Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae)

Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGÔ THANH HOA NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU VÀ ĐỘC TÍNH CỦA TECTORIGENIN CHIẾT XUẤT TỪ XẠ CAN (Belamcanda chinensis (L.) DC, Iridaceae) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGÔ THANH HOA NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU VÀ ĐỘC TÍNH CỦA TECTORIGENIN CHIẾT XUẤT TỪ XẠ CAN (Belamcanda chinensis (L.) DC, Iridaceae) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LÝ- DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 60.73.05 Người hướng dẫn khoa học: HÀ NỘI - 2011 1. TS. Vũ Thị Trâm 2. TS. Lê Minh Hà LỜI CẢM ƠN Với tất kính trọng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Vũ Thị Trâm - nguyên trưởng môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy tận tình hướng dẫn, bảo, động viên, khích lệ suốt trình học tập nghiên cứu để hoàn thành luận văn này. Tôi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới ThS. Đỗ Thị Nguyệt Quế - giảng viên môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội, quan tâm nhắc nhở, ủng hộ, giúp đỡ, cho nhiều kiến thức quý báu suốt trình học tập nghiên cứu. Tôi xin chân thành cảm ơn TS. Lê Minh Hà - phòng hóa dược, Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành luận văn này. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể thầy cô, anh chị, bạn bè công tác môn Dược lực phòng Đào tạo - trường Đại học Dược Hà Nội, ủng hộ, nhiệt tình giúp đỡ đóng góp nhiều ý kiến quý báu giúp hoàn chỉnh luận văn này. Tôi xin cảm ơn Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam hỗ trợ kinh phí giúp thực luận văn này. Hà Nội, tháng 10 năm 2011 Ngô Thanh Hoa ILỜM CẢ ƠN DANH M CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN .3 1.1. Tổng quan viêm 1.1.1. Khái niệm viêm .3 1.1.2. Nguyên nhân viêm 1.1.3. Phân loại viêm .3 1.1.4. Những biến đổi chủ yếu viêm .4 1.1.5. Một số chất trung gian hoá học phản ứng viêm .6 1.1.6. Một số nhóm thuốc chống viêm 1.1.6.1. Thuốc chống viêm không steroid (NSAID) .9 1.1.6.2. Thuốc chống viêm steroid (glucocorticoid) .10 1.1.6.3. Enzym chống viêm .10 1.1.6.4.Các flavonoid .11 1.2. Tổng quan đau .14 1.2.1. Khái niệm đau 15 1.2.2. Phân loại cảm giác đau .15 1.2.3. Các receptor với cảm giác đau .15 1.2.4. Đường dẫn truyền cảm giác đau .15 1.2.5. Thuốc giảm đau .17 1.2.5.1. Thuốc giảm đau, gây ngủ 17 1.2.5.2. Thuốc giảm đau, hạ sốt, chống viêm .18 1.2.5.3. Đông dược 19 1.3. Tổng quan xạ can tectorigenin 19 1.3.1. Cây xạ can .19 1.3.1.1. Đặc điểm thực vật 20 1.3.1.2. Đặc điểm vị thuốc 20 1.3.1.3. Phân bố, thu hái chế biến 20 1.3.1.4. Thành phần hoá học .21 1.3.1.5. Công dụng .21 1.3.1.6. Tác dụng sinh học xạ can .21 1.3.1.7. Các thuốc cổ truyền có xạ can 22 1.3.1.8. Các chế phẩm thị trường có chứa vị thuốc xạ can .22 1.3.2. Tectorigenin 23 1.3.3. Tác dụng sinh học tectorigenin .24 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1. Nguyên liệu nghiên cứu 26 2.1.1.Thuốc nghiên cứu .26 2.1.2. Súc vật thí nghiệm .27 2.1.3. Hoá chất, thuốc thử 27 2.1.4. Máy móc thiết bị nghiên cứu 27 2.2. Phương pháp nghiên cứu .28 2.2.1. Nghiên cứu độc tính 28 2.2.1.1. Nghiên cứu độc tính cấp .28 2.2.1.2. Nghiên cứu độc tính bán trường diễn .29 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm .30 2.2.2.1. Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 30 2.2.2.2. Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn .31 2.2.3. Nghiên cứu tác dụng giảm đau 32 2.2.3.1. Nghiên cứu tác dụng giảm đau quặn 32 2.2.3.2. Nghiên cứu tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình gây đau phiến nóng 33 2.3. Phương pháp xử lý số liệu 33 CHƯƠNG 3. KẾTQUẢ NGHIÊN CỨU 34 3.1. Nghiên cứu độc tính TEC-01 34 3.1.1. Nghiên cứu độc tính cấp 34 3.1.2. Nghiên cứu độc tính bán trường diễn 35 3.1.2.1. Ảnh hưởng TEC-01 tới tình trạng chung thể trọng chuột .35 3.1.2.2. Ảnh hưởng TEC-01 tới số huyết học .36 3.1.2.3. Ảnh hưởng TEC-01 tới chức gan 37 3.1.2.4. Ảnh hưởng TEC-01 tới chức thận .38 3.1.2.5. Mô bệnh học .38 3.2. Nghiên cứu tác dụng chống viêm TEC-01 .40 3.2.1. Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp TEC-01 mô hình gây phù chân chuột carragenin .40 3.2.2. Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn TEC-01 mô hình gây viêm u hạt amian 42 3.3. Nghiên cứu tác dụng giảm đau TEC-01 43 3.3.1. Nghiên cứu tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình gây đau quặn acid acetic .43 3.3.2. Ngiên cứu tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình gây đau phiến nóng .45 CHƯƠNG 4. BÀN LUẬN .47 4.1. Bàn luận độc tính .47 4.1.1. Độc tính cấp .47 4.1.2. Độc tính bán trường diễn 48 4.1.2.1. Tình trạng chung, cân nặng chuột 49 4.1.2.2. Ảnh hưởng TEC-01 đến số huyết học .49 4.1.2.3. Ảnh hưởng TEC-01 lên chức gan .50 4.1.2.4. Ảnh hưởng TEC-01 đến chức thận .52 4.2. n Bà luận tác dụng chống viêm TEC-01 53 4.2.1. Về tác dụng chống viêm cấp TEC-01 mô hình gây phù chân chuột carragenin 54 4.2.2. Tác dụng chống viêm mạn TEC-01 mô hình gây viêm u hạt amian .55 4.3. Bàn tác dụng giảm đau TEC-01 57 4.3.1. Về tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình gây đau quặn acid acetic 57 4.3.2. Tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình gây đau phiến nóng 58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT COX Cyclooxygenase PG Prostagladin NSAID Thuốc chống viêm không steroid LOX Lipooxygenase iNOS Inducible nitric oxide synthase NC Nghiên cứu HC Hồng cầu BC Bạch cầu PLT Tiểu cầu Hb Hemoglobin HCT Hematocrit DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1. Sơ đồ chế chống viêm NSAIDs glucocorticoid Hình 1.2. Cơ chế điều biến đường nhận cảm đau 17 Hình 1.3. Cây xạ can .20 Hình 1.4. Công thức Tectorigenin .23 Hình 2.5. Quy trình chiết tách TEC-01 .26 Hình 2.6. Sơ đồ mô hình nghiên cứu .28 Hình 2.7. Sơ đồ đánh giá tác dụng chống viêm cấp TEC-01 mô hình gây viêm carragenin 30 Hình 2.8. Sơ đồ quy trình nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn mô hình gây u hạt amian. 31 Hình 2.9. Sơ đồ quy trình thí nghiệm nghiên cứu tác dụng giảm đau TEC01 mô hình giảm đau quặn. 32 Hình 2.10. Sơ đồ quy trình nghiên cứu tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình giảm đau phiến nóng. 33 Hình 3.11 Ảnh hưởng TEC-01 đến cấu trúc vi thể gan, thận chuột nhắt trắng sau 28 ngày uống thuốc liên tục. 39 Hình 3.12. Độ tăng thể tích chân chuột thời điểm khảo sát .41 Hình 3.13. Số đau quặn qua giai đoạn lô chuột .44 Hình 3.14. Thời gian đáp ứng đau lô chuột 46 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1. Kết thử độc tính cấp TEC-01 chuột nhắt trắng .34 Bảng 3.2. Ảnh hưởng TEC-01 đến thể trọng chuột 35 Bảng 3.3. Ảnh hưởng TEC-01 số huyết học .36 Bảng 3.4. Ảnh hưởng TEC-01 đến chức gan .37 Bảng 3.5. Ảnh hưởng TEC-01 đến chức thận 38 Bảng 3.6. Tác dụng chống viêm cấp TEC-01 mô hình gây phù chân chuột gây carragenin .41 Bảng 3.7. Tác dụng chống viêm mạn TEC-01 42 Bảng 3.8. Số đau quặn giai đoạn sau gây đau acid acetic lô nghiên cứu .44 Bảng 3.9. Thời gian đáp ứng đau lô chuột 45 số huyết học, chức gan thận chuột mô bệnh học số quan. Thông thường, hoạt chất có biểu độc tính cấp biểu độc tính bán trường diễn. Tuy nhiên, qua kết nghiên cứu độc tính cấp độc tính bàn trường diễn thu được, TEC-01 không tuân theo quy luật đó. Độc tính cấp TEC-01 sát với mức độc thấp thuốc độc tính thử nghiệm dài ngày. Điều phần ảnh hưởng động vật thực nghiệm chuột nhắt trắng - loại động vật đáp ứng sinh học loại động vật thử nghiệm thỏ, chó Do đó, để đánh giá đầy đủ xác độc tính bán trường diễn TEC-01, kiến nghị tiến hành thử nghiệm thêm loài động vật khác, theo nhiều đường dùng thuốc khác nhau. 4.2. BÀN LUẬN VỀ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA TEC-01 Trong nhóm hoạt chất chiết xuất từ dược liệu có tác dụng chống viêm, flavonoid bật lên nhóm có tác dụng chống viêm mạnh, tác dụng chống viêm cấp chống viêm mạn. Tectorigenin flavonoid thành phần có hoạt tính xạ can - vị thuốc sử dụng chủ yếu để chữa nhiều bệnh liên quan đến viêm viêm họng cấp mạn, viêm amidan .[24]. Thêm vào đó, giới tectorigenin chứng minh có tác dụng chống viêm in vitro [35],[46]. Từ sở trên, lựa chọn tìm hiểu tác dụng sinh học TEC-01 tác dụng chống viêm. Chúng tiến hành thử tác dụng chống viêm TEC-01 mô hình gây viêm cấp (gây phù bàn chân chuột carragenin) mô hình gây viêm mạn (gây u hạt thực nghiệm amian). 53 4.2.1. Về tác dụng chống viêm TEC-01 mô hình gây phù chân chuột carragenin Chúng lựa chọn mô hình gây phù chân chuột carragenin để đánh giá tác dụng chống viêm cấp. So với mô hình chống viêm cấp bán cấp khác mô hình gây phù chân chuột đơn giản, dễ dàng thực hơn, phù hợp cho mục đích sàng lọc lẫn nghiên cứu sâu. Đây mô hình sử dụng rộng rãi nhiều nghiên cứu giới Việt Nam để đánh giá tác dụng chống viêm. Chúng tiến hành đánh giá tác dụng chống viêm cấp TEC-01 mức liều 60 mg/kg cho chuột cống trắng (tương đương liều chuột nhắt trắng 100mg/kg). Kết nghiên cứu bảng 3.6 cho thấy: sau gây viêm caragenin, mức độ phù chân chuột lô uống TEC-01 thời diểm (19,70 ± 6,62) (20,40 ± 6,32) khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng (5 giờ: 46,93 ± 5,86; giờ: 62,41 ± 6,64); p0,05. Trong, mô hình gây phù chân chuột carragenin, trình viêm diễn theo hai pha. Pha bắt đầu sau tiêm giảm xuống nhanh vòng đầu. Pha giải phóng histamin serotonin. Pha thứ hai bắt đầu sau kết thúc pha giải phóng PG, protease lysosom. Hầu hết thuốc có tác dụng chống viêm có tác dụng pha hai [28],[59]. TEC-01 thể tác dụng chống viêm pha hai: thuốc tác dụng tốt khoảng 5-7 sau gây viêm. So sánh với tectorigenin, nhiều flavonoid có đáp ứng tương tự với mô hình như: queretin liều 75mg/kg, hesperidin liều 80mg/kg, kaemferol glycosid .[54]. 54 Như vậy, TEC-01 liều 60mg/kg có tác dụng chống viêm mô hình gây phù chân chuột carragenin thời điểm 5-7 giờ, tác dụng tương đương với indomethacin liều 10mg/kg. 4.2.2. Tác dụng chống viêm mạn TEC-01 mô hình gây u hạt thực nghiệm amian Khi đưa vào thể tác nhân gây viêm trơ bông, amian, chất dẻo… khả tiêu trình viêm thể phản ứng cách tập trung nhiều loại tế bào xung quanh dị vật tạo thành u hạt. Về tổ chức học, u hạt nơi tập trung nhiều loại tế bào bạch cầu đa nhân trung tính, bạch cầu hạt ưa base, tế bào dạng biểu mô, nguyên bào sợi… Khi u hạt hình thành, trình viêm vào giai đoạn mạn tính mà đặc trưng có tham gia tích cực loại tế bào. Các thuốc có khả ức chế phát triển u hạt xem có tác dụng chống viêm mạn động vật thực nghiệm. Dựa vào nghiên cứu trước Đỗ Trung Đàm số nghiên cứu khác, lựa chọn mô hình gây hình u hạt thực nghiệm chuột cống trắng để nghiên cứu chống viêm mạn TEC-01 [15],[16]. Việc sử dụng amian gây viêm có nhiều ưu điểm: + Rất trơ + Dễ tạo hình dáng, kích thước + Trọng lượng khối u đồng + Dễ bóc tách Qua kết bảng 3.7 cho thấy: TEC-01 có tác dụng chống viêm mạn, với tỷ lệ ức chế u hạt 35,67% cân khối lượng ướt, 43,54% cân khối lượng khô so vơi lô chứng. Tác dụng tương đương với tỷ lệ ức chế prednisolon liều mg/kg (cân ướt: 42,53%; cân khô: 44,55%) với p > 0,05. 55 Tác dụng chống viêm mạn quan sát thấy nhiều flavonoid. Các flavonoid có cấu trúc vòng B giống catechol guaiacol có khả ức chế u hạt mạnh flavonid khác [49]. Trong nghiên cứu Guardia T. cộng sự, rutin, quercetin hesperidin thể tác dụng chống viêm mạn, đặc biệt rutin làm giảm mức độ phù, hình thành hạt mức độ cứng khớp mô hình gây viêm khớp chuột [32]. Như vậy, TEC-01 liều 60mg/kg có tác dụng chống viêm mô hình gây viêm cấp mô hình gây viêm mạn. Kết phù hợp với nghiên cứu tác dụng chống viêm in vitro tectorigenin giới. Theo tài liệu công bố, chế chống viêm tectorigenin có liên quan tới ức chế sản xuất PGE2. Trong phản ứng viêm PG tạo thành từ acid arachidonic theo đường COX. COX -1 chịu trách nhiệm tổng hợp PG sinh lý tham gia vào chức bình thường thể. COX-2 enzym tiền viêm có vai trò tạo PG gây viêm. Bình thường hoạt tính COX-2 thấp tế bào. Trong mô viêm, kích thích viêm gây cảm ứng tế bào, hoạt hóa mạnh COX-2 nồng độ COX-2 tăng cao tới gấp 80 lần bình thường [7],[25]. Trong nghiên cứu Kim Y P. cộng sự, tectorigenin không ảnh hưởng tới hoạt tính COX-1 COX-2, nhiên chất lại ức chế cảm ứng COX-2 gây TPA thapsigargin đại thực bào phúc mạc chuột, ức chế hình thành PGE2 [35]. Ngoài ra, chế chống viêm tectorigenin liên quan đến việc ức chế tạo thành NO IL-1β. Trong viêm, NO gây giãn mạch, tăng tính thấm thành mạch, tăng sản xuất PG viêm, gây độc tế bào với số vi khuẩn, nấm . NO tạo thành enzym NOS chủ yếu NOS cảm ứng (iNOS) tham gia vào phản ứng viêm [51]. Tectorigenin ức chế tạo thành NO ức chế iNOS [61]. IL-1β chất trung gian viêm 56 có tác dụng kích thích sinh sản lympho T, tổng hợp PG, bộc lộ phân tử dính tế bào nội mô [22]. Tectorigenin ức chế đáng kể tạo thành IL-1β đại thực bào Raw 264.7 bị kích thích IFNγ/lipopolysacharid. Bên cạnh đó, tectorigenin ức chế hoạt hóa NF-κB đại thực bào ức chế giáng hóa IκB-α; ức chế chép sản xuất iNOS, COX-2, NO, cytokin tiền viêm [46]. 4.3. BÀN LUẬN VỀ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA TEC-01 Quá trình viêm gây đau nên có nhiều thuốc có tác dụng chống viêm có tác dụng giảm đau. Nhiều flavonoid vừa có tác dụng chống viêm, vừa có tác dụng giảm đau quercetin, myricitrin .[27],[50]. Vị thuốc xạ can sử dụng chữa bệnh liên quan đến đau đau bụng kinh .[24]. Chính vậy, sau quan sát tác dụng chống viêm TEC-01 flavonoid xạ can, lựa chọn đánh giá tác dụng giảm đau hoạt chất này. Tác dụng giảm đau TEC-01được thử nghiệm hai mô hình: mô hình gây đau quặn acid acetic mô hình gây đau phiến nóng. 4.3.1. Về tác dụng giảm đau TEC-01 chuột nhắt gây đau quặn acid acetic Mô hình gây đau quặn chuột nhắt acid acetic mô hình đánh giá tác dụng giảm đau ngoại vi thuốc. Mặc dù mô hình tính chọn lọc có nhiều chất khác đáp ứng với mô hình (ví dụ: thuốc kháng cholinergic, thuốc chống trầm cảm ba vòng, thuốc kháng histamin…), sử dụng rộng rãi để sàng lọc, đánh giá tác dụng giảm đau thuốc [60]. Từ kết bảng 3.8 cho thấy: dùng liều 100 mg TEC-01/kg, số đau quặn chuột giảm khoảng từ 5-30 phút (5-10 phút: 11,13 ± 0,33; 10-15 phút: 7,14 ± 0,54; 15-20 phút: 8,41 ± 0,33; 20-25 phút: 7,14 ± 57 0,40; 25-30 phút: 6,17 ± 0,28) so với lô chứng (5-10 phút: 18,00 ± 0,47; 1015 phút: 18,10±0,39; 15-20 phút: 13,77±0,35; 20-25 phút: 14,00± 0,28; 25-30 phút: 11,37 ± 0,32); p < 0,05. So sánh với lô chứng dương, hiệu giảm đau tương đương với tác dụng aspirin liều 240 mg/kg (p > 0,05). Mô hình gây đau quặn liên quan đến receptor phúc mạc chỗ (receptor cholinergic, receptor histamin) chất trung gian, acetylcholine histamin. Ngoài liên quan đến tăng mức PGE2 PGF2α dịch màng bụng. Con đường quan trọng dẫn truyền đau viêm nhạy cảm receptor nhận cảm đau ngoại vi với proton (như kênh ion nhạy cảm với acid) với chất gây đau (như bradykinin cytokine). Các receptor truyền tín hiệu thần kinh trung ương thông qua sợi C. Thêm vào đáp ứng đau gây acid acetic phụ thuộc vào số cytokine TNFα, interleukin-1 interleukin-8 thông qua điều biến đại thực bào tế bào mast khu trú khoang màng bụng [26],[43],[50],[58]. Theo nghiên cứu Kim YP cộng sự, tectorigenin có tác dụng ức chế sản xuất PGE2 ức chế cảm ứng COX-2 đại thực bào phúc mạc chuột. Có thể chế góp phần tạo tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình [35]. Như vậy, liều 100mg TEC-01/kg chuột nhắt trắng có tác dụng giảm đau mô hình gây đau quặn sau tiêm acid acetic phút, tác dụng tương đương với aspirin liều 240mg/kg. 4.3.2. Tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình gây đau phiến nóng Thí nghiệm cho thấy tác dụng giảm đau ngoại vi TEC-01. Ngoài tác dụng giảm đau ngoại vi, nhiều flavonoid thể tác dụng giảm đau theo chế trung ương. Dịch chiết từ Pueraria thunbergiana số dược liệu (trong dịch chiết có chứa tectorigenin) quan sát 58 thấy có tác dụng giảm đau theo chế trung ương [36]. Vì vậy, để tìm hiểu thêm liệu TEC-01 có tác dụng giảm đau theo chế trung ương hay không, tiến hành thử nghiệm thêm tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình phiến nóng. Đây mô hình đơn giản, dễ thực hiện, thời gian nghiên cứu ngắn dễ áp dụng Việt Nam. Kết bảng 3.9 cho thấy: thời gian đáp ứng chuột với lô sử dụng morphin cao hẳn so với lô lại; thời gian đáp ứng đau lô uống TEC-01 liều 100 mg/kg lô uống NaCl 0.9% tương đương nhau. Như vậy, với mức liều 100mg/kg chuột nhắt trắng, TEC-01 tác dụng giảm đau mô hình giảm đau phiến nóng. Từ kết thí nghiệm hai mô hình giảm đau, đến kết luận: TEC-01 có tác dụng giảm đau với mức liều 100mg/kg, nhiên mức liều TEC-01 chưa thể tác dụng giảm đau theo chế trung ương. 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu độc tính tác dụng giảm đau, chống viêm TEC-01, xin đưa số kết luận sau: 1. Về độc tính 1.1. Độc tính cấp. LD50 = 1,735 (1,449-1,990) g/kg chuột nhắt trắng. 1.2. Độc tính bán trường diễn: TEC-01 liều 100mg TEC-01/kg/ngày 300mg TEC-01/kg/ngày cho chuột nhắt trắng uống liên tục 28 ngày, chưa thấy ảnh hưởng đến tình trạng chung, gia tăng khối lượng thể , số huyết học, chức gan thận chuột. 2. Về tác dụng chống viêm TEC-01 2.1. Tác dụng chống viêm cấp TEC-01 mô hình gây phù chân chuột carragenin TEC-01 với mức liều 60 mg/kg chuột cống trắng thể tác dụng chống viêm cấp thông qua giảm mức độ phù chân chuột lô uống thuốc thử thời diểm (19,70 ± 6,62) (20,40 ± 6,32) so với lô chứng (5 giờ: 46,93 ± 5,86; giờ: 62,41 ± 6,64); p < 0,05. Tác dụng chống viêm tương đương với tác dụng chống viêm indomethacin liều 10 mg/kg (p>0,05). 2.2. Tác dụng chống viêm mạn TEC-01 mô hình gây u hạt amian Liều 60 mg TEC-01/kg thể tác dụng chống viêm thông qua giảm khối lượng u hạt so với lô chứng (cân ướt: 35,67%, cân khô: 43,54%); p < 0,05. Tác dụng tương đương với tác dụng prednisolon liều mg/kg (p>0,05). 60 3. Về tác dụng giảm đau TEC-01 3.1. Tác dụng giảm đau TEC-01 mô hình gây đau quặn acid acetic. TEC-01 mức liều 100mg/kg chuột nhắt trắng làm giảm số đau quặn chuột thực nghiệm so với lô chứng thời điểm từ 5-30 phút (lô thử: 11,13 ± 0,33 (5-10’), 7,14 ± 0,54 (10-15’), 8,41 ± 0,33 (15-20’), 7,14 ± 0,40 (20-25’), 6,17 ± 0,28 (25-30’); lô chứng: 18,00 ± 0,47 (5-10’), 18,10 ± 0,39 (10-15’), 13,77±0,35 (15-20’), 14,00 ± 0,28 (20-25’), 11,37± 0,32 (2530’); p . NGÔ THANH HOA NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU VÀ ĐỘC TÍNH CỦA TECTORIGENIN CHIẾT XUẤT TỪ XẠ CAN (Belamcanda chinensis (L. ) DC, Iridaceae) LUẬN VĂN THẠC SĨ. chống viêm 30 2.2.2.1. Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 30 2.2.2.2. Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn 31 2.2.3. Nghiên cứu tác dụng giảm đau 32 2.2.3.1. Nghiên cứu tác dụng giảm đau quặn. hiểu tác dụng của tectorigenin nói chung và tác dụng của TEC-01 nói riêng, chúng tôi đã 2 thực hiện đề tài " ;Nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau và độc tính của tectorigenin chiết xuất