phân lập, tuyển chọn vi sinh vật để sản xuất chế phẩm sinh học xử lý phụ phẩm sau thu hoạch quả vải

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ------------------------- -------------------------- ĐỖ MINH HẠNH PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VI SINH VẬT ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC XỬ LÝ PHỤ PHẨM SAU THU HOẠCH QUẢ VẢI LUẬN VĂN THẠC SỸ HÀ NỘI – NĂM 2015 BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ------------------------- -------------------------- ĐỖ MINH HẠNH PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VI SINH VẬT ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC XỬ LÝ PHỤ PHẨM SAU THU HOẠCH QUẢ VẢI CHUYÊN NGÀNH: KHOA HỌC MÔI TRƯỜNG MÃ SỐ: 60.44.03.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. ĐINH HỒNG DUYÊN HÀ NỘI – NĂM 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu thân, xuất phát từ yêu cầu phát sinh công việc để hình thành hướng nghiên cứu. Các số liệu có nguồn gốc rõ ràng tuân thủ nguyên tắc kết trình bày luận văn thu thập trình nghiên cứu trung thực chưa công bố trước đây. Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Tác giả luận văn Đỗ Minh Hạnh Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phòng thí nghiệm Vi sinh vật – Khoa Môi Trường – Học viện Nông nghiệp Việt Nam. Để hoàn thành luận văn nhận nhiều động viên, giúp đỡ nhiều cá nhân tập thể. Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS. Đinh Hồng Duyên tận tình hướng dẫn cho thời gian thực luận văn. Xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới thầy cô giáo truyền đạt lại cho kiến thức quý báu năm học vừa qua. Cũng xin gửi lời cám ơn chân thành tới Ban Giám hiệu, Ban quản lý Đào tạo, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện cho trình học tập. Sau xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè, người thân, em sinh viên K56, K57 tạo điều kiện tốt cho suốt trình học thực luận văn. Do thời gian có hạn kinh nghiệm nghiên cứu khoa học chưa nhiều nên luận văn nhiều thiếu sót, mong nhận ý kiến góp ý Thầy/Cô trường. Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Tác giả luận văn Đỗ Minh Hạnh Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ix MỞ ĐẦU 1. Tính cấp thiết đề tài 2. Mục đích nghiên cứu 3. Yêu cầu đề tài Chương TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1. Tổng quan vải . 1.1.1. Giới thiệu vải 1.1.2. Các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng vải tình hình xử lý phụ phẩm sau thu hoạch vải . 1.2. Cơ sở khoa học trình phân giải phụ phẩm sau thu hoạch . 15 1.2.1. Phân giải xenluloza . 15 1.2.2. Phân giải tinh bột . 17 1.2.3. Phân giải protein 18 1.3. Nghiên cứu ứng dụng vi sinh vật xử lý phụ phẩm nông nghiệp sau thu hoạch 19 1.3.1. Nghiên cứu giới 19 1.3.2. Nghiên cứu Việt Nam . 22 Chương ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1. Đối tượng nghiên cứu 27 2.2. Phạm vi nghiên cứu . 27 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii 2.3. Địa điểm nghiên cứu 27 2.4. Nội dung nghiên cứu . 27 2.4.1. Phân lập vi sinh vật từ mẫu nghiên cứu . 27 2.4.2. Tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả phân hủy phụ phẩm vải 27 2.4.4. Xử lý phụ phẩm vải chế phẩm vi sinh vật . 27 2.5. Phương pháp nghiên cứu . 28 2.5.1. Phương pháp lấy mẫu 28 2.5.2. Phân lập vi sinh vật từ mẫu phế thải 28 2.5.3. Đánh giá đặc tính sinh học vi sinh vật . 28 2.5.4. Phương pháp xác định sinh khối 29 2.5.5. Phương pháp đánh giá hoạt tính enzyme ngoại bào, định lượng hoạt độ enzyme 29 2.5.6. Đánh giá ảnh hưởng pH ban đầu . 30 2.5.7. Đánh giá ảnh hưởng nhiệt độ ban đầu . 30 2.5.8. Đánh giá ảnh hưởng nguồn chất đến vi sinh vật 30 2.5.9. Phương pháp xác định tính đối kháng chủng VSV . 30 2.5.10. Phương pháp định tên vi khuẩn, xạ khuẩn, nấm . 30 2.5.11. Phương pháp sản xuất chế phẩm vi sinh vật . 32 2.5.12. Phương pháp đánh giá chất lượng chế phẩm 32 2.5.13. Phương pháp xử lý số liệu . 33 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1.Phân lập, tuyển chọn VSV từ mẫu nghiên cứu 34 3.1.1. Kết phân tích VSV 34 3.1.2. Kết phân lập VSV . 35 3.2. Tuyển chọn đánh giá đặc tính sinh học 35 3.2.1. Đánh giá hoạt tính enzym ngoại bào VSV phân lập . 35 3.2.2. Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy khác . 38 3.2.3. Ảnh hưởng pH ban đầu đến sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào chủng VSV 42 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv 3.2.4. Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào VSV 44 3.2.5. Xác định khả kháng kháng sinh chủng VSV . 47 3.2.6. Ảnh hưởng nguồn cacbon, nitơ đến sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào chủng VSV 49 3.3. Sản xuất đánh giá chất lượng chế phẩm . 54 3.3.1. Kiểm tra tính đối kháng . 54 3.3.2. Định tên vi sinh vật . 54 3.3.3. Sản xuất đánh giá chất lượng chế phẩm 61 3.4. Xử lý phụ phẩm sau thu hoạch vải chế phẩm VSV . 62 3.4.1. Kết thí nghiệm chậu vại 62 3.4.2. Kết xử lý phụ phẩm vải quy mô đống ủ lớn 63 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 65 1. Kết luận . 65 2. Kiến nghị . 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC 69 PHỤ LỤC 72 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Diện tích sản lượng số ăn 2009 - 2012 1.2 Tổng hợp thông tin vải thiều tỉnh Bắc Giang năm 2013 1.3 Thành phần dinh dưỡng trái vải 12 3.1 Số lượng vi sinh vật 1g mẫu phế phẩm (CFU/g) 34 3.2 Hoạt tính enzym chủng VSV chọn 36 3.3 Hoạt độ enzym xenlulaza chủng VSV 38 3.4 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào nấm 3.5 39 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào chủng xạ khuẩn 3.6 40 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh khối, hoạt tính enzym ngoại bào chủng vi khuẩn 41 3.7 Ảnh hưởng pH đến sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào nấm 42 3.8 Ảnh hưởng pH đến sinh khối, hoạt tính enzym ngoại bào xạ khuẩn 3.9 43 Ảnh hưởng pH đến sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào Vi khuẩn 3.10 44 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào VSV 3.11 45 Ảnh hưởng mức kháng sinh đến sinh trưởng sinh enzym ngoại bào 3.12 48 Ảnh hưởng nguồn cacbon môi trường nuôi cấy đến sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào 3.13 3.14 50 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng nitơ đến sinh khối hoạt tính enzym ngoại bào VSV 52 Đặc điểm hình thái, kích thước chủng xạ khuẩn X10 54 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi 3.15 Chất lượng chế phẩm sau sản xuất 61 3.16 Kết phân tích thí nghiệm chậu vại sau 35 ngày 62 3.17 Kết phân tích đống ủ sau 35 ngày 64 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Địa điểm thu mua vải thiều 1.2 Sấy vải Bắc Giang 10 1.3 Phụ phẩm vải dồn lại thành đống bỏ 11 1.4 Quả vải 13 3.1 Vòng phân giải nguồn chất chủng xạ khuẩn 37 3.2 Vết thương hành vòng đối kháng X7 với chủng X10 54 3.3 Khuẩn lạc hình thái khuẩn ty khí sinh, bào tử xạ khuẩn X10 55 3.4 Cây phân loại dựa trình tự 16S rRNA 56 3.5 Sản phẩm PCR với cặp mồi đặc thù cho XK 56 3.6 Hình thái khuẩn lạc V19, V98 môi trường LB 57 3.7 Chủng V19 kính hiển vi điện tử 57 3.8 Cây phân loại chủng V19 dựa trình tự 16S rRNA 57 3.9 Chủng V98 kính hiển vi điện tử 58 3.10 Cây phân loại chủng V98 dựa trình tự 16S rRNA 58 3.11 Sản phẩm tách chiết AND vi khuẩn V19 V98 58 3.12 Sản phẩm PCR nhân mồi đặc thù vi khuẩn M marker; 1: 58 3.13 Đặc điểm khuẩn lạc quan sinh sản, phân loại chủng N34 59 3.14 Đặc điểm khuẩn lạc quan sinh sản, phân loại chủng N18 60 3.15 Biểu đồ diễn biến nhiệt độ đống ủ 64 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii Bảng PL 2. Hoạt tính enzym chủng xạ khuẩn Các chủng Hoạt tính enzyme (mm) xạ khuẩn Xenlulaza CMC Amylaza Proteaza X1 15,0 X2 X3 16,6 X4 X5 17,5 17,5 18 16,0 X6 17 17,75 17,5 15,0 X7 22,5 20 19,66 20,66 X8 X9 X10 22 18,6 17 21,0 X11 13,0 X12 19,66 17,5 13 19 X13 X14 X15 8,5 X16 X17 X18 X19 14,0 X20 20 18 14,5 20 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 74 Bảng PL 3: Hoạt tính enzym chủng vi khuẩn Cácchủng vi khuẩn V3 V4 V11 V19 V25 V27 V31 V34 V37 V41 V42 V54 V57 V60 V65 V67 V96 V98 Xenlulaza 21,5 20 22 27 28 22 24 21 22 22 22 22 25 25 22 21,5 23 27 Hoạttính enzyme (mm) Amylaza 17 18 14 17 14 16 14 16 12 17 10 18 18 17 Proteaza 16 20 16 18 15 12 17 15 18 14 16 17 19 15 13 18 18 Hình PL 2. Đường chuẩn nồng độ glucose Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 75 PHỤ LỤC 3: ĐỊNH DANH HAI CHỦNG VI KHUẨN, MỘT CHỦNG XẠ KHUẨN A. Xạ khuẩn • Tách chiết ADN ADN genome xạ khuẩn X10 tách chiêt theo phương pháp Marmur (1961) Saito (1963) mô tả cải tiến. - Xạ khuẩn X10 nuôi môi trường Gause lỏng ngày 30°C sau ly tâm 4000 vòng/phút phút để thu tế bào. - Sinh khối xạ khuẩn hòa tan 250 µl TE, trộn cách vortex. - Bổ sung 50 µl dung dịch 10% SDS + 20 µl proteinase K lắc đều. - Ủ 30 phút 650°C, phút đảo lần. - Bổ sung 400 µl CTAB, ủ 65C 30 phút. phút đảo lần - Bổ sung 600 µl (25:24:1) lắc đều, ly tâm 13000 vòng, 10 phút, 4C - Hút 500 µl dịch trong, bổ sung 25:24:1 lắc đều. Sau ly tâm 13000 vòng 10 phút, thu dich (v ml) - Bổ sung V = v ml (24:1), ly tâm 13000 vòng, 10 phút - Hút dịch trong, chiết lại chloroform lạnh - Tủa ethanol 100% - Rửa tủa với ml ethanol 70%, ly tâm 13000 vòng, phút. - Bay hòa tan DNA nước khử ion, bảo quản -20C. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 76 • Phản ứng PCR nhân trình tự 16S rRNA đặc thù cho xạ khuẩn Mồi sử dụng nhân PCR trình tự gene 16S rRNA đặc thù cho xạ khuẩn Tên mồi Trình tự C008F 5’ - AGA GTT TGA TCC TGG CTC AGC - 3’ C008R 5’ - ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT - 3’ Thành phần phản ứng: Thể tích Thành phần phản ứng Chu kỳ nhiệt (µl) Nước 95oC 5’ Master mix (2X) 10 95oC 45s C008F (10µM) 53oC 45s C008R (10µM) 72oC 2’ ADN 72oC Tổng thể tích 20 oC 35 chu kì 2’ Sản phẩm PCR sau phát gel agarose 1%. Sản phẩm PCR có độ dài khoảng 1500 bp tinh gửi giải trình tự. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 77 • Kết giải trình tự >1st_BASE_1668760_8_X10 C008_forward TNGNNATNGGGCAGCTACCATGCAGTCGACGATGAGCCCTTCAGGGTGGATT AGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAAACTGCCCTTCACTCTGGGACA AGCCCTGTAAACAGGGTCTAATACCGGATAACACCGGCTTCCGCTTGGGGGC TGGTTAAAAGCTCCGGCGGTGAAGGATGAGCCCGCGGCCTATCATCTTGTTG GTGGGGTAATGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCG ACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCACACTCCTACACGGAGGCAGC AGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTG AGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAA AGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGTCAGCAGCCGC GGTAATACGTATGGCTCACGCGTTGTCCGGAATTATTGAGCGTGAAGAGCTC GTACGCAGCTTGTCACGTCAGGTGTGGAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCT GCATCCGATACGGGTAGGCTATAGTGCGGTATGTGAGATCGGAATTCCTGGT GTAGCGGTAAAATGCTCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGA TCTCTGGAACATTACTGACGCTGAGGAGCGAATGCGTGGGGAGTGAACAGG ATTAAATACCCTGGTAGTCCACACCGTAAACGTTGAGAACTAGGTGTTGGCG ACATTCCACGTCATCGGGCCGCAGCTAACGCATTACTTCCCCGCCTGCTAATA CGGCAGCAAGGCTAAACTCAAAGAATTGCGGGAGCCCGCTCAACGGCGTAG CATGTGACTTATTCGACGCACGCGAAGACCTTACTAGGTTGACATATACCGC AAACCTACCTATAGTGCCCCCTTGGGGCAGAAACAGGTGGGCATGGATTCAC CGCTCGCGGGGGAGAGGGCGTTAATCCCCCACGAGGGAACCTTGGCCAGTTT GCCACATGCCTTCCGGTGATGGGACCACAGAAACGCCCGGTCACTTGCAGGA AGTAGGAAAGCGTCAGTGCTAAAGCCCTTATTCTTTGGCTTAAAGGGGGCAC ATGCCCGGAACAAAGAGTGGATCCGTGGGGCCAACCAACTCAGAGCCCGTT CAAAACCAATGGTGTTGCAATCC >1st_BASE_1668768_8_X10 C008_Reverse Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 78 NNNNNNTGCAGTTCACGTTGGAAAGCTCCCTCCATAGGGGGTTGCTACCACC GGCTTCGGGTGTTACCGACTTTCGTGACGTGACGGGCGGGGTGTACAAGGCC CGGGAACGTATTCACCGCATCAATGCTGATCTGCGATTACTATCAACTCCTAC TTCATGGGGTCTAGTTGCAGACCCCAATCCGAACTGAGACCGGCTTTTTGAG ATTCGCTCCGCCTCACGGCATCGCAGCTCTTTGTACCGGCGATTGTAGCACGT GTGCAGCCCAAGACATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCCTCCCCACCTTCC TCCGAGTTGACCCCGGCGGTCTCCTGTGAGTCCCCATCACCCCGAAGGGCAT GCTGGCAACACAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATC TCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTATACCGACCACAAGG GGGGCACTATCTCTAATGCTTTCCGGTATATGTCGAGCCTTGGTAAGGTTCTT CGCGTTGCGTCTAATTAAGCCACATGCTCCGCTGCTTGTGCGGGCCCCCGTCA ATTCCTTTGAGTTTTAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGAACTTAATG CGTTAGCTGCGGCACCGACGACGTGGAATGTCGCCAACACCTAGTTCCCAAC GTTTACGGCGTGAACTACGAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTC GCTCCTCAGCGTCAGTAATGGCCCAGACATCCGCCTTCGCCACCGGTGTTCCT CCTGATATCTGCGCATTTCATCGCTACACCAGGAATTCCGATCTCCTCTACCA CACTCTATCCTGCCCGTATCGGATGCAGACCCAGGGTTAAGCCCCGGGCTTT CACACCCGACGTGACAAGCCGCCTACGAGCTCTTTACGACCAATAATTCCGG ACAACGTTTGCGCCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTATTTAGCCGG CCCTTCTTCTGCAGGTACCGTCACTTTCACTTCTTCCCTGCTGAAAAAGGTTA CTACCCGAAGGCAGTCATCCCTCATGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTTCGCC CATTGGGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTACGAATCTAGGGCGGGGCT CAATTCCAATTTGGGCCGGGTCGCCCTCCAACGCCGA Hình 4. Kết BLAST với trình tự truy vấn X10 C008_F Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 79 Hình 5. Kết BLAST với trình tự truy vấn X10 C008_R Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 80 PHỤ LỤC 2: ĐỊNH DANH HAI CHỦNG VI KHUẨN • Tách chiết AND vi khuẩn V19, V98 - Lấy nửa vòng que cấy vi khuẩn đĩa thạch, bổ sung 200 µl nước khử ion vortex cho tan khuẩn. Ủ 60 ktrong giờ, khoảng 10 phút lắc lần. - Ly tâm 2000 vòng, 30 giây, thu dịch trong. - Kiểm tra sản phẩm tách chiết AND gel agarose 0.8%. • Phản ứng PCR nhân trình tự gen 16S rRNA đặc thù cho vi khuẩn Tên mồi 27F 1525R Trình tự 5’ - GAG TTT GAT CCT GGC TGA G – 3’ 5’ – AGA AAG GAG GTG ATC CAG CC – 3’ • Kết giải trình tự Vi khuẩn V19 >1st_BASE_1668758_191_27_forward (V19_27F) GNGNCATACGTCCCTATAATGCAGTCGAGCGACCGCGATTTGGATCTTGTTCTTT CTGAGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACTACGTGGGTAACCTGCCCATAAGACT GGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATAACATTTTGAACCGCATGG TTCGAAATTGAAAGGCGGCTTCGGCTGTCACTTATGGATGGACCCGCGTCGCAT TAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGA GAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGG CAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCG TGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTG CTAGTTGAATAAGCTGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGATAAC TACGTGCCATCAGCCGCGGTAATACGTATGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATT GGGCGTAAAGCGCGCGCAAGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCT CAACCGTGCAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCTGAAGAGGAAAGT GAAAT >1st_BASE_1668766_191_1525_Reverse (V19_1525R) 564 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 81 TTGCGTTCTCATCTTCAGTCACGACTGCTTCGCTTCTCAGTGCTCACACCATGAT GAAGAGCTCGGCTCCAAATACAGGTTACCCCACCGACTTCGGGTGTTACAAACT CTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCA TGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTAC AATCCGAACTGAGAACGGTTTTATGAGATTAGCTCCACCTCGCGGTCTTGCAGC TCTTTGTACCGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGAT GATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAAAGT GCCCAACTTAATGATGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTA ACCCAACATCTCACGACACGGGCTGACGACGACAGGGCACGACGTGTCACTCTG CTCCCGAAGGAGAAGCCCTATCTCTAGGGTTTTCAGAGGATGTCCAAGACCTGG TAAGGTTCTTCGCGTTGCTTC Hình PL 6. Kết BLAST với trình tự truy vấn V19_27F Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 82 Hình PL 7. Kết BLAST với trình tự truy vấn V19_1525R Vi khuẩn V98 >1st_BASE_1668759_981_27_forward 1200 NNGCTTCGGTGATGTCCTCTCTCAGTCAAGCGATGGTTTCAGATGTTGGTCTTAT AAGATAGATTGCGGCCGGGTGAGTACCAGCGGTGTAGCCTGCCTTGCGACCATT TCTGATGAAAGCAAACCTTTTATTATAGTCGACCTAATTTTTGTTGAATAGGTGG ACTCAACCGGATTAGGAGTTTTTGTCGGAATGTTGAAAACGGTCAGAAATTAGG CGGAAAGCTGAAATTGACATCTTTGGGCCGCGGCTGGATCCCTCCTTTCAGGGT GATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAG TAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTG ATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCTAGTT GAATAAGCTGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTG CCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGT AAAGCGCGCGCAGGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCG TGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATT CCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGG CGACTTTCTGGTCTGTAACTGACACTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAG GATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGG GTTTCCGCCCTTTAGTGCTGAAGTTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTAC GGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGG Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 83 A GCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAAAACCTTACCAGGTCTTGACATCCT Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 84 CTGAAAACCCTAGAGATAGGGCTTCTCCTTCGGGAGCAAATTGACAGGTGGTGC ATGGTTGTCGCCCCCCCGGGCNTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCCCAACGAAGGC AACCCTTGAACTTAATTGCCACCATTAATTTGGGCACTCTAAGGGGACTGCCGG TGACAAACCGGAGGAAGGTGGGTATGACCTCAATCCTCTTGCCCCTTAAGGCCC GGGCTCACCCTTGT >1st_BASE_1668767_981_1525_Reverse 1233 TAGNCGNACAAGACCAGCTCGTTCGACTTCTTGCAATCAGATCGTCCAACCTTA TCCGGCTGGCTCCACAAAGGTGATTGACTCCATTTCTTCAACAACAAACTCGTTG GCTTCGACAAAAGGTTCGCTTTCCGCCCAAATGGGCGCAAGTTTATTTTTGATGG CTGGCGATTAATAGGCATCAATCTCTCCTTTTAGATGCACATACCAAACCTTTTT TTCCGTTTTAGTATCAATTTCATTATTCATTCTGATCCCCCTCGCCCAGGATCAAA CTCTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGAC GTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACT TAATGATGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACA TCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCTCCCGAA GGAGAAGCCCTATCTCTAGGGTTTTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCT TCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAA TTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGT TAACTTCAGCACTAAAGGGCGGAAACCCTCTAACACTTAGCACTCATCGTTTAC GGCGTGGACTACCAGGGTATCTAACCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCTCGCCTCA GTGTCAGTTACAGACCAGAAAGTCACCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCATATCTCT ACGCATTTCACCGCTACACATGGAATTCCACTTTCCTCTTCTGCACTCAAGTCTC CCAGTTTCCAATGACCCTCCACGGTAGAGCCGNGGGCTTTCACATCAGACTTAA GAAACCACCTGCGCGCGCTTTACGCCCAATAATTCCGGAAAACGCTTGCCACCT ACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAATTAACCGTGGCTTTCTTGTTAAGTACG TCCAAGTGCCAACTTATTAACTAGCAATTGTTCTTCCTAACAAAAGATTTTACAA CCCAAAAGCTTTTTCACTAAGGGGGGGTGCTCGGCAAAATTTTCTACAATGCGG AAAATTCCTAATGGTGGCCTCCGTAAGAATCGGGGCGGGGCTCAATCCCATGGG GGCCGATCCCCTTTCAAGGCGGGAACCAACTT Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 85 Hình PL 8. Kết BLAST trình tự truy vấn V98_27F Hình 3.6.6. Kết BLAST trình tự truy vấn V98_1525R Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 86 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 87 Phụ lục 4: Thử nghiệm chế phẩm quy mô chậu vại đống ủ Hình PL 9: Thí ngiệm chậu vại Hình PL 10: đống ủ sau 35 ngày ủ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 88 Trước ủ Sau ủ 35 ngày ủ Hình PL11: Đống ủ trước sau 35 ngày ủ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 89 [...]... Khoa học Nông nghiệp Page 1 Với mong muốn áp dụng biện pháp sinh học để xử lý phụ phẩm quả vải sau thu hoạch, tôi tiến hành nghiên cứu đề tài “ Phân lập tuyển chọn vi sinh vật để sản xuất chế phẩm sinh học xử lý phụ phẩm sau thu hoạch quả vải 2 Mục đích nghiên cứu - Phân lập, tuyển chọn được được một số chủng vi sinh có khả năng phân giải mạnh xenluloza, protein, tinh bột từ phụ phẩm sau thu hoạch. .. phụ phẩm sau thu hoạch quả vải 1.1.2.1 Phụ phẩm sau thu hoạch quả vải Phụ phẩm quả vải phát sinh trong cả quá trình thu hoạch và sau thu hoạch Phụ phẩm sau thu hoạch quả vải gồm cành quả, cuống quả, quả bị loại và các quả bị hỏng trong quá trình vận chuyển, tiêu thụ Lá, cành, cuống vải: Trong quá trình thu hoạch, người dân dùng dao sắc cắt tỉa những chùm quả chín Tuy nhiên để được những chùm quả đẹp,... tinh bột từ phụ phẩm sau thu hoạch qua vải để sản xuất chế phẩm sinh học - Xử lý phụ phẩm sau thu hoạch quả vải bằng chế phẩm sinh học 3 Yêu cầu của đề tài - Phân lập được từ 1-2 chủng vi khuẩn, 1-2 chủng xạ khuẩn, 1-2 chủng nấm - Định tên các chủng VSV và lựa chọn được tổ hợp VSV để sản xuất chế phẩm VSV Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 2 Chương 1 TỔNG QUAN... Giang là xử lý phụ phẩm sau thu hoạch quả vải để đảm bảo môi trường cho khu vực Hiện nay có rất nhiều phương pháp đã và đang được áp dụng xử lý phế thải hữu cơ (rơm rạ, tàn dư thực vật, rác thải hữu cơ ) đạt hiệu quả cao, trong đó xử lý phế thải bằng chế phẩm sinh học được áp dụng một cách triệt để và sản xuất chế phẩm sinh học từ vi sinh vật bản địa là phổ biến nhất Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận... khoa học cấp Bộ B2004 – 32 – 66: “ Xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh xử lý tàn sư thực vật trên đồng ruộng thành phân hữu cơ tại chỗ bón cho cây trồng” Đề tài đã phân lập được 8 chủng VSV để làm giống sản suất chế phẩm VSV Đã xây dựng được quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh vật, chế phẩm vi sinh đạt tiêu chuẩn Vi t Nam (TCVN 134B – 1996) Đã xây dựng được quy trình xử lý tàn dư thực vật bằng... ra, các chất hữu cơ khác như axit, vitamin đều giảm 1.1.2.3 Biện pháp xử lý phụ phẩm quả vải sau thu hoạch Hiện nay, một trong các biện pháp được người nông dân sử dụng rộng rãi để xử lý phụ phẩm nông nghiệp nói chung và xử lý phụ phẩm sau thu hoạch quả vải nói riêng là đốt Phụ phẩm được thu gom, phơi khô và đốt hoặc làm nguyên liệu để đun nấu Ưu điểm của biện pháp này là nhanh, đơn giản, dễ làm, chi... pháp khoa học cụ thể nào được đưa ra để xử lý phụ phẩm sau thu hoạch quả vải 1.2 Cơ sở khoa học của quá trình phân giải phụ phẩm sau thu hoạch 1.2.1 Phân giải xenluloza Khái quát về xenluloza Hàng năm có khoảng 30 tỷ tấn chất hữu cơ được cây xanh tổng hợp trên Trái Đất, 30% trong số đó là xenluloza Xenluloza 90% trong bông, 40% trong gỗ Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông... thích ứng pH rộng để làm giống sản xuất chế phẩm VSV phân hủy phế thải sau thu hoạch Cụ thể: Chế phẩm VSV đã rút ngắn thời gian ủ phụ phẩm rơm rạ từ 3 - 4 tháng xuống còn 40 ngày, thời gian ủ phụ phẩm hành tỏi từ 5 - 6 tháng xuống còn 50 ngày, thời gian ủ phụ phẩm rau quả từ 2 - 3 tháng xuống còn 30 ngày Hàm lượng photpho, kali trong các đống ủ thí nghiệm có bổ sung chế phẩm vi sinh vật đều cao hơn trong... dụng các chủng vi sinh vật này để ủ phụ phẩm rau quả và thân lá hoa cho thấy: bổ sung 1% các chủng vi sinh vật vào đống ủ đã làm tăng quá trình phân hủy sinh học các nguyên liệu lên 23,64% so với đống ủ không bổ sung thêm vi sinh vật, do đó rút ngắn thời gian ủ và tăng chất lượng của phân ủ Từ những năm 80 trở lại đây, trên thế giới mà nhất là ở những nước sản xuất cà phê xuất khẩu, vi c nghiên cứu... coi là vùng vải lớn ở miền Bắc Vi t Nam Diện tích trồng vải chiếm 74,2% diện tích trồng cây ăn quả toàn huyện Sản lượng quả vải trồng tại huyện Lục Ngạn thay đổi phụ thu c vào thời tiết từng năm, năm 2012 đạt 80.000 tấn song đến năm 2013 đạt trên 130.000 tấn quả tươi (Sở Công Thương Bắc Giang, 2013) Phụ phẩm sau thu hoạch quả vải gồm cành quả, cuống quả, quả bị loại và các quả bị hỏng trong quá trình . lượng quả vải và tình hình xử lý phụ phẩm sau thu hoạch quả vải 1.1.2.1. Phụ phẩm sau thu hoạch quả vải Phụ phẩm quả vải phát sinh trong cả quá trình thu hoạch và sau thu hoạch. Phụ phẩm sau thu. bột từ phụ phẩm sau thu hoạch qua vải để sản xuất chế phẩm sinh học - Xử lý phụ phẩm sau thu hoạch quả vải bằng chế phẩm sinh học. 3. Yêu cầu của đề tài - Phân lập được từ 1-2 chủng vi khuẩn,. NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VI N NÔNG NGHIỆP VI T NAM  ĐỖ MINH HẠNH PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VI SINH VẬT ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC XỬ LÝ PHỤ PHẨM SAU THU HOẠCH QUẢ VẢI LUẬN