. Khi tâng tÿ lê EC trong công thûc së dân tôi chiêu dài khuéch tan tàng lên, cùng vôi viêc EC cô trnh so nuôc, së khiê'n cho quâ trinh thâ'm cüa môi trucfng hoà tan vào côt bi kéo dài, do vây làm giâm tÔc dô giâi phông duoc châ't khôi viên. Tuy nhiên, dé EC thé hiên rô khâ nàng kéo dài quâ trinh giâi phông duoc chat khôi viên, côn phâi xét dén ânh hucfng cüa tÿ lê HPMC trong công thûc. Vf du: CT N8(tÿ lê EC = 20%) và CT N9 (tÿ lê EC = 10%) cô cùng thông sô vê tÿ lê HPMC trong công thûc (20%) thï tâc dung cüa EC chî thé hiên rô rêt à già dàu tiên (Y,), % ACV duoc giâi phông tù CT N9 nhanh hon han tù CT Ng (89,52% so vôi 48,02%), nhung bât dàu tù gicf thû hai, quâ trinh giâi phông duçfc châ't không khâc nhau nhiêu. Nguyên nhân là do à gicf dàu tiên, HPMC chua kip truong nô, nên viên cô tÿ lê EC cao hon së giâi phông duoc chât châm han. Tù giôr thü hai, HPMC (vôi môt tÿ lê khâ cao) dâ tnrong nô manh, tao thành môt h^jiiongj^xogjkhién môi trucmg dê dàng thâm vào côt, hoà tan duac chât và khuêch tân duac chât ra ngoài. Do cô cùng tÿ lê HPMC nên toc dô giâi phông ACV cüa hai công thirc không khâc nhau nhiêu. Hînh 9: % ACV giâi phông tù câc viên bào ché theo CT N8 và N9 (*) Ânh hirông cüa tÿ lê HPMC Su ânh huàng cüa HPMC và lactose tcti % duac chât giâi phông sau 8h duac biëu diên à hînh 10. Hinh 10: Anh hitông cüa tÿ lê HPMC và lactose tôi Y8 Tù hînh 7 và hînh 10, nhân thây: tÿ lê HPMC trong công thurc tàng thî duç/c chât giâi phông càng nhanh, nhât là vôi tÿ le HPMC > 20%. C6n vcd tÿ lê 30 HPMC < 10% thi % duçfc chât giâi phông sau 8 giô giâm dang ké. Do HPMC là mot polyme cô khâ nâng hoà tan và truang na manh trong nuôc, tao côt giâi phông duac chât theo ca ché hoà tan. Khi truang nef, HPMC së tao thành môt hàng rào gel kiëm soât giâi phông ( khi dùng riêng rë HPMC ). Tuy nhiên HPMC trong viên côn phôi hop voi EC nên cô thé câi thiên tmh sa nuôc cüa EC (do HPMC là polyme thân nuôc ), côt së trô nên thân nuôc hcfn, khién dung môi dê dàng thâm sâu vào côt de hoà tan và khuéch tân duçfc chât ra ngoài. Khi tàng luang HPMC së dân dén tâng mât dô lô xô'p, dê dàng hüt dung môi vào hoà tan trong côt, dây nhanh tôc dô giâi phông duçfc chât. Vf du: Hai công thüc N4 và N5 (không chûa HPMC) và công thüc N9 (tÿ lê HPMC = 20%) cô tôc dô giâi phông duac chât rât khâc nhau. Viên bào ché theo công thüc N9 sau 2 giô dâ giâi phông hcfn 90% ACV, côn vôi hai công thüc N4 và N5 thi quâ trînh giâi phông duçfc chât diên ra rât châm, sau 8 giô chî giâi phông duac khoàng 30%. Qua dô cô thë thây rô ânh huông cüa HPMC dén tôc dô giâi phông duçfc chât cüa viên nén ACV TDKD. Hînh 11: %ACV giâi phông tù câc viên bào ché theo công thûc N4,N5,N 9 (*) Ânh hurâng cüa lactose Ânh huông cüa lactose dén su giâi phông ACV phâi duçfc xét trong môi quan hê vôi tÿ lê cüa câ EC và HPMC. Nhîn vào hînh 8: vôi cùng tÿ lê 31 9r* EC, công thüc cô tÿ lê lactose tâng dân së cô % giâi phông ACV sau 8 gio {lXA giâm dân. Do tâng tÿ lê lactose cüng tuong duong vôi viêc giâm tÿ lê HPMC trong công thurc. Nhu vây, khi tÿ lê lactose tâng hoâc giâm cüng tucfng duong vôi tÿ lê EC và HPMC trong công thirc thay doi theo. Mà EC và HPMC là hai ta duoc quyét dinh dén toc dô giâi phông duoc chât, nên chmh su thay doi cüa tÿ lê EC hoâc HPMC môi là tac nhân chmh dân dén su khâc nhau vê toc dô giâi phông duoc chât trong môi công thirc. Dua vào câc mât dâp, ta nhân thay: khi giâm luong lactose, dông thôi giâm EC và tàng HPMC thi % duoc chât duoc giâi phông sau 8 giô së tâng. Vf du: CT N5: %HPMC = 0, %EC = 10, % Lactose = 50 CT N6: % HPMC = 20, % EC = 0, % Lactose = 40 Vôi tÿ lê câc ta duoc trong công thüc nhu trên, quâ trinh giâi phông duoc chât cüa CT N6 nhanh hon hân so vôi CT N5. Diêu này duoc thé hiên rô qua hinh 12 duôi dây. Hinh 12: % ACV giài phông tù câc viên bào chê'theo công thûc N5 và N6 Nhu vây lactose ânh huông không dâng ké dén quâ trinh giâi phông duoc chât cüa viên. 2.2.3.3. Lira chon công thürc bào ché viên nén ACV TDKD. Tién hành lua chon trên mang thân kinh nhân tao vôi su tro giüp cüa phân mêm Inform 3.2, dua trên giâ tri f2. Chî so f2 thé hiên sir giong nhau giua hai dô thi giâi phông duoc chât, duoc quy dinh bôi Cü quan quân lÿ thuôc và 32 thuc phâm Mÿ (FDA) và Dan vi dânh giâ thuôc dùng cho nguài thuôc Co quan dânh giâ câc sân phâm y hoc Châu Âu dua ra nhu sau: f 2 = 50 x lgi - 0.5 .1 0 0 . ► n t=l Trong dô: + n: sô' diëm lây mâu thir + Rt, Tt: % duoc chât giâi phông tai thcri diëm t cüa mâudôL _ chiéu và mâu thü. Giâ tri f2trong khoâng tù 50- 100 thi hai dô thi duoc coi là giông nhau. f2= 100 thi hai dô thi giông nhau hoàn toàn. Tien hành xù lÿ sô liêu thu duoc tù câc trâc nghiêm hoà tan cüa 11 công thûc thuc nghiêm duoc trinh bày à bâng 12, so voi dieu kiên vê % duoc dfJ Y* 'viih/ ,, chât giâi phông sau môi gicf, thu duoc giâ tri f2 cüa tùng công thûc. Ket quâ ------duoc trinh bày à trong bàng 14. Bâng 14: Chî sof2cüa 11 công thûc thuc nghiêm CT N, n 2 n 3 n 4 n 5 n 6 n 7 n 8 n 9 N10 Nu f2 17.42 70.25 52.45 18.69 20.38 22.2 41.36 24.68 20.16 19.19 19.04 Tù ket quâ trên, công thurc N2 thuc nghiêm duoc lua chon dë xây dung công thûc bào ché viên nén ACV TDKD vôi thành phàn và câc giâ tri du doân vê toc dô giâi phông duçfc chât cüa viên duçfc trinh bày à bàng 15. * Thành phàn công thurc bào ché dtïçrc lira chon: CT (*) ACV 200mg ( 40% ) HPMC 195mg ( 39% ) EC lOOmg ( 20% ) Lactose 5mg ( 1% ) Mg stearat 0,5% Talc 1% 33 Bâng 15: Câc giâ tri du doân cüa mô hînh 20,85 Y, (%) Y4(%) 58,11 y 8(%) 91,83 f2 69,98 Chûng tôi tién hành bào ché viên nén ACV TDKD theo công thirc (*) 3 lân. Môi mê dâp 300 viên. Câc công thüc thu duçfc dem thü hoà tan, két quâ duac trinh bày à bâng 16 và hînh 13. Bâng 16: % ACV giâi phông tù viên bào ché theo công thûc (*) Nsfli) 1 6 7 8 3 4 5 2 CT \ 17.94 26.06 42.52 58.13 69.07 78.99 87.19 90.56 TN ±1.07 ±2.51 ±2.17 ±2.90 ±3.29 ±6.40 ±5.02 ±1.57 91.83 58.11 MH 20.85 (Chu thich: TN: Thuc nghiêm; MH: Mô hînh) Tü két quâ trên, tînh duac chî so f2= 81,39 chüng tô hai dô thi này duçfc coi là khâ giông nhau. Két quâ thuc nghiêm khâ phù hop vôi mô hînh lÿ thuyét. Hînh 13: % ACV giâi phông tù câc viên bào chétheo công thûc (*) 34 Tù CT (*) chüng tôi tien hành bào ché viên ACV TDKD voi qui mô lôn hon: 2 mè, môi mè 1000 viên theo qui trînh sau: ACV, HPMC, EC, lactose Rây 250 Mây nhào trôn ERWEKA Mây xât lâc hat ERWEKA Mây trôn lâp phuong ERWEKA * Nhân xét : luong côn dùng dë nhào âm khôi bôt ît hon khi làm mè 300 viên. Do voi mè 300 viên thi chî nhào bàng tay, côn voi mè 1000 viên thî nhào bàng mây và dugc dây km trong quâ trînh nhào nên côn không bi bay hoi, luçrng côn dùng sê giâm di dë trânh dinh bét khôi bôt do EC tan môt phân trong côn. 2.2.4. Khâo sât và de xuât mot sô chî tiêu chât luçmg cho viên nén ACV TDKD 2.2.4.1. Dânh giâ chât luong viên nén ACV TDKD (a) Dinh Iwçfng: * Phuong phâp do quang: theo BP 2005. - Tién hành theo phuong phâp dâ trînh bày à mue 2.1.2.3. 35 - Cân 20 viên, tmh duac khôi luang trung bînh mra= 0,51329g. Nghiên, cân môt luang bôt: mcân= 0,2514g, dem pha thành dung dich mâu thu, dem do dô v hâp thu cüa dung dich à buôc sông 252nm, duoc kêt quâ A= 0,776. ; h Tmh toân cho kêt quâ: Hàm luang ACV trong viên : 94,31% ± 2,43. ' * Phirong phâp HPLC: theo USP 29 - Tiên hành theo phuong phâp dâ trînh bày à mue 2.1.2.3 - Két quâ: + Sâc kÿ dô thu duoc tù dung dich chuân và dung dich thir thé hiên à hïnh 14 và hinh 15 duôi dây. 350 300 250 200 < E 150 100 50 0 0 1 2 3 4 5 6 Minutes 7 8 9 10 Hinh 14: Sâc kÿ do cüa dung dich chuan 350 300 250 200 < E 150 100 50 0 0 1 2 3 4 5 Minutes 6 7 8 9 Hinh 15: Sac kÿ dô cüa dung dich thü 10 + Ket quâ tmh toân dua vào diên tich pic: St= 9746788 Sc= 9894435 Thu duac ket quâ: hàm luong ACV trong viên : 99,94% ± 0,07. => Nhu vây viên dat yêu câu vê hàm luçmg duçfc chât ( 90,0 - 110,0 % ) trong câ hai phuofng phâp dinh luong. Ket quâ thu duçfc tù hai phucfng phâp không khâc nhau nhiêu, nhung phuong phâp HPLC cô sai sô nhô han. (b)Dô dông dêu khoi litûng: theo Duoc diên Viêt Nam III. - Cân 20 viên, tmh duçfc mMn? bWl = 0,5036g. Vây, giôi han cho phép: 0,47842 - 0,52878 (g). Ket quâ duofc trinh bày cf bâng 17. Bâng 17: Khoi luomg tàng viên nén ACV TDKD dem thü dô dông dêu khôï luong. STT Khoi luong STT Khoi luong STT Khoi luçfng STT Khôl luofng viên viên (g) (g) (g )’ viên (g )‘ viên 16 0.5129 11 0.5182 1 0.5024 6 0.4979 2 0.4975 7 0.5126 12 0.507 17 0.4984 3 0.5117 8 0.5004 13 0.4978 18 0.5091 4 0.5029 9 0.5073 14 0.492 19 0.4915 5 0.5174 10 0.4948 15 0.5111 20 0.5124 Nhu vây, không cô viên nào nâm ngoài khoâng giôi han cho phép. Viên nén ACV TDKD dat tiêu chuân vê dô dông dêu khoi luofng theo Duçfc diên Viêt Nam III. (c) Thü hoà tan: Tien hành thù hoà tan 4 mâu viên, lây giâ tri trung bînh. Ket quâ thù hoà tan viên nén ACV TDKD bào ché me 1000 viên duçfc trinh bày à bàng 18. 37 Bâng 18: % ACV giâi phông tù viên bào chê me 1000 viên. 7h 8h 4h 5h 6h 2h 3h Thôi lh gian % 15.43 22.07 37.85 52.70 64.00 73.15 80.79 88.22 ACV ±2.11 ±2.05 ±2.15 ±4.17 ±3.46 ±3.01 ±4.06 ±2.63 giâi phông Nhân xét : Dira vào két quà thü hoà tan cüa viên nén ACV TDKD bào ché theo công thüc tôi uu mê 300 viên và mè 1000 viên ( bàng 16, 18 ), ta thay toc dô giâi phông duçfc chât cüa viên bào ché theo mè 1000 viên châm hon viên duçfc bào ché theo mè 300 viên nhung không khâc nhau dang kë. Nguyên nhân là do khôi luofng bôt nhào trôn trong mè 1000 viên lofn hon nên thôi gian nhào âm kéo dài, EC tan nhiêu trong khi tao hat, giüp liên két câc hat voi nhau chât chë tao thành môt khung mang thuôc kiëm soât quâ trînh giâi phông duçfc chât. (d) Dânh giâ dô bô cüa viên : Tién hành thü 3 làn theo phuofng phâp ghi à mue 2.1.2.3 , lây giâ tri trung binh. Két quâ: Dô bôf cüa viên ACV TDKD = 0,137 % ± 0,03. (e)Dânh giâ LGW: -Tién hành theo phuong phâp ghi à mue 2.1.2.3. -Két quâ: LG W = 7,21 kP ± 2,48%. 2.2.4.2. Xây dung mot so chî tiêu chât luong cüa viên nén ACV TDKD * Câm quan: Viên nén trôn, màu tràng, mât viên nhân, canh và thành viên lành làn. * LGW : 6-8 kP * Dô bô: < 1,0% * Dô dông dêu khôl luofng: Theo duofe diën Viêt Nam III . Dô lêch chuân cho phép là 5%. Không duac quâ 2 viên cô dô lêch vuçrt quâ giôi han cho phép, không cô viên nào gâp dôi giôi han dô. * Giôi han giâi phông diïorc chât: - Sau lh: 15 - 25%. - Sau 4h: 50 - 65%. - Sau 8h: > 80%. * Dinh luang: Thù theo 1 trong 2 phuong phâp : - Phuong phâp do quang. - Phuong phâp HPLC. Yêu càu: Hàm luang ACV trong viên chura tù 90,0 - 110,0% so vôi hàm lirong ghi trên nhân. 39 PHÂNIH: KET LUÂN VÀ DE XUAT 3.1 Ket luân: Sau quâ trinh làm thuc nghiêm, chüng tôi thu duçfc nhüng ket quâ sau: 1. Lua chon duoc tâ duoc de xây dung công thuc bào ché viên nén acyclovir TDKD, dô là hôn hop 2 polyme HPMC và EC. 2. Dânh giâ duoc ânh huôfng cüa câc tâ duoc: EC, HPMC và lactose dén khà nàng giâi phông duçfc chât cüa viên: - Tî lê HPMC trong công thûc (khi phoi hop vôi EC) tâng thi toc dô giài phông duçfc chât càng nhanh, nhât là vôi tî lê HPMC > 20%. - Tî lê EC tâng thî tôc dô giâi phông duçfc chât cüa viên lai giâm, khi tî lê EC >12% thi tôc dô giâi phông duçfc chât sau 8h giâm rô rêt. - Ânh hucmg cüa lactose phu thuôc vào tî lê HPMC và EC trong công thûc. Khi luofng lactose giâm và tî lê HPMC tàng, dông thoi tî lê EC giâm thi tôc dô giâi phông duofc chât cüa viên tâng. 3. Dâ lua chon duofc công thûc bào ché viên nén ACV TDKD 12h dat yêu câu thiét ké: 200mg Acyclovir 195mg HPMC lOOmg EC 5mg Lactose 0,5% Mg stearat 1% Talc 0,15ml CÔn 80° 4. Dâ dânh giâ môt so chî tiêu chât luong cüa viên ACV TDKD nhu : dô dông dêu khôi luong, dô bô, dinh luong, khà nàng giâi phông duoc chât cüa viên. Tù dô dê xuât tiêu chuân cho viên nén ACV TDKD 12h. 3.2. Dê xuât: Trên dây chî là nhüng nghiên cüu buôc dàu vê diêu chê viên nén ACV TDKD. VI thôti gian nghiên ciru cô han nên chüng tôi chua thé khào sât thêm vê ânh huông cüa môt sô yêu tô khâc dén khâ nàng giâi phông duoc chât cüa viên, nhu ânh huông cüa tî lê ta duoc trofn, cüa lue gây vo viên, nhàm dua ra môt công thirc cô khâ nàng giài phông tôt hon. Do vây, chüng tôi xin dua ra môt sô dê xuât nhu sau: 1. Nghiên ciîu bào ché viên nén ACV TDKD ô qui mô lôn hon và dânh giâ câc thông sô kÿ thuât ânh huông dén chât liïçmg viên. 2. Nghiên curu dô ôn dinh cüa viên nén ACV TDKD. 41 TÀILIÊU THAM KHÂO TIÊNG VIÊT 1. Lê Hoàng Anh (2006), Nghiên cüu bào chê'vi câu noi ACV TDKD, khoâ luân tôt nghiêp duoc sî dai hoc, Truôfng DH Duoc Hà Nôi. 2. Bô Y Té (2002), Duac diên Viêt Nam III, NXB Y hoc, PL132. 3. Bô mon Bào ché (2006), Mot sô chuyên de ve bào chê'hiên dai, tài lieu sau dai hoc, NXB Y Hoc, tr. 143-170. 4. Bô mon Bào ché (2004), Kÿ thuât bào chê'và sinh duac hoc câc dang thuôc, tâp 2, NXB Y Hoc, tr.156-179. 5. Bô mon Hoâ duoc (2004), Hoâ duçfc, tâp 2, Trucmg DH Duoc Hà Nôi, tr.283 - 285. 6. Bô Y Té (2002), Duac thu quô'c gia Viêt Nam, tr.89-91. 7. Nguyën Thi Hong (2005), Nghiên cüu bào chê'vi nangACV TDKD, Khoâ luân tôt nghiêp duoc si dai hoc. 8. Nguyên Thi Thu Hàng (2007), Nghiên cüu bào che viên nang ACV TDKD, Luân vân tôt nghiêp thac sÿ duoc hoc, Trucmg DH Duoc Hà Nôi. TIÊNG ANH 9. Berner Bert et al (1998), Transbuccal delivery of acyclovir: I. invitro détermination of routes of buccal transport, Pharm. Res., 8, p.l 182-1187. 10. BP 2005, Volume 1 - p.53-54; Volume 3 - p.2206. 11. Degim Tuncer et al (2006), A Sustained release dosage form of acyclovir for bucal application: An experimental study in dogs, Journal of Drug Targeting, 14, p.35-44. 12. D. Paraskevas et al (2007), High-through put HPLC assay of acyclovir and its major impurity guanine using a monolithic column and aflow gradient aproach, J. of Pharm. and Bio. Anal., 43, p.1526-1530. 13. Fuertes I. et al (2006), Estimation of the percolation thresholds in acyclovir hydrophilic matrix tablets, Eur. J. of Pharm. BioPharm., 64, p.336-342. 14. J. Tu et al (2001), Formulation and pharmacokinetic study of acyclovir controlled-release capsules, Drug Dev. Ind. Pharm., 27 (7), p.687-692. 15. K. Basavaiah et al (2002), Simple spectrophotometric détermination of acyclovir in bulk drug and formulations, Il Farmaco, 57, p.443-449. 16. K. Basavaiah et al (2003), Simple high-performance liquid chromatographie method for the détermination of acyclovir in pharmaceuticals, Il Farmaco, 58, p.1301-1306. 17. Lewis Gareth A. (2002), Optimization methods, Ecyclopedia of pharmaceutical technology, 2 , Vol 2 , p.1922 - 1934. 18. Martindale 32, p.602-606. 19. Ponsuwanapha Supapon (2002), Study of hollow microspheres of acyclovir, A thesis of as a multiple-unit floating sustained release system the degree of Master of Science in Pharmacy, Mahidol University. 20. SJ. Cheu et al (2000), Invitro modified release of acyclovir from ethylcellulose microspheres, J. Microen., 18 (5), p.559-565. 21. Sultan M. (2002), Spectrophotometric détermination of acyclovir in some pharmaceutical formulations, Il Farmaco, 57,p.865-870. 22. Shao Z. et al (1992), Acyclovir permeation enhancement across intestinal and nasal mucose by bile salt-acylcarnitine mixed micelles, Pharm. Res., 10, p. 1262 —1266. 23. USP 29 (2006), NF 24, p.57. 24. P.Ugandhi et al (2006), Spectrophotometric estimation of acyclovir in 'pharmaceutical dosage forms, Indian J. of Pharm. Sci., p.516. [...]... pham AVC trờn thi trirụng (1) Acyclovir NocKwoo: viờn nộn 200mg (Korea Green Pharm) (2) Acyclovir Stada Tab: viờn nộn 200mg, 400mg, 800mg (Stada) (3) Herpevir viờn nộn 200mg (Sanofi - Sinthelabo) (4) Zovirax : + Viờn nộn 200mg, 800mg + Hụn dich 250mg/5ml, chai 125ml + Kem bụi da 5%, ụng 2g + Thuoc mụ tra mõt 3% ụng 4,5g + Lo bot pha dung dich tiờm truyờn tợnh mach 250mg (5) Acyclovir viờn nộn 200mg (Cty... duac chõt kộo di dộn 6h, duac lua chon l cụng thuc thich hgp nhõt cho cõc thỹ nghiờm invivo - Tõc giõ cỹng dõ xõy dung duac mụt mụ hợnh dụng hoc dở phõn tfch, du doõn quõ trợnh hõp thu cỹa acyclovir trờn chụ Mụ hợnh ny cụ thở duac phõt triởn dở õp dung mụ phụng quõ trợnh dụng hoc cỹa thuục trong ca thở con ngucri *Viờn nang [14]: J Tu v cụng su dõ bo chộ viờn nang ACV gii phụng cụ kiởm soõt qua 3 buục:... tng lirỗmg C - 934 v nguofc lai, gim khi tng lirỗmg PC - Viờc thờm ST vo cụ hiờu quõ lm tng su hõ'p thu cỹa acyclovir qua niờm mac 7 - Khõ nõng ho tan dugc chat tir viờn nộn dirac khõo sõt trong mụi tnrcfng dich nuục bot nhõn tao dở tim ra cụng thurc tụi uu giõi phụng duac chõt theo mụ hợnh dụng hoc bõc O - Cụng thỷc bao gụm: C - 934 (64,4%), PC (34,4%), ST (0,8%) cụ toc dụ giõi phụng duac chõt 9,708mg/h,... 1.2.12 Mot so nghiờn curu vờ bo chộ Acyclovir TDKD * Viờn nộn [11]: Tuncer Degim v cụng su dõ bo chộ viờn nộn kột dmh niờm mac miờng dở diờu tri nhiờm trựng tai miờng do Herpes Simplex gõy ra Viờn nộn duac bo chộ voi cõc thnh phõn: Carbopol - 934, Polycarbophil (PC), v Sodium Taurocholat (ST) Kột quõ nghiờn curu: - Dụ tan v giõ tri log cỹa hờ s6 phõn bụ octanol/ nuục cỹa acyclovir thay doi theo pH Cõc giõ... Phirong phõp sac k long hiờu nõng cao (HPLC): 9 * Paraskevas D Tzanavaras v cụng sir dõ nghiờn cuu dinh lirong dụng thcd ACV v tap chfnh cỹa nụ l guanine trong cõc chộ pham bo chộ [12] + Sỹ dung mõy HPLC Hewlett Packard (HP 1100) + Cụt monolithic RP - 18e (100 mm x 4,6 mm); nhiờt dụ cụt: 25C + Pha dụng: acid acetic 0,2% (v/v) + D2 chuõn: pha dung dich ACV chuõn cụ nụng dụ 1000mg/l pha dung dich guanine... Cụt: 5(j.m Hypersi]|ODS~Q^25cm x4,6 mm) + Pha dụng: Hụn hgp acetonitril 20 mM - dờm ammonium acetat (pH 4,5) theo tợ lờ 40: 60 + D2 pha loõng: Trụn acetonitril vụi nuục theo tợ lờ 40:60 + D2 chuõn v dung dich thỹ: cụ nụng dụ 198 |ug/ml, trong quõ trợnh pha dờu dugc diờu chợnh thở tfch bng dung dich pha loõng trờn + Detector UV buục sụng 250 nm + Toc dụ dụng: 0,8 ml/ phỹt 10 4- Thở tfch tiờm: 20 jllI... dirụng chuõn bng phirong phõp sac k long hiờu nõng cao (HPLC) - Dung chuõn ACV duac xõy dung bng phuong phõp HPLC voi cõc diờu kiờn sau: + Pha dụng: dung dich acid acetic 0,02M + Cụt: C18 ( 250mm x 4,6mm ), duụng kmh hat: 5|j,m, nhiờt dụ cụt: 25C 14 + Toc dụ dụng: l,5ml/phỹt + Detetor UV, buục sụng 254nm + The tich tiờm mõu: lOjul + Dung dich thu: cõn chmh xõc lOOmg ACV, ho tan trong 10ml NaOH 0,1N... ACV chuõn cụ nụng dụ 1000mg/l pha dung dich guanine chuõn cụ nụng dụ 100mg/l + D2thỹ: tfnh toõn pha dung dich cụ nụng dụ tuang ỹng vụi dung dich chuõn + Detector quang pho DAD buục sụng 254nm + Toc dụ dụng: 2,0ml/phỹt + Thở tfch tiờm: 20 jol Kột quõ: thụti gian luu cỹa guanine l 1,25 phỹt, cụn thụi gian luu cỹa ACV l 3,51 phỹt * Mụt phuong phõp mụi sỹ dung HPLC dở dinh luong ACV dõ dugc K.Basavaiah... su dõ bo chộ viờn nang ACV gii phụng cụ kiởm soõt qua 3 buục: Tao hat (cụng thirc tao hat ACV 100g, PEG 6000 20g), bao hat (cụng thirc dich bao EC, PVP, dõu thõu dõu, aceton, isopropanol, Mg stearat), dụng nang Qua nghiờn cuu khõ nõng giõi phụng duac chõt vụi cõc dich bao cụ nụng dụ EC lõn lugt l 10%, 16 %, 24%, kột quõ cho thõy: tợ lờ EC trong dich bao tõng lờn thợ phõn trm giõi phụng duac chõt giõm... 3 4 5 6 7 8 9 2.1 NGUYấN LIấU V PHUONG PHP THUC NGHIấM 2.1.1 Nguyờn liờu v phuong tien nghiờn curu * Nguon goc v tiờu chuan chõt Iiùỗmg cỹa cõc nguyờn liờu Nguyờn liờu Nguon goc Tiờu chuõn chõt luong Acyclovir Trung Quoc USP26 Dicalci phosphat Trung Quoc BP 2001 HPMCE15 Trung Quoc BP 2000 Ethyl cellulose lOcp Nhõt BP 2000 Lactose Trung Quoc Eur.Ph 2000 Talc Trung Quoc BP 1998 Magnesi stearat Phõp Eur.Ph ... loc cao Acyclovir ỷc chộ quõ trinh sinh tong hop DNA cỹa siờu vi khuõn chỹng xõm nhõp vo tộ bo, nhụ tõc dụng cỹa cõc men virus sinh acyclovir duac chuyởn thnh acyclovir monophosphat, acyclovir. .. dõ xõy dung duac mụt mụ hợnh dụng hoc dở phõn tfch, du doõn quõ trợnh hõp thu cỹa acyclovir trờn chụ Mụ hợnh ny cụ thở duac phõt triởn dở õp dung mụ phụng quõ trợnh dụng hoc cỹa thuục ca thở ngucri... dirofc chat 1.2 Vi nột vờ Acyclovir .4 1.2.1 Cụng thỷc hoõ hoc 1.2.2 Tmh chõt 1.2.3 Tac dung duoc l 1.2.4 Diùoc dụng hoc 1.2.5 Chợ dinh