bài giảng chiết xuất và pha loãng huyết thanh

KHÁNG SINH ĐỒ LẤY MÁU CHIẾT XUẤT HUYẾT THANH CÁCH PHA LOÃNG HUYẾT THANH BS.. KHÁNG SINH ĐỒMục đích: o Xác định độ nhạy cảm/hiện tượng đề kháng của vi khuẩn đối với một/nhiều loại kháng

KHÁNG SINH ĐỒ LẤY MÁU CHIẾT XUẤT HUYẾT THANH

CÁCH PHA LOÃNG HUYẾT THANH

BS Trần Minh Anh Đào

BM Vi sinh

Buổi 6

KHÁNG SINH ĐỒ

Mục đích:

o Xác định độ nhạy cảm/hiện tượng đề kháng của vi khuẩn đối với một/nhiều loại kháng sinh

o Kiểm tra thuốc kháng sinh còn tác dụng với

vi khuẩn gây bệnh

o Tìm tính kháng sinh của các dược liệu→điều trị

KHÁNG SINH ĐỒ

Nguyên tắc:

vi khuẩn(VK)

↓ tiếp xúc [ kháng sinh] nhất định

Đề kháng/VK Nhạy/VK

KHÁNG SINH ĐỒ

Phương pháp:

Phương pháp đĩa giấy

(Kirby – Bauer) Phương pháp pha loãng liên tiếp (MIC)

Nguyên

tắc

[Kháng sinh] thích hợpđược tẩm trong

đĩa giấy→xác định độ nhạy : vòng

vô khuẩn

Độ pha loãng của kháng sinh

Sự tăng trưởng VK

[kháng sinh] min ức chế VK phát triển

Vật liệu

Môi trường Mueller – Hinton /NA

Đĩa giấy tẩm KS với nồng độ thích hợp

Chuẩn độ đục của VK cần làm:

108 VK/ml, ủ 37°C/2-5 giờ

Tampon, kẹp

Môi trường lỏng Nutrient Broth (NB)

Kháng sinh pha loãng : 200 μg/ml

Canh cấy VK trẻ 2-6 giờ ủ

10 ống nghiệm vô trùng

Pipette: 1ml, 5ml

KHÁNG SINH ĐỒ

Phương pháp:

Phương pháp đĩa giấy

(Kirby – Bauer) Phương pháp pha loãng liên tiếp (MIC)

Phương

pháp

Trải đều VK cần làm trên mặt thạch Mueller hay NA

Để thạch khô, đặt mỗi loại 1 đĩa

KS cách bờ hộp thạch: 1cm

Ủ ấm: 37°C/24 giờ → VK nhạy, kháng : đường kính vòng vô khuẩn/ đường kính chuẩn

Đánh số thứ tự ống nghiệm:1-10

Lấy 0,5 ml môi trường dinh dưỡng lỏng (5ml): ống nghiệm 2-10

Lấy 1ml KS pha loãng (1ml): mỗi 0,5

ml cho ống 1, 2→ trộn đều ống 2 rồi hút 0,5 ml cho vào ống 3

Làm tương tự đến ống 9, hút 0,5 ml/ống 9 bỏ

Ống 10 không có KS pha loãng

Hút 5ml canh cấy VK(5ml) cho 0,5ml mỗi ống 1-10

Lắc đều, ủ 37°C/24 giờ → ống trong cuối cùng: MIC

KHÁNG SINH ĐỒ

0,5

MTDD(ml)

0,5

0,5

KSPL

0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

ống

chứng

ống chứng

KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ

 Lấy máu để chiết xuất huyết thanh

Chuẩn bị dụng cụ

Cách lấy máu:

Lấy từ 2 – 3 ml máu

Quay ly tâm Tủ ấm/ tủ lạnh

chiết huyết thanh

KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ

 Lấy máu để chiết xuất huyết thanh

Chú ý:

Khi chiết xuất huyết thanh tránh làm vỡ hồng cầu (tránh tạo bọt)

Lấy máu đúng thời gian của bệnh

→ ∆ chính xác

KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ

Phản ứng

ngưng kết Bệnh Thời điểm lấy máu Kết quả (+)

Widal Thương hàn Tuần thứ 2 của bệnh (ngày7-10) ≥1/100 Lần 2: lần 1=4:1

Weil-Felix Sốt mò

oLần 1:

<ngày10/bệnh

oLần 2: tuần 3/

tuần 4

≥ 1/160(làm 1 lần) lần 2: lần 1=4:1

Martin - Pettit Sốt vàng da <10 ngày

KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ

Rickettsia orientalis (sốt mò): là sốt kéo dài 2-3 tuần

 Weil-Felix (không đặc hiệu):

 Có biểu hiện lâm sàng đầy đủ, phản ứng Weil – Felix (-)

 Hiệu giá ngưng kết không cao

Leptospira: không kéo dài quá 10 ngày, không bao giờ có vết loét, thường có tổn thương gan, thận rõ rệt, phản ứng huyết thanh đặc hiệu là Martin - Pettit

Cách pha loãng huyết thanh: nhiều cách

1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32…

Tử: mẫu=huyết thanh: tổng lượng dịch

Tổng lượng dịch= huyết thanh+nước muối

1 : 2 = 1 huyết thanh + 1 nước muối sinh lý KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ

Kỹ thuật pha loãng:

Tùy từng phản ứng → độ loãng đầu tiên

Phản ứng Độ pha loãng

Weil – Felix 1:10

∆ bệnh do virus 1:10

KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ

Pha loãng HT với hệ số 2, và bắt đầu 1:10 như sau:

Thành

phần

Ống Stock

Độ loãng của huyết thanh

Ống 1 1:10

Ống 2 1:20

Ống 3 1:40

Ống 4 1:80

Ống 5 1:160 NaCl

0,9%(ml)

HT(ml)

Tổng V

Độ loãng

cuối

cùng

4ml

5 ml

0,5

1:5 ( 1 /5)

1:10

1 /5x 0,5 / 1 = 1/5x(1/2)1

1:20 1/5x (1/2)2

1:40 1/5x (1/2)3

1:80 1/5x (1/2)4

1:160 1/5x (1/2)5

0,5

0,5 0,5 0,5 0,5

1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml

Chúc các em h c t t ọ ố