Đang tải... (xem toàn văn)
Bài giảng Phản ứng huyết thanh với ứng dụng miễn dịch trong chẩn đoán vi sinh và bệnh nhiễm sẽ giúp các bạn trình bày tính chất của phản ứng KN – KT, nguyên tắc và các phương pháp thực hiện, nhận định kết qua. Mời các bạn cùng tham khảo!
PHẢN ỨNG HUYẾT THANH ỨNG DỤNG MIỄN DỊCH TRONG CHẨN ĐOÁN VI SINH VÀ BỆNH NHIỄM TS Nguyễn Thị Hoàng Lan Bộ môn Vi sinh Khoa Dược – Đại học Lạc Hờng MỤC TIÊU • Trình bày tính chất của phản ứng KN – KT • Nguyên tắc và các phương pháp thực hiện • Nhận định kết quả NG̀N GỐC TẾ BÀO MÁU ĐÁP ỨNG MIỂN DỊCH CHẨN ĐOÁN HUYẾT THANH HỌC • Nhận biết kháng nguyên hoăc̣ kháng thể • Lương giá kháng nguyên hoặc kháng thể IgG 70% - IgM 10% - IgA 20% - IgE 0.001% - IgD 1% PHẢN ỨNG HUYẾT THANH • Là phản ứng kháng nguyên – kháng thể • Ứng dụng chẩn đoán lâm sàng - Tìm kháng thể huyết - Nhận định vi sinh vật - Đo sự gia tăng kháng thể máu để nhận định tình trạng nhiễm bệnh CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH DÙNG TRONG CHẨN ĐOÁN • Quan sát trực tiếp mắt thường - Kết tủa - Ngưng kết - Trung hòa - Cố định bổ thể • Dùng chất đánh dấu - Enzyme - ELISA - Đờng vị phóng xạ - RIA - Huỳnh quang - IFA PHÁT HIỆN KHÁNG NGUYÊN • Dùng kháng thể (KT)đã được biết trước để phát hiện kháng ngun (KN) của vi sinh vật • Khơng cần ni cấy phân lập vi khuẩn • Giúp định danh vi sinh vật PHÁT HIỆN KHÁNG THỂ VÀ XÁC ĐỊNH HIỆU GIÁ KHÁNG THỂ • Dùng kháng nguyên mẫu biết cho kết hợp với kháng thể nếu có mẫu hút của bệnh nhân • Đánh giá đáp ứng của thể kháng nguyên của vi sinh vật ( vaccine) Kỹ thuật miễn dịch phóng xạ Để đảm bảo đợ xác mẫu thử, mẫu bệnh phẩm cũng mẫu chuẩn, phải được xử lý xét nghiệm hoàn toàn điều kiện • thời gian ủ • khối lượng • nhiệt độ, pH • thời gian tốc độ quay ly tâm Nhược điểm : sử dụng hố chất phóng xạ nên phòng xét nghiệm cần phải được thiết kế thích hợp để bảo đảm quy định an tồn phóng xạ Labeled antibodies allow detection of antigen/antibody complexes in immunoassays Labeled antigen also allows detection of antigen/antibody complexes in immunoassays 56 Gamma Counter – Sử dụng để đo mẫu được đánh dấu KỸ THUẬT MIỄN DỊCH MEN ELISA • Kháng thể hoặc kháng nguyên được gắn giá cứng (giếng) đem ủ với huyết thành phức hợp KN-KT • Phức hợp được ủ tiếp với kháng thể kháng globulin được gắn enzyme Cơ chất của enzym cho vào đem ủ phản ứng chuyển chất thành hợp chất có màu THỬ NGHIỆM MIỄN DỊCH GẮN MEN ELISA THỬ NGHIỆM ELISA SANDWICH Mẫu XN KN gắn giếng 30 phút/ 37 °C R Ử A X + E Cộng hợp 30 phút/ 37 °C + Ngưng phản ứng Đọc kết quả 450nm R Ử chất A X 30phút/ To phòng Phản ứng màu tỷ lệ thuận với nồng độ kháng thể THỬ NGHIỆM ELISA PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI Y Y KHÁNG NGUYÊN & KHÁNG THỂ Y ? R Ử A Mẫu XN KN và KT Bước 1:Ủ 60 phút/ 37 °C X E + E Cợng hợp Bước : 30 phút/ To phòng R + Ử A Cơ chất X 30phút/ To phòng Phát nhiễm HIV giai đọan cửa sổ Ngưng phản ứng Đọc kết quả 450nm : KT KHẲNG ĐỊNH WESTERN BLOT CHỨNG DƯƠNG CHỨNG ÂM MẪU BỆNH NHÂN THỬ NGHIỆM MIỄN DỊCH SẮC KÝ Immunochromatographic • Dễ thực hiện • Giá thành rẽ • Độ tin cậy cao Dr.T.V.Rao MD XÉT NGHIỆM NHANH SD HIV1/2 Âm tính Dương tính HIV.1 Dương tính HIV.2 Khơng biện luận NGUYÊN LÝ KỸ THUẬT PCR • PCR phương pháp in vitro có chọn lọc để tổng hợp một đoạn DNA đặc thù → tạo một số lượng lớn DNA • Sử dụng đọan mời (primer) chun biệt để tổng hợp nhiều bản một đoạn gen ( hoặc một gen) từ một vài phân tử DNA khn ban đầu nhờ tác dụng của DNA polymerase • Số lượng bản được tổng hợp theo cấp số nhân 2n 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ QUY TRÌNH PHẢN ỨNG ĐỢ NHẠY VÀ ĐỢ ĐẶC HIỆU ĐỢ NHẠY • Khả của một xét nghiệm cho kết quả dương tính mợt mẫu bệnh phẩm thực sự dương tính • Đợ nhạy càng cao thì kết quả âm tính giả càng thấp ĐỢ ĐẶC HIỆU • Khả của mợt xét nghiệm cho kết quả âm tính một mẫu bệnh phẩm thực sự âm tính • Đợ đặc hiệu càng cao thì kết quả dương tính giả càng thấp LỰA CHỌN THỬ NGHIỆM • Điều kiện phòng thí nghiệm : thiết bị, nhân sự • Đợ nhạy các thử nghiệm khác RIA > EIA và IFA > ngưng kết > kết tủa • Phản ứng khơng đặc hiệu cần chọn thử nghiệm ít nhạy • Chi phí o Thử nghiệm sàng lọc ít tốn kém (ELISA) o Thử nghiệm xác định thì đắt tiền (W.Blot) ... sát trực tiếp mắt thường - Kết tủa - Ngưng kết - Trung hòa - Cố định bổ thể • Dùng chất đánh dấu - Enzyme - ELISA - Đờng vị phóng xạ - RIA - Huỳnh quang - IFA PHÁT HIỆN KHÁNG NGUYÊN... ĐOÁN HUYẾT THANH HỌC • Nhận biết kháng nguyên hoăc̣ kháng thể • Lương giá kháng nguyên hoặc kháng thể IgG 70% - IgM 10% - IgA 20% - IgE 0.001% - IgD 1% PHẢN ỨNG HUYẾT THANH • Là... HUYẾT THANH • Là phản ứng kháng nguyên – kháng thể • Ứng dụng chẩn đoán lâm sàng - Tìm kháng thể huyết - Nhận định vi sinh vật - Đo sự gia tăng kháng thể máu để nhận định tình trạng