Khoá luận tốt nghiệp bước đầu nghiên cứu quy trình nhân nhanh giống lan đai châu đỏ (rhynchostylis gigantea) bằng công nghệ nuôi cấy mô tế bào

TRƯỜNG ĐẠI HỌC sư PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH - KTNNPHAN THỊ HIÈN LƯƠNG “BƯỚC ĐÀU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN NHANH GIỐNG LAN ĐAI CHÂU ĐỎ RHYNCHOSTYLIS GIGANTEA BẰNG CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ TẾ B

TRƯỜNG ĐẠI HỌC sư PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH - KTNN

PHAN THỊ HIÈN LƯƠNG

“BƯỚC ĐÀU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN

NHANH GIỐNG LAN ĐAI CHÂU ĐỎ

(RHYNCHOSTYLIS GIGANTEA) BẰNG CÔNG NGHỆ

NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO”

Chuyên ngành: DI TRUYỀN HỌC

Hà Nội, 2015

LỜI CẢM ƠN

Trong suốt quá trình tìm hiểu và nghiên cứu khóa luận, nhận được sự giúp

đỡ, chỉ bảo tận tình của Th.s Phan Thị Thu Hiền và TS Nguyễn Như

Toản, em đã từng bước tiến hành nghiên cứu khóa luận này với đề tài “Bước

đầu nghiên cứu quy trình nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ (Rhynchostylỉs gigantea) bằng công nghệ nuôi cấy mô tế bào”.

Qua đây, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Th.s Phan Thị Thu Hiền và T.s Nguyễn Như Toản Các thầy cô trong tổ di truyền của Trường Đại học sư

phạm Hà Nội 2 đã tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành khóa luận này

Cuối cùng em xin được chân thành gửi lời cảm ơn tới gia đình, tập thể, bạn

bè, những người đã động viên, giúp đỡ tận tình và tạo mọi điều kiện thuận lợicho em trong suốt quá trình thực hiện đề tài

Một lần nữa, em xin được chân thành cảm ơn tất cả!

Hà Nội, tháng 5 năm 2015 Sinh viên

Phan Thị Hiền Lưong

LỜI CAM ĐOAN

Để đảm bảo tính trung thực của khóa luận, tôi xin cam đoan:

Khóa luận “Bước đầu nghiên cứu quy trình nhân nhanh giống lan Đai

châu đỏ (Rhynchostylis gigantea)” là công trình nghiên cứu của cá nhân tôi,

được thực hiện dưới sự hướng dẫn của ThS Phan Thị Thu Hiền và TS Nguyễn Như Toản Các kết quả trình bày trong khóa luận là trung thực và

chưa được công bố ttong bất kỳ công trình nào trước đây

Hà Nội, tháng 5 năm 2015 Sinh viên

Phan Thị Hiền Lương

CÁC CHỬ VIẾT TẤT TRONG LUẬN VĂN

BAP : 6-Benzyl Amino Purin

Cs : Cộng sự

LỜI CẢM ƠN

NN : Nhân nhanhNAA : Naphythyl Acetic Acid

MS : Murashige và SkoogTHT : Than hoạt tính

TR : Tạo rễIBA : 3-Indol Butyric Acid2,4-D : 2,4-Dichlorophenoxy Acetic Acid

Bảng 3.1: Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của Ca(OCl2)2đến tỷ lệ sống 17Bảng 3.2: Anh hưởng của tổ hợp BAP, NAA đến khả năng nhân nhanh của

giống lan Đai châu đỏ bằng in vitro 19Bảng 3.3: Anh hưởng của cường độ ánh sáng lên khả năng sinh trưởng của

cây (sau 40 ngày nuôi cấy) 21Bảng 3.4: Anh hưởng của nồng độ NAA lên khả năng tạo rễ của 22Bảng 3.5: Anh hưởng của than hoạt tính (THT) đến khả năng tạo rễ của chồi

lan Đai châu đỏ (sau 40 ngày) 24Bảng 3.6: Anh hưởng của giá thể đến tỷ lệ sống và chất lượng cây con ngoài

vườn ươm của giống lan Đai châu đỏ 25

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.2 Cây lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea) 5

Hình 3.1: Ảnh hưởng của chất khử trùng lên khả năng nảy mầm của hạt 18

Hình 3.2: Anh hưởng của tổ họp BAP, NAA đến khả năng nhân nhanh của giống lan Đai châu đỏ bằng in vitro 20

Hình 3.4: Anh hưởng của THT đến khả năng ra rễ của cây lan 25

Hình 3.5 Cây lan hoàn chinh khi ra ngoài môi trường tự nhiên 27

LỜI CẢM ƠN 2

LỜI CAM ĐOAN 3

MỞ ĐẦU 1

1 Lý do chọn đề tài 1

2 Mục tiêu của đề tài 2

3 Ý nghĩa 2

3.1 Ý nghĩa khoa học 2

3.2 Ý nghĩa thực tiễn 2

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1 Nguồn gốc xuất xứ, ví trí và phân loại của cây hoa lan 3

1.1 Nguồn gốc và vị trí phân loài 3

1.1.1 Nguồn gốc 3

1.1.2 Phân loại thực vật 4

1.1.3 Giới thiệu chung về lan Đai châu đỏ(Rhynchostylis gỉgantea) 5

1.2 Giá trị sử dụng và thực trạng khai thác của giống lan đai châu đỏ 6

1.2.1 Giá trị sử dụng của hoa lan 6

1.2.2 Tình hình nghiên cứu sản xuất hoa lan Đai Châu đỏ trên thể giới và ở Việt Nam 6

Chương 2 VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP VÀ NỘI DUNG 13

NGHIÊN CỨU 13

2.1 Đối tượng nghiên cứu 13

2.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 13

2.3 Phương pháp nghiên cứu 13

2.3.1 Phương pháp bổ trí thí nghiệm 13

2.3.1.1 Nghiên cứu lựa chọn để tạo nguồn vật liệu in vỉtro phương pháp khử trùng và cơ quan nuôi cấy 13

2.3.1.2 Giai đoạn nhân nhanh 14

2.3.1.3 Giai đoạn tạo rễ 14

2.3 ỉ.4 Giai đoạn ra cây 16

2.3.2 Phương pháp xử lý số liệu 16

2.4 Nội dung nghiên cứu 16

Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17

3.1 Khử trùng cơ quan nuôi cấy tạo nguồn vật liệu in vitro 17

3.2 Anh hưởng của tổ họp BAP và NAA lên khả năng nhân nhanh của giống lan Đai châu đỏ 18

3.3 Giai đoạn tạo rễ và ra cây 20

Thí nghiệm 1 Ảnh hưởng của cường độ ánh sáng lên khả năng sinh trưởng của chồi 20

Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của nồng độ NAA lên khả năng tạo rễ của lan Đai châu đỏ 22

Thí nghiệm 3 Ảnh hưởng của nằng độ than hoạt tính lên hình thái rễ của giong lan Đai châu đỏ 23

CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 28

TÀI LIỆU THAM KHẢO 29

MỞ ĐẦU

1 Lý do chọn đề tài

Cây hoa Lan (Orchidaceae) là một giống cây cảnh được nhiều người ưa

chuộng, không những bỏi yẻ đẹp quý phái của chúng, mà còn bỏi công dụngchữa bệnh của một số giống Nghề trồng lan cũng đem lại lợi nhuận khá cao.Ngày nay Phong lan đã được xuất khẩu và lưu thông như một ngànhthương mại và nhanh chóng lan rộng trên phạm vi toàn thế giới Nên việctrồng hoa lan đã đem lại hiệu quả kinh tế thiết thực và đã thu hút được nhiềungười tham gia

Trên thế giói chi lan Hoàng thảo (Dendrobium) có khoảng 1400 loài, chủ

yếu phân bố ở Đông Nam Á và các đảo thuộc Philippine, Malaysia, Indonesia,Papua New Guinea, Đông Bắc Australia Ở Việt Nam có 107 loài và 1 thứ,phân bố ở các vùng núi từ Bắc vào Nam và trên một số đảo ven biển

[20] Tuy nhiên, do nhiều nguyên nhân khác nhau, đến nay nhiều loài đã bịtuyệt chủng hoặc bị đe dọa Một số loài nằm trong danh mục Đỏ của “Sách đỏ

Việt Nam”, trong đó có loài lan Thạch hộc (Dendrobium nobỉle Lỉndl) phân bố

ở vùng trung du miền núi phía Bắc Việt Nam [11] Để bảo tồn và phát triểnloài lan quý hiếm này, không còn cách nào khác là phải tiến hành nhân giống

và nuôi ttồng chúng ở quy mô lớn Nguyễn Tiến Bân, 2007, [2], Dương ĐứcHuyến, 2007,[11]

Dựa ừên cơ sở khoa học và thực tiễn trên, chúng tôi đã tiến hành nghiêncứu xây dựng và phát triển quy trình nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ Giống

lan Đai châu đỏ có tên khoa học: (Rhynchostylỉs gigantea), thuộc họ: Phong lan (Orchidaceac) Lan Đai châu đỏ có nguồn gốc từ miền tây nam Trung

Quốc - là cây thân thảo, có thể trồng ở ngoài trời và cả trong bóng râm làm câycảnh hoa Cuống hoa mọc từ Cây lan Đai châu đỏ ưa thích khí hậu

nóng ẩm, yêu cầu ánh nắng đày đủ, tuy nhiên càn đặt cây vào nơi mát mẻ vào mùa hè Cây lan Đai châu đỏ thích hợp trồng khắp mọi nơi.

Giống lan Đai châu đỏ phân bố ngày càng hẹp, vì vậy cần nhân nhanh đểlưu trữ nguồn gen, phục vụ cho sản xuất đáp ứng nhu cầu thị hiếu của conngười

Xuất phát tò những lý do trên tôi tiến hành thực hiện đề tài “Bước đầu nghiên cứu quy trình nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea) bằng công nghệ nuôi cấy mô tế bào”.

2 Muc tiêu của đề tài

Nhân nhanh thành công giống lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea)

bằng công nghệ nuôi cấy mô tế bào

3 Ý nghĩa

3.1 Ý nghĩa khoa học

Kết quả nghiên cứu sẽ đưa ra được một biện pháp kỹ thuật nhân giống hoa

lan Đai châu đỏ bằng phương pháp in vitro Đánh giá được tác động của một

số chất điều tiết sinh trưởng trong nhân giống hoa lan Đai châu

3.2 Ý nghĩa thực tiễn

Sản xuất được cây con sinh trưởng phát triển tốt, đồng đều và sạch bệnhvói khối lượng lớn, kịp thời phục yụ cho sản xuất Thuận lọi cho việc áp dụngcác biện pháp kỹ thuật trong giai đoạn sản xuất hoa thực phẩm, từ đó kíchthích sản xuất hoa phát triển

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1 Nguồn gốc xuất xứ, ví trí và phân loại của cây hoa lan

1.1 Nguồn gốc và vị trí phân loài

1.1.1 Nguồn gốc

Từ thời cổ xưa con người đã sớm thưởng thức cái đẹp của thiên nhiên.Hoa đã đi vào cuộc sống như một nét đẹp không thể thiếu trong các ngày lễtết, hội hè, đình đám, trang hoàng nhà cửa

Ngày nay, cùng với sự phát triển nhanh chóng của xã hội, nhu cầu vềhoa trên thế giới nói chung và cả nước ta nói riêng tăng nhanh hơn bao giờ hết,hoa tươi trở thành loại sản phẩm mang lại giá trị kinh tế cao và chiếm vị trí đặcbiệt trong thị trường hàng hóa nông nghiệp trên thế giới Thị trường hoa tươitập trung ở các nước có nền công nghiệp phát triển cao: Hà Lan; Pháp; Anh;Nhật; Ý; Mỹ

Cây hoa lan (Orchidaceae) được biết đến đầu tiên ở Phương Đông, nói

về hoa lan là phải nói đến người Trung Hoa, họ đã biết về lan vào khoảng

2500 năm về trước tức là thời đại của Đức Khổng Tử (551 - 479 TCN)

Theo tác giả Bretchacidon thì từ đòi vua Thần Nông (2800 TCN) một số loàilan rừng này đã được dùng để làm thuốc chữa bệnh Chính vẻ đẹp kiêu sa vàhương thơm quyến rũ của nó kết hợp với công dụng chữa bệnh nên loài hoanày đã nhanh chóng xuất hiện ở Châu Âu Pharatus (376 - 285 TCN) được coi

là cha đẻ của ngành lan học, vì ông là người đầu tiên dùng từ Orchids để chỉ 1loài hoa lan củ tròn Sau đó là Linrieatis (1707 - 1778) và Bron (1773 - 1858)

là những người đầu tiên phân biệt rõ ràng họ lan với các họ thực vật khác.Nhưng người đặt nền tảng cho môn học về hoa lan là Joanlind (1779 - 1858).Vào năm 1936 ông đã công bố tài liệu (A Tabules View of the tubes oforchidea) để sắp xếp loài và chi họ lan Tên họ lan do ông đưa ra vẫn dùng chođến ngày nay [9]

Ở Việt Nam nghiên cứu về lan ở buổi đầu chưa được rõ rệt Người takhông biết chính xác nhưng có lẽ người đầu tiên khảo sát về lan là người tuyên

giáo Bồ Đào Nha Joanisde Lourceiro, ông đã mô tả cây lan Việt Nam trongcuốn “Flora de cochinchinensis” (1789), chỉ sau khi người Pháp đến Việt Namthì mới có những công trình nghiên cứu công bố đáng kể là Guillaumin, tác giả

đã mô tả 101 chi gồm 750 loài lan cho cả 3 nước Đông Dương trong bộ “Thựcvật chí Đông Dương” do Lecomle chủ biên, xuất bản từ năm 1932 - 1934 theoPhạm Hoàng Hổ (1999) Ở Việt Nam có tới 755 loài lan [7]

1.1.2 Phân loai thưc

vât • • •

Qua quá trình nghiên cứu và phân loại trong hệ thống phân loại thực vật,cây hoa lan thuộc:

Giới: Thực vật (Plantae) Ngành: Hạt kín (Mangoliophvaatjh) Lớp: Một lá mầm (Monocotyledoneae) Bộ: Măng tây (Asparagales)

Họ: Phong lan (Orchỉdaceae) Chi: Hoàng thảo (Dendrobium) [21]

Theo những nghiên cứu trước đây họ phong lan được chia làm 3 họ phụ.Tuy nhiên những phân tích gần đây nhất cho thấy có thêm 3 họ phụ của họ

phong lan Vậy đến nay họ Phong lan chia thành 6 họ phụ: Apostasỉscỉdeae; Orchỉdadae; Cypripedicidea; Epỉdendroideae; Neotrìcideae và Vandoỉdeae.

Theo thống kê sơ bộ mới đây của giáo sư Leonid V.A very anov thì ở ViệtNam có khoảng 152 chi, 897 loài Với số lượng như vậy cũng đã cho ta thấy

sự phong phú của họ lan ở Việt Nam Trong công tác chọn giống cây trồng,

5 Hình 1.2 Cây lan Đai châu đỏ (Rhynchostylừ gỉgantea)

việc phân loại các đơn vị dưới loài là rất quan trọng, tuy nhiên công việc này cũng gặp nhiều khó khăn đối với

họ lan

1.1.3 Giới thiệu chung về lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea)

Lan Đai châu đỏ (Rhỵnchostylis gỉgantea) thường được gọi là Ngọc

điểm đai châu (chuỗi hạt châu) mà người bình dân gọi tắt là đai châu, đuôichồn hay gọi là lan me (vì thường mọc trên cây me tại Sài Gòn) Hơn nữa lại

nở vào mùa xuân cho nên có thêm tên gọi là Nghinh Xuân Cây lan này thường

có 5 - 8 lá dài từ 20 - 30 cm, rộng 4-7 cm, màu xanh vàng có những sọc trắng

và những chấm tím Cây lớn và khỏe mạnh có thể ra tới 3 - 4 chùm hoa cong

và dài từ 15 - 30 cm, hoa to chừng 3 cm

Lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea) thuộc Họ Phong lan (Orchidaceac), bộ Măng tây (Asparagales), lớp Một lá mầm (Monocotyledoneae) Chúng là những cây thân cứng, lá mọc so le, dày Các

cây thuộc chi này là nhóm hoa lan đa dạng có hoa đẹp với đầy đủ các màu sắc

và hương thơm Dù rằng Bulbophyllum (Lan Lọng) là một loài lớn nhất trong

họ hoa lan nhưng luận về hương sắc có lẽ Dendrobium vẫn vượt trội hơnnhiều

1.2 Giá trị sử dụng và thực trạng khai thác của giống lan đai châu đỏ

1.2.1.Gui trị sử dụng của hoa lan

Xét về phương diện thẩm mỹ: Từ xưa hoa lan đã được coi là loại hoavương giả Hoa sở dĩ được nhiều người ưa chuộng là bỏi màu sắc hoa thắmtươi, đủ về cùng với trăm ngàn kiểu dáng hoa khác nhau Không chỉ thế mà là

từ những bông hoa xinh đẹp đó còn tỏa ra những mùi hương thoang thoảng,ngọt ngào đã làm ngây ngất lòng người Khác vói các loài hoa sớm nở tối tàn,hữu sắc vô hương, hoa lan được xếp vào hàng vương giả cũng bỏi những lí doriêng của mình Nếu giữ được đúng nhiệt độ và độ ẩm thì hoa có thể giữnguyên hương, nguyên sắc từ 2 tuần lễ cho đến 2 tháng, có những loại đến 4tháng Lan thường sống trên các thân cây, cành cây khác nhưng lại không phải

là loài kí sinh ăn hại vì nó không hút chất dinh dưỡng, không gây hại cho cây

mà chỉ mượn cây làm chỗ dựa, nhiều trường họp đem lại lợi ích cho cây màchúng bám lên

Xét về mặt kinh tế, lợi từ vườn lan mang lại cao hơn nhiều lần các loạicây trồng nông nghiệp khác Theo thống kê của vụ kế hoạch thuộc Bộ NN &

PTNT nếu trồng lan cắt cành Dendrobium và Mokara thì lha có thể cho doanh

thu 500 triệu - 1 tỷ đồng/ha/năm Hiện nay trên thế giới, một số nước xuấtkhẩu hoa lớn như: Thái Lan, Đài Loan, Hà Lan đang có xu hướng mở rộngdiện tích các trang trại trồng hoa lan, các quy mô lớn, dự án đầu tư cho ngànhthương mại hoa lan cũng không ngừng gia tăng

1.2.2 Tĩnh hình nghiên cứu sản xuất hoa lan Đai Châu đỏ trên thế giói và

ở Viêt Nam

I.2.2.I Tình hình nghiên cứu sản xuất hoa ỉan Đai Châu đỏ ở Việt Nam

Đất nước ta là một trong hai khu vực xuất phát các loài lan quý trênthế giới Do vị trí địa lý mà khí hậu, độ ẩm, nhiệt độ và cường độ ánh sáng củanước ta thích họp cho sự tăng trưởng và phát triển của cây lan Khánh

Hòa cũng là một trong những tỉnh có điều kiện tự nhiên để phát triển ngànhtrồng lan Trong quá trình điều tra và nuôi trồng thử nghiệm các loại lan tạitỉnh Khánh Hòa, người ta nhận thấy lan Đai châu đỏ có khả năng phát triểnthuận lợi về điều kiện tự nhiên, nhưng việc phát triển lan tại tỉnh Khánh Hòacòn nhiều khỏ khăn: chưa có đơn vị chuyên sâu nghiên cứu Phong lan, chưacung cấp được nguồn lan tại chỗ, kỹ thuật chăm sóc còn yếu kém, chưa quantâm nhiều đến phân bón và giá thể, chưa có phòng nuôi cấy mô hiện đại, đặcbiệt là rất khó khăn trong khâu nhân giống và chăm sóc, do đó tỷ lệ sống, sinhtrưởng phát triển còn thấp ở thời kỳ vườn ươm Tại Khánh Hòa việc nhân

giống lan bằng nuôi cấy in vitro chưa được phát triển, giống cây con chủ yếu

nhập từ thành phố Hồ Chí Minh, Đà Lạt do đó giá thành cây con rất cao [28].Tuy nhiên, hiện nay việc sản xuất hoa lan ở Việt Nam mói chỉ phát triểnmạnh mẽ ở các tỉnh phía Nam Bên cạnh đó những nghiên cứu về lan cũngmới chỉ là những nghiên cứu về đặc tính nông sinh học mà chưa có nhữngnghiên cứu sâu sắc về đặc tính di truyền, biến dị ở mức độ khác nhau như hìnhthái hay phân tử

Kho tàng hoa lan Đai châu đỏ ở Việt Nam và Lâm Đồng, Đà Lạt là cảmột nguồn tài nguyên thiên nhiên gần như vô tận, vói khí hậu mát lạnh trongsạch, giá thành nuôi trồng hoa lan chỉ bằng 1/5 - 1/10 ở các nước ôn đới Gầnđây, việc nuôi cấy mô phát triển mạnh số giống mới mang nhiều tính ưu việtnhư: đẹp, bền, có giá ttị xuất khẩu mang hiệu quả kinh tế xã hội rất đáng kể.Nhưng bên cạnh thế mạnh này hoa lan Đai châu đỏ lại rất khó trồng vì thườnghay bị bệnh, năm 2006 có một số vườn nuôi trồng hoa bị thối và chết khoảng

Nguyễn Quỳnh Trang, 2013 [16] Nhiều tác giả khác nhân nhanh in vitro với

nguồn nguyên liệu ban đầu là hạt gieo trên môi trường MS + 15% đườngsaccarose + 2,0 mg/1 BA (Nguyễn Văn Song, 2011) [19] Theo Lê VănHoàng, 2008 [8], phương pháp nuôi cấy mô là phương pháp duy nhất có thểnhân giống lan cho hệ số nhân cao, số lượng cây giống lớn, giá thành hợp lý

Ở Việt Nam cũng đã có nhiều nhà khoa học quan tâm đến việc thu thậplưu giữ nghiên cứu nguồn gen hoa lan bản địa và nhập nội Khuất Hữu Trung

và công sự [17], đã nghiên cứu đa dạng di truyền tập đoàn lan Kiếm (C swarte) của Việt Nam bằng kĩ thuật RAPD, phân tích kết quả phản ứng PCR -

RAPD của 17 giống lan Kiếm ở Việt Nam có 12 mồi Operon khác nhau Kếtquả đã nhận được tổng số 992 băng đa hình, từ đó đã thiết lập được bằng hệ sốtương đồng di truyền và sơ đồ cây phát sinh chủng loại về mối quan hệ ditruyền của 17 giống lan Kiếm Việt Nam Dựa trên kết quả phân tích này, 17giống lan Kiếm Việt Nam được chia làm 5 nhóm khác nhau và dựa vào mứctương đồng di truyền của chúng

Khi nghiên cứu thu thập đánh giá và tuyển chọn một số giống Phong lan

Hoàng thảo (Dendrobium) nhập nội tại miền bắc Việt Nam Phạm Thị Liên và

công sự (2009) [12] đã thu thập được 6 giống lan Hoàng Thảo, ừong đó có 3giống có nguồn gốc tại Băng kốc - Thái Lan, 2 giống tại Chiềng Mai và 1giống tại Chiềng Rai Các giống đều có năng suất cao, hoa đẹp, hiện nay thịtrường trong và ngoài nước rất ưa chuộng

Khi nghiên cứu đa dạng di truyền loài lan Hài Đốm (paphiopedilum concolor pfilzer) bản địa Việt Nam, Khuất Hữu Trung và cộng sự [18] đã nhận xét: loài lan Hài đốm (paphiopediỉum concolor pfilzer) bản địa Việt Nam rất

đa dạng và phong phú

Đặng Văn Đông và cộng sự [4] đã điều tra sự phân bố của hoa lan ViệtNam và lưu giữ, đánh giá một số giống lan quý tại Gia Lâm - Hà Nội Các tácgiả đã kết luận: “Việt Nam được chia thành 6 vùng lan chính, khác nhau vềtính đa dạng, độc đáo của lan rừng và sinh thái tự nhiên của các loài lan này:phía Tây Bắc Bộ; phía Đông Bắc Bộ và Trung tâm Bắc Bộ; Bắc Trung Bộ; cáctỉnh Trung Bộ; Tây Nguyên; Nam Trung Bộ và Nam Bộ Các tác giả đã thuthập được 1.035 chậu (giò) gồm 50 loài thuộc 17 chi Phong lan, Địa lan ViệtNam Nhiều loại hoa lan có khả năng thích ứng tốt với điều kiện khí hậu tạiTam Đảo - Vĩnh phúc (Đai châu, Phi Điệp )

Phạm Thị Kim Hạnh và cộng sự (2008) đã nghiên cứu nhân nhanh in vitro loài lan Đai Châu (Rhynchostylis gigantea) trong bioreactor và cho kết quả về tỷ lệ nảy mầm cũng như tốc độ sinh trưởng của cây con in vitro tốt hơn

so với môi trường đặc Môi trường nuôi cấy là wv bổ sung: vitamin, axit amin

MS bằng phương thức lỏng - bioreactor với các thông số kỹ thuật: nhiệt độ25°c, lưu lượng không khí 0,5 líưphút, thời gian 45 ngày, chu kì 4 ngày ngập:

1 ngày khô là tốt nhất để tăng tỉ lệ cây con (91,1%), giảm thời gian phát triển

1 1

mầm (5 tuần) đồng thời kích thích sinh trưởng cây con in vitro Cây con được

cấy chuyển sang môi trường đặc sau 3 tháng đạt được 5,8 lá; 5,2 rễ; dải lá 6,1cm; rộng lá l,35cm, rễ mập 0,41 cm Giá thể nuôi cấy ngoài vườn ươm bọt núi+ than củi + tảo Đài Loan [10]

Năm 2009, Lê Minh Nguyệt và cộng sự đã nghiên cứu ảnh hưởng củamôi trường và chất điều hòa sinh trưởng đến khả năng tái sinh và nhân giống

Hoàng lan thuộc chi lan Kiếm (cymbidium) Các tác giả đã khẳng định: môi

trường nhân nhanh bổ sung các chất điều hòa sinh trưởng thuộc nhóm auxin vàcytokinin có tác dụng tốt tăng hệ số nhân và chất lượng chồi đối với hai giốnglan CD5 và CD9 Môi trường cho hệ số nhân và chất lượng chồi cao nhất vớigiống CD5 là môi trường cơ bản MS bổ sung lmg/1 BAP và 0,3 mg/1 NAA.Môi trường tốt nhất đối với giống CD9 là môi trường cơ bản MS bổ sung lmg/

1 BAP và 0,5 mg/1 NAA Các chất điều hòa sinh trưởng IBA, kinetin bổ sungriêng rẽ hay tổ hợp với các môi trường MS có bổ sung BAP và NAA Các chất

có ttong các sản phẩm tự nhiên ở nước ta như chuối xanh, nước dừa có thể bổsung để tăng hiệu quả môi trường và tiết kiệm chi phí khi nhân giống hoa lan.Môi trường tạo cây hoàn chỉnh tốt nhất cho CD5 và CD9 là môi trường MS bổsung 1,0 g/1 than hoạt tính và 0,5 mg/1 NAA, tạo số rễ nhiều nhất và chất

lượng rễ tốt nhất Giá thể tốt nhất để ra cây con sau giai đoạn in vitro là dớn

đối với cả 2 giống CD5 và CD9 Tuy nhiên có thể dùng hỗn hợp rong biển và

xơ dừa với tỷ lệ 1:1 YÌ tỷ lệ sống của giá thể hỗn hợp này cũng khá cao, nhằmgiảm chi phí giá thể trong nhân giống [15]

Võ Hà Giang, Ngô Xuân Bình, nghiên cứu nhân giống phong lan Đuôi

chồn (Rhynchotylỉs rotunda (L.) Blume) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế

bào Các tác giả đã nghiên cứu môi trường gieo hạt và nhân chồi cho thấy, khi

bổ sung 0,3 mg/lit BAP và kinetin 0,1 mg/1 cho tỷ lệ nảy mầm cao nhất đạt

86,67%, bổ sung phối hợp kinetin và BAP cho hiệu quả cao nhất ở nồng độ0,5 mg kinetin/1 và 0,3 mg/1 BAP hệ số nhân chồi đạt 5 - 6 chồi và 5,7chồi/cụm [5].

Theo Vũ Ngọc Lan và cộng sự (2010) đã nghiên cứu ảnh hưởng của giá

thể ttồng đến quá trình sinh trưởng của lan Hoàng thảo trúc đen (D Hancockỉỉ) trên 3 loại giá thể: gỗ nhãn, than củi, xơ dừa Kết quả cho thấy, giá

thể gỗ nhãn có hiệu quả nhất đến giai đoạn sinh trưởng của cây lan này

[13]

Nhận xét chung:

Ở Việt Nam đã có rất nhiều các công trình nghiên cứu về điều tra, thuthập, lưu giữ và phát triển hoa lan Tuy nhiên việc nghiên cứu chỉ tập trungchủ yếu vào một số giống lan công nghiệp như Hồ Điệp, Vũ Nữ, Mokara,Cattleya Còn về lan rừng, đặc biệt với các loài lan đặc hữu thì các nghiên cứu

về giống chưa nhiều

7.2.2.2 Ngoài nước

Trên thế giới, có rất nhiều công trình nghiên cứu về nhân nhanh cácgiống lan nhằm bảo tồn và tăng số lượng phục vụ sản xuất Điển hình như

Kusumoto and Furukawa (1977) [25], Shu Fung Lo et a/.,(2004) [27], Kauth

P.(2005),Tawaro Supavadee et «/.,(2008) [28] Ở Thái Lan có cây Ngọc điểm

với nhiều nhánh đã ra tới 30 chùm hoa Ngoài ra cây lan ra hoa có nhiều màu

đỏ khác đã tạo ra một giống đỏ tuyền Những cây lan hoa màu đỏ này, nếumùa thu quá nóng, sẽ thành sắc đỏ có pha lẫn trắng Ngày nay lan đã trở thànhloại hàng hóa rất được ưa chuộng ở nhiều quốc gia trên thế giới Do đó một sốnước phát triển như: Pháp, Mỹ, Hà Lan,Thái Lan, Trung Quốc đã và đangứng dụng những công nghệ tiên tiến vào việc nghiên cứu lai tạo ra các giống

1 3

hoa lan mới có hương thơm và màu sắc đa dạng nhằm đáp ứng nhu cầu ngàycàng cao của thị trường đồng thời cũng nhằm đem lại một nguồn lọi kinh tếđáng kể cho các nước này

Trung Quắc: Là nước có truyền thống chơi lan lâu đời, đặc biệt là lan

Kiếm, loài lan này được coi là quốc hoa của Trung Quốc, vì thế họ đã tậptrung đầu tư nghiên cứu nhất là khoảng 20 năm trở lại đây và đã thu đươcnhững kết quả rực rỡ Họ đã sử dụng phương pháp lai hữu tính thụ quả, sau đógieo và tuyển chọn cho các loài hoa đáp ứng được màu sắc, kiểu dáng sau đó

họ sử dụng kỹ thuật nhân giống vô tính ỉn vitro và để tạo ra sản phẩm hàng

hóa có giá trị kinh tế cao, giá bán 1 cành hoa khoảng từ 5 - 10 USD

Singapore: Năm 1987 bắt đầu nghề trồng hoa lan xuất khẩu ttên quy

mô lớn Nhận thấy được tiềm năng xuất khẩu của loài hoa này trên thế giới Vìvậy các trang trại trồng lan đã không ngừng được mở rộng Năm 1993 quốcgia này đã xuất khẩu 3,8 triệu cành đến Châu Âu và một số lượng khá lớn đếnthị trường Nhật Bản

Thái Lan: là nước dẫn đầu thế giới về xuất khẩu lan với tổng thu nhập

chỉ riêng 6 tháng đầu năm 2007, Thái Lan đã được hơn 70,0 triệu USD từ việcxuất khẩu, diện tích ttồng loại hoa này chiếm hơn 1/3 tổng diện tích các loại

hoa khác Hoa lan Thái Lan xuất khẩu phần lớn thuộc nhóm lan Dendrobỉum,

hơn 80% lượng hoa thuộc nhóm này trên thị trường thế giới có xuất xứ từ TháiLan

Đài Loan: Diện tích trồng hoa cây cảnh là 12.481 ha, trong đó diện

tích trồng hoa lan là 484 ha Giá ttị xuất khẩu lan Hồ Điệp của Đài Loan đạt23,9 triệu USD năm (2004); 27,05 triệu USD năm (2005) và tăng thêm 35,38triệu USD trong năm 2006 [27]