bài giảng pha loãng huyết thanh

dsfdsgfd

THỰC TẬP BUỔI 5

MỤC TIÊU

 Trình bày được ý nghĩa và thực hiện chính xác các bước làm kháng sinh đồ.

 Biết cách đọc kết quả kháng sinh đồ

 Trình bày đúng các thao tác chiết xuất huyết

thanh để làm xét nghiệm vi sinh

 Trính bày được phương pháp pha loãng huyết thanh.

KHÁNG SINH ĐỒ

 MỤC ĐÍCH:

1. Tìm sự nhạy cảm và sự đề kháng của VK đối với kháng sinh

2. Kiểm tra xem thuốc kháng sinh còn tác dụng

3. Thăm dò, điều tra tính kháng sinh của dược liệu

 NGUYÊN TẮC THỰC HIỆN:

 VK mọc  VK kháng lại loại KS đó

 VK không mọc  VK nhạy với loại KS đó

 PHƯƠNG PHÁP:

1. PP đĩa giấy ( PP Kirby – Bauer): định tính

2. PP pha loãng MIC ( PP tìm nồng độ ức chế tối thiểu): định lượng

 PP đĩa giấy ( Kirby – Bauer)

 Nguyên tắc: khuếch tán

K S

 CÁCH THỰC HIỆN:

Ống

VK đã

chuẩn

độ đục

1 cm

37 0 C/24h

Mt NA hay MHA

TÊN KHÁNG SINH

KÝ HIỆU

NỒN

G ĐỘ mg

ĐƯỜNG KÍNH (mm) Thạch Mueller Hinton

Thạch thường (NA) nhạy cảm Kháng Trung gian Nhạy cảm

Bacill ( G- ) ≤ 11 12-13 ≥ 14  

Cocci ( G+) ≤ 20 21-28 ≥ 29  

Staphylococci ≤ 20 21-28 ≥ 29 Như thạch MH  

Vi trùng

Cephalexin X 30 ≤ 14 15-17 ≥ 18  

Oxacillin M 01 ≤ 9 10-13 ≥ 14  

Gentamycin G 10 ≤ 12 ≥ 13 10  

Kanamycin K 30 ≤ 13 14-17 ≥ 18 14  

Neomycin N 30 ≤ 12 13-16 ≥ 17 12  

Streptomycin S 10 ≤ 11 12-14 ≥ 15 Như MHA  

Tobramycin t 10 ≤ 11 12-13 ≥ 14 12  

Erythromycin E 15 ≤ 13 14-17 ≥ 18  

Lincomycin L 02 ≤ 7 8-9 ≥ 10 Như MHA  

Clindamycin l 02 ≤ 14 15-16 ≥ 17  

Novobiocin v 30 ≤ 17 18-21 ≥ 22  

Polymycin B b 300 ≤ 8 9-11 ≥ 12 8  

Colistin c 10 ≤ 8 9-10 ≥ 11 9  

Rifampicin R 30 ≤ 11 12-18 ≥ 19 Như MHA  

Chloramphenic

ol C 30 ≤ 12 15-17 ≥ 18 Như MHA  

Tétracyclin T 30 ≤ 14 15-18 ≥ 19 Như MHA  

Quinoseptyl U 01 ≤ 12 13-16 ≥ 17  

Bactrim B 25 ≤ 10 11-15 ≥ 16  

Nitrofurantoin n 300 ≤ 14 15-16 ≥ 17  

Nalidixic acid g 30 ≤ 13 14-18 ≥ 19 Như MHA  

BẢNG TIÊU CHUẨN ĐỂ TRẢ LỜI KẾT QUẢ KHÁNG SINH ĐỒ

THEO PHƯƠNG PHÁP KIRBY - BAUER

PP PHA LOÃNG LIÊN TIẾP:( MIC)

 Tìm nồng độ tối thiểu của kháng sinh ức chế được sự tăng trưởng của vi khuẩn

 Nguyên tắc:

 Dựa trên sự liên quan giữa độ pha loãng của kháng sinh

đối với sự tăng trưởng của vi khuẩn ở mỗi nồng độ

kháng sinh khác nhau.

0,5ml

mt dd mt dd0,5ml mt dd0,5ml mt dd0,5ml mt dd0,5ml mt dd0,5ml mt dd0,5ml

0,5ml

mt dd mt dd0,5ml

0,5ml

KS

200µg/ml

0,5ml KS

0,5m

l ống 2

0,5m

l ống 6

0,5m

l ống 3

0,5m

l ống 4

0,5m

l ống 5

0,5m

l ống 8

0,5m

l ống 7

1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256

Bỏ

đi 0 ,5m

l

 ĐỌC KẾT QUẢ:

 Kiểm tra các ống

 Tìm ống trong cuối cùng  tìm MIC (µg/m)

Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC): là nồng độ tối thiểu của kháng sinh ngăn cản được sự tăng trưởng của vi khuẩn

CÁCH LẤY MÁU CHIẾT XUẤT HUYẾT THANH

PHA LOÃNG HUYẾT THANH

Dụng cụ:

 Pipet

 ống nghiệm vô trùng, phiến nhựa

 Kỹ thuật:

 Thường pha loãng theo hệ số 2

 Dd pha loãng: nước muối sinh lý hay dung dịch đệm

Pha 1 ống huyết thanh có độ loãng 1:5 1 phần huyết thanh

4 phần NMSL

Ống 1 Ống 2 Ống 3 Ống 4 Ống 5

NMSL

(ml)

Huyết

thanh

(ml)

Độ loãng

0,5

0,5 0,5

0,5 0,5 0,5 0,5

0,5 0,5

0,5 ml

huyết thanh 1:5

Pha loãng huyết thanh theo hệ số 2 bắt đầu với độ loãng 1:10

THỰC HÀNH

1. Làm đĩa kháng sinh đồ

2. Đọc kết quả buổi 4.