PHƯƠNG PHÁP NHUỘM ĐẶC BIỆT LẤY MÁU CHIẾT XUẤT HUYẾT THANH CÁCH PHA LOÃNG HUYẾT THANH

NHA BÀO• Vi khuẩn có khả năng hình thành 1 cấu trúc nghỉ gọi là: nội bào tử hay nha bào • Mỗi tế bào chỉ làm phát sinh 1 nội bào tử • Những vi khuẩn có khả năng sinh nha bào thuộc giống:

PHƯƠNG PHÁP NHUỘM ĐẶC BIỆT LẤY MÁU CHIẾT XUẤT HUYẾT THANH

CÁCH PHA LOÃNG HUYẾT THANH

BS Trần Minh Anh Đào

BM Vi sinh

Buổi 7

NHA BÀO

• Vi khuẩn có khả năng hình thành 1 cấu trúc nghỉ gọi là: nội bào tử hay nha bào

• Mỗi tế bào chỉ làm phát sinh 1 nội bào tử

• Những vi khuẩn có khả năng sinh nha bào thuộc giống: Bacillus , Clostridium , Desulfotomaculum, Sporolactobacillus, Thermoactinomyces, Sporosarcina, …

NHA BÀO

• Bào tử có thể nằm ở giữa, đầu mút hay gần đầu nút tùy theo loài

Vị trí và hình thái của nội bào tử

(1, 2: Bào tử không làm biến dạng tế bào nằm chính tâm hay lệch tâm; 3-6: Bào tử làm biến dạng tế bào một đầu, chính tâm, nằm lệch tâm hay một bên).

NHA BÀO

o C perfringens , ban đầu có tên C welchii , là nguyên nhân gây ra một loạt các hội chứng khác nhau, từ ngộ độc thức ăn cho đến bệnh hoại thư sinh hơi Loài này cũng sản sinh ra độc tố ruột huyết gây ra bệnh nhuyễn thận ở cừu và dê.Lợi ích của C perfringens là thay thế nấm men trong phương pháp bánh mì muối

o C tetani , gây ra bệnh uốn ván

NHA BÀO

Bào tử:

• 1 vi khuẩn dinh dưỡng→1 bào tử

• Bào tử hình thành: Vi khuẩn ở ẩn (gần như không hoạt động theo năm-hàng chục năm)

• Cấu tạo bào tử:

Lớp áo: Protein sừng không thấm nước, tránh bị tác động bởi tia cực tím, enzym (lyzozyme, protease, )

Lớp vỏ: peptidoglycan có phân tử calcium dipicolinate

(DPA-Ca) →lớp vỏ cứng chắc

o có tính thấm cao với nước →loại bỏ nước khỏi tế bào

→kháng nhiệt, kháng bức xạ, ức chế hoạt động của

enzym bên trong lõi

NHA BÀO

1 Chuẩn bị:

a Dụng cụ, thiết bị:

- Phiến kính (slide), KHV quang học nền sáng, dầu soi kính.

- Đèn cồn, nước cất, que cấy đầu vòng, giấy lọc, cốc bese 500ml, giá đỡ, chậu rửa, bếp điện

1 Chuẩn bị:

b Vật liệu, hóa chất:

- Thuốc nhuộm:

+ Dung dịch lục malachite 5% Hòa tan malachite vào cồn

95 0 , khuấy cho tan, sau đó nhỏ thuốc nhuộm vào ly

thủy tinh màu tối có nút mài

+ Dung dịch safranin O 2,5%, trước khi dùng pha với

nước cất theo tỉ lệ 1:5 (vol/vol) để có dung dịch 0,5%

Hoặc chuẩn bị sẵn dung dịch Fuchsin ziehl: fuchsin

kiềm 1g, phenol 5g, ethanol, 90% 10 ml, nước cất

200 ml (hòa tan fuchsin với ethanol; hòa tan phenol với

nước cất sau đó trộn lại)

NHA BÀO

2 Nguyên tắc nhuộm:

• Khi dùng thuốc nhuộm có hoạt tính mạnh lục malachite

với tiêu bản có đun nóng 5- 10 ph, thuốc xâm nhập vào nội bào tử và làm chúng nhuộm màu lục Khi rửa vết bôi bằng nước cất các tế bào dinh dưỡng sẽ bị mất màu còn

bào tử sẽ giữ màu lục Khi nhuộm bổ sung bằng đỏ safranin hay fuchsin sẽ làm phần bao quanh bào tử bắt màu phân biệt (màu đỏ hồng)

NHA BÀO

• Bacillus subtilis: bào tử bắt màu xanh, tế bào chất bắt

màu hồng

NHA BÀO

XOẮN KHUẨN

Xem trực tiếp

Nhuộm thấm bạc

Nhuộm xoắn khuẩn: Leptospirae

* Phương pháp Fontana-Tribondeau: Nhuộm Nitrate

- Hút 10ml AgNO 3 1% cho vào ống nghiệm để dành.

- Cho ammonia 10% vào phần AgNO 3 1% từng giọt một vừa nhỏ vừa lắc để làm tan chất tủa vừa hiện

ra rồi biến mất và dung dịch trong trở lại.

- Lại cho dung dịch AgNO 3 từng giọt vào cho đến khi dung dịch trở nên đục trở lại

XOẮN KHUẨN

2 Phương pháp nhuộm:

• Làm phết vi khuẩn để khô ngoài

2 Phương pháp nhuộm:

• Phủ dung dịch AgNO3 để vài giây rồi bỏ, phủ dung dịch AgNO3 lên hơ lửa cho đến khi miếng lam bốc khói và màu nâu óng ánh kim loại (30'')

• Rửa nước - để khô - xem vật kính dầu

 Kết quả: Leptospira sẽ có màu hơi

nâu đen trên nền màu nâu vàng.

XOẮN KHUẨN

* Phương pháp violet de gentian

• Tiêu bản để khô tự nhiên, không cố định

• Nhỏ dung dịch A, hơ nóng vừa bốc hơi thì ngưng - lập lại như vậy trong vòng 5 phút Rửa nước ,vẩy để khô

• Nhỏ dung dịch B, hơ nóng vừa bốc hơi thì ngưng - lập lại như vậy trong 5 phút.Rửa nước ,vẩy ráo

XOẮN KHUẨN

* Phương pháp nhuộm âm bản

* Phương pháp nhuộm âm bản

2 Các bước tiến hành 

• Lấy vi khuẩn hoà vào giọt nước trên phiến kính.

• Nhỏ thêm 1 giọt mực tàu, trộn đều Dùng cạnh lamen dàn mỏng vết bôi, làm khô trong không khí.

• Cố định vết bôi bằng cách nhỏ metanol lên vết bôi, giữ trong 1 phút.

• Thêm dần dần dung dịch Safranin 0,5% lên vết bôi

để rửa metanol, sau đó giữ trong 30 giây để nhuộm lại, rửa nước, thấm khô.

• Soi kính: dùng vật kính dầu 100×

XOẮN KHUẨN

• Phương pháp nhuộm âm bản

chiết huyết thanh

KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ

 Lấy máu để chiết xuất huyết thanh

Phản ứng

ngưng kết Bệnh Thời điểm lấy máu Kết quả (+)

Widal Thương hàn Tuần thứ 2 của bệnh (ngày7-10) ≥1/100Lần 2: lần 1=4:1

Martin - Pettit Sốt vàng da <10 ngày

KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ

Rickettsia orientalis (sốt mò): là sốt kéo dài 2-3 tuần

Weil-Felix (không đặc hiệu):

 Có biểu hiện lâm sàng đầy đủ, phản ứng Weil – Felix (-)

 Hiệu giá ngưng kết không cao

Leptospira: không kéo dài quá 10 ngày, không bao giờ có vết loét, thường có tổn thương gan, thận rõ rệt, phản ứng huyết thanh đặc hiệu là Martin - Pettit

 Cách pha loãng huyết thanh: nhiều cách

Theo hệ số 2 /dung dịch NaCl 0.9%

1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32…

Tử: mẫu=huyết thanh: tổng lượng dịch

Tổng lượng dịch= huyết thanh+nước muối

KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ

 Kỹ thuật pha loãng:

Tùy từng phản ứng → độ loãng đầu tiên

Pha loãng HT với hệ số 2, và bắt đầu 1:2 như sau:

Ống 31:8

Ống 41:16

Ống 51:32

Pha loãng HT với hệ số 2, và bắt đầu 1:2 như sau:

Ống 31:8

Ống 41:16

Ống 51:32