bài giảng chiết xuất và pha loãng huyết thanh full

Buổi KHÁNG SINH ĐỒ LẤY MÁU CHIẾT XUẤT HUYẾT THANH CÁCH PHA LOÃNG HUYẾT THANH BS. Trần Minh Anh Đào BM. Vi sinh KHÁNG SINH ĐỒ Mục đích: o Xác định độ nhạy cảm/hiện tượng đề kháng vi khuẩn một/nhiều loại kháng sinh o Kiểm tra thuốc kháng sinh tác dụng với vi khuẩn gây bệnh o Tìm tính kháng sinh dược liệu→điều trị KHÁNG SINH ĐỒ Nguyên tắc: vi khuẩn(VK) ↓ tiếp xúc [ kháng sinh] định (+) Mọc Đề kháng/VK (-) Không mọc Nhạy/VK KHÁNG SINH ĐỒ Phương pháp: Phương pháp đĩa giấy Phương pháp pha loãng liên tiếp (MIC) (Kirby – Bauer) Nguyên tắc [Kháng sinh] thích hợpđược tẩm đĩa giấy→xác định Độ pha loãng kháng sinh độ nhạy : vòng vô khuẩn Sự tăng trưởng VK [kháng sinh]min ức chế VK phát triển Vật liệu Môi trường Mueller – Hinton /NA Môi trường lỏng Nutrient Broth (NB) Đĩa giấy tẩm KS với nồng độ thích hợp Kháng sinh pha loãng : 200 μg/ml Chuẩn độ đục VK cần làm: 108 Canh cấy VK trẻ 2-6 ủ VK/ml, ủ 37°C/2-5 10 ống nghiệm vô trùng Tampon, kẹp Pipette: 1ml, 5ml KHÁNG SINH ĐỒ Phương pháp: Phương pháp đĩa giấy Phương pháp pha loãng liên tiếp (MIC) (Kirby – Bauer) Trải VK cần làm mặt thạch Mueller hay NA Để thạch khô, đặt loại đĩa KS cách bờ hộp thạch: 1cm Ủ ấm: 37°C/24 → VK nhạy, kháng : đường kính vòng vô khuẩn/ đường kính chuẩn Phương pháp Đánh số thứ tự ống nghiệm:1-10 Lấy 0,5 ml môi trường dinh dưỡng lỏng (5ml): ống nghiệm 210 Lấy 1ml KS pha loãng (1ml): 0,5 ml cho ống 1, 2→ trộn ống hút 0,5 ml cho vào ống Làm tương tự đến ống 9, hút 0,5 ml/ống bỏ. Ống 10 KS pha loãng Hút 5ml canh cấy VK(5ml) cho 0,5ml ống 1-10 Lắc đều, ủ 37°C/24 → ống cuối cùng: MIC KHÁNG SINH ĐỒ MTDD(ml) 0,5 KSPL 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 (ml) 10 ống chứng ống chứng KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ  Lấy máu để chiết xuất huyết Chuẩn bị dụng cụ Cách lấy máu: Lấy từ – ml máu chiết huyết Quay ly tâm Tủ ấm/ tủ lạnh KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ  Lấy máu để chiết xuất huyết Chú ý: Khi chiết xuất huyết tránh làm vỡ hồng cầu (tránh tạo bọt) Lấy máu thời gian bệnh → ∆ xác KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ Phản ứng Bệnh ngưng kết Thời điểm lấy máu Kết (+) Tuần thứ bệnh (ngày7- ≥1/100 10) Lần 2: lần 1=4:1 Widal Thương hàn Weil-Felix Sốt mò oLần 1: [...]... Cách pha loãng huyết thanh: nhiều cách Theo hệ số 2/dung dịch NaCl 0.9% 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32… Tử: mẫu =huyết thanh: tổng lượng dịch Tổng lượng dịch= huyết thanh+ nước muối 1:2 = 1 huyết thanh + 1 nước muối sinh lý KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ Kỹ thuật pha loãng: Tùy từng phản ứng → độ loãng đầu tiên Phản ứng Độ pha loãng Widal 1:50 Weil – Felix 1:10 ∆ bệnh do virus 1:10 Pha loãng HT với hệ số 2, và bắt...ống chứng ống chứng KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ  Lấy máu để chiết xuất huyết thanh Chuẩn bị dụng cụ Cách lấy máu: Lấy từ 2 – 3 ml máu chiết huyết thanh Quay ly tâm Tủ ấm/ tủ lạnh KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ  Lấy máu để chiết xuất huyết thanh Chú ý: Khi chiết xuất huyết thanh tránh làm vỡ hồng cầu (tránh tạo bọt) Lấy máu đúng thời gian của bệnh → ∆ chính... ∆ bệnh do virus 1:10 Pha loãng HT với hệ số 2, và bắt đầu 1:10 như sau: Độ loãng của huyết thanh Ống Stock Ống 1 Ống 2 Ống 3 Ống 4 Ống 5 1:10 Thành phần 1:20 1:40 1:80 1:160 NaCl 0,9%(ml) 4ml 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 HT(ml) 1ml 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 5ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1:5 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1/5x 1/5x 1/5x 1/5x Tổng V Độ loãng cuối cùng 1/5x0,5/1=1/5x(1/2 (1/5) ) 1 (1/2) 2 (1/2) 3 (1/2) 4 (1/2)... tuần 4 Martin - Pettit Sốt vàng da .  Lấy máu để chiết xuất huyết thanh Chuẩn bị dụng cụ Cách lấy máu: Lấy từ 2 – 3 ml máu Quay ly tâm Tủ ấm/ tủ lạnh chiết huyết thanh KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ  Lấy máu để chiết xuất huyết thanh Chú. lượng dịch= huyết thanh+ nước muối 1:2 = 1 huyết thanh + 1 nước muối sinh lý KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ  Kỹ thuật pha loãng: Tùy từng phản ứng → độ loãng đầu tiên Phản ứng Độ pha loãng Widal 1:50 Weil. rõ rệt, phản ứng huyết thanh đặc hiệu là Martin - Pettit  Cách pha loãng huyết thanh: nhiều cách Theo hệ số 2/dung dịch NaCl 0.9% 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32… Tử: mẫu =huyết thanh: tổng lượng