Khóa luận tốt nghiệp đại học nghiên cứu tạo chồi địa lan kiếm tứ thời (cymbidium ensifolium) từ mô rễ bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o - NGUYỄN THỊ KIM NGÂN Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU TẠO CHỒI ĐỊA LAN KIẾM TỨ THỜI (CYMBIDIUM ENSIFOLIUM) TỪ MÔ RỄ BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY IN VITRO” KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Ngành/chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2015 - 2019 Thái Nguyên - năm 2019 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o - NGUYỄN THỊ KIM NGÂN Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU TẠO CHỒI ĐỊA LAN KIẾM TỨ THỜI (CYMBIDIUM ENSIFOLIUM) TỪ MƠ RỄ BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY IN VITRO” KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Ngành/chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Lớp : K47 - CNSH Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2015 - 2019 Người hướng dẫn : TS Bùi Tri Thức GS.TS Ngơ Xn Bình Thái Ngun - năm 2019 i LỜI CẢM ƠN Lời em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học cơng nghệ Thực phẩm, tồn thể quý thầy cô giáo Khoa Công nghệ Sinh học công nghệ Thực phẩm giảng dạy, hướng dẫn để em có kiến thức ngày hơm Em xin chân thành cảm ơn TS Bùi Tri Thức trực tiếp hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực tập, giúp em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn GS TS Ngơ Xn Bình tận tình dạy, hướng dẫn truyền đạt kinh nghiệm quý báu để em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Cuối em xin cảm ơn quý thầy, gia đình, bạn học lớp K47 - CNSH tồn thể gia đình giúp đỡ động viên tạo điều kiện mặt tinh thần cho em để hồn thành khóa luận tốt nghiệp Mặc dù có nhiều cố gắng để hồn thiện tốt luận văn tốt nghiệp, song trình thực khơng thể tránh thiếu sót định Vì vậy, em mong góp ý q thầy, giáo bạn để khóa luận em hoàn chỉnh Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2019 Sinh viên thực Nguyễn Thị Kim Ngân ii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Danh sách 30 loài lan kiếm đặc hữu Việt Nam Bảng 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA đến khả tái sinh mô rễ 34 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA kết hợp với than hoạt tính đến khả tái sinh mô rễ .36 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng GA3 đến khả tái sinh mô rễ 38 Bảng 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA đến khả nhân nhanh mô rễ 40 Bảng 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả nhân nhanh mô rễ 42 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA kết hợp với IBA NAA đến khả nhân nhanh mô rễ 44 Bảng 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinetin đến khả kich thích tạo chồi từ mơ rễ 46 Bảng 4.8 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả kích thích tạo chồi từ mơ rễ 48 Bảng 4.9 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinetin kết hợp với BA NAA đến khả tạo hoàn chỉnh từ rễ 50 iii DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu tạo chồi địa lan từ rễ phương pháp in vitro .27 Hình 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA đến khả tái sinh mô rễ .35 Hình 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA kết hợp với than hoạt tính đến khả tái sinh mơ rễ 37 Hình 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng GA3 đến khả tái sinh mơ rễ .39 Hình 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA đến khả nhân nhanh mô rễ 41 Hình 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả năngnhân nhanh mơ rễ 43 Hình 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA kết hợp với IBA NAA đến khả nhân nhanh mô rễ 45 Hình 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinetin đến khả kích thích tạo chồi từ mô rễ 47 Hình 4.8 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả kích thích tạo chồi từ mơ rễ 49 Hình 4.9 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinetin kết hợp với BA NAA đến khả tạo chồi từ rễ 51 iv DANH MỤC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT Nghĩa đầy đủ từ, thuật ngữ Từ, thuật ngữ viết tắt BA Benzyladenine CITES Convention on International Trade in Endangered Species of wild fauna and flora - Công ước thương mại quốc tế loài động, thực vật hoang dã nguy cấp Cs Cộng CT Công thức CV Coeficient of Variation – Hệ số biến động Đ/c Đối chứng GA3 Gibberellin IAA Indole-3-acetic acid IBA Indole-3-butyric acid IUCN International Union for Conservation of Nature and Natural Resources - Liên minh Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế Kinetin 6-Furfurylaminopurine LSD Least Singnificant Difference Test – Sai khác nhỏ có ý nghĩa MS Murashige & Skoog’s, 1962 MT Môi trường NAA α-Naphthalene acetic acid ND Nước dừa THT Than hoạt tính TN Thí nghiệm VU Vulnerable – Nguy trở thành loài bị đe dọa tuyệt chủng MỤC LỤC v LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG .ii DANH MỤC HÌNH iii MỤC LỤC iv Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan lan Kiếm 2.1.1 Phân bố, phân loại đặc điểm địa lan 2.1.2 Hiện trạng Địa lan kiếm Việt Nam 2.1.3 Tình hình sản xuất, tiêu thụ sản phẩm từ loài địa lan kiếm giới 12 2.1.4 Tình hình sản xuất, tiêu thụ địa lan kiếm ở Việt Nam 14 2.1.5 Tình hình nghiên cứu nhân giống địa lan kiếm giới ở Việt Nam16 2.2 Giới thiệu giống địa lan kiếm Tứ Thời 18 2.2.1 Phân loại khoa học 18 2.2.2 Sự phân bố 19 2.2.3 Hình thái 19 2.3 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào 19 2.3.1 Tính tồn tế bào thực vật 19 2.3.2 Sự phân hoá tế bào 20 2.3.3 Sự phản phân hoá tế bào 20 2.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình nuôi cấy mô tế bào thực vật 20 2.4.1 Vật liệu nuôi cấy 20 vi 2.4.2 Điều kiện nuôi cấy 21 2.4.3 Môi trường dinh dưỡng 21 2.5 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy mô địa lan Tứ Thời giới nước 24 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 24 2.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 25 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Đối tượng nghiên cứu phạm vi nghiên cứu 26 3.2 Nội dung nghiên cứu 26 3.2.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời in vitro 26 3.2.2 Nội dung 2: Nghiên cứu môi trường nhân nhanh mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời 26 3.2.3 Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả kích thích tạo chồi từ mơ rễ địa lan kiếm Tứ Thời 27 3.2.4 Nội dung 4: Nghiên cứu mơi trường tạo hồn chỉnh từ mô rễ địa lan kiến Tứ Thời 27 3.3 Phương pháp nghiên cứu 27 3.3.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy in vitro 27 3.3.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 28 3.4 Các phương pháp xử lý số liệu 33 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời 34 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA đến khả tái sinh mơ rễ 34 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA kết hợp với than hoạt tính đến khả tái sinh mô rễ 36 4.1.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng GA đến khả tái sinh mô rễ 38 4.2 Kết nghiên cứu môi trường nhân nhanh mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời 40 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA đến khả nhân nhanh mô rễ 40 vii 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả nhân nhanh mô rễ 42 4.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng IAA kết hợp với IBA NAA đến khả nhân nhanh mô rễ 43 4.3 Kết nghiên ảnh hưởng chất kích thich sinh trưởng đến khả kích thích tạo chồi từ mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời 45 4.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinitine đến khả kích thích tạo chồi từ mơ rễ 45 4.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả kích thích tạo chồi từ mô rễ 47 4.4 Kết nghiên cứu mơi trường tạo hồn chỉnh từ mơ rễ địa lan kiến Tứ Thời.49 4.4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinitine kết hợp với BA NAA đến khả taọ hồn chỉnh từ mơ rễ 50 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 5.1 Kết luận 52 5.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Địa lan kiếm (Cymbidium) gọi Địa Lan hay Thổ Lan, chi thuộc họ Lan (Orchidaceae), mệnh danh nữ hoàng lồi lan [15] Chúng có điểm bật kinh tế thẩm mỹ nhiều người quan tâm khai thác Ở Việt Nam, khí hâu nhiệt đới gió mùa phù hợp cho phát triển lồi thực vật nói chung hoa lan nói riêng Các khu rừng ở Việt Nam thường nhiều nhà khoa học nước giới đề cập tới nơi tập trung nhiều loài lan rừng đẹp quý như: lan Hồ Điệp, lan Vũ Nữ, lan Hoàng Thảo Giả Hạc, Quế Lan Hương, đặc biệt loài địa lan kiếm địa Các loài lan kiếm địa ở Việt Nam đa dạng có giá trị cao Chính vậy, chúng bị khai thác cách ạt, thiếu kiểm sốt quản lý Nhiều lồi kiếm địa bị đe dọa dần biến khỏi tự nhiên Hiện 52 loài Địa Lan Việt Nam rơi vào tình trạng nguy cấp lồi địa lan Tứ Thời loài bị báo động nguy tuyệt chủng gần Địa lan kiếm Tứ Thời (Cymbidium ensifolium) chưa Liên minh Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế (IUCN) phân hạng Tuy nhiên, đánh giá tạm thời dễ bị tổn thương (VU) theo tiêu chí Danh sách đỏ IUCN [13] Địa lan kiếm Tứ Thời liệt kê phụ lục II Công ước thương mại quốc tế loài động, thực vật hoang dã nguy cấp (CITES) [16] Việc nghiên cứu nhân giống với nhằm nhân nhanh bảo tồn giống lan quý trước bờ vực tuyệt chủng việc cần thiết Nhân giống lan thường sử dụng phương pháp gieo hạt không giữ đặc tính mẹ, địa Ngồi tỷ lệ nảy mầm loài lan thường thấp Việc tìm phương pháp nhân giống riêng cho loài địa lan nhà nghiên cứu thực phận khác chồi, mảnh Tuy nhiên nay, đa phần giống lan nhân giống thành công từ chồi đỉnh sinh trưởng Việc sử dụng chồi, đỉnh sinh trưởng ni cấy giữ đặc tính mẹ đồng thời tiêu diệt mẹ Việc nghiên cứu nhân giống vơ tính khó khăn với lồi bờ vực tuyệt trủng có số lượng mẹ cịn Việc nhân giống từ phận khác mà không làm ảnh hưởng đến sinh trưởng mẹ có ý nghĩa lớn Đặc biệt giống có số lượng mẫu khơng nhiều, khó thu thập từ tự nhiên Sử dụng mảnh mô rễ để nhân giống lan thành công có vai trị lớn với việc bảo tồn giống lan Đặc biệt với giống số lượng cá thể ít, khó nhân giống phương pháp nhân giống tự nhiên Xuất phát từ sở khoa học yêu cầu thực tế khách quan trên, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu tạo chồi địa lan kiếm Tứ Thời (cymbidium ensifolium) từ mô rễ kỹ thuật nuôi cấy in vitro” 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Xác định môi trường tối ưu tạo chồi rễ từ rễ địa lan kiếm Tứ Thời kỹ thuật nuôi cấy in vitro 1.2.2 Mục tiêu cụ thể - Xác định nồng độ thích hợp số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh chồi từ mô rễ - Xác định môi trường thích hợp để nhân nhanh mơ rễ địa lan - Xác định nồng độ chất kích thích sinh trưởng thích hợp cho khả tái sinh chồi từ mơ rễ - Xác định mơi trường thích hợp cho rễ tạo hoàn chỉnh 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài - Giúp sinh viên củng cố hệ thống lại kiến thức học bổ sung vào kiến thức lý thuyết học thông qua hoạt động thực tiễn - Giúp thân sinh viên học hỏi kiến thức, tích lũy kinh nghiệm thực tế tác phong làm việc, nghiên cứu khoa học phục vụ cho cho công tác sau 3 - Kết nghiên cứu đề tài cung cấp thêm phương pháp nhân giống địa lan kiếm mới, phương pháp tạo chồi từ mô rễ Phương pháp đem lại lợi ích lớn đặc biệt cho giống bờ vực tuyệt chủng có số lượng lồi cịn 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài - Xây dựng quy trình tạo chồi từ mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời phương pháp nuôi cấy in vitro, tạo số lượng giống địa lan kiếm Tứ Thời góp phần bảo tồn giống đồng thời tạo nguồn vật liệu cho nghiên cứu khoa học sau phịng thí nghiệm Khoa CNSH & CNTP 4 Phần TỞNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tởng quan lan Kiếm 2.1.1 Phân bố, phân loại đặc điểm địa lan 2.1.1.1 Phân bố phân loại Địa lan Kiếm Cymbidium thuộc ho ̣phụ Orchidioideae Các loài chi Lan Kiếm có đặc điểm hoa lớn, đẹp, bền Lan Kiếm đa phần sống phụ mục khác hốc đá có mùn [17] Địa lan Kiếm phân bố vùng vô rộng lớn khắp Đông Nam Á, hải đảo Thái Bình Dương đến Hy Lạp Sơn, từ Philippines đến Fidgi bao gồm Việt Nam [17] Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới nóng ẩm mưa nhiều, mơi trường thích hợp cho địa lan sinh trưởng phát triển Có nhiều lồi địa lan Kiếm đượng tìm thấy ở Việt Nam Địa lan tìm thấy vùng rừng núi khu vực phía Tây bắc phía Đông bắc Việt Nam Trong khu vực Đông bắc, địa lan Kiếm tìm thấy ở tỉnh như: Quảng Ninh, Lạng Sơn, Hải Phịng, Hịa Bình Với nhiều lồi đặc hữu cho tiểu vùng khí hậu nơi tìm thấy chúng [20] Địa lan gồm 52 lồi thuộc họ Lan Căn vào mùa phân Địa lan thành nhóm: Địa lan thu nhóm lan thường hoa vào mùa thu như: Bạch ngọc, Tố tâm, Trần Mộng ; địa lan đông nhóm địa lan hoa vào mùa đơng; địa lan xuân nhóm hoa địa lan hoa vào mùa xuân như: Đại mạc, Thanh trường, Đại hoàng, Hoàng vũ, Thanh ngọc Trong địa lan xuân chiếm phần đa Nó phong phú chủng loại có giá trị so với nhóm cịn lại [20] Căn vào màu sắc hoa chia địa lan thành sáu nhóm như: Nhóm - Hoa màu nâu: Đại mạc biến thể Nhóm - Hoa màu vàng: Hoàng lan biến thể Nhóm - Hoa màu xanh: Thanh lan biến thể Nhóm - Hoa màu hồng: Hồng lan biến thể Nhóm - Hoa màu trắng: Bạch lan biến thể 5 Nhóm - Hoa màu đen (hoặc nâu đen): Hắc lan biến thể Trong Hồng lan Hắc lan loài đặc hữu quý [20] 2.1.1.2 Đặc điểm hình thái Địa lan kiếm Về hình thái bên ngồi, Địa lan kiếm lồi thân thảo, đa niên, đẻ nhánh hàng năm tạo thành bụi nhỏ Có lồi rễ mọc bám vỏ (phụ sinh), mặt đất (bì sinh); có lồi rễ ăn sâu bọng (thực sinh), đất mùn (địa sinh) Rễ thường mọc ở con, mẹ khó rễ mà thấy phân nhánh từ củ rễ [17] Thân ngầm chúng (căn hành) thường ngắn, nối củ lan với Các củ lan thực chất cành ngắn hành Củ già, bị tách khỏi hành cũ, mọc đoạn hành mới, từ mọc lên Do người ta xếp Cymbidium vào nhóm lan đa thân (sympodial) [20] Củ lan (giả hành) thường có dạng quay hay dạng hột xồi, đường kính từ cm đến 15 cm, củ thường tươi bọc bẹ [20] Lá thường có hai dạng: dạng vảy đính theo đoạn hành dạng thực đính giả hành Lá thực thường có cuống lá, bẹ cuống có tầng phân cách Khi phiến rụng, cịn đoạn bẹ ơm lấy giả hành Vài lồi khơng có cuống Tùy theo lồi mà phiến khác nhau, có gân dọc rõ hay chìm thịt Một số lồi chịu râm có phiến màu xanh vàng, cịn lại thường xanh đậm Bản độ dày thay đổi tùy theo loài: loài sống ở trảng trống có hẹp dày lồi ưa bóng râm Lá có dạng dải, dạng mũi mác, dạng phiến Đầu nhọn hay chia thành thùy Kích thước biến động từ 0,5 cm đến cm Chiều dài thay đổi từ 10 cm đến 150 cm [20] Chồi hoa thường xuất bên giả hành, nách lá, tách bẹ già, đâm bên ngồi Thơng thường, giả hành cho hoa lần Chồi hoa thường xuất đồng thời với chồi thân, chồi hoa no tròn hơn, chồi thân dẹp Các ở chồi thân mọc đâm phía hình cá, cịn ở chồi hoa bao hoa ôm chặt quanh phát hoa Cọng phát hoa không phân nhánh, dựng đứng hay buông thõng Chiều dài phát hoa từ 10 đến 100 cm Cành hoa mang từ vài đến vài chục búp hoa xếp phiên theo đường xoắn ốc Búp hoa đủ lớn, bắt đầu dang xa khỏi cọng hoa, xoay nửa vịng trịn để đưa cánh mơi xuống bắt đầu nở Thoạt nhìn, hoa Cymbidium có cánh gần giống nhau, thực có hai cánh hoa ở bên trong, lại đài ở bên ngồi, có cấu trúc màu sắc giống cánh hoa Cánh hoa thứ ba chun hóa thành cánh mơi, màu sắc rực rỡ hơn, xẻ thành ba thùy tạo dạng nửa hình ống Hai thùy bên ơm lấy trụ, thùy thứ có dạng bầu hay nhọn tạo thành hình đáy thuyền, làm chỗ đậu cho trùng đến hút mật thụ phấn cho hoa Giữa cánh mơi có hai gờ dọc song song màu vàng Tận bên có dĩa mật đơi có tuyến tiết mùi hương [20] Hoa Cymbidium lưỡng tính, nhị đực nhụy gắn chung trụ nhị - nhụy (hay trục hợp nhụy) hình bán trụ cong phía trước Nhị ở cùng, mang khối phấn màu vàng, có gót dính keo Khối phấn đậy bởi nắp màu trắng ngà dễ mở rời Hộc chứa phấn khối trục hợp nhụy cách với nuốm nhụy bởi gờ (mỏ) lên Cấu trúc bắt buộc tự nhiên hoa Cymbidium thụ phấn nhờ côn trùng Sau thụ phấn, hoa xoay dần vị trí cũ, bầu nỗn phình lên tạo thành [20] Quả lan nang có góc, bên có chứa hàng trăm ngàn hạt Khi chín, mở theo đường góc gieo vào khơng khí hạt bụi phấn màu vàng lụa Khi rơi vào nơi có điều kiện ẩm độ, ánh sáng thích hợp có nấm cộng sinh tham gia, hạt nẩy mầm phát triển thành [20] Hạt lan có kích thước nhỏ li ti Khối lượng tồn hạt bằng1/10 đến 1/1000 miligam Trong khơng khí chiếm khoảng 76 - 96% thể tích hạt cấu tạo bởi khối chưa phân hoá, mạng lưới nhỏ, xốp, chứa đầy khơng khí Do đó, họ hoa lan cịn gọi họ vi tử Phải trải qua - tháng hạt chín Trong tự nhiên, phần lớn hạt thường chết khó gặp nấm cộng sinh cần thiết để nảy mầm Do hạt nhiều theo gió bay xa, hạt nảy mầm thành lại Chỉ ở khu rừng già ẩm ướt, vùng nhiệt đới đủ điều kiện cho hạt lan nảy mầm [20] 2.1.2 Hiện trạng Địa lan kiếm Việt Nam Địa lan Kiếm lồi khơng có giá trị thẩm mỹ, giá trị khoa học mà cịn có giá trị kinh tế cao Hoa Lan kiếm có nét đẹp kiêu sa, quyến rũ mềm mại, mang dáng vẻ sang trọng huyền bí Hiện với phát triển kinh tế xã hội, đời sống người ngày nâng cao, nhu cầu thưởng thức đẹp gia tăng Nghề trồng hoa cảnh nói chung đặc biệt chọn tạo giống hoa lan xuất nói riêng, trở thành ngành kinh tế thu nhiều lợi nhuận [22] Địa lan Kiếm có giá trị thương mại cao, sưu tầm tìm kiếm nhiều Chi Cymbidium giới ghi nhận 52 lồi địa lan Trong 52 lồi địa lan Kiếm ghi nhận Việt Nam Như vậy, nước ta quốc gia có nguồn lan kiếm tự nhiên phong phú Không phong phú chủng loại, Việt Nam cịn có nhiều lồi lan kiếm đặc hữu có giá trị thẩm mĩ cao, giới ưa chuộng Vì tình trạng thu thập xuất lan kiếm cách ạt, khơng kiểm sốt dẫn đến việc lan kiếm ngày tự nhiên Đồng thời với tình trạng mơi trường tự nhiên bị khai thác cạn kiệt nay, quần thể lan Kiếm có nguy suy giảm nghiêm trọng Dưới danh sách 30 loài lan Kiếm đặc hữu Việt Nam [20] 8 Bảng 2.1: Danh sách 30 loài lan kiếm đặc hữu Việt Nam Tên loài (tiếng Latinh) Tên loài (Tiếng Việt) Ghi Cymbidium aloifolium Đồng danh: Cymbidium Đoản kiếm Lô hội (PHH), crassifolium, Cymbidium * erectum, Cymbidium Kiếm Lô hội (TH) intermedium, Cymbidium pendulum, Cymbidium simulans Cymbidium atropurpureum Đoản kiếm đen đỏ (PHH), Đồng danh:Cymbidium * atropurpureum; Cymbidium Lan kiếm treo (TH) finlaysonianum Đoản kiếm Bà Na, Cymbidium banaense Thiên Nga (PHH), Lan * kiếm Bà Nà (TH) Cymbidium bicolor Đồng danh: Cymbidium aloifolium, Cymbidium bicolor Đoản kiếm hai mầu * (PHH), Lan Kiếm hai mầu (TH) Cymbidium cochleare Đồng danh: Cyperorchis cochleare Cymbidium cyperifolium Cymbidium dayanum Kiếm cói, Thanh lan (TH) * Bích ngọc (PHH), * Đồngdanh: Cymbidium alborubens, Cymbidium Chưa có tên angustifolium, Tố tâm, Tên loài (tiếng Latinh) Tên loài (Tiếng Việt) Đào Liễu Cymbidium poilanei Cymbidium devonianum Đồng danh: Cymbidium Ghi Thanh Hoàng (PHH), rigidum Cymbidium sikkimense Cymbidium eburneum Đồng danh: Cymbidium syringodorum * Gấm ngũ hổ (TH) Bạch Ngọc, Bạch Ngọc Xuân 10 Cymbidium elegans Đồng danh: Cymbidium densiflorum, Cymbidium longifolium, Cyperorchis Chưa có tên elegans 11 Cymbidium ensifolium Đồng danh: Cymbidium Thanh Ngọc * acuminatum, Cymbidium albomarginatum, Cymbidium arrogans 12 Cymbidium erythraeum Đồng danh: Cymbidium longifolium, Cyperorchis hennisiana, Chưa có tên Cyperorchis longifolia 13 Cymbidium erythrostylum Đồng danh: Cyperorchis erythrostyla, 14 Cymbidium finlaysonianum Bạc lan Kiếm vàng (TH), Đồng danh: Cymbidium pendulum, Cymbidium tricolor, Cymbidium wallichii 15 Cymbidium floribundum Đồng danh: Cymbidium illiberal, * * Hoàng kiếm lan Chưa đặt tên * 10 Tên loài (tiếng Latinh) Tên loài (Tiếng Việt) Ghi Chưa có tên * Hồng lan * Kiếm Hồng Hồng (TH) * Cymbidium pumilum 16 Cymbidium hookerianum Đồng danh: Cymbidium giganteum var hookerianum ; Cymbidium grandiflorum ; Cymbidium grandiflorum var punctatum 17 Cymbidium insigne Đồng danh: Cymbidium sanderi, Cyperorchis insignis 18 Cymbidium iridioides Đồng danh: Cymbidium giganteum ; Cyperorchis gigantea ; Iridorchis gigantea 19 Cymbidium kanran Đồng danh: Cymbidium linearisepalum 20 Cymbidium lancifolium Đồng danh: Cymbidium maclehoseae Chưa có tên Lục lan (PHH), Kiếm giáo (TH) * 21 Cymbidium lowianum Đồng danh: Cymbidium giganteum, Hoàng lan * Cymbidium hookerianum 22 Cymbidium macrorhizon Lan hoại sinh (PHH), Đồng danh: Cymbidium aberrans, Cymbidium aphyllum 23 Cymbidium mastersii Đồng danh: Cymbidium * Kiếm hoại (TH) Lan kiếm bạch ngọc * 11 Tên loài (tiếng Latinh) Tên loài (Tiếng Việt) Ghi affine ; Cymbidium maguanense, Chưa có tên 24 Cymbidium qiubeiense 25 Cymbidium sanderae Đồng danh: Cymbidium Hồng lan (TH) * parishii var sanderae 26 Cymbidium schroederi Hoàng lan (PHH), Kiếm Đồng danh: Cyperorchis schroederi trung (TH) * 27 Cymbidium sinense Đồng danh: Cymbidium Kiếm tầu (TH), Mặc lan, albojucundissimum, Cymbidium Thanh trường, Đại hồng * 28 Cymbidium suavissimum Chưa có tên * 29 Cymbidium wenshanense Chưa có tên chinense ; Cymbidium fragrans ; Cymbidium hoosai 30 Cymbidium wilsonii Đồng danh: Cymbidium giganteum Chưa có tên Ghi chú: Các giống đánh dấu (*) liệt kê vào Phụ Lục II Cơng ước CITES Hiện nay, 21 lồi tìm thấy Việt Nam nằm danh sách CITES 2017 Trên thực tế, mức độ thu hẹp quần thể tất loài Địa lan kiếm Việt Nam diễn thời gian gần đây, qua đợt điều tra thực địa phát tốc độ phá huỷ mạnh mẽ diện rộng khu rừng cịn sót lại Việt Nam, chủ yếu đỉnh núi đá vơi [11] Trước tình hình Địa lan kiếm cạn kiệt ngồi thiên nhiên, nhiều chương trình quốc gia bảo tồn loài hoa quý triển khai, chủ yếu thu thập, phân loại, nghiên cứu loài địa lan Kiếm bảo tồn môi trường sống tự nhiên chúng [11]  ...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o - NGUYỄN THỊ KIM NGÂN Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU TẠO CHỒI ĐỊA LAN KIẾM TỨ THỜI (CYMBIDIUM ENSIFOLIUM) TỪ MÔ RỄ BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY IN VITRO? ??... nhiên Xuất phát từ sở khoa học yêu cầu thực tế khách quan trên, tiến hành thực đề tài: ? ?Nghiên cứu tạo chồi địa lan kiếm Tứ Thời (cymbidium ensifolium) từ mô rễ kỹ thuật nuôi cấy in vitro? ?? 1.2 Mục... trình tạo chồi từ mơ rễ địa lan kiếm Tứ Thời phương pháp nuôi cấy in vitro, tạo số lượng giống địa lan kiếm Tứ Thời góp phần bảo tồn giống đồng thời tạo nguồn vật liệu cho nghiên cứu khoa học sau