Khóa luận tốt nghiệp đại học nghiên cứu dna barcode cho một số vật nuôi của việt nam

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUỲNH THỊ THIỆP Tên đề tài: NGHIÊN CỨU DNA BARCODE CHO MỘT SỐ VẬT NI CỦA VIỆT NAM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Chính quy Chuyên ngành: Cơng nghệ sinh học Khoa: CNSH - CNTP Khóa học: 2014 - 2019 Thái Nguyên, năm 2019 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUỲNH THỊ THIỆP Tên đề tài: NGHIÊN CỨU DNA BARCODE CHO MỘT SỐ VẬT NI CỦA VIỆT NAM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Chính quy Chun ngành: Cơng nghệ Sinh học Lớp: K47- CNSH Khoa: CNSH - CNTP Khóa học: 2014 - 2019 Giảng viên hướng dẫn: TS Phạm Bằng Phương Thái Nguyên, năm 2019 i LỜI CẢM ƠN Lời em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực Phẩm, tồn thể q thầy giáo khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực Phẩm giảng dạy, hướng dẫn em ngày hôm Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo TS Phạm Bằng Phương người thầy trực tiếp hướng dẫn giúp đỡ em, toàn thể thầy cô Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm động viên giúp đỡ chúng em trình học tập thực đề tài tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn cán bộ, anh chị bạn làm việc Viện khoa học sống – ĐH Thái Nguyên giúp đỡ, chia sẻ kinh nghiệm, kỹ tạo điều kiện để đề tài “Nghiên cứu xây dựng DNA barcode cho số vật ni Việt Nam” hồn thành tiến độ có kết tốt Mặc dù có nhiều cố gắng để hồn thiện tốt luận văn tốt nghiệp, trình thực khơng thể tránh thiếu sót định Vì vậy, em mong góp ý thầy, giáo bạn để khóa luận em hoàn chỉnh Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 04 tháng 06 năm 2019 Sinh viên Huỳnh Thị Thiệp ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Các mẫu thí nghiệm phục vụ q trình nghiên cứu 20 Bảng 3.2 Trình tự mồi cho phản ứng PCR 21 Bảng 3.3 Danh mục thiết bị sử dụng 21 Bảng 3.4 Danh mục loại hóa chất sử dụng 22 Bảng 3.5 Thành phần phản ứng PCR 24 Bảng 4.1: Kết đo độ tinh DNA 26 Bảng 4.2 Vị trí sai khác trình tự nucleotide thị COI mẫu nghiên cứu mẫu công bố NCBI 32 Bảng 4.3 Hệ số tương đồng phân tích trình tự gen COI mẫu dê nghiên cứu với trình tự cơng bố NCBI 33 Bảng 4.4 Vị trí sai khác trình tự nucleotide thị COI mẫu nghiên cứu mẫu công bố NCBI 36 Bảng 4.5 Hệ số tương đồng phân tích trình tự gen COI mẫu nghiên cứu với trình tự cơng bố NCBI 37 Bảng 4.6 Vị trí sai khác trình tự nucleotide thị COI mẫu B nghiên cứu mẫu công bố NCBI 40 Bảng 4.7 Hệ số tương đồng phân tích trình tự gen COI mẫu nghiên cứu với trình tự công bố NCBI 41 iii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Lợn Landrace Hình 2.2 Bị Vàng Hình 2.3: Dê Cỏ Ninh Bình Hình 4.1 Kết tách chiết DNA tổng số mẫu mô tai 26 Hình 4.2a Kết PCR thị COI mẫu DH1, DH2,DN1, DN2 27 Hình 4.2b Kết PCR thị COI mẫu B, L 27 Hình 4.3: Kết giải trình tự thị COI mẫu nghiên cứu theo giái trị QV 29 Hình 4.4: Kết BLAST thị COI Mẫu DH1 với thị COI Capra hircus công bố NCBI 30 Hình 4.5 So sánh vị trí sai khác trình tự nucleotide thị COI mẫu nghiên cứu với thị COI cơng bố NCBI 31 Hình 4.6: Kết BLAST thị COI Mẫu DH1 với thị COI Gallus gallus công bố NCBI 34 Hình 4.7: Kết BLAST thị COI mẫu L với thị COI Sus scrofa công bố NCBI 35 Hình 4.8 So sánh vị trí sai khác trình tự nucleotide thị COI mẫu L nghiên cứu với thị COI cơng bố NCBI 36 Hình 4.9 Kết so sánh khác loài 38 Hình 4.10: Kết BLAST thị COI Mẫu B với thị COI Bos taurus công bố NCBI 39 Hình 4.11 So sánh vị trí sai khác trình tự nucleotide thị COI mẫu B nghiên cứu với thị COI cơng bố NCBI 40 Hình 4.12: Kết so sánh trình tự khác lồi 42 iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ, thuật ngữ viết tắt Nghĩa đầy đủ từ, thuật ngữ BLAST Basic Local Alignment Search Tool Bp Base pair – cặp bazơ nitơ COI Cytochrome C oxidase Subutnit I Cytb Cytochrome b dATP DeoxyAdenine Triphosphate dCTP DeoxyCytosine Triphosphate ddATP DideoxyAdenine Triphosphate ddCTP DideoxyCytosine Triphosphate ddGTP DideoxyGuanine Triphosphate ddNTP Dideoxynucleotide Triphosphate ddTTP DideoxyThymine Triphosphate dGTP DeoxyGuanine Triphosphate DNA Deoxyribonucleic Acid dNTP Deoxyribonucleotide Triphosphate dTTP DeoxyThymine Triphosphate EDTA Etilendiamin tetraaxetic acit GPS Global Positioning System ITS Internal Transcribed Spacer Kb Kilo base – Kilo bazo nito matK Maturase K NCBI Nation Cetrer for Biotechnology Information (trung tâm Quốc gia Thông tin Công nghệ sinh học) PCR Polymerase Chain Recation QV Quality value RPM Revolutions Per Minute SDS Sodium Dodecyl Sulfate v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Một số đối tượng vật nuôi phổ biến Việt Nam 2.1.1 Tổng quan lợn 2.1.2 Tổng quan bò vàng 2.1.3 Tổng quan dê 2.2 Cơ sở khoa học đề tài 2.2.1 Công nghệ mã vạch DNA 2.3 Phương pháp tách chiết DNA tổng số 11 vi 2.4 Phương pháp điện di DNA gel agarose 12 2.5 Kỹ thuật PCR 13 2.6 Phương pháp xác định trình tự nucleotide 14 2.7 Tình hình nghiên cứu DNA mã vạch ngồi nước 15 2.7.1 Tình hình nghiên cứu giới 15 2.7.2 Tình hình nghiên cứu nước 17 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 20 3.2 Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu 21 3.2.1 Thiết bị nghiên cứu 21 3.2.2 Hóa chất 22 3.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 22 3.4 Nội dung nghiên cứu 23 3.5 Phương pháp nghiên cứu 23 3.5.1 Phương pháp lấy mẫu 23 3.5.2 Phương pháp tách chiết DNA tổng số 23 3.5.3 Phương pháp PCR 24 3.5.4 Phương pháp xác định trình tự nucleotide 25 3.5.5 Phân tích liệu 25 Phần KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 4.1 Kết tách DNA tổng số 26 vii 4.2 Kết PCR khuếch đại thị COI 27 4.3 Kết phân tích thị DNA bacoding 28 4.3.1 Kết phân tích chất lượng giải trình tự 28 4.4 Kết so sánh, phân tích thị COI mẫu nghiên cứu 30 4.4.1 Chỉ thị COI mẫu dê 30 4.4.2 Chỉ thị COI mẫu lợn 34 4.4.3 Chỉ thị COI mẫu bò 38 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 5.1 Kết luận 43 5.2 Kiến nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Ngành chăn nuôi Việt Nam phận quan trọng cấu thành nông nghiệp phận quan trọng kinh tế Việt Nam Tình hình chăn ni phản ánh thực trạng sử dụng, khai thác, chế biến tiêu thụ sản phẩm động vật Các sản phẩm từ vật nuôi nguồn cung cấp thực phẩm với tỷ trọng cao, chất lượng tốt giá trị dinh dưỡng lớn cho người, sản phẩm phụ da, mỡ, thịt nguồn cung cấp cho ngành công nghiệp chế biến khác Đồng thời phụ phẩm ngành chăn nuôi nguồn cung cấp phân bón hữu cho trồng trọt Để phục vụ nhu cầu ngày lớn xã hội, việc chọn lọc phát triển giống vật nuôi ngày trọng Trên giới có nhiều nghiên cứu việc chọn lọc, xác định giống vật nuôi thị phân tử, có nghiên cứu phương pháp “DNA barcode” (mã vạch DNA) Đây phương pháp xác định nhanh chóng cho thể sinh vật tới cấp độ loài Về nguyên tắc mã vạch DNA sử dụng trình tự DNA ngắn nằm genome sinh vật chuỗi ký tự giúp phân biệt hai loài sinh vật với Phương pháp ví tương tự máy quét siêu thị đọc hai mã vạch hai sản phẩm khác mà nhìn bên ngồi chúng giống Như vậy, phương pháp mã vạch DNA phương pháp định danh xác định giống vật ni tới cấp độ lồi Những nghiên cứu mã vạch DNA sở vững đáng tin cậy cho nghiên cứu phân loại dựa hình thái, phát triển tất yếu có tính kế thừa từ nghiên cứu phân loại học trước 2 Một gen sử dụng để xác định lồi động vật có vú gen COI Gen COI đóng vai trị trình tự dùng để phân biệt lồi vật ni có quan hệ gần trình tự bảo thủ thành viên loài Điều gợi ý sử dụng phương pháp mã vạch DNA có hiệu nhiều loài sinh vật Xuất phát từ giá trị khoa học thực tiễn, dựa sở khoa học trình tự gen biết, nhằm đóng ghóp, bổ sung trình tự DNA phục vụ cho mục đích xác định lồi vật ni, tiến hành đề tài “Nghiên cứu DNA barcode cho số vật nuôi Việt Nam” 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Xây dựng DNA barcode cho số vật nuôi Việt Nam 1.2.2 Mục tiêu cụ thể - Nhân gen COI số vật ni: Bị, lợn, dê - Giải trình tự gen COI - Xây dựng sở liệu DNA barcode cho số vật nuôi Việt Nam - Đánh giá so sánh sở liệu DNA barcode vật nuôi Việt Nam với sở liệu quốc tế 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài - Xây dựng sở liệu DNA barcode cho số giống vật ni bị, lợn, dê Việt Nam 3 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài - Có ý nghĩa quan trọng cơng tác bảo tồn nguồn gen động vật ni có giá trị Việt Nam - Tạo sở liệu cho các nghiên cứu khoa học sau 4 Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Một số đối tượng vật nuôi phổ biến Việt Nam Ở Việt Nam, nghề chăn ni có vai trị quan trọng Ở nhiều địa phương, nghề đem lại thu nhập cho nhiều hộ gia đình Một số giống vật nuôi người dân chăn nuôi quy mô lớn, đem lại thu nhập ổn định cho người dân Trong thời gian thực đề tài, số giống vật ni như: Lợn, bị, dê lựa chọn để xây dựng DNA barcode (mã vạch DNA) 2.1.1 Tổng quan lợn Lợn thuộc lớp thú (Mammalia), guốc chẵn (Artiodactyla), họ lợn (Suidae), thuộc chi lợn (Sus), loài lợn rừng (Sus scrofa) Một giống lợn nuôi nhiều Việt Nam lợn Landrace Lợn Landrace có nguồn gốc từ Đan Mạch hình thành vào khoảng 1924–1925 trình tạp giao giống lợn đến từ Anh, Tây Ban Nha, Ý, Bồ Đào Nha, Trung Quốc tạo thành Theo nhiều tài liệu, chúng tạo thành trình lai tạo giống lợn Youtland có nguồn gốc từ Đức với lợn Yorkshire có nguồn gốc từ Anh Giống lợn chủ yếu nuôi nhiều Đan Mạch Sau năm 1990, chúng chọn lọc có suất cao nên nuôi nhiều nước Châu Âu Hiện giống lợn xuất khắp nơi để cải thiện giống lợn nhiều nước trở thành giống “Lợn Landrace Mỹ”, “Lợn Landrace Anh”, “Lợn Landrace Pháp”, “Lợn Landrace Canada”, giống nhập vào Việt Nam nuôi diện rộng Lợn Landrace coi giống lợn tốt giới nuôi phổ biến nhiều nơi, giống lợn vừa có tỷ lệ nạc cao vừa để nái, thích hợp cho hộ chăn nuôi trang trại Giống lợn nhập vào Việt Nam vào khoảng năm 1970 qua Cuba Giống lợn Landrace giống tốt để thực hiên chương trình nạc hóa đàn lợn Vệt Nam.[20] Ngoại hình lợn Landrace có màu trắng tuyền, đầu nhỏ, dài, tai to rủ xuống kín mặt, tai cúp phía trước, cổ nhỏ dài, vai-lưng-mơng-đùi phát triển, mông đùi to, mõm thẳng, mông nở, ngoại hình thể chất vững Tồn thân có dáng hình thoi nhọn, chúng nhiều giống lợn khác 12 đơi xương sường nên thân hình dài Đây giống lợn tiêu biểu cho hướng nạc Lợn có khả tăng trọng từ 750 – 800 g/ngày, tháng tuổi lợn thịt đạt 105 – 125 kg Khi trưởng thành nặng tới 400 kg, 280 – 300 kg Lợn Landrace có khả sinh sản cao, mắn đẻ đẻ nhiều trung bình đạt 1,8 – lứa/năm Mỗi lứa đẻ 10 – 12 con, trọng lượng sơ sinh (Pss) trung bình đạt 1,2 – 1,3 kg, trọng lượng cai sữa (Pcs) từ 12 – 15 kg Sức tiết sữa từ – kg/ngày Khả sinh trưởng lợn tốt Giống lợn kén ăn đòi hỏi nhu cầu dinh dưỡng cao đòi hỏi điều kiện chăm sóc tốt.[21] Hình 2.1 Lợn Landrace 2.1.2 Tổng quan bò vàng Bò vàng giống bò u da lơng vàng tìm thấy Nam Trung Quốc, Việt Nam Đài Loan Chúng tạo q trình lai tạo hai giống bị Bos taurus Bos indicus Chúng có tên bị vàng màu sắc lơng màu vàng Đây giống bị gốc làm để tạo nhiều giống bò khác Trung Quốc, Việt Nam Về phân loại động vật học, bò thuộc giới động vật (Animalia), ngành động vật có dây sống (Chordata),lớp thú (Mammalia), guốc chẵn (Artiodactyla), họ trâu bò (Bovidae), phân họ trâu bò (Bovinae), thuộc chi bị (Bos), lồi Bos primigenius, phân lồi (B.p.taurus, B.p.indicus) Bị vàng có số ưu điểm bật chịu đựng tốt với điều kiện nhiệt đới nóng ẩm, chịu đựng kham khổ tốt, thích nghi với nhiều vùng khí hậu, thích nghi với phương thức chăn ni tận dụng, đầu tư Bị có nhược điểm lớn tầm vóc nhỏ, khơng đáp ứng với yêu cầu chăn nuôi thâm canh, suất thịt sữa thấp Năng suất thịt không cao, tỉ lệ thịt xẻ 4044% Tuổi phối giống lần đầu vào khoảng 20-24 tháng Hình 2.2 Bị Vàng Bị vàng có khả sinh sản tốt, 18-24 tháng tuổi bò động dục có khả phối giống, 30-34 tháng tuổi đẻ lứa đầu, nhịp đẻ năm (1 năm lứa) năm lứa phổ biến Khả sinh sản tốt đặc điểm có ích lớn bò vàng 2.1.3 Tổng quan dê Nhiều nhà khoa học nước khác nghiên cứu nguồn gốc dê nhà, nhiều ý kiến khác đại đa số nhà khoa học cho dê loại vật ni hóa sớm Người ta cho dê nhà ngày (Capra hircus) có nhiều nguồn gốc khác Tổ tiên trực tiếp dê nhà gồm nhóm dê rừng chính: + Dê rừng Bezoar (Capra aegagrus) tìm thấy Iran nước vùng tiểu Á, tổ tiên phần lớn dê nhà nuôi châu Á châu Âu Nó coi nhóm tổ tiên thứ dê nhà Dê thuộc nhóm có sừng thẳng xoắn vặn + Dê rừng Markhor (Capra Falconeri), nhóm có sừng cong vặn phía sau coi nhóm tổ tiên thứ dê nhà, cịn thấy vùng núi Hymalaya ni nhiều hai bên sườn phía Đơng Tây dãy núi Nhóm Markhor phân bố Afghanistan vùng Kashimir – Karakorum Hiện nay, người ta thấy khu vực nuôi dê lâu đời nước Trung Đơng, sau đến Ấn Độ Ai Cập, tiếp đến nước châu Âu, châu Á châu Phi Khu vực nuôi dê Đông Nam Á Về phân loại động vật học, dê thuộc giới động vật (Animalia), ngành động vật có dây sống (Chordata), phân ngành động vật có xương sống (Vertebrata), lớp động vật có vú (Mammalia), guốc chẵn (Artiodactyla), họ trâu bò (bovidae), họ phụ dê cừu (capra rovanae), thuộc lồi dê (Capra) Dê có đặc điểm màu lơng khơng nhất, có nhiều màu lơng khác tập trung chủ yếu số màu lơng như: Màu vàng (vàng tro, vàng cánh gián, vàng nâu), màu đen (đen tuyền, xám đen), khoang trắng đen, trắng xám Dê đực dê có sừng râu, tai nhỏ hướng phía trước sang ngang, đầu nhỏ, ngắn, bụng to, tầm vóc nhỏ Khối lượng sơ sinh bình quân đạt từ 1,6 - 1,8kg, khối lượng trưởng thành dê khoảng 25 - 30kg dê đực 30 - 45kg, cao khoảng 50 - 54cm đực cao khoảng 55 - 58cm Dê cỏ có khả sinh sản tốt, tuổi phối giống lần đầu 6-7 tháng, đẻ 1,7 lứa/năm 1,5 con/lứa, khoảng năm đẻ lứa, lứa 1-2 Dê mang thai trung bình từ 145 - 155 ngày đẻ Dê lúc đẻ đến cai sữa khoảng tháng Dê non phải đạt tháng tuổi có trọng lượng xấp xỉ 24 kg cho phối giống lần đầu[7] Hình 2.3: Dê Cỏ Ninh Bình 2.2 Cơ sở khoa học đề tài 2.2.1 Công nghệ mã vạch DNA Năm 2003, Paul Hebert – nhà nghiên cứu đại học Guelph, Canada, sáng lập phương pháp “mã vạch DNA” dùng để nhận diện lồi [15] Theo định nghĩa thơng thường, mã vạch phương pháp lưu trữ truyền tải thông tin loại ký hiệu chuyên biệt, có quy ước Khi nhìn vào dãy ký hiệu người ta biết nguồn gốc xuất xứ sản phẩm Tương tự, mã vạch DNA sử dụng trình tự nucleotide ngắn lấy từ phần thích hợp hệ gen sinh vật chuỗi ký tự giúp nhận diện phân biệt loài sinh vật với [22] Ơng đề xuất sử dụng trình tự ngắn gen Cytochrome c oxidase (COI) có chiều dài khoảng 650 bp, trình tự DNA có tất lồi động vật Tuy nhiên trình tự nucleotide đoạn DNA khác lồi Hệ gen ty thể động vật thích hợp để phân tích sử dụng gen nhân khơng chứa đoạn intron, 13 gen mã hóa protein ty thể động vật vùng gen có nhiều tiềm dùng để làm mã vạch DNA thêm trình tự dẫn đến thay đổi khung đọc xảy Gen COI có đủ yếu tố quan trọng để sử dụng làm mã vạch DNA [16] Một mã vạch DNA điển hình cần đáp ứng u cầu sau: (1) Có tính phổ biến cao để thực nhiều lồi (2) Trình tự có tính đặc hiệu cao có hiệu suất tái cao (3) Có khả phân biệt đồng thời nhiều lồi Có năm bước liên quan đến xác định lồi trình tự mã vạch DNA Đầu tiên, mẫu vật phải thu nhận xác định nhà phân loại Một mẫu mô lấy từ thể vật nuôi tiến hành tách chiết thu DNA tổng số, sau trình tự DNA đích khuếch đại phản ứng PCR 10 (Polymerase chain reaction) giải trình tự để tạo “mã vạch” Cuối cùng, mã vạch nhập vào hệ thống ngân hàng liệu Barcode (BOLD) Nó hệ thống trực tuyến để giúp nhà nghiên cứu thu thập, quản lý phân tích mã vạch DNA Mỗi mục tổ chức BOLD có thơng tin tên phân loại, hình ảnh lồi, GPS tọa độ nơi mà lồi tìm thấy trình tự mã vạch quy ước cho đối tượng Thơng tin cung cấp cho có nhu cầu thơng qua BOLD nơi đâu giới [10] Ví dụ, mã vạch DNA giúp định danh nhanh chóng lồi gây bệnh giai đoạn tiềm ẩn (giai đoạn ấu trùng), hỗ trợ chương trình kiểm sốt sâu bệnh bảo vệ trồng Gen COI dùng để xác định động vật có xương sống côn trùng Gen COI bọt biển san hô bảo thủ, loài lưỡng cư giáp xác lại có biến đổi cao, lồi giun trịn, sán nhóm động vật cổ xưa “tardigrades” (gấu nước) vùng gen có tái xếp lớn nên trở ngại cho việc sử dụng cặp mồi phổ biến phản ứng PCR Ngoài locut gen COI, đoạn gen khác ty thể Cytb (Cytochrome b), gen ribosome 12S, 16S dùng DNA mã vạch nhận dạng động vật [17] Với hàng triệu lồi động vật ln biến đổi khơng ngừng theo giai đoạn sống, việc phân loại định danh lồi ln gặp thách thức khơng nhỏ Nhiều sinh vật nhỏ chưa biết đến Tuy nhiên, loài động vật lớn có tranh luận nhận dạng lồi Việc định danh lồi thơng qua đặc điểm hình thái khơng cịn thuyết phục Vì việc tìm phương pháp mã vạch DNA giải pháp hữu ích cho việc phân loại kiện quan trọng có ý nghĩa thực tiễn 11 2.3 Phương pháp tách chiết DNA tổng số Tách chiết DNA từ mẫu thí nghiệm việc cần thiết thí nghiệm cơng nghệ gen tiến hành với DNA Cho đến có nhiều quy trình tách chiết thành cơng DNA cơng bố báo cáo nhiều nhà nghiên cứu Đối với loại mơ hay tế bào, quy trình tách chiết khác Dù ngun lý tách chiết ADN từ tế bào gồm bước gồm: 1) Phá màng tế bào; 2) Loại bỏ protein; 3) Tủa thu DNA Nguyên lý tách chiết DNA cụ thể sau: Bước 1: Phá vỡ màng tế bào màng nhân (tế bào Eukaryote) Thông thường tế bào, mô nghiền nitơ lỏng -1960C dùng hỗn hợp chất tẩy rửa (SDS, Sarcosyl) proteinase K Khi màng tế bào, màng nhân bị phá vỡ giải phóng DNA mơi trường phân hủy protein liên kết với DNA Bước 2: Loại bỏ thành phần không mong muốn mẫu, chủ yếu protein, mẫu lắc mạnh dung dịch phenol chloroform, dung dịch có tác dụng làm biến tính protein đồng thời khơng hịa tan DNA, sau li tâm tủa thành lớp nằm hai lớp nước phenol/chloroform Nước có chứa DNA thu nhận lại Bước 3: Tủa DNA nhằm thu nhận DNA dạng cô đặc, phần để bảo vệ chúng khỏi phân hủy enzyme, mặt khác hịa tan lại chúng dung dịch có nồng độ mong muốn Có thể tủa DNA ethanol, mơi trường có nồng độ muối cao, nhiệt độ thấp, nhiên tủa isopropanol (không cần muối) Sau thu nhận DNA, cặn tủa cần phải rửa ethanol 70% để loại bỏ muối isopropanol dính vào  ...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUỲNH THỊ THIỆP Tên đề tài: NGHIÊN CỨU DNA BARCODE CHO MỘT SỐ VẬT NI CỦA VIỆT NAM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Chính... tài ? ?Nghiên cứu DNA barcode cho số vật nuôi Việt Nam? ?? 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Xây dựng DNA barcode cho số vật nuôi Việt Nam 1.2.2 Mục tiêu cụ thể - Nhân gen COI số vật ni: Bị,... dựng sở liệu DNA barcode cho số vật nuôi Việt Nam - Đánh giá so sánh sở liệu DNA barcode vật nuôi Việt Nam với sở liệu quốc tế 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài - Xây