định lượng paclitaxel trong huyết tương thỏ bằng HPLC

Đồng Quỳnh Như i MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ . v DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ VIẾT TẮT vii LỜI CẢM ƠN . viii CHƢƠNG 1. ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 2. TỔNG QUAN 2.1. PACLITAXEL . 2.1.1. Cấu trúc tác động . 2.1.2. Tính chất vật lý dƣợc động học . 2.1.3. Liều lƣợng cách dùng . 2.1.4. Ðộ ổn định bảo quản . 2.2. MÔ HÌNH DƢỢC ĐỘNG NGĂN, NGĂN . 2.2.1. Mô hình dƣợc động ngăn 2.2.2. Mô hình dƣợc động hai ngăn . 2.2.3. Mô hình dƣợc động nhiều ngăn . 10 2.3. DƢỢC ĐỘNG HỌC . 12 2.3.1. Dƣợc động học . 12 2.3.2. Những thông số dƣợc động 13 2.4. MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ DƢỢC ĐỘNG HỌC CỦA PTX . 17 2.5. THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH . 18 2.5.1. Tính phù hợp hệ thống . 19 2.5.2. Tính đ c hiệu 19 2.5.3. Độ độ xác 20 2.5.4. Giới h n định lƣợng dƣới . 20 2.5.5. Đƣ ng chuẩn khoảng tuyến tính . 21 2.5.6. Tỷ lệ thu hồi . 22 Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như ii 2.5.7. Độ ổn định mẫu thử . 23 2.6. KĨ THUẬT CHIẾT TÁCH ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH 25 2.6.1. Kĩ thuật tách 25 2.6.2. Kĩ thuật chiết 26 CHƢƠNG 3. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1. ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 28 3.2. HÓA CHẤT VÀ THUỐC THỬ NGHIỆM 28 3.2.1. Thuốc thử . 28 3.2.2. Thuốc đối chứng 28 3.2.3. Hóa chất dụng cụ thí nghiệm . 29 3.3. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 29 3.3.1. Pha mẫu chuẩn . 30 3.3.2. Phƣơng pháp chiết 30 3.3.3. Điều kiện sắc kí 31 3.3.4. Định lƣợng palitaxel huyết tƣơng thỏ . 32 3.3.5. Quy trình 32 3.3.6. Phƣơng pháp xử lý mẫu 32 3.3.7. Xử lý kết 33 CHƢƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN . 32 4.1. THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG PTX (PTX) BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC VỚI ĐẦU DÒ DÃY DIOT QUANG (PDA) . 32 4.1.1. Điều kiện sắc kí 32 4.1.2. Tính phù hợp hệ thống . 32 4.1.3. Tính đ c hiệu 33 4.1.4. Độ ngày liên ngày . 37 4.1.5. Đƣ ng chuẩn khoảng tuyến tính . 38 4.1.6. Giới h n định lƣợng dƣới . 39 4.1.7. Tỷ lệ thu hồi – Hiệu suất chiết CAR 40 Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như iii 4.1.8. Tỷ lệ thu hồi – Hiệu suất chiết PTX . 41 4.1.9. Độ l p l i độ xác liên ngày 42 4.1.10. Độ ổn định mẫu thử . 43 4.2. KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM XÁC ĐỊNH NỒNG ĐỘ THUỐC GỐC PTX (CHẾ PHẨM STRAGEN 30 MG/5 ML) VÀ THUỐC THỬ PTX DẠNG DUNG DỊCH . 45 4.2.1. Kết thẩm định đƣ ng tuyến tính ngày . 45 4.2.2. Kết thực nghiệm thuốc chứng Stragen 30 mg/5 ml 46 4.2.3. Kết qủa thực nghiệm thuốc thử 49 4.3. BÀN LUẬN 57 CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 59 5.1. KẾT LUẬN . 59 5.2. KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 60 Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như iv DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Thông số tính phù hợp hệ thống . 32 Bảng 4.2 Độ ngày liên ngày . 37 Bảng 4.3 Độ xác LLOQ 39 Bảng 4.4 Tỷ lệ thu hồi hiệu suất chiết CAR . 40 Bảng 4.5 Hiệu suất chiết PTX huyết tƣơng nồng độ . 41 Bảng 4.6 Độ l p l i độ xác liên ngày nồng độ 42 Bảng 4.7 Nồng độ PTX tìm l i sau gi bảo quản autosampler 15 oC 43 Bảng 4.8 Nồng độ PTX tìm l i sau pha mẫu để nhiệt độ phòng gi . 43 Bảng 4.9 Nồng độ PTX đo đƣợc sau chu kì đông rã đông 44 Bảng 4.10 Kết nồng độ thuốc huyết tƣơng thỏ liều mg/kg 46 Bảng 4.11 Nồng độ thuốc gốc PTX huyết tƣơng thỏ (µg/ml) . 47 Bảng 4.12 Các thông số dƣợc động PTX gốc thỏ 49 Bảng 4.13 Nồng độ thuốc thử PTX công thức huyết tƣơng thỏ (µg/ml) 51 Bảng 4.14 Thông số dƣợc động thuốc thử công thức 53 Bảng 4.15 Nồng độ thuốc thử PTX công thức huyết tƣơng thỏ (µg/ml) 55 Bảng 4.16 Thông số dƣợc động thuốc thử công thức 56 Bảng 4.17 So sánh thuốc chứng thuốc thử . 57 Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như v DANH MỤC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ Hình 2.1 Cấu trúc PTX Hình 2.2 Nhân taxan Hình 2.3 Mô hình dƣợc động ngăn. . Hình 2.4 (a) Nồng độ thuốc huyết tƣơng (Cp) theo th i gian, (b) log Cp theo th i gian mô hình dƣợc động ngăn Hình 2.5 Mô hình dƣợc động hai ngăn Hình 2.6 (a) Nồng độ thuốc huyết tƣơng theo th i gian, (b) log Cp theo th i gian mô hình dƣợc động ngăn Hình 2.7 (a) Nồng độ thuốc theo th i gian, (b) log Cp theo th i gian mô hình dƣợc động ngăn. 11 Hình 2.8 Chu trình thuốc thể . 12 Hình 2.9 AUC thuốc . 13 Hình 2.10 Sơ đồ đơn giản hệ thống HPLC 26 Hình 2.11 Các bƣớc trình chiết lỏng – lỏng 27 Hình 2.12 Các bƣớc trình chiết rắn SPE . 28 Hình 3.1 Sơ đồ chiết PTX huyết tƣơng 31 Hình 4.1 Hình sắc kí mẫu chuẩn mẫu thử tự t o 36 Hình 4.2 Đồ thị đƣ ng chuẩn khoảng tuyến tính . 38 Hình 4.3 Đồ thị đƣ ng chuẩn khoảng tuyến tính ngày . 45 Hình 4.4 Đồ thị đƣ ng chuẩn khoảng tuyến tính ngày . 46 Hình 4.5 Biểu đồ nồng độ thuốc PTX đối chiếu huyết tƣơng thỏ theo th i gian . 48 Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như vi Hình 4.6 Biểu đồ nồng độ thuốc PTX đối chiếu trung bình huyết tƣơng thỏ 49 Hình 4.7 Đồ thị đƣ ng tuyến tính ngày . 50 Hình 4.8 Đồ thị biểu diễn nồng độ thuốc PTX công thức huyết tƣơng thỏ 52 Hình 4.9 Đồ thị biểu diễn nồng độ thuốc PTX công thức trung bình huyết tƣơng thỏ . 52 Hình 4.10 Đƣ ng tuyến tính ngày 54 Hình 4.11 Đồ thị biểu diễn nồng độ thuốc PTX công thức huyết tƣơng thỏ 55 Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như vii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ VIẾT TẮT STT Chữ tắt Ý nghĩa Chữ nguyên AS Chất chuẩn AUC Area under curve CAR Carbamazepin Cmax Diện tích dƣới đƣ ng cong Nồng độ thuốc cao huyết tƣơng CrEL H HPLC Cremopher ethanol Chiều cao pic High performance liquid Sắc kí lỏng hiệu cao chromatography IS Internal Standard Nội chuẩn LLE Liquid-Liquid extraction Chiết lỏng – lỏng 10 LLOQ Lower limit of quantitation Giới h n định lƣợng dƣới 11 N 12 PTX Paclitaxel 13 PP Protein precipitation 14 RSD Relative deviation standard 15 S 16 SD Standard deviation Độ lệch chuẩn 17 SPE Solid phase extraction Chiết pha rắn 18 Rt Retention time Th i gian lƣu 19 tmax Số đĩa lý thuyết PTX Độ lệch tƣơng đối Diện tích pic Th i điểm nồng độ thuốc cao huyết tƣơng Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như viii LỜI CẢM ƠN Em xin trân trọng gửi l i cảm ơn đên thầy PGS-TS. Lê Minh Trí, trƣởng môn Hóa Dƣợc, thầy PGS-TS. Trần Mạnh Hùng, trƣởng môn Dƣợc Lý nhiệt tình giúp đỡ hƣớng dẫn chuyên môn kiến thức liên quan giúp em hoàn thành luận văn tốt nhất. Em xin gửi l i cảm ơn đến Ths. Nguyễn Thanh Hà, trƣởng phòng Khoa Học & Đào Tạo, Viện Kiểm Nghiệm thuốc TP Hồ Chí Minh tận tình dẫn, giải đáp thắc mắc t o điều kiện tốt cho em trình làm thực nghiệm t i viện. Xin gửi l i cảm ơn anh chị, thầy cô môn Dƣợc lý anh, chị t i viện kiểm nghiệm thuốc giúp đỡ em từ bƣớc đề tài để có đƣợc kết tốt nhất. Và l i cảm ơn chân thành đến gia đình b n bè động viên, khuyến khích em vƣợt qua lúc khó khăn th i gian thực đề tài. Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như Đặt vấn đề CHƢƠNG 1. ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh ung thƣ vấn đề đƣợc quan tâm hàng đầu giới. Theo ƣớc tính Tổ chức y tế giới hàng năm có khoảng 9-10 triệu ngƣ i mắc bệnh ung thƣ nửa số chết bệnh này. Số bệnh nhân ngày gia tăng năm tỷ lệ mắc bệnh nƣớc nghèo ngày tăng tỷ lệ nƣớc giàu có xu hƣớng giảm. Tỷ lệ mắc bệnh nam nữ khác (nam/nữ 1/3). Các lo i ung thƣ thƣ ng g p ung thƣ phổi, vú, đ i trực tràng, d dày gan, theo thứ tự giảm dần. Ở Việt Nam, tình hình bệnh ung thƣ đáng lo ng i với ƣớc tính năm có khoảng 150000 ngƣ i mắc khoảng 50-70 nghìn ngƣ i chết ung thƣ. Tỷ lệ chết ung thƣ Việt Nam cao giới. Để điều trị bệnh này, áp dụng phƣơng pháp phẫu thuật, x trị, hóa trị hay điều trị kết hợp. Những thuốc trị ung thƣ phổ biến đƣợc xếp vào nhóm (nhóm kháng chuyển hóa, ức chế vi quản tế bào, alkyl hóa, kháng sinh, nội tiết tố, kháng thể cytokin). Trên thị trƣ ng Việt Nam nay, thuốc trị ung thƣ phần lớn thuốc ngo i nhập với giá thành cao. Chính vậy, nhằm mục tiêu giảm giá thành thuốc cho bệnh nhân mà giữ đƣợc hiệu trị liệu tốt nhất, môn Hóa Dƣợc, môn Công Nghiệp Dƣợc – Khoa Dƣợc – đ i học Y Dƣợc Tp. Hồ Chí Minh phối hợp với Viện kiểm nghiệm thuốc Tp. Hồ Chí Minh tiến hành nghiên cứu bào chế thuốc paclitaxel generic d ng dung dịch dầu tiêm tĩnh m ch. Góp phần vào quy trình nghiên cứu, sản xuất thuốc paclitaxel generic d ng dung dịch đông khô, đề tài khóa luận tốt nghiệp” Khảo sát nồng độ thuốc tiêm paclitaxel d ng dung dịch huyết tƣơng thỏ” đƣợc thực với mục tiêu: - Thẩm định quy trình định lƣợng paclitaxel huyết tƣơng thỏ. - So sánh nồng độ paclitaxel huyết tƣơng thỏ chế phẩm Stragen®30 mg/5 ml chế phẩm thuốc tiêm paclitaxel d ng dung dịch. Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như Tổng quan luận văn CHƢƠNG 2. TỔNG QUAN 2.1. PACLITAXEL (PTX) 2.1.1. Cấu trúc tác động[9] Hình 2.1 Cấu trúc PTX (5β,20-Epoxy-1,2α,4,7β,13α-hexahydroxytax-11-en-9one4,10-diacetate2-benzoate13-ester với (2R,3S)-n-benzoyl-3phenyllisoserin) PTX: thuốc chống ung thƣ, thuộc nhóm taxan. Các chất thuộc nhóm taxan đƣợc sử dụng rộng rãi hóa trị liệu. Trong hai chất đƣợc sử dụng nhiều docetaxel (chế phẩm Taxotere) PTX (chế phẩm Taxol). Đây chất nhóm tác động lên tulubin tế bào. PTX đƣợc Viện ung thƣ quốc gia (NCI) Mỹ đánh giá bƣớc tiến quan trọng trị liệu khoảng năm 1960 đƣợc chấp nhận sử dụng từ tháng 12 năm 1992. PTX diterpenoid pseudoalkaloid có công thức phân tử C47H5NO14, trọng lƣợng phân tử 853 Dalton. Để có tác động chống ung thƣ, toàn nhân taxan phải diện cấu Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như Kết bàn luận 53 Bảng 4.14 Thông số dƣợc động thuốc thử công thức AUC0-6 AUC0-∞ Thông số t1/2 (gi ) ka Vd (lít/kg) (µg.gi /ml) (µg.gi /ml) Thỏ 20,12 21,91 1,18 0,59 0,166 Thỏ 19,99 21,81 1,18 0,59 0,165 Thỏ 16,54 18,54 1,32 0,52 0,1654 Thỏ 13,96 15,48 1,25 0,55 0,229 Thỏ 13,61 15,37 1,39 0,50 0,305 Thỏ 13,74 17,18 1,85 0,38 0,215 Trung bình 16,33 18,38 1,36 0,52 0,208 3,08 2,94 0,25 0,08 0,06 0,19 0,16 0,18 0,15 0,27 16,33 ± 2,53 18,38 ± 2,42 1,36 ± 0,21 0,52 ± 0,07 0,208 ± 0,06 Độ lệch chuẩn Độ phân tán Khỏang ƣớc lƣợng Nhận xét: Nồng độ thuốc thử nghiệm PTX huyết tƣơng th i gian đầu cao, sau giảm nhanh bắt đầu ổn định từ th i điểm gi . Tuy nhiên nồng độ thuốc không ổn định thỏ. Khoảng chênh lệch nồng độ đỉnh thỏ lớn, 36,585 – 19,624 µg/ml. Các thông số dƣợc động có chênh lệch thỏ dƣợc động học thuốc thỏ phụ thuộc vào đ c điểm sinh ký thỏ. Tuy nhiên chênh lệch không lớn. Nguyên nhân: Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như - Kết bàn luận 54 Có thể th i gian lấy máu th i điểm chƣa đƣợc đồng lƣợng máu cần lấy lớn (tối thiểu 1,2 ml). Do chênh lệch th i gian lấy máu từ 30 - 90 phút. 4.2.3.2. Khảo sát nồng độ PTX huy t tƣơng công thức bào ch Đƣ ng tuyến tính Nồng độ PTX Nồng độ PTX Tỷ lệ diện tích pic methanol(µg/ml) huyết tƣơng (µg/ml) S/S.IS 0,500 0,484 0,063 1,000 1,014 0,127 2,500 2,183 0,221 25,000 22,711 2,558 50,000 43,886 5,144 y = 0,116x-0,018; R² = 0,999 LLOQ = 0,5 µg/ml Tỷ lệ diện tích pic S/S.iS 6.000 y = 0.1167x - 0.0181 R² = 0.9996 5.000 4.000 3.000 2.000 1.000 0.000 0.000 10.000 20.000 30.000 40.000 50.000 Nồng độ (µg/ml) Hình 4.9 Đƣ ng tuyến tính ngày Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như Kết bàn luận 55 Bảng 4.15 Nồng độ thuốc thử PTX công thức huyết tƣơng thỏ (µg/ml) Th i gian Thỏ1 Thỏ Thỏ TB Khoảng ƣớc lƣợng (phút) (2.0kg) 12,486 (2.0kg) 11,197 (2.0kg) 10,556 (2.0kg) 11,412 11.412±1.277 10 7,841 10,595 6,839 8,426 8,426±2,527 15 4,133 5,815 6,741 5,562 5,562±1,718 30 3,312 1,872 3,855 3,012 3,012±1,331 60 0,875 1,077 1,334 1,096 1,096±0,299 120 0,623 0,834 1,242 0,899 0,899±0,409 240 0,501 0,503 0,537 0,507 0,512±0,028 14.000 Nồng độ (µg/ml) 12.000 10.000 8.000 Thỏ 6.000 Thỏ Thỏ 4.000 2.000 0.000 60 120 180 Thời gian (phút) 240 300 Hình 4.10 Đồ thị biểu diễn nồng độ thuốc PTX công thức huyết tƣơng thỏ theoth i gian Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như Kết bàn luận 56 Bảng 4.16 Thông số dƣợc động thuốc thử công thức Thông số AUC0-4 AUC0-∞ t1/2(gi ) ka Vd (lít/kg) Thỏ 5,19/ml) (µg.gi 5,57 5,84/ml) (µg.gi 6,24 0,92 0,75 0,480 0,94 0,74 0,535 6,98 7,74 0,99 0,70 0,570 Trung bình (2,0 kg) Độ lệch (2,0 kg) 5,91 6,61 0,95 0,73 0,528 0,94 1,00 0,04 0,03 0,05 Độ chuẩn phân tán 0,16 0,15 0,04 0,04 0,09 5,91±2,34 6,61±2,49 0,95±0,09 0,73±0,07 0,528±0,113 Thỏkg) (2,0 Thỏkg) (2,0 Khỏang ƣớc lƣợng Nhận xét: Nồng độ đỉnh huyết tƣơng thấp (trung bình 11,412 µg/ml) so với công thức thuốc (30,589 µg/ml) thuốc chứng (24,837 µg/ml). Nồng độ thuốc giảm m nh gi đầu ổn định từ gi trở đi, đến th i điểm gi gần nhƣ không thuốc huyết tƣơng nữa. Nguyên nhân: Thuốc đƣợc bào chế với tá dƣợc cách pha chế khác với lần thử nghiệm trƣớc nên dƣợc động thuốc có thay đổi. Sử dụng phép kiểm t (thực excel 2007) so sánh thông số dƣợc động thuốc chứng thuốc thử với độ tin cậy 95%, kết đƣợc trình bày bảng sau: Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như Kết bàn luận 57 Bảng 4.17 So sánh thuốc chứng thuốc thử Thông số Thuốc chứng Thuốc thử công thức AUC0-6 AUC0-∞ (µg.gi /ml) (µg.gi /ml) 14,71±2,31 15,70±2,07 1,15±0,04 0,60±0,01 0,251±0,07 16,33±2,53 18,38±2,42 1,36±0,21 0,52±0,07 0,207±0,06 6,61±2,49 0,95±0,09 0,73±0,07 0,528±0,113 Thuốc thử công thức So sánh thuốc chứng thuốc thử công thức So sánh thuốc chứng thuốc thử công thức t1/2(gi ) ka Vd (lít/kg) t -1,27 -2,05 -2,04 2,54 1,91 t0,05 2,45 2,45 2,57 2,57 2,57 t 11,69* 8,66* -8,10* -10,58* t0,05 2,78 3,18 4,30 4,30 Khác biệt có ý nghĩa thống kê t > t0,05 4.3. BÀN LUẬN Phƣơng pháp phân tích định lƣợng thuốc huyết tƣơng sắc kí lỏng hiệu cao đƣợc áp dụng nhiều nghiên cứu Việt Nam nhƣ giới. Tuy nhiên, chƣa có nghiên cứu định lƣợng PTX huyết tƣơng phƣơng pháp Việt Nam. Trong khóa luận này, tiến hành xây dựng quy trình định lƣợng PTX huyết tƣơng dựa theo nghiên cứu Jun-Shik Choi hƣớng dẫn FDA. Theo nhƣ kết thu đƣợc trình thẩm định, thấy việc thay chất chuẩn nội n-butyl p-aminobenzoat carbamazepine đảm Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như 58 Kết bàn luận bảo độ tính xác cho quy trình. Quy trình đ t theo yêu cầu thẩm định FDA áp dụng để định lƣợng PTX huyết tƣơng. Sau trình thực nghiệm khảo sát nồng độ thuốc gốc thuốc thử PTX huyết tƣơng thỏ, nhận thấy hai công thức bào chế PTX có khác biệt so với chế phẩm đối chiếu có dƣợc động học khác nhau. Đối với công thức bào chế 1, thông số dƣợc động AUC0->6, AUC0->∞, t1/2 đƣợc cải thiện, công thức bào chế cho thấy giảm rõ thông số dƣợc động, AUC0->∞, t1/2, ka, Vd. Sở dĩ có khác biệt thay đổi thành phần tỷ lệ tá dƣợc công thức. Trong công thức bào chế 1, tá dƣợc CrEL ethanol khan công thức bào chế 2, thay tá dƣợc gồm hỗn hợp hydroxypropyl-βcyclodextrin, PVP K30, PEG 400, Tween 80 ethanol khan. Điều sở cho việc lựa chọn công thức bào chế thích hợp đế hình thành sản phẩm. Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như 59 Kết bàn luận CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1. KẾT LUẬN - Đã xây dựng thành công quy trình định lƣợng thuốc PTX huyết tƣơng đ t theo yêu cầu FDA đƣợc ứng dụng thực nghiệm. - Đã tiến hành khảo sát nồng độ thuốc chứng thuốc thử PTX (2 công thức) với liều mg/kg thỏ cái. - Công thức bào chế có dƣợc động học tƣơng đƣơng chế phẩm đối chiếu nhƣng có cải thiện thông số dƣợc động AUC0->6, AUC0->∞, t1/2 (độ tin cậy 95%) - Công thức bào chế có dƣợc động học chế phảm bào chế thông số dƣợc động, AUC0->∞, t1/2, ka, Vd. 5.2. KIẾN NGHỊ - Tiếp tục thẩm định độ ổn định dài h n thuốc theo yêu cầu FDA để hoàn thiện quy trình. - Nghiên cứu tiếp tục dƣợc động học thuốc thử công thức lô thỏ khác để có kết luận kh ng định. Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Dƣợc điển Việt Nam IV. 2. Trần Thị Thu Hằng, Dƣợc lực học, Nhà xuất Phƣơng Đông 2012, trang 40-52. 3. Mai Phƣơng Mai, Dƣợc động học, Nhà xuất Y hoc 2012. 4. Amil K. Singla, Alka Garg, Deepika Aggarwal, University Institute of Pharmaceutical Sciences, Panjab University, Chandigarh 160 014, India, “Paclitaxel and its formulations”, Internaitonal Journal of Pharmaceutical 235 (2002), page180(2),179-192. 5. Brouwer et Al., “Mesurement of Fraction Unbound Paclitaxel in Human Plasma”, Drug Metabolism and Disposition, Vol.28, No.10, 2000, pages 1141-1145. 6. Food and Drug Administration, Guidance for Industry “ Bioanalytical Method Validation”, May 2001. 7. N. Martin, J. catalin, M.F. Blachon, A. Durand, “Assay of Paclitaxel (Taxol) in Plasma and Urine by High performance Liquid Chromatography”, Journal of Chromatography B, 709 (1998), pages 281-288. 8. Jun-Shik Choi, Colledge of Pharmacy, Chosun University, Gwang 501-759, Korea, “Pharmacokinetics of paclitaxel in Rabbits with Carbon tetrachloride-Induced Hepatic Failure”, Arch Pharm Res Vol. 25, No. 6, 2002,pages 973-977. 9. Shane Bermingham (B.Sc.), Development of novel extraction and separation methods for the determination of anthracyclines and taxanes simultaneously from biological matrices, Submitted in fulfillment of the requirements for a Master of Science Degree, Dublin City University – School of Chemical Sciences, pages 1418, 23-26. 10. Soraya Dhillon and Kiren Gill, “Basic Pharmacokinetics”, pages 5-8. 11. Ying Wang, Ke-Chun Wu, Bing-Xiang Zhao, Xin Zhao, Xin Wang, Su Chen, ShuFang Nie, Wei-San Pan, Xuan Zhang, Qiang Zhang, “A novel Paclitaxel Microemulsion Containing a Reduced Amount of Cremophor EL: Pharmacokinetic, Biodistribution, and In Vivo Antitumor Efficacy and Safety”, Journal of Biomedicine and Biotechnology, Volume 2011, Article ID 854872,1, 10 pages. PHỤ LỤC Hình sắc kí mẫu huyết tƣơng trắng: Bảng số liệu phân tích sắc kí nồng độ thuốc chứng huyết tƣơng thỏ IS Th i gian lấy Diện tích pic Diện tích pic Diện tích pic máu (phút) (thỏ 1) (thỏ 2) (thỏ 3) 398187 399858 330204 10 390092 424528 346784 15 414679 416719 379924 30 369037 369341 322732 60 369220 363712 339412 120 352478 345398 337684 240 377343 384013 330055 360 439963 440880 444357 PTX Th i gian lấy Diện tích pic Diện tích pic Diện tích pic máu (phút) (thỏ 1) (thỏ 2) (thỏ 3) 953870 953621 884921 10 662179 691346 659954 15 524405 529152 471139 30 294874 294576 201168 60 156127 117099 111252 120 55752 38671 35886 240 25132 17284 25493 360 14426 20559 15714 Bảng số liệu phân tích sắc kí nồng độ thuốc thử bào chế theo công thức huyết tƣơng thỏ IS Th i gian Diện tích Diện tích Diện tích Diện tích Diện tích Diện tích pic (thỏ 1) pic (thỏ 2) pic (thỏ 3) pic (thỏ 4) pic (thỏ 5) pic (thỏ 6) 335280 335005 421843 350206 356380 331273 335992 391158 410832 351178 355891 356545 399699 367826 358668 345284 320834 321801 849912 333901 319438 333644 346954 346731 363162 317816 400146 365016 396441 399656 507947 308641 372934 586087 240 549644 553856 361688 361018 343293 307242 360 376437 378355 357904 351508 332788 383890 lấy máu (phút) 335360 10 333127 15 30 60 120 PTX Th i gian Diện tích Diện tích Diện tích Diện tích Diện tích Diện tích pic (thỏ 1) pic (thỏ 2) pic (thỏ 3) pic (thỏ 4) pic (thỏ 5) pic (thỏ 6) 1193330 1193378 1194263 1066678 657598 965816 10 734283 738990 1092716 721413 583706 319912 15 635166 642683 265858 437299 351143 207159 30 391290 380909 484254 212121 153281 91368 60 130037 129790 100848 65068 106140 61814 120 29466 29502 50876 15146 29564 92099 240 17548 16127 15449 4301 8624 19165 360 12387 13197 11600 3651 4674 21381 lấy máu (phút) Bảng số liệu phân tích sắc kí nồng độ thuốc thử bào chế theo công thức huyết tƣơng thỏ IS Th i gian lấy Diện tích pic Diện tích pic Diện tích pic máu (phút) (thỏ 1) (thỏ 2) (thỏ 3) 314555 342481 313778 10 116928 312731 380091 15 375659 316726 309554 30 360421 343457 406308 60 318273 524778 352408 120 353844 328174 367876 342746 344169 382397 240 PTX Th i gian lấy Diện tích pic Diện tích pic Diện tích pic máu (phút) (thỏ 1) (thỏ 2) (thỏ 3) 452648 441311 380847 10 104879 381029 296483 15 174409 209211 237926 30 132784 68810 175454 60 26757 56481 48492 120 19312 26006 46647 13392 13537 17030 240 [...]... phân bố trong cơ thể ngay lập tức và thuốc đƣợc cân bằng ngay tức thì giữa các mô Do vậy sự thay đổi nồng độ thuốc theo th i gian cho thấy diễn tiến theo một pha Chú ý rằng điều đó không có nghĩa là nồng độ thuốc trong huyết tƣơng (Cp) bằng nồng độ thuốc trong mô Tuy nhiên, sự thay đổi nồng độ thuốc trong huyết tƣơng phản ánh sự thay đổi nồng độ thuốc trong mô Mối quan hệ này đƣợc thể hiện trong sơ... các chất khác có trong mẫu thử Tiến hành: sắc ký mẫu huyết tƣơng trắng, mẫu thử tự t o (mẫu huyết tƣơng chứa chuẩn đối chiếu), và mẫu chuẩn đối chiếu pha trong dung môi t i 3 nồng độ trong ph m vi định lƣợng (trong đó phải có 1 nồng độ gần ho c bằng LLOQ) Yêu cầu: Th i gian lƣu của pic của chất khảo sát trong mẫu tự t o phải tƣơng đƣơng với th i gian lƣu của pic của chất khảo sát trong mẫu đối chiếu,... m vi định lƣợng đƣợc dự đoán trong nghiên cứu thực tế Đƣ ng chuẩn bao gồm từ 6 – 8 điểm (trừ điểm 0) nằm trong ph m vi cần định lƣợng (có cả giới h n định lƣợng dƣới) Tiến hành: chuẩn bị các dung dịch chuẩn đối chiếu pha trong dung môi Thêm các dung dịch này vào trong dịch sinh học để thu đƣợc các dung dịch có nồng độ trong ph m vi định lƣợng Tiến hành sắc ký ít nhất 2 lần cho mỗi dung dịch Xác định. .. l nh trong một th i gian nhất định thì cũng phải chứng minh đƣợc độ ổn định Sau th i gian bảo quản nhất định, độ ổn định sẽ đƣợc kiểm tra bằng cách so sánh độ đáp ứng của dung dịch sau th i gian bảo quản với dung dịch gốc ngay khi đƣợc chuẩn bị 2.5.7.5 Độ ổn định dung dịch sau khi pha Độ ổn định của mẫu sau khi đƣợc xử lý, kể cả th i gian mẫu đƣợc đ t trong bộ phận tiêm mẫu tự động nên đƣợc xác định. .. bố thuốc trong cơ thể Đó là thể tích mà trên lý thuyết lƣợng thuốc đƣa vào cơ thể phải đƣợc phân tán đế có cùng nồng độ trong huyết tƣơng của thuốc này Thể tích phân bố biểu kiến là hệ số giữa tổng lƣợng thuốc đƣa vào cơ thể (DxF) và nồng độ thuốc trong huyết tƣơng (Cp) Vd= V càng lớn, sự phân bố càng m nh Ý nghĩa: từ Vd có thể tính đƣợc các trị số: Liều dùng để đ t nồng độ mong muốn Cp trong huyết tƣơng:... hạn định lƣợng dƣới (lower limit of quantitation, LLOQ) Định nghĩa: Giới h n định lƣợng dƣới là lƣợng thấp nhất của chất cần thử có trong mẫu thử còn có thể xác định đƣợc với độ đúng và độ chính xác thích hợp Điểm thấp nhất của đƣ ng chuẩn nên đƣợc chấp nhận nhƣ giới h n định lƣợng dƣới nếu nhƣ đáp ứng tín hiệu của nó so với đáp ứng của mẫu trắng ít nhất bằng 5 lần (tỷ số S/N  5), và có thể xác định. .. pháp định lƣợng PTX (Taxol) trong huyết tƣơng và nƣớc tiểu bằng HPLC để ứng dụng trong nghiên cứu dƣợc động học của paditaxel trên trẻ em Sử dụng nội chuẩn là docetaxel, chiết bằng phƣơng pháp lỏng – lỏng với dung môi diethyl ether, cột sắc kí pha đảo, bƣớc sóng 227 nm; kết quả thu đƣợc th i gian lƣu của PTX và docetaxel lần lƣợt là 7,7 và 6,7 phút, vùng tuyến tính từ 25 – 1000 ng/ml với giới h n định. .. PTX là 25 và 40 ng/ml trong huyết tƣơng và trong nƣơc tiểu Phƣơng pháp này thích hợp cho những nghiên cứu dƣợc động của PTX ở trẻ em trong pha I của thử nghiệm lâm sàng.[7] Brouwer và cộng sự (2000) đã xây dựng một phƣơng pháp định lƣợng PTX (Taxol) d ng không kết hợp trong huyết tƣơng ngƣ i khi dùng thuốc d ng tiêm với tá dƣợc CrEl Nghiên cứu trên 3 bệnh nhân nhận liên tiếp trong 3 tuần PTX với những... định Độ ổn định của thuốc, nên đƣợc đánh giá trong khoảng th i gian phân tích dự kiến tất cả các mẫu, sẽ đƣợc thẩm định bằng cách xác định nồng độ của thuốc dựa vào đƣ ng cong chuẩn Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - 2013 Đồng Quỳnh Như 25 Tổng quan luận văn 2.6 KĨ THUẬT CHIẾT TÁCH ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH 2.6.1 Kĩ thuật tách [9] Hiện nay có rất nhiều kĩ thuật tách áp dụng trong quy trình định lƣợng... thử tự t o ít nhất là t i 2 nồng độ trong ph m vi định lƣợng với 6 lần tiêm mẫu liên tiếp ứng với mỗi nồng độ Yêu cầu: quy trình đ t tính tƣơng thích hệ thống khi các thông số sắc ký trong cả hai mẫu mẫu đối chiếu và mẫu thử tự t o phải đ t theo yêu cầu của quy định đối với quy trình định lƣợng 2.5.2 Tính đ c hiệu Định nghĩa: tính đ c hiệu là khả năng cho phép xác định chính xác và đ c hiệu chất cần . o CPTX  mM trong ethanol, 20 mM trong methylen chlorid     trong isoprapanol. [4]  in. CAR Carbamazepin 4 Cmax N thuc cao nht trong huyt  5 CrEL Cremopher và ethanol 6 H Chiu cao pic 7 HPLC High performance liquid chromatography Sc kí lng. LLOQ Lower limit of quantitation Gii hi 11 N S t 12 PTX Paclitaxel PTX 13 PP Protein precipitation 14 RSD Relative deviation standard  li