Phương pháp nhuộm tế bào

Phương pháp nhuộm tế bào 3.1 Nhuộm Giemsa Là phương pháp hay dùng thao tác đơn giản, thời gian tiến hành nhanh tiết kiệm giá thành nên dùng rộng rãi Tuy nhiên để phương pháp nhuộm đạt kết đòi hỏi số điểm cần ý: - Tiêu phải để bay hoàn toàn chất cố định - Dụng cụ pha chế phải - Nước cất lần (ở nơi xa nước cất dùng nước mưa nước suối cần đun sôi lọc vài lần dùng tạm) Nhuộm Tiến hành: - Nhúng tiêu vào nước cất cho ướt - Phủ dung dịch Giemsa pha loãng 1/10 15’ - Đổ thuốc nhuộm - Rửa nhẹ vòi nước chảy (mặt sau tiêu bản) - Để khô tiêu (có thể dùng quạt gió cho nhanh ) Kết : Nhân tế bào màu tím đỏ Bào tương tế bào xanh da trời Bào tương bạch cầu toan màu vàng nhạt Hồng cầu màu xám Mặc dù vậy, phương pháp nhuộm Giemsa không thấy rõ chi tiết nhân, màng nhân, chất nhiễm sắc v.v Nhuộm Pha chế dung dịch: + Hematoxylin Harris: Hematoxylin Cồn tuyệt đối Alum potassium hay ammonium Nước cất Oxyt thuỷ ngân Acid acetic lạnh 5g 50 ml 100g 1000 ml 2,5 g 20 ml Dùng bình chứa 2000 ml để hoà tan alum nước cất cách đun nóng Hoà tan hematoxylin cồn vào cốc nhỏ Lắc mạnh để hematoxylin tan hết trộn dung dịch vào Đun sôi dung dịch nhanh Lấy dung dịch khỏi bếp cho oxyt thuỷ ngân vào Tiếp tục đun lại dung dịch có màu tím thẫm Lấy dung dịch khỏi bếp làm lạnh đột ngột Sau cho acid acetic vào Lọc trước dùng Nhuộm +Dung dịch Orange G: Orange G Cồn 95 Acid phosphotungstic 0,5 g 100 ml 0,015 g + Hỗn hợp EA50 Verte lumière jaunâtre 0,375 g Brun Bismarck 0,4 g Eosin jaunâtre 2,5 g Nước cất 50 ml Cồn 960 609 g Methanol absolu 160 g Dung dịch acid phosphotungstic cồn etanol 50 (1,7 g ml) ml Lithium carbonat bão hòa ml Acid acetic glacial ml Ngoài phương pháp nhuộm nói trên, người ta nhuộm Gram (phát vi khuẩn Gram dương Gram âm) trực khuẩn kháng cồn kháng toan (BK BH) hay nhuộm Kwik - Diff Hoặc nhuộm Wright – Giemsa Và ngày người ta nhuộm thành công hoá tế bào miễn dịch (Cytoimmunochemical) XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN! [...]... Nhuộm 3.2 Nhuộm hematoxylin-eosin Là phương pháp nhuộm phối hợp 2 phẩm nhuộm : Hematoxylin nhuộm nhân tế bào và Eosin nhuộm bào tương tế bào Tiến hành : - Tiêu bản rửa nước chảy 1’ - Nhuộm nhân trong dung dịch Alum Hematoxylin tuỳ ý từ 3-5’ - Rửa nước chảy 5’ - Biệt hoá trong dung dịch cồn acid... nước chảy 5’ - Nhuộm bào tương trong dung dịch Eosin 3-5’ - Rửa qua nước - Loại nước bằng cồn tuyệt đối Làm trong bằng xylen Gắn Baume Nhuộm Kết quả: Nhân tế bào màu xanh đến xanh đen Bào tương hồng đến đỏ Hồng cầu đỏ đậm Ưu điểm của phương pháp này là tiêu bản giữ được lâu và thấy rõ được các chi tiết của nhân và tế bào Nhuộm 3.3 - Nhuộm Papanicolaou 3.3.1 - Nguyên tắc: Kết hợp một phẩm nhuộm nhân bằng... 900 30” mỗi bể - Nhuộm trong dung dịch Orange G 90” - Nhúng trong 2 bể liên tiếp cồn 950 30” mỗi bể - Nhuộm trong dung dịch đa sắc EA50 của Papanicolaou 90’’ - Nhúng qua 3 bể cồn 950 30” mỗi bể - Chuyển vào cồn tuyệt đối - Chuyển vào hỗn hợp cồn/xylen tỷ lệ 1:1 rồi vào xylen và gắn Baume Nhuộm 3.3.3 - Kết quả : - Nhân tế bào - Bào tương của các tế bào ưa acid - Bào tương của các tế bào ưa bazơ xanh... nhân bằng hematoxylin Harris và một phẩm nhuộm bào tương bởi Orange G và một phẩm nhuộm chủ yếu là Verte lumière , nâu Bismarck và Eosin (hỗn hợp đa sắc EA50 của Papanicolaou) Từ khá lâu, phương pháp này được chọn để nhuộm các tế bào ung thư Nhuộm 3.3.2 - Các bước tiến hành: - Tiêu bản nhúng liên tục trong cồn 900, 800, 500 rồi nước cất 2 lần x 30’ mỗi bể - Nhuộm nhân trong hematoxylin Harris 3 - 6... carbonat bão hòa 5 ml Acid acetic glacial 1 ml Ngoài các phương pháp nhuộm nói trên, người ta còn nhuộm Gram (phát hiện các vi khuẩn Gram dương và Gram âm) hoặc các trực khuẩn kháng cồn kháng toan (BK hoặc BH) hay nhuộm Kwik - Diff Hoặc nhuộm Wright – Giemsa Và ngày nay người ta còn nhuộm thành công cả hoá tế bào miễn dịch (Cytoimmunochemical) XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN! ... trước khi dùng Nhuộm +Dung dịch Orange G: Orange G Cồn 95 Acid phosphotungstic 0,5 g 100 ml 0,015 g + Hỗn hợp EA50 Verte lumière jaunâtre 0,375 g Brun Bismarck 0,4 g Eosin jaunâtre 2,5 g Nước cất 50 ml Cồn 960 609 g Methanol absolu 160 g Dung dịch acid phosphotungstic trong cồn etanol 50 0 (1,7 g trong 5 ml) 5 ml Lithium carbonat bão hòa 5 ml Acid acetic glacial 1 ml Ngoài các phương pháp nhuộm nói trên,... xylen và gắn Baume Nhuộm 3.3.3 - Kết quả : - Nhân tế bào - Bào tương của các tế bào ưa acid - Bào tương của các tế bào ưa bazơ xanh xám hoặc tím màu hồng đỏ hoặc vàng xanh sáng đôi khi xanh ve sẫm Nhuộm Pha chế các dung dịch: + Hematoxylin Harris: Hematoxylin Cồn tuyệt đối Alum potassium hay ammonium Nước cất Oxyt thuỷ ngân Acid acetic lạnh 5g 50 ml 100g 1000 ml 2,5 g 20 ml Dùng bình chứa 2000 ml