Khóa luận tốt nghiệp bước đầu hoàn thiện quy trình nhân nhanh giống hoa dạ yến thảo petunia pink diamond bằng phương pháp nuôi cấy in vitro

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “BƯỚC ĐẦU HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN NHANH GIỐNG HOA DẠ YẾN THẢO PETUNIA PINK DIAMOND BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY IN VITRO” Giảng viên hướng dẫn : PGS TS ĐỒNG HUY GIỚI Sinh viên thực : NGUYỄN THỊ HỒNG NHUNG Lớp : K62CNSHC MSV : 620616 HÀ NỘI, 2021 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan đề tài:“ Bước đầu hoàn thiện quy trình nhân nhanh giống hoa Dạ yến thảo Petunia pink diamond phương pháp nuôi cấy in vitro” đề tài nghiên cứu độc lập hướng dẫn nhiệt tình PGS.TS Đồng Huy Giới Các kết nghiên cứu khóa luận em trực tiếp thực Các số liệu khóa luận hồn tồn trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu Các thơng tin tham khảo khóa luận trích dẫn cách đầy đủ ghi rõ trích dẫn Nếu có vấn đề xảy ra, em xin chịu hoàn toàn trách nhiệm, kỷ luật trước môn nhà trường Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên thực Nguyễn Thị Hồng Nhung i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài tốt nghiệp này, cố gắng, nỗ lực thân, em nhận nhiều động viên, quan tâm, giúp đỡ tận tình thầy cơ, bạn bè người thân! Trước tiên cho phép em bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới giáo viên hướng dẫn PGS.TS Đồng Huy Giới, Bộ môn Sinh học, Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, người hướng dẫn trực tiếp, tận tình giúp đỡ em trình thực tập hồn chỉnh khóa luận tốt nghiệp! Em xin gửi lời cảm ơn thầy giáo, cô giáo, cán thuộc môn Sinh học, Khoa Công nghệ sinh học, tạo điều kiện tốt cho em q trình thực tập hồn thành đề tài này! Em xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô giáo Khoa Công nghệ sinh học tập thể thầy cô giáo Học viện Nông nghiệp Việt nam dìu dắt, truyền đạt cho em kiến thức quý báu suốt thời gian học tập trường! Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tất người thân, bạn bè – người bên cạnh, động viên, giuý đỡ em trình học tập thực đề tài! Do thời gian điều kiện có hạn nên đề tài tốt nghiệp em khơng tránh thiếu sót, kính mong thầy bạn bè đóng góp ý kiến để khố luận hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng 09 năm 2021 Sinh viên Nguyễn Thị Hồng Nhung ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CÁC CỤM TỪ - KÝ HIỆU VIẾT TẮT viii TÓM TẮT ix PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu yến thảo 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Phân bố phân loại 2.1.3 Các dòng yến thảo 2.1.4 Đặc điểm thực vật học 2.1.5 Yêu cầu ngoại cảnh 2.1.6 Giá trị kinh tế, giá trị sử dụng yến thảo 2.2 Các nghiên cứu yến thảo giới Việt Nam 10 2.2.1 Các nghiên cứu yến thảo giới 10 2.2.2 Các nghiên cứu yến thảo Việt Nam 11 2.2.3 Kỹ thuật nhân giống, trồng chăm sóc Dạ yến thảo 14 PHẦN MỤC TIÊU, NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Đối tượng, vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 16 3.1.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 16 iii 3.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 16 3.2 Phương pháp nội dung nghiên cứu 16 3.2.1 Phương pháp nghiên cứu 16 3.2.2 Nội dung nghiên cứu 17 3.3 Các tiêu theo dõi 21 3.4 Bố trí thí nghiệm 22 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Nghiên cứu tạo vật liệu khởi đầu nhân giống in vitro yến thảo 23 4.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng mẫu NaClO 5% đến khả sống phát sinh hình thái mẫu đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo Petunina pink diamond 23 4.1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng mẫu HgCl đến khả sống phát sinh hình thái mẫu đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo Petunia pink diamnond 25 4.2 Nhân nhanh 26 4.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi yến thảo Petunia pink diamond 27 4.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi yến thảo Petunia pink diamond 29 4.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BA với α-NAA đến khả nhân nhanh chồi Dạ yến thảo Petunia pink diamond 31 4.3 Tạo hoàn chỉnh 33 4.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng α-NAA đến khả rễ chồi yến thảo Petunia pink diamond 33 4.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi Dạ yến thảo Petunia pink diamond 35 4.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng IBA kết hợp với than hoạt tính đến khả rễ chồi yến thảo Petunia pink diamond 37 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 iv 5.1 Kết luận 40 5.2 Kiến nghị 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 PHỤ LỤC 43 v DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng NaClO 5% đến khả sống phát sinh hình thái mẫu hoa Dạ yến thảo Peteunia pink diamond (Sau tuần nuôi cấy) 24 Bảng 4.2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl 0,1% đến khả sống phát sinh hình thái mẫu đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo Peteunia pink diamond.( Sau tuần nuôi cấy) 25 Bảng 4.3 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh yến thảo Petunia pink diamond 28 Bảng 4.4 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân nhanh yến thảo Petunia pink diamond sau tuần nuôi cấy 30 Bảng 4.5 Ảnh hưởng BA kết hợp α-NAA đến khả nhân nhanh chồi yến thảo Petunia Pink diamond sau tuần nuôi cấy 32 Bảng 4.6 Ảnh hưởng α-NAA đến khả rễ Dạ yến thảo Petunia pink diamond 34 Bảng 4.7 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ yến thảo Petunia pink diamond 36 Bảng 4.8 Ảnh hưởng IBA kết hợp than hoạt tính đến khả rễ yến thảo Petunia pink diamond sau tuần nuôi cấy 38 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hoa Dạ yến thảo hồng viền trắng cánh kép Hình 3.1 Đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo Petunia pink diamond 16 Hình 4.1 Đoạn thân mang mắt ngủ ni cấy sau xử lí khử trùng 23 Hình 4.2 Cụm chồi yến thảo nhân môi trường bổ sung BA sau tuần nuôi cấy 27 Hình 4.3 Chồi yến thảo tách từ cụm chồi nhân môi trường bổ sung BA sau tuần nuôi cấy 28 Hình 4.4 Cụm chồi Dạ yến thảo Petunia pink diamond nhân môi trường bổ sung Kinetin sau tuần nuôi cấy 29 Hình 4.5 Chồi yến thảo Petunia pink diamond tách từ cụm chồi nhân môi trường bổ sung Kinetin sau tuần nuôi cấy 30 Hình 4.6 Cụm chồi yến thảo Petunia pink diamond môi trường bổ sung BA kết hợp α- NAA sau tuần nuôi cấy 31 Hình 4.7 Chồi yến thảo Petunia pink diamond môi trường bổ sung BA kết hợp α-NAA sau tuần nuôi cấy 32 Hình 4.8 Chồi yến thảo Petunia pink diamond môi trường bổ sung α-NAA sau tuần nuôi cấy 34 Hình 4.9 Chồi yến thảo Petunia Pink diamond môi trường bổ sung IBA sau tuần nuôi cấy 35 Hình 4.10 Chồi yến thảo Petunia pink diamond môi trường bổ sung IBA kết hợp than hoạt tính sau tuần ni cấy 38 vii DANH MỤC CÁC CỤM TỪ - KÝ HIỆU VIẾT TẮT STT Viết đầy đủ Viết tắt AC Activated charcoal BA Benzyl adenine CT Công thức CV% ĐC ĐTST Điều tiết sinh trưởng GA3 Gibberellic acid IBA Indole-3-butyric acid Ki 10 LSD 0,05 11 MS Môi trường 12 TB Trung bình 13 α-NAA Sai số thí nghiệm Đối chứng Kinetin Độ lệch tiêu chuẩn mức nghĩa 5% α- Napthalene aceticacid viii TÓM TẮT Nghiên cứu để bước đầu hồn thiện quy trình nhân giống trồng ln vấn đề nhiều nhà khoa học quan tâm Ngoài quy trình nhân giống, việc thiết kế chế tạo thiết bị trồng đại không ngừng phát triển Trong nghiên cứu này, chồi yến thảo nuôi cấy môi trường bổ sung với nồng độ khác BA, KI, BA kết hợp với NAA cho hệ số nhân chồi đạt cao công thức bổ sung 0,4 mg/l BA 13,2 chồi/mẫu Chồi yến thảo nuôi cấy mơi trường rễ có chứa nồng độ khác IBA, NAA than hoạt tính Môi trường tối ưu cho rễ môi trường MS có bổ sung 0,2 mg/L IBA có ảnh hưởng tốt đến khả rễ với số rễ trung bình 38,4 rễ/chồi ix hầu hết cơng thức có α-NAA nhỏ 1,0 cm, số rễ trung bình ít, điều ảnh hưởng đến khả sống sót non ngồi vườn ươm (Nơng Thị Huệ nnk, 2018) Bên cạnh đó, kích thước đường kính cục callus α-NAA tạo có xu hướng tăng nộng độ α-NAA tăng, làm cho rễ khó xuất Qua kết luận α-NAA chưa thực có hiệu việc hình thành rễ yến thảo Petunia pink diamond Các tiêu chiều cao chồi, số rễ trung bình chiều dài trung bình rễ có xu hướng giảm nồng độ α-NAA tăng Nếu nồng độ auxin cao có hình thành callus, rễ có hình dạng khơng bình thường khơng kéo dài, sau tăng trưởng chồi bị giảm (theo George, 1996) Như vậy, nồng độ α-NAA cao môi trường ức chế hình thành rễ, tạo callus gốc khiến rễ khó xuất 4.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi Dạ yến thảo Petunia pink diamond IBA (Indole-3-butyric acid) dạng auxin tổng hợp có vai trị việc hình thành rễ bất định, tạo mơ sẹo kích thích vươn dài chồi đỉnh Để tiếp tục tìm mơi trường thích hợp cho việc rễ, chúng tơi tiến hành khảo sát ảnh hưởng IBA với dải nồng độ từ 0-0,5 mg/L IBA Kết sau tuần ni cấy thu sau: Hình 4.9 Chồi yến thảo Petunia Pink diamond môi trường bổ sung IBA sau tuần nuôi cấy (a: Đối chứng, b: MS + 0,1 mg/L IBA, c: MA + 0,2 mg/L IBA, d: MS + 0,3 mg/L IBA, e: MS + 0,4 mg/L IBA, f: MS + 0,5 mg/L IBA) 35 Bảng 4.7 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ yến thảo Petunia pink diamond Nồng độ Công IBA thức (mg/L) Tỷ lệ chồi rễ (%) Số rễ/chồi Chiều dài rễ Đặc điểm TB (cm) rễ (ĐC) 100 25,53c 4,12f + 0,1 100 31,20d 1,18d +++ 0,2 100 38,40f 1,31e +++ 0,3 100 33,80e 1,08c +++ 0,4 100 24,40b 0,86b ++ 0,5 100 16,20a 0,78a ++ LSD 0,05 0,91 0,04 CV% 1,82 1,34 Ghi chú: +Rễ mảnh, yếu ++ Rễ xuất muộn, sinh trưởng chậm, +++ Rễ to, khỏe, xuất sớm Qua số liệu bảng 4.7 kết xử lí thống kê cho thấy cơng thức khác có ảnh hưởng khác biết đến số lượng rễ chiều dài rễ Có thể thấy cơng thức thí nghiệm sử dụng IBA đem lại kết tốt so với α-NAA Cụ thể, bổ sung IBA với nồng độ 0,1 mg/L IBA với số rễ trung bình tạo 31,2 rễ/chồi chiều dài rễ 1,66cm cao so với công thức đối chứng (24 rễ/chồi), chất lượng rễ cơng thức khơng bổ sung IBA mảnh yếu hơn, khả tỷ lệ sống sót sau đưa vườn ươm thấp so với cơng thức có bổ sung IBA Khi tăng thêm nồng độ IBA hiệu rễ chồi tăng lên đáng kể Trong cơng thức có bổ sung IBA, số rễ trung bình chiều dài rễ trung bình có xu hướng tăng từ cơng thức có bổ sung 0,1 mg/L IBA (31,2 rễ/mẫu 1,66cm) đạt cao cơng thức có bổ sung 0,2 mg/L IBA (38,4 rễ/mẫu 1,28cm) Sau số rễ trung bình chiều dài rễ trung bình có xu hướng giảm dần từ mơi trường có bổ sung 0,3-0,5 mg/L IBA Cụ thể, số rễ 36 trung bình giảm từ 33,8 xuống 16,2 rễ/chồi chiều dài rễ trung bình giảm từ 1,08 xuống cịn 0,78cm Như vậy, dựa vào kết thí nghiệm trên, ta thấy cơng thức có bổ sung mơi trường MS + 0,2 mg/L IBA cơng thức có ảnh hưởng tốt đến khả rễ cây, với số rễ trung bình 38,4 rễ/chồi chiều cao rễ trung bình 1,28 cm Tỷ lệ sống sót cơng thức có khả cao rễ khỏe mạnh, đủ dài để có khả hút nước chất dinh dưỡng khác Theo kết nghiên cứu Like (2008) cho môi trường rễ tối ưu ½ MS bổ sung 0,5 mg/L IBA cho tỷ lệ rễ đạt 100% tỷ lệ sống 100% Như thấy kết thu gần so với kết tác giả 4.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng IBA kết hợp với than hoạt tính đến khả rễ chồi yến thảo Petunia pink diamond Trong mơi trường nhân chồi tạo rễ chất điều hòa sinh trường BA IBA thường sử dụng Ngồi ra, mơi trường ni cấy mơ, theo số thí nghiệm cho thấy than hoạt tính bổ sung vào để trung tính hóa ảnh hưởng ức chế gây độc chất phenol Than hoạt tính có tác dụng khử độc, kích thích tăng trưởng Khả kích thích tăng trưởng tế bào mơ thực vật than hoạt tính kết hợp với hợp chất phenol độc mô tiết suốt thời gian nuôi cấy Than hấp thu hợp chất ức chế phát triển cây, hấp thu hợp chất hữu cơ, tăng khả hình thành phơi tăng việc hình thành rễ (George,1993) Để tìm nồng độ thích hợp cho việc rễ chồi yến thảo, sử dụng môi trường MS + 0,2 mg/L IBA (thu từ công thức tốt thí nghiệm trên) kết hợp với than hoạt tính với nồng độ từ 0-200 mg/L AC Kết thu sau tuần nuôi cấy sau: 37 Hình 4.10 Chồi yến thảo Petunia pink diamond môi trường bổ sung IBA kết hợp than hoạt tính sau tuần ni cấy (a: Đối chứng (MS + 0,2 mg/L IBA), b: MS + 0,2 mg/L IBA + 50 mg/L AC, c: MS + 0,2 mg/L IBA + 100 mg/L AC, d: MS + 0,2 mg/L IBA + 150 mg/L AC, e: MS + 0,2 mg/L IBA + 200 mg/L AC) Bảng 4.8 Ảnh hưởng IBA kết hợp than hoạt tính đến khả rễ yến thảo Petunia pink diamond sau tuần nuôi cấy Công Nồng Nồng độ Tỷ lệ chồi Số thức độ IBA than hoạt rễ (%) rễ/chồi (mg/L) tính (mg/L) Chiều dài Đặc rễ TB (cm) điểm rễ (ĐC) 100 38,40e 1,31a ++ 50 100 27,40b 1,76b ++ 100 100 32,60d 3,52c +++ 150 100 28,60c 5,30d ++ 200 100 21,30a 5,82e + 0,2 LSD 0,05 0,44 0,17 CV% 0,81 2,60 Ghi chú: +Rễ xuất muộn ++ Rễ xuất sớm, sinh trưởng nhanh, số rễ trung bình , rễ dài +++ Rễ xuất sớm, số rễ nhiều, rễ ngắn Từ kết bảng 4.8 cho thấy, với môi trường ni cấy có kết hợp than hoạt tính IBA tất cơng thức cho rễ tốt, đạt từ 21-32 38 rễ/chồi Ở cơng thức 3, mơi trường có bổ sung MS + 0,2 mg/L + 100 mg/L AC cho số lượng rễ tốt 32,60 rễ/chổi chiều dài rễ 3,52cm Qua đó, phản ánh kết hợp có hiệu than hoạt tính IBA Tuy nhiên, số lượng rễ có xu hướng giảm dần nồng độ than hoạt tính tăng từ 150-200mg/L AC, cụ thể giảm từ 28,60 xuống 21,30 rễ/chồi Mặt khác, chiều dài rễ có cải thiện rõ rệt cơng thức có bổ sung than hoạt tính Cụ thể, chiều dài rễ tăng từ 1,76-5,82cm, cao so với công thức đối chứng bổ sung 0,2 mg/L IBA 1,31 cm Có thể thấy bổ sung than hoạt tính tỷ lệ rễ khơng cao than hoạt tính lại kích thích dài rễ cây, nhiên rễ mảnh không mập Bên cạnh đó, chất lượng rễ tốt khắc phục tượng rễ xốp so với công thức khơng bổ sung than hoạt tính, giúp làm tăng tỷ lệ sống sót ngồi vườn ươm Với nồng độ than hoạt tính cao dễ hấp phụ phần lượng hormone IBA, làm giảm hình thành callus, giúp cho rễ dài hơn, đạt tỷ lệ sống sót cao Tuy nhiên, kết hợp IBA than hoạt tính làm cho số rễ trung bình giảm, điều than hoạt tính vừa hấp phụ chất khơng mong muốn, vừa hấp phụ lượng hormone IBA cần thiết cho tăng trưởng số lượng rễ 39 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Dựa vào kết thu từ thí nghiệm đề tài đưa kết luận sau: - Thời gian khử trùng thích hợp cho đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo Petunia pink diamond khử trùng NaClO 5% (trong 20 phút) cho tỷ lệ mẫu 63,33% tỷ lệ mẫu phát sinh hình thái chồi đạt 40,00% - Mơi trường tối ưu cho nhân nhanh mơi trường MS có bổ sung 0,4 mg/L BA cho hệ số nhân chiều cao trung bình đạt tốt 13,2 chồi/mẫu 1,47cm - Môi trường tối ưu cho rễ mơi trường MS có bổ sung 0,2 mg/L IBA có ảnh hưởng tốt đến khả rễ với số rễ trung bình 38,4 rễ/chồi chiều dài rễ trung bình 1,28cm sau tuần nuôi cấy 5.2 Kiến nghị - Thực tiếp thí nghiệm thích nghi ngồi vườn ươm điều kiện thời tiết thuận lợi - Tiếp tục khảo sát quy trình nhân nhanh in vitro giống Dạ yến thảo khác 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bùi Thị Cúc, Đồng Huy Giới, Bùi Thị Thu Hương (2017) Nhân nhanh in vitro Dạ yến thảo hoa hồng sọc tím (Petunia hybrida L.), tạp chí Khoa học Công nghệ tháng 10/ 2017 Mai Thị Thảo (2017) Hồn thiện quy trình vi nhân giống hoa Dạ yên thảo (Petunia hybrida) Đồ án tốt nghiệp Đại học Nha Trang Nguyễn Thùy Vân (2015) Nhân nhanh hoa Dạ yên thảo (Petunia hybrida) Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội Phạm Hoàng Hộ (2000) Cây cỏ Việt Nam, Quyển II (in lần 2) Nhà xuất trẻ Phạm Văn Lộc (2010) Nhân giống in vitro Dạ yến thảo (Petunia hybrida) Khóa luận tốt nghiệp Đại học cơng nghệ thực phẩm TP HCM Trần Hợp (2000) Cây cảnh hoa Việt Nam Nhà xuất Nông nghiệp, trang 279 – 280 Trần Quốc Cường (2011) Hiệu BA, NAA TDZ lên tái sinh chồi Dã yên thảo in vitro Đồ án tốt nghiệp Đại học Cần Thơ Nguyễn Hồng Lộc (1998), Giáo trình ni cấy mơ tế bào thực vật, Nhà xuất Trường Đại học Khoa học Huế Nguyễn Tiến Long, Lã Thị Thu Hằng, Trần Thị Triêu Hà, Dương Thanh Thủy, Lê Như Cương (2021) Nghiên cứu tạo nguồn vật liệu khởi đầu nhân giống in vitro hoa Dạ yến thảo (Petunia hybrid L.) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Tài liệu nước 10 B Natanija, B Ausra, J Vaida (2015), “In vitro regeneration from leaf explants of Petunia hybrida L.”, Journal of Propagation of Ornamental Plants, 15, pp.47-52 11 Danuta Kunlpa, Natalia Nowak (2011) In vitro flowering of Petunia × atkinsiana D Don Folia Horticulturae; 23/2; 125-129 12 E.G Sara, M.E Naglaa (2015), “In vitro prelimilary study on Petunia hybria breading under Sodium Chloride stress condition”, Middle East Journal of Agriculture Research, 4, pp.867-872 13 Farshad, T., C.S Hinkley and N Ramprashad, 2013 A Comparison of DNA Extraction Methods using Petunia hybrida Tissues J Biomolecular Techniques., 24: 113-118 14 Hassan Abu – Qaound, Anas Abu – Rayya an, Sami Yaish (2010).In vitro regeneration and smaclonal variation of Petunia hybrida, 18: 71 – 81 15 K.E Danso, et al (2011), “Effective decontamination and subsequent plantlet regeneration of sugarcane (Saccharum officinarum L.) in vitro”, International Journal of Integrative Biology, 11, pp.90-96 16 Lang B, Yang A, Fan R (2006) Study on the technique system of tissue culturein Petunia hybrida Vilm Journal of Northeast Agricultural, 04 17 Liang Bing,Yang Aifu, Fan Ruifeng, Hu Baozhong (2006) Study on the technique system of tissue culturein Petunia hybrida Vilm Journal of Northeast Agricultural University 18 Like (2008), Study on the improvement of ploidy of Petunia hybrida Vilm by tissue culure Southwest University 41 19 M Johnson, E.G Wesely, M.S Kavitha, V Uma (2011), “Antibacterial activity of leaves and inter-nodal callus extracts of Mentha arvensis L.”, Asian Pac J Trop Med., 4, pp.196-200 20 Naglaa, M Esmaiel, A.A Al-Doss and M.N Barakat, 2013 An assessment of in vitro culture and plant regeneration from leaf base explants in carnation (Dianthus caryophyllus L ) J Fd Agric and Envi., 1111(1): 1113-1117 21 Piao Ri zi, Jin Ying shan, Cao Hou-nan, Zong Cheng wen,Wang Xing guo (1999) High speed breeding technique of petunia Journal of Agricultural Science Yanbian University;04 22 T Murashige, F Skoog (1962), “A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures”, Physiol Plant, 15, pp.473-497 23 Wei Shuqin (2010) Study on induced differentiation of Petunia hybrida shoot tip Jilin Science and Technology College 24 Zhang Hong (2010) Study on Plant Regeneration of Petunia hybrida by Lamina Hubei Agricultural Sciences 25 Zhou Rui-jin, Hu Yan, Zhang Can, Zhang Huan.(2009) Study on Fast Reproductive Technique of Petunia with Tissue Culture, Journal of Hebei North University (Natural Science Edition) 42 PHỤ LỤC TN3: Khảo sát ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi yến thảo Petunia pink diamond Analysis of variance He so nhan Variable He so nhan N 18 R² 1.00 Adj R² 1.00 CV 2.24 Analysis of S.V Model Nong BA Error Total variance table (Partial SS) SS df MS 742.56 148.51 742.56 148.51 1.02 12 0.09 743.58 17 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.51866 Error: 0.0850 df: 12 Nong BA Means n S.E 0.00 1.00 0.17 A 0.20 9.80 0.17 B 0.40 13.20 0.17 0.60 14.80 0.17 0.80 18.40 0.17 1.00 20.80 0.17 F 1747.20 1747.20 p-value