Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae)

Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae) Nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau và độc tích của tectorigenin chiết xuất từ xạ can (belamcanda chinensis (l ) DC, iridaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGÔ THANH HOA

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM,

GIẢM ĐAU VÀ ĐỘC TÍNH CỦA TECTORIGENIN CHIẾT XUẤT TỪ XẠ CAN (Belamcanda chinensis (L.) DC, Iridaceae)

LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGÔ THANH HOA

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM,

GIẢM ĐAU VÀ ĐỘC TÍNH CỦA TECTORIGENIN CHIẾT XUẤT TỪ XẠ CAN (Belamcanda chinensis (L.) DC, Iridaceae)

LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC

CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LÝ- DƯỢC LÂM SÀNG

MÃ SỐ: 60.73.05

Người hướng dẫn khoa học: 1 TS Vũ Thị Trâm

2 TS Lê Minh Hà

LỜI CẢM ƠN Với tất cả sự kính trọng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Vũ Thị Trâm - nguyên trưởng bộ môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội,

là người thầy đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo, động viên, khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu để hoàn thành luận văn này

Tôi cũng xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới ThS Đỗ Thị Nguyệt Quế - giảng viên bộ môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội, đã luôn quan tâm nhắc nhở, ủng hộ, giúp đỡ, cho tôi nhiều kiến thức quý báu trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu

Tôi xin chân thành cảm ơn TS Lê Minh Hà - phòng hóa dược, Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi để tôi có thể hoàn thành luận văn này

Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể các thầy cô, anh chị, bạn

bè công tác tại bộ môn Dược lực và phòng Đào tạo - trường Đại học Dược Hà Nội, đã luôn ủng hộ, nhiệt tình giúp đỡ và đóng góp nhiều ý kiến quý báu giúp tôi hoàn chỉnh luận văn này

Tôi xin cảm ơn Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã hỗ trợ kinh phí giúp tôi thực hiện luận văn này

Hà Nội, tháng 10 năm 2011 Ngô Thanh Hoa

I CẢM ƠN

DANH M CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 3

1.1 Tổng quan về viêm 3

1.1.1 Khái niệm viêm 3

1.1.2 Nguyên nhân viêm .3

1.1.3 Phân loại viêm 3

1.1.4 Những biến đổi chủ yếu trong viêm .4

1.1.5 Một số chất trung gian hoá học trong phản ứng viêm 6

1.1.6 Một số nhóm thuốc chống viêm 9

1.1.6.1 Thuốc chống viêm không steroid (NSAID) 9

1.1.6.2 Thuốc chống viêm steroid (glucocorticoid) 10

1.1.6.3 Enzym chống viêm 10

1.1.6.4.Các flavonoid 11

1.2 Tổng quan về đau 14

1.2.1 Khái niệm đau 15

1.2.2 Phân loại cảm giác đau .15

1.2.3 Các receptor với cảm giác đau .15

1.2.4 Đường dẫn truyền cảm giác đau .15

1.2.5 Thuốc giảm đau 17

1.2.5.1 Thuốc giảm đau, gây ngủ .17

1.2.5.2 Thuốc giảm đau, hạ sốt, chống viêm .18

1.2.5.3 Đông dược 19

1.3 Tổng quan về cây xạ can và tectorigenin 19

1.3.1 Cây xạ can 19

1.3.1.1 Đặc điểm thực vật .20

1.3.1.2 Đặc điểm vị thuốc .20

1.3.1.3 Phân bố, thu hái và chế biến .20

1.3.1.4 Thành phần hoá học 21

1.3.1.5 Công dụng .21

1.3.1.6 Tác dụng sinh học của xạ can 21

1.3.1.7 Các bài thuốc cổ truyền có xạ can 22

1.3.1.8 Các chế phẩm trên thị trường có chứa vị thuốc xạ can 22

1.3.2 Tectorigenin .23

1.3.3 Tác dụng sinh học của tectorigenin 24

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26

2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 26

2.1.1.Thuốc nghiên cứu 26

2.1.2 Súc vật thí nghiệm 27

2.1.3 Hoá chất, thuốc thử 27

2.1.4 Máy móc thiết bị nghiên cứu 27

2.2 Phương pháp nghiên cứu 28

2.2.1 Nghiên cứu độc tính 28

2.2.1.1 Nghiên cứu độc tính cấp 28

2.2.1.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn 29

2.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm 30

2.2.2.1 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 30

2.2.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn 31

2.2.3 Nghiên cứu tác dụng giảm đau 32

2.2.3.1 Nghiên cứu tác dụng giảm đau quặn 32

2.2.3.2 Nghiên cứu tác dụng giảm đau của TEC-01 trên mô hình gây đau

bằng phiến nóng 33

2.3 Phương pháp xử lý số liệu 33

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34

3.1 Nghiên cứu độc tính của TEC-01 34

3.1.1 Nghiên cứu độc tính cấp 34

3.1.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn 35

3.1.2.1 Ảnh hưởng của TEC-01 tới tình trạng chung và thể trọng chuột 35

3.1.2.2 Ảnh hưởng của TEC-01 tới các chỉ số huyết học 36

3.1.2.3 Ảnh hưởng của TEC-01 tới chức năng gan 37

3.1.2.4 Ảnh hưởng của TEC-01 tới chức năng thận 38

3.1.2.5 Mô bệnh học 38

3.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm của TEC-01 40

3.2.1 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp của TEC-01 trên mô hình gây phù chân chuột bằng carragenin 40

3.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn của TEC-01 trên mô hình gây viêm u hạt bằng amian .42

3.3 Nghiên cứu tác dụng giảm đau của TEC-01 43

3.3.1 Nghiên cứu tác dụng giảm đau của TEC-01 trên mô hình gây đau quặn bằng acid acetic 43

3.3.2 Ngiên cứu tác dụng giảm đau của TEC-01 trên mô hình gây đau bằng phiến nóng 45

CHƯƠNG 4 BÀN LUẬN 47

4.1 Bàn luận về độc tính 47

4.1.1 Độc tính cấp 47

4.1.2 Độc tính bán trường diễn .48

4.1.2.1 Tình trạng chung, cân nặng của chuột 49

4.1.2.2 Ảnh hưởng của TEC-01 đến các chỉ số huyết học 49

4.1.2.3 Ảnh hưởng của TEC-01 lên chức năng gan 50

4.1.2.4 Ảnh hưởng của TEC-01 đến chức năng thận 52

4.2 Bàn luận về tác dụng chống viêm của TEC-01 .53

4.2.1 Về tác dụng chống viêm cấp của TEC-01 trên mô hình gây phù chân chuột bằng carragenin 54

4.2.2 Tác dụng chống viêm mạn của TEC-01 trên mô hình gây viêm u hạt bằng amian 55

4.3 Bàn về tác dụng giảm đau của TEC-01 57

4.3.1 Về tác dụng giảm đau của TEC-01 trên mô hình gây đau quặn bằng acid acetic 57

4.3.2 Tác dụng giảm đau của TEC-01 trên mô hình gây đau bằng phiến nóng 58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1 Sơ đồ cơ chế chống viêm của NSAIDs và glucocorticoid 9

Hình 1.2 Cơ chế điều biến trong con đường nhận cảm đau .17

Hình 1.3 Cây xạ can 20

Hình 1.4 Công thức Tectorigenin 23

Hình 2.5 Quy trình chiết tách TEC-01 26

Hình 2.6 Sơ đồ mô hình nghiên cứu 28

Hình 2.7 Sơ đồ đánh giá tác dụng chống viêm cấp của TEC-01 trên mô hình gây viêm bằng carragenin 30

Hình 2.8 Sơ đồ quy trình nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn trên mô hình gây u hạt bằng amian .31

Hình 2.9 Sơ đồ quy trình thí nghiệm nghiên cứu tác dụng giảm đau của TEC-01 trên mô hình giảm đau quặn .32

Hình 2.10 Sơ đồ quy trình nghiên cứu tác dụng giảm đau của TEC-01 trên mô hình giảm đau phiến nóng .33

Hình 3.11 Ảnh hưởng của TEC-01 đến cấu trúc vi thể gan, thận chuột nhắt trắng sau 28 ngày uống thuốc liên tục .39

Hình 3.12 Độ tăng thể tích chân chuột tại các thời điểm khảo sát 41

Hình 3.13 Số cơn đau quặn qua các giai đoạn của các lô chuột 44

Hình 3.14 Thời gian đáp ứng đau của các lô chuột 46

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 3.1 Kết quả thử độc tính cấp của TEC-01 trên chuột nhắt trắng 34

Bảng 3.2 Ảnh hưởng của TEC-01 đến thể trọng của chuột 35

Bảng 3.3 Ảnh hưởng của TEC-01 trên các chỉ số huyết học 36

Bảng 3.4 Ảnh hưởng của TEC-01 đến chức năng gan 37

Bảng 3.5 Ảnh hưởng của TEC-01 đến chức năng thận 38

Bảng 3.6 Tác dụng chống viêm cấp của TEC-01 trên mô hình gây phù chân chuột gây ra bởi carragenin 41

Bảng 3.7 Tác dụng chống viêm mạn của TEC-01 42

Bảng 3.8 Số cơn đau quặn trong các giai đoạn sau khi gây đau bằng acid acetic ở các lô nghiên cứu 44

Bảng 3.9 Thời gian đáp ứng đau của các lô chuột 45

Đ VẤN ĐỀ

Flavonoids là một nhóm các hợp chất tự nhiên được tìm thấy trong rau

củ, hoa quả, ngũ cốc, rượu vang, và các loại dược liệu khác nhau Từ lâu, các flavonoid đã được biết đến với rất nhiều tác dụng có lợi cho sức khỏe Năm 1999, FDA đã chấp nhận việc sử dụng 25g protein đậu nành/ngày giúp làm giảm nguy cơ tim mạch; năm 2002, tổ chức the UK Joint Health Claims Initiative tại Anh cũng đưa ra khuyến cáo rằng sử dụng 25g protein đậu nành/ngày giúp làm giảm cholessterol trong máu Khoảng 50 năm gần đây, các flavonoid ngày càng được nghiên cứu sâu hơn và đã được chứng minh có nhiều tác dụng khác nhau như: chống viêm, chống oxy hóa, kháng khuẩn, kháng virus, ngăn ngừa xơ vữa động mạch, bảo vệ tim mạch, chống ung thư, trị đái tháo đường, [52]

Trong nhóm hợp chất flavonoid, một số hợp chất đã được nghiên cứu

kỹ về tác dụng và cơ chế tác dụng như: genistein, quercetin, myrcetin, Tectorigenin cũng là một trong các flavonoid trên Chất này đã được chứng minh có nhiều tác dụng như chống oxy hóa, chống ung thư, ngăn ngừa biến chứng của đại tháo đường, ức chế khối u, gây độc tế bào, tác dụng oestrogen thực vật, chống viêm, [33],[40],[46],[62],[63] Tuy nhiên, các nghiên cứu này phần nhiều là các thử nghiệm invitro Qua tham khảo tài liệu, chúng tôi chưa tìm thấy công trình nghiên cứu nào về tác dụng chống viêm, giảm đau của tectorigenin trên invivo Bên cạnh đó, tectorigenin là thành phần hóa học chính của xạ can - một dược liệu rất quen thuộc của nhân dân ta dùng để chữa các bệnh về viêm, đau như viêm họng, ho, viêm amidan, đau cổ, nhiều đờm, khản tiếng, Chính vì vậy, với phân đoạn flavonoid TEC-01 (95% tectorigenin) chiết tách được từ cây xạ can Tam Đảo, nhằm tìm hiểu tác dụng của tectorigenin nói chung và tác dụng của TEC-01 nói riêng, chúng tôi đã

thực hiện đề tài "Nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau và độc tính của tectorigenin chiết xuất từ cây xạ can (Belamcanda chinensis (L.) DC,

họ Iridaceae)" với mục tiêu:

- Xác định độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của tectorigenin trên chuột nhắt trắng thực nghiệm

- Nghiên cứu tác dụng chống viêm của tectorigenin trên chuột cống trắng thực nghiệm

- Nghiên cứu tác dụng giảm đau của tectorigenin trên chuột nhắt trắng thực nghiệm

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ VIÊM

1.1.1 Khái niệm viêm

Theo từ điển bách khoa dược học: "viêm là phản ứng tại chỗ của cơ thể

do các mô bị kích thích hoặc tổn thương Đó là một phản ứng phức tạp của các mô liên kết và của tuần hoàn mao mạch ở nơi bị tác động, được thể hiện bằng các triệu chứng sưng, nóng, đỏ, đau và rối loạn chức phận" [23]

1.1.2 Nguyên nhân viêm

Có nhiều nguyên nhân gây viêm, có thể chia thành hai nhóm:

- Nguyên nhân bên ngoài:

+ Do vi sinh vật: vi khuẩn, vi rút, một số loại nấm, các vi sinh vật đơn bào, ký sinh trùng và côn trùng

+ Do các chất hoá học: do hoá chất, do thuốc,

+ Do các yêú tố vật lý: chấn thương, dị vật, nhiệt, tia phóng xạ, bức xạ

+ Do cơ học: từ sây sát nhẹ đến chấn thương nặng

- Nguyên nhân bên trong:

+ Sản phẩm chuyển hoá, urê máu tăng gây viêm màng phổi, màng tim; acid uric tăng gây viêm khớp trong bệnh gut

+ Hoại tử kín gây viêm vô trùng: như hoại tử chỏm xương đùi

+ Phản ứng tự miễn: như bệnh khớp, viêm cầu thận

+ Viêm xung quanh tổ chức ung thư [8],[22]

1.1.3 Phân loại viêm

- Theo nguyên nhân: có viêm nhiễm khuẩn và viêm vô khuẩn

- Theo vị trí: có viêm nông, viêm sâu (bên trong và bên ngoài)

- Theo dịch rỉ viêm: có viêm thanh dịch, viêm tơ huyết, viêm mủ

- Theo diễn biến: có viêm cấp và viêm mạn

- Theo tính chất: có viêm đặc hiệu và viêm không đặc hiệu [8]

1.1.4 Những biến đổi chủ yếu trong viêm

* Rối loạn vận mạch

- Co mạch chớp nhoáng ở các tiểu động mạch

- Sung huyết động mạch: động mạch vi tuần hoàn giãn rộng tăng cả lưu lượng lẫn áp lực máu, biểu hiện bên ngoài là đau và nóng Sung huyết động mạch sinh ra do sự giải phóng các enzym từ lysosom của tế bào chết, các chất trung gian hóa học (histamin, bradykinin, prostaglandin, protease, IL-1, PAF,

NO .) Quá trình này giúp cung cấp ATP giúp bạch cầu thoát mạch, di chuyển và thực bào

- Sung huyết tĩnh mạch: sung huyết động mạch giảm dần, chuyển sang sung huyết tĩnh mạch Biểu hiện là các mao tĩnh mạch giãn rộng, ổ viêm bớt nóng chuyển sang màu tím sẫm Giai đoạn này giúp dọn sạch ổ viêm, chuẩn

bị cho quá trình sửa chữa và cô lập ổ viêm

- Ứ máu: làm cô lập ổ viêm, ngăn cản sự lan rộng của tác nhân gây bệnh

* Hình thành dịch rỉ viêm

Dịch rỉ viêm là sản phẩm xuất tiết tại ổ viêm bao gồm: các thành phần bình thường từ máu thoát ra (nước, muối, protein, huyết tương, các thành phần hữu hình của máu) và các chất mới được hình thành do rối loạn chuyển hóa kèm tổn thương mô (histamin, seretonin, leucotrien )

* Bạch cầu xuyên mạch

Bình thường bạch cầu chỉ dính với nội mô ở mức thấp Khi có viêm, dưới tác động của các chất trung gian hóa học bạch cầu tăng khả năng bám dính với tế bào nội mô Sau khi dính vào các tế bào nội mô, bạch cầu chuyển động nhẹ dọc theo bề mặt nội mô, luồn chân giả vào kẽ hở giữa các tế bào nội

mô rồi xuyên qua vào khoảng gian bào ngoài mao mạch Tiếp theo, bạch cầu

di chuyển trong mô kẽ về phía mô viêm do kích thích hoá ứng động [7],[8],[11]

* Hiện tượng thực bào và thoát hạt

Khi tới ổ viêm, bạch cầu nhận biết và dính với đối tượng bị thực bào Sau

đó, bào tương của thực bào kéo dài ra tạo thành giả túc tiến đến bao quanh lấy đối tượng, sập giả túc lại tạo thành hốc thực bào Màng của hốc thực bào sát nhập với màng bào tương của hạt lysosom, rồi các thành phần của lysosom đổ vào hố thực bào để phân huỷ đối tượng thực bào [11]

* Rối loạn chuyển hóa

Tại ổ viêm nhu cầu oxy tăng nhưng sự sung huyết động mạch không đáp ứng kịp do vậy pH sẽ giảm, từ đó kéo theo hàng loạt những rối loạn chuyển hóa protid, lipid và glucid

* Tổn thương mô

Thường thấy có hai loại tổn thương:

- Tổn thương tiên phát do nguyên nhân gây viêm tạo ra, phải có tổn thương tiên phát tại chỗ thì mới phát triển thành ổ viêm

- Tổn thương thứ phát do những rối loạn tại ổ viêm gây nên, phụ thuộc vào cường độ của nguyên nhân và mức độ phản ứng của cơ thể

* Tăng sinh tế bào và quá trình lành vết thương

Các tế bào nhu mô của cơ quan viêm có thể được tái sinh đầy đủ khiến kiến trúc và chức năng của cơ quan vẫn được phục hồi Nếu không được như vậy thì một phần nhu mô bị thay thế bằng mô xơ (sẹo) Quá trình lành tổn thương có toàn vẹn hay không tùy thuộc vào: cơ quan bị viêm, mức độ hoại

tử, thời gian viêm, hoạt lực của yếu tố gây viêm

* Viên mạn tính

Viêm cấp tính (với các giai đoạn được trình bày ở trên) có thể khỏi hoàn toàn hoặc có thể chuyển sang viêm mạn tính Viêm mạn tính cũng có thể bắt đầu ngay từ đầu mà không qua giai đoạn viêm cấp tính

Biển hiện của viêm mạn tính gồm:

- Tiết dịch nhưng sưng đỏ và nóng không rõ rệt, hoặc không có

- Chức năng mô và cơ quan ít bị ảnh hưởng hoặc chỉ suy giảm chậm chạp

- Có hiện tượng huy động bạch cầu, hiện tượng thực bào tại ổ viêm, tăng bạch cầu trung tính không rõ rệt [8]

1.1.5 Một số chất trung gian hoá học trong phản ứng viêm

* Các chất chuyển hoá của acid arachidonic

Prostagladin (PG)

Khi tế bào bị tổn thương, màng phospholipid của tế bào sẽ bị hoạt hoá bởi phospholipase A2 tạo thành acid arachidonic PG là sản phẩm chuyển hoá của acid arachidonic theo con đường cyclooxygenase (COX) Enzym COX có hai đồng phân là COX-1 và COX-2 COX-1 là enzym có mặt ở hầu hết các

mô, chịu trách nhiệm tổng hợp PG sinh lý tham gia vào các chức năng bình thường của cơ thể (đặc biệt ở đường tiêu hoá, tiểu cầu và thận), ổn định nội môi và bảo vệ tế bào COX-2 được xem là enzym tiền viêm, chỉ xuất hiện tại các tổ chức bị tổn thương và có vai trò tạo ra các PG gây viêm

Trong viêm cấp, các mô và mạch máu sản xuất ra PGE2 và PGI2 , các tế bào mast giải phóng ra PGD2 Trong viêm mạn các bạch cầu đơn nhân và đại thực bào cũng giải phóng ra PGE2 và thromboxan A2 Các chất PGE2, PGI2, PGD2 là các chất giãn mạch mạnh, đồng thời chúng cũng hiệp đồng tác dụng với các chất giãn mạch khác như histamin và bradykinin Chúng không trực tiếp làm tăng tính thấm thành mạch mà gián tiếp thông qua tác dụng của histamin và bradykinin

Tuy nhiên, bên cạnh chức năng là chất trung gian trong viêm, một số PG còn có vai trò chống viêm đáng kể do làm giảm hoạt tính của các tế bào viêm

Ví dụ: PGE2 làm giảm giải phóng các enzym của lysosom và các chất chuyển

hóa gây độc từ bạch cầu trung tính, làm giảm giải phóng histamin từ tế bào mast [20], [51]

Leucotrien

Ngoài con đường COX, acid arachidonic có thể được chuyển hoá theo con đường lipooxygenase (LOX ) để tạo ra leucotrien Các leucotrien được tổng hợp chủ yếu bởi tế bào viêm như bạch cầu đa nhân, đại thực bào và dưỡng bào [22]

Leukotriene B4 là chất trung gian quan trọng trong mọi loại viêm Chúng được tìm thấy trong dịch tiết viêm và các mô trong tình trạng viêm như viêm khớp dạng thấp, bệnh vẩy nến, viêm loét đại tràng Các leukotriene chứa cystein có mặt trong đờm của viêm phế quản mạn tính Người ta cho rằng chúng là một trong các chất trung gian chính ở cả giai đoạn đầu và cuối của bệnh hen suyễn [51]

* Các acid amin hoạt mạch

Histamin

Histamin được hình thành và dự trữ sẵn trong các hạt và được giải phóng

do sự vỡ hạt của các dưỡng bào khi đáp ứng với các kích thích như: tổn thương vật lý, phản ứng miễn dịch làm gắn các kháng thể với các dưỡng bào Histamin gây giãn các tiểu động mạch và tăng tính thấm thành mạch đối với các tiểu tĩnh mạch

Serotonin

Serotonin có tác động tương tự như histamin [22]

* Yếu tố hoạt hoá tiểu cầu (PAF)

PAF hoạt động trên các receptor đặc hiệu của nó và có khả năng gây ra nhiều hiện tượng trong viêm PAF hoạt hoá mạnh bạch cầu đa nhân trung tính, kích thích sự xuyên mạch của bạch cầu, giải phóng các men của tiêu thể, gây hoạt hoá và kết dính tiểu cầu [22]

* Các cytokin

TNF, IL-1, IL-6 tham gia phát triển phản ứng viêm tại chỗ hoặc hệ thống, một số có thể trở thành viêm mạn tính Tại chỗ, chúng làm hoạt hóa nội mô, tăng tổng hợp các phân tử dính của tế bào nội mô Chúng còn gây sốt, làm tăng lượng bạch cầu đa nhân trung tính, tăng sinh nguyên bào sợi và kích thích tổng hợp collagen Còn IL-8 là một tác nhân gây hoá ứng động và hoạt hoá mạnh đối với bạch cầu đa nhân trung tính Nó là chất cảm ứng mạnh của các cytokin khác, chủ yếu là TNF và IL-1 [22]

* Các protein huyết tương

Hệ thống bổ thể

Hệ thống bổ thể có các thành phần C3a và C5a làm tăng tính thấm thành mạch và gây giãn mạch C5a hoạt hoá con đường chuyển hoá LOX của acid arachidonic ở các bạch cầu đa nhân trung tính và bạch cầu đơn nhân, gây giải phóng chất trung gian hoá học của phản ứng viêm C5a còn là tác nhân hoá ứng động mạnh với bạch cầu

Bradykinin

Bradykinin gây giãn mạch và tăng tính thấm thành mạch

Hệ thống đông máu và tiểu tơ huyết

Hệ thống đông máu là một loạt những protein của huyết tương có thể bị hoạt hoá bởi yếu tố Hageman Bước cuối cùng của quá trình là sự chuyển fibrinogen thành fibrin Trong quá trình biến đổi này, các fibrinopeptid được hình thành, nó gây tăng tính thấm mao mạch và có hoạt tính hoá ứng động đối với bạch cầu [22]

* Oxyd nitơ

NO do đại thực bào sản xuất, có tác dụng làm giãn mạch, tăng tính thấm thành mạch, tăng sản xuất các PG viêm Tuy nhiên nếu các đại thực bào bị

hoạt hóa sản xuất quá nhiều NO sẽ gây giãn mạch quá mức, gây shock nhiễm khuẩn [51]

ức chế tạo leukotrien Hầu hết các NSAID ức chế cả COX-1 và COX-2 Một

số thuốc ức chế chọn lọc COX-2 như celecoxib, valdecoxib

Ngoài ra các thuốc này còn đối kháng với hệ enzym phân huỷ protein, ngăn cản quá trình biến đổi protein làm bền vững màng lysosom và đối kháng với tác dụng của các chất trung gian hoá học như bradykinin, histamin,

Hình 1.1 Sơ đồ cơ chế chống viêm của NSAIDs và glucocorticoid

serotonin, ức chế hoá ứng động bạch cầu, ức chế sự di chuyển của bạch cầu tới ổ viêm

* Các thuốc trong nhóm

Aspirin, indomethacin, piroxicam, meloxicam, ibuprofen, diclofenac [3]

1.1.6.2 Thuốc chống viêm steroid (glucocorticoid)

Là nhóm thuốc có cấu trúc giống với cấu trúc của các hormon glucocorticoid của vỏ thượng thận

- Điều hoà các chất trung gian hoá học của phản ứng viêm như các protein của pha cấp, các cytokin, các thụ thể gây kết dính trên màng bạch cầu

- Giảm khả năng hoạt hoá hệ thống bổ thể của phức hợp miễn dịch màng

tế bào, làm giảm sự nguy hiểm của các phản ứng quá mẫn [37]

*Một số enzym có tác dụng chống viêm

α-chymotrypsin, trysin, serratiopeptidase, amylase, papain, bromelain 1.1.6.4 Các flavonoid

* Cơ chế tác dụng [52]

Một số hợp chất flavonoid có tác dụng kháng viêm cả hoạt động in vitro

và in vivo Mặc dù cơ chế tác dụng của các hợp chất này vẫn chưa được biết đầy đủ, một số cơ chế chống viêm của các flavonoid đã được đưa ra:

- Ức chế tổng hợp và hoạt tính sinh học của các prostanoid

Hesperidin và diosmin đã được chứng minh có khả năng ức chế đáng kể của sự hình thành PG in vivo

Quercetin là một chất ức chế mạnh cả hai enzym COX-2 và 5-LOX Một số flavonoid ức chế chọn lọc hoạt tính của LOX in vitro: sideritoflavone, irsiliol, hypolaetin-8-O--D-glucoside, hypolaetin, oroxindin, quercetagetin-7-O--D-glucoside, gossypin, hibifolin và gossypetin

Resveratrol thay đổi các phản ứng viêm thông qua việc ức chế tổng hợp

và giải phóng các chất trung gian tiền viêm, thay đổi tổng hợp eicosanoid, ức chế sự hoạt hóa của các tế bào miễn dịch, ức chế inducible nitric oxide synthase (iNOS) và COX-2 thông qua ức chế NF-B

Các flavonoid từ các loài Citrus chống viêm do chúng ức chế sự tổng hợp và hoạt tính sinh học của các chất trung gian tiền viêm, chủ yếu là các chất chuyển hóa của acid arachidonic, PGE2, PGF2 và thromboxan A2

Tác dụng ức chế phospholipase A2 của một số flavonoid đã được báo cáo trong các nghiên cứu in vitro Các flavonoid prenylat từ Sophora

flavescens và một số biflavonoid (amentoflavone, bilobetin, morelloflavone

và ginkgetin) trong các dược liệu ức chế phospholipase C1 và A2 Morelloflavone, là một chất ức chế tiết phospholipase A2, sử dụng đường uống có tác dụng ức chế phù bàn chân chuột do carrageenin, sử dụng tại chỗ

có tác dụng ức chế viêm tai gây ra bởi 12-O-tetradecanoylphorbol 13 - acetate (TPA)

Ngoài ra còn có các cơ chế khác: ức chế protein và sự dịch mã mARN của COX, ức chế enzym iNOS

- Ức chế giải phóng histamin

Các flavonoid ức chế giải phóng histamin ở pha muộn của phản ứng dị ứng Sự giải phóng các histamin này bị kiểm soát chặt chẽ bởi các leukotrien Một số flavon chứa hydroxyl, các aglycon có hoạt tính này còn các flavon chứa nhóm methoxyl có hoạt tính này yếu hơn

- Ức chế phosphodiesterase

AMP vòng đóng vai trò là chất truyền tin thứ hai của tế bào Hoạt tính của nó trong các tế bào viêm được kiểm soát bởi một enzym thủy phân đặc biệt là phosphodiesterase (PDE) Ức chế PDE sẽ ngăn cản giáng hóa AMP vòng, do đó gây tăng mức AMP vòng nội bào Mức AMP vòng tăng làm cản trở toàn bộ các chức năng của tế bào vì thế ức chế sao chép các gen mã hóa TNF-α và ức chế giải phóng cytokin viêm TNF-α từ phân tử tiền thân của nó trong các tế bào viêm [34],[53]

Nhiều dược liệu chứa flavonoid có tác dụng ức chế phosphodiesterase Các flavon aglycon có năm hoặc nhiều hơn số nhóm thế methoxy (có nhiều polymethoxyflavones trong cam quýt) có xu hướng ức chế phosphodiesterase mạnh, trong khi các C-glycosyl flavon là các chất ức chế yếu, và các flavone-O-glycosid ít hoạt tính hơn các aglycon Gần đây, bốn flavonoid chiết xuất từ

cam thảo, và biflavones từ Ginkgo biloba, thể hiện tác dụng ức chế mạnh phosphodiesterase in vitro

Tác dụng ức chế phosphodiesterase ở bạch cầu đơn nhân của người bị kích hoạt bởi lipopolysacharid đã được báo cáo ở các flavon polymethoxy từ các loài Citrus Các hợp chất này cũng ức chế sự sản xuất các cytokin, TNF-α, IL-10 ở tế bào bạch cầu bị kích hoạt

Flavonid có tác dụng ức chế mạnh nhất sự sản xuất của TNF-α là 3,5,6,7,8,38,48- heptamethoxy flavone (HMF), 5-desmethylnobiletin, sinensetin, nobiletin và 5-hydroxy-3,6,7,8,38,48-hexamethoxyflavone Một số hydroxyl flavones (vd: apigenin, kaempherol, rhamnetin, quercetin, và tamaraxetin) cũng có tác dụng ức chế sản xuất TNF-α ở mức trung bình

- Ức chế hoạt hóa yếu tố sao chép nhân (NF-B)

NF-B đóng vai trò quan trọng nhất trong các đáp ứng viêm và miễn dịch Nó được tìm thấy trong bào tương ở dạng không hoạt động do tạo phức hợp với một protein ức chế là IB IL-1, TNF-α, lipopolysaccharid, tia tử ngoại và các phản ứng kháng nguyên là những yếu tố hoạt hóa kinase của NF-

B Phản ứng phosphoryl hóa IB sẽ dẫn đến hoạt hóa và chuyển vị NF-B tới nhân Tại nhân, NF-B gắn với các chuỗi DNA và kích thích sự sao chép các gen mã hóa cytokin, chemokin, các phân tử kết dính, các bổ thể và các receptor cho những phân tử này, cảm ứng sự sao chép các gen mã hóa enzym COX-2, iNOS [29]

Apigenin ức chế hoạt tính của IB kinase ở đại thực bào của chuột bị kích thích bởi lipopolysaccharid Myricetin, silymarin ức chế hoạt tính và ngăn cản sự giáng hóa của IB kinase Điều này dẫn đến sự giảm biểu hiện gen của COX-2 và iNOS, giảm tổng hợp COX-2 và giảm việc tạo thành các gốc NO

* Một số dược liệu chứa flavonoid có tác dụng chống viêm

- Kim Ngân

+ Tên khoa học: Lonicera japonica Thunb, Caprifoliaceae

+ Bộ phận dùng: hoa, phần trên mặt đất phơi hay sấy khô

+ Công dụng: chữa mụn nhọt, mẩn ngứa, sốt nóng, sốt rét, viêm nhiễm đường hô hấp trên như viêm amydan, viêm họng, viêm da, sưng vú, viêm ruột thừa, viêm màng kết do siêu vi

- Hoàng cầm

+ Tên khoa học: Stecullaria baicalensis Georg, Lamiaceae

+ Bộ phận dùng: Rễ phơi hay sấy khô

+ Công dụng: chữa ho, sốt, lỵ, ỉa chảy, mắt đỏ sưng đau, mụn nhọt, viêm

dạ dày ruột, cao huyết áp, nhức đầu, mất ngủ

- Núc Nác

+ Tên khoa học: Oroxylum imdicum, Bignoniaceae

+ Bộ phận dùng: vỏ và hạt phơi hay sấy khô

+ Công dụng: chữa ho, viêm phế quản, đau gan, đau dạ dày

- Xạ can: theo kinh nghiệm dân gian, xạ can được dùng để chữa viêm họng, vùng amiđan bị sưng mủ Trên thế giới đã có các công trình nghiên cứu

về tác dụng chống viêm của tectorigenin chiết xuất từ xạ can nhưng tại Việt Nam vẫn chưa có công trình nghiên cứu nào đề cập đến tác dụng chống viêm của isoflavonoid này [18],[24]

1.2 TỔNG QUAN VỀ ĐAU

1.2.1 Khái niệm đau

Đau là một cảm giác thuộc về giác quan và xúc cảm, do tổn thương đang tồn tại hoặc tiềm tàng ở các mô gây nên và phụ thuộc vào mức độ nặng nhẹ của tổn thương ấy [13]

1.2.2 Phân loại cảm giác đau

- Đau nhói: Là cảm giác đau như khi có kim châm vào da xuất hiện khi một vùng da rộng bị kích thích

- Đau rát: Là cảm giác đau khi da bị bỏng cháy, gây đau đớn và hành hạ bệnh nhân

- Đau quằn quại: đây không phải là cảm giác đau trên bề mặt cơ thể mà

là cảm giác đau sâu bên trong cơ thể, gây khó chịu cho bệnh nhân [10]

1.2.3 Các receptor với cảm giác đau

Các receptor đau ở da và ở các mô khác nhau là các đầu tận cùng của dây thần kinh cảm giác đau Chúng được phân bố rộng trên lớp nông của da và ở các mô bên trong như màng xương, thành động mạch, mặt khớp, màng não Các mô nằm sâu có ít receptor đau hơn

Các kích thích lên receptor đau là các kích thích cơ học, nhiệt và hoá học [11]

1.2.4 Đường dẫn truyền cảm giác đau

- Tín hiệu đau từ ngoại biên được truyền về tuỷ sống nhờ hai loại sợi thần kinh là sợi Aδ (truyền cảm giác đau cấp: đau nhói, đau tại chỗ) và sợi C (truyền cảm giác đau mạn: đau âm ỉ, đau lan tỏa, đau do bỏng)

- Dẫn truyền từ tủy lên não (nơron thứ hai):

Cảm giác đau được dẫn truyền theo nhiều đường: bó gai - thị nằm ở cột trắng trước - bên; bó gai - lưới tận cùng ở các vùng khác nhau ở hành não, cầu não, não giữa của cả hai bên; các bó gai - cổ - đồi thị từ tuỷ cùng bên đi lên Tại các synap với nơron thứ hai ở sừng sau tủy, các sợi C tiết ra chất truyền đạt là chất P Chất P là chất trung gian hoá học chủ yếu trong đường dẫn truyền cảm giác đau

- Nhận cảm ở vỏ não:

Nơron thứ ba từ đồi thị lên nhiều vùng khác nhau ở nền não và ở vùng cảm giác đau của vỏ não Trên vỏ não không có một trung tâm chuyên biệt nhận cảm đau Tuy mất vỏ não vẫn còn cảm giác đau nhưng võ não vẫn có vai trò trong việc đánh giá đau [11]

Cơ chế kiểm soát đau của cơ thể được trình bày ở hình 1.2 [51]

Hình 1.2 Cơ chế điều biến trong con đường nhận cảm đau 1.2.5 Thuốc giảm đau

Thuốc giảm đau được chia làm hai loại: thuốc giảm đau, gây ngủ và

thuốc giảm đau, hạ sốt, chống viêm

1.2.5.1 Thuốc giảm đau, gây ngủ

Thuốc giảm đau, gây ngủ (thuốc giảm đau trung ương, thuốc giảm đau

loại morphin) có đặc tính: giảm đau mạnh, sâu

- Cơ chế:

Các opioid gắn vào receptor opioid (µ,k, δ) làm kích thích receptor này

Tất cả các receptor của opioid đều cặp đôi với protein Gi Khi kích thích các

receptor của opioid, gây ức chế adenylcyclase, ức chế mở kênh Ca++ và hoạt

hóa kênh K+ (tăngưu cực) Vì vậy, ức chế giải phóng các chất dẫn truyền thần

kinh (chất P, acid glutamic) và ngăn cản dẫn truyền xung động thần kinh Các

Kích thích

Viêm Con đường nhận cảm đau

Đau

+ Receptor muy (µ): khi kích thích gây tác dụng giảm đau, ức chế hô hấp, co đồng tử, giảm co bóp cơ trơn dạ dày, ruột và gây sảng khoái

+ Receptor kappa (k): khi kích thích gây tác dụng giảm đau, suy hô hấp,

co đồng tử và an thần

+ Receptor delta (δ): chưa được nghiên cứu đầy đủ trên người, nhưng trên động vật khi kích thích cũng có tác dụng giảm đau

- Nhóm thuốc này bao gồm:

+ Thuốc chủ vận trên receptor opioid

● Các opioid tự nhiên: morphin, codein

● Các opioid tổng hợp: pethidin, methadon

+ Thuốc chủ vận - đối kháng hỗn hợp và chủ vận từng phần trên receptor opioid: pentazocin, nalorphin, nalbuphin, butorphanol

+ Thuốc đối kháng đơn thuần trên receptor opioid: naloxon, naltrexon [3]

1.2.5.2 Thuốc giảm đau, hạ sốt, chống viêm

Các thuốc này chỉ có tác dụng với các chứng đau nhẹ, đau khu trú, tác dụng tốt với các chứng đau do viêm (đau khớp, viêm cơ, viêm dây thần kinh, đau răng)

- Cơ chế:

Nhóm thuốc này có tác dụng giảm đau do làm giảm tổng hợp PGF2α nên thuốc làm giảm tính cảm thụ của các dây cảm giác với các chất gây đau của phản ứng viêm như bradykinin, histamin, serotonin Ngoài ra, một số tác giả khác còn thấy các NSAID có cả tác dụng giảm đau ở các nơron ngoại biên và trung ương

- Các thuốc trong nhóm: paracetamol, ibuprofen, indomethacin, diclofenac [3],[4]

- Dây đau xương

+ Tên khoa học: Tinospora sinensis, Menispermaceae

1.3 TỔNG QUAN VỀ CÂY XẠ CAN VÀ TECTORIGENIN

1.3.1 Cây xạ can

1.3.1.1 Đặc điểm thực vật

Hình 1.3 Cây xạ can Cây xạ can còn gọi là cây rẻ quạt, lưỡi dòng

Xạ can có tên khoa học là Belamcanda sinensis, họ Lay Ơn Iridaceae

Vị thuốc xạ can (Rhizoma Belamcandae) là thân rễ phơi hay sấy khô của cây xạ can

Xạ can là một loại cây thảo, sống nhiều năm Thân rễ mọc bò phân nhánh nhiều Thân có lá mọc thẳng đứng, có thể cao tới 1m Lá hình mác, hơi có bẹ, dài 20-40cm, rộng 15-20cm Cụm hoa dài 20-40cm, cuống gầy mềm Hoa có cuống, bao hoa có 6 cánh màu vàng cam đỏ, điểm những đốm tía Quả nang hình trứng, có 3 van, dài 23-25mm, hạt xanh đen, hình cầu bóng, đường kính 5mm [18],[24]

1.3.1.2 Đặc điểm vị thuốc

Xạ can có vị đắng, tính mát, hơi có độc, vào hai kinh: phế và can, có tác dụng thanh nhiệt, giải độc, tán huyết, tiêu đờm [24]

1.3.1.3 Phân bố, thu hái và chế biến

Cây sống trong trạng thái hoang dại và được trồng ở Ấn Độ, Triều Tiên, phía nam Nhật Bản, Đông Nam Trung Quốc và một số nước Đông Nam Á

Ấn Độ và Trung Quốc là hai nước trồng xạ can nhiều nhất thế giới

Ở Việt Nam, có thể gặp xạ can ở rất nhiều nơi Cây mọc rải rác ở các bãi hoang quanh làng, hoặc dưới chân núi đá vôi ở Ninh Bình, Thanh Hoá, Lạng Sơn, Quảng Ninh Cây cũng được trồng ở vườn làm cảnh ở các gia đình, trồng làm thuốc ở vườn cây thuốc của các cơ sở y tế

Cây rất dễ trồng, có sức sống dai, tái sinh dinh dưỡng khỏe từ các phần thân rễ và từ hạt Khi trồng, xạ can mọc bò lan bằng thân ngầm, vì vậy chỉ cần làm cỏ thời gian đầu Cây ít bị sâu bệnh [24]

Xạ can được trồng tại Việt Nam có nhiều tác dụng sinh học khác nhau:

- Cao cồn thân rễ xạ can có tác dụng ức chế nhiều chủng vi khuẩn in vitro như: phế cầu, liên cầu tan máu, trực khuẩn ho gà, Bacillus subtilis

- Thân rễ xạ can có tác dụng chống viêm trong mô hình gây phù bàn chân chuột với kaolin, gây u hạt thực nghiệm bằng amian ở chuột cống trắng

và có độc tính thấp Có tác dụng chống co thắt gây bởi histamin trên cơ trơn chuột lang cô lập, có tác dụng lợi tiểu nhẹ

- Cao chiết với nước nóng từ thân rễ xạ can có hoạt tính ức chế aldose reductase là enzym gây tích lũy sorbitol trong tế bào

- Nước sắc thân rễ xạ can được tiêm phúc mạc chuột, ở liều tương đương với liều dùng cho người sau 24h - 48h không thấy có tổn thương nhiễm sắc

thể, với liều gấp 4 lần bắt đầu có tổn thương nhẹ và liều gấp 15 lần làm tăng chỉ số phân bào và lệch bội [24]

1.3.1.7 Các bài thuốc cổ truyền có xạ can

- Bài thuốc chữa viêm họng:

+ Thành phần: xạ can 4g, kinh giới 16g; kim ngân, huyền sâm, sinh địa, mỗi vị 12g; bạc hà, cỏ nhọ nồi, tang bạch bì, mỗi vị 8g

+ Chủ trị: viêm họng

- Xạ can ma hoàng thang:

+ Thành phần: xạ can, tử quyển, ma hoàng, sinh khương, bán hạ, khoản đồng hoa, mỗi vị 9g; ngũ vị tử, tế tân 3g, đại táo 3 quả Sắc uống nước

+ Chủ trị: chỉ khái, khoát đàm, trị chứng ho khí cấp, đờm khò khè trong họng

- Xạ can thang:

+ Thành phần: bán hạ 12g, ma hoàng 20g, tử quyển 20g, chích thảo 20g, quế tâm 8g, xạ can 20g, đại táo 20 quả, sinh khương 20g Sắc uống ngày một thang

+ Chủ trị: trẻ nhỏ ho nghịch, suyễn cấp, họng như có nước ủng tắc [24],[21]

1.3.1.8 Các chế phẩm trên thị trường có chứa vị thuốc xạ can

- Viêm ngậm Ngọc hầu (Nata Hoa Linh)

+ Thành phần: chanh muối, kim ngân hoa, xạ can, huyền sâm

+ Chỉ định: hầu họng viêm, sưng đau

- Viên ngậm Cagu (Traphaco)

+ Thành phần: xạ can, can khương, cam thảo, quế

+ Chỉ định: viêm họng, đau họng, rát cổ

- Siro bổ phổi (Thephaco)

+ Thành phần: ma hoàng, cát cánh, xạ can

+ Chỉ định: đau họng, viêm họng, ho do cảm lạnh

- Viên ngậm trị viêm họng (Tập đoàn y dược Bảo Long)

+ Thành phần: lưỡng diện chân, xạ can, cam thảo, kha tử

+ Chỉ định: trị ho, tích đờm, viêm họng, chân răng sưng đau

5,7-Dihydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-6-methoxy-4H-1-benzopyran-4 Tính chất: tinh thể hình kim, màu vàng nhạt; nhiệt độ nóng chảy là 2255,7-Dihydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-6-methoxy-4H-1-benzopyran-4

225-226o C

Tectorigenin là một isoflavonoid được chiết xuất từ thân rễ của Iris tectorum Maxim., Iridaceae năm 1927 Đến năm 1928, Asahina và cộng sự đã xác định được cấu trúc của tectorigenin và đến năm 1960 trên thế giới đã tổng hợp được flavonoid này Hiện nay, tectorigenin được tìm thấy trong nhiều dược liệu khác nhau như Belamcanda chinensis, Pueraria thunbergiana

Năm 1970, tectorigenin đã được phân lập từ cây xạ can Việt Nam [18],[24]

1.3.3 Tác dụng sinh học của tectorigenin

Trong những năm gần đây, trên thế giới có rất nhiều công trình nghiên cứu về tác dụng sinh học của tectorigenin được công bố

* Về tác dụng chống viêm của tectorigenin

Kim YP và cộng sự đã quan sát được tác dụng ức chế sản xuất PGE2 do

ức chế sự cảm ứng enzym COX-2 ở đại thực bào phúc mạc chuột Các chất này ức chế chọn lọc trên COX-2 mà không ức chế COX-1 Điều này gợi ý rằng cơ chế chống viêm của tectorigenin là ức chế sản xuất PGE2 do ức chế chọn lọc COX-2 ở các tế bào viêm [52] Nghiên cứu sâu hơn Cheol-Ho và cộng sự thấy rằng tectorigenin có khả năng ức chế sự hình thành của NO, COX- 2, PGE2, IL-1β bị cảm ứng bởi IFN-γ/LPS thông qua biểu hiện gen Tác dụng ức chế này là do tectorigenin đã khóa NF-κB hoạt hóa ở đại thực bào [46]

* Các tác dụng khác

Jun SH và cộng sự đã nghiên cứu tác dụng ức chế mạnh enzym aldose reductase của tectorigenin, do đó có thể ngăn chặn được các biến chứng của đái tháo đường trên mô hình chuột gây đái tháo đường do streptozocin Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng, tectorigenin có tác dụng ức chế sự tích luỹ sorbitol ở các vị trí như thuỷ tinh thể, dây thần kinh hông hay tế bào hồng cầu [33]

Jens-Gerd Scharf và cộng sự đã nghiên cứu tác dụng ức chế khối u trên chuột thực nghiệm của tectorigenin và các chất khác từ dịch chiết của thân rễ

xạ can Cụ thể: tectorigenin có tác dụng ức chế sự tăng sinh của các tế bào ung thư tuyến tiền liệt Cơ chế có thể do tectorigenin có tác dụng sửa chữa những bất thường trong biểu hiện một số gen liên quan đến ung thư tuyến tiền liệt Từ kết quả nghiên cứu này cho thấy tectorigenin trong tương lai có thể được sử dụng để ngăn ngừa và điều trị ung thư tuyến tiền liệt [57]

Tectorigenin có tác dụng làm giảm sự tăng sinh của các tế bào HSC-T6 phụ thuộc vào thời gian và liều dùng Thêm vào đó, tectorigenin gây ra sự chết theo chương trình của các tế bào HSC-T6 và có khả năng chống lại sự hình thành xơ (trong xơ gan, tính chất đặc trưng nhất là dư thừa collagen type I; các tế bào hình sao hoạt hóa (HSC) là các tế bào chịu trách nhiệm chính về việc sản xuất dư thừa collagen) [63]

Tectorigenin ức chế sự tăng sinh của các nguyên bào sợi ở phổi và tăng hoạt hóa miR-338* Điều này cho thấy tectorigenin có thể có khả năng ức chế bệnh sinh của xơ hóa phổi vô căn [64]

Wozniak D và cộng sự đã nghiên cứu khả năng chống đột biến và chống oxy hoá của các isoflavonoid từ xạ can [62]

Lee HU và cộng sự đã nghiên cứu tác dụng bảo vệ tế bào gan của tectorigenin trên tế bào gan bị gây độc bởi tert-butyl hyperoxide [40]

Satoru Tamura và cộng sự đã quan sát thấy khả năng ức chế sự biểu hiện của receptor IgE trên tế bào mast của người Receptor của IgE (FcεRI) chính

là chìa khóa phân tử để kích hoạt các phản ứng dị ứng thông qua IgE Receptor này có 3 tiểu đơn vị là α, β, γ; tectorigenin làm giảm sự hình thành của tiểu đơn vị γ nên làm giảm biểu hiện của FcεRI Tectorigenin được phát hiện là chất ức chế mạnh nhất trong số các chất của 400 dược liệu khác nhau được khảo sát Đây có thể là một hướng nghiên cứu mới về các thuốc dị ứng [56]

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU

2.1.1 Thuốc nghiên cứu

Chế phẩm TEC-01 (thành phần chính là tectorigenin) do phòng Hóa Dược, Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam chiết tách từ thân rễ cây Xạ can (Belamcanda chinensis) thu tại Vườn Quốc gia Tam Đảo, Việt Nam cung cấp

- Quy trình chiết tách như sau:

Hình 2.5 Quy trình chiết tách TEC-01

Thân rễ xạ can

Cắn chiết ethanol

Dịch chiết nước

Cắn chiết ethyl acetat

+ Ethanol 70, cất loại dung môi

+ nước, chiết loại béo với n-hexan

+ pH = 3-4, chiết với ethyl acetat

Tách bằng sắc ký cột, SiO2

DM 25:1 Phân đoạn isoflavonoid

(TEC-01)

- Tiêu chuẩn thành phẩm:

+ Tính chất: bột màu vàng nhạt

+ Thành phần: 95% là tectorigenin

2.1.2 Súc vật thí nghiệm

- Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả 2 giống, khoẻ mạnh, có trọng lượng

20 - 22g do viện Vệ sinh dịch tễ TW cung cấp

- Chuột cống trắng, cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 180-200g, do học viện Quân Y cung cấp

- Động vật thí nghiệm sau khi mua được nuôi dưỡng theo chế độ tiêu chuẩn, cho ăn thức ăn do viện Vệ sinh Dịch tễ cung cấp và cho uống nước tự

do tại phòng nuôi động vật thí nghiệm bộ môn Dược lực, trường đại học Dược Hà Nội

- Prednisolon lọ 125 mg do viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế sản xuất

- Kit định lượng các enzym và chất chuyển hóa trong máu: ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), cholesterol toàn phần, protein toàn phần và creatinin là hoá chất của hãng Teco Diagnostics (Mỹ)

- Các hoá chất khác đạt độ tinh khiết hóa học

2.1.4 Máy móc thiết bị nghiên cứu

- Tủ lạnh, tủ sấy, tủ ấm Memmert

- Cân phân tích Precisa XB 220A và cân kỹ thuật GM 312

TEC-01

Nghiên cứu

độc tính

Nghiên cứu tác dụng chống viêm

Nghiên cứu tác dụng giảm đau

Độc

tính cấp Độc tính bán trường diễn đau quặn Giảm phiến nóng Giảm đau viêm cấp Chống viêm mạn Chống

- Dụng cụ đo thể tích chân chuột: thiết bị Plethymometer model 7140, hãng Ugo basile

- Máy LE 7406 Hot plate, hãng Letica Scientific Instruments, Tây Ban Nha

- Máy sinh hoá TC 84 plus của hãng Teco Diagnostics (Mỹ)

- Máy huyết học poCH-100i của hãng Sysmex (Nhật Bản)

- Máy móc và dụng cụ thí nghiệm khác thuộc bộ môn Dược lực - trường đại học Dược Hà Nội

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Thiết kế nghiên cứu (sơ đồ mô hình nghiên cứu):

Hình 2.6 Sơ đồ mô hình nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu độc tính

2.2.1.1 Nghiên cứu độc tính cấp

Nghiên cứu độc tính cấp trên chuột nhắt trắng theo đường uống [12],[14],[44]

Chuột thực nghiệm được nuôi ổn định trong điều kiện phòng thí nghiệm

5 ngày, sau đó chia ngẫu nhiên chuột thành 5 lô, mỗi lô 10 con

Trước khi tiến hành thí nghiệm 12 giờ, cho chuột nhịn đói nhưng được cho uống nước đầy đủ

Tiến hành thí nghiệm: cho từng lô chuột uống thuốc thử TEC-01 với mức liều từ cao nhất không gây chết tới mức liều thấp nhất gây chết Theo dõi chuột liên tục trong vòng 4h, tỉ lệ chết trong 72 giờ và các dấu hiệu khác trong vòng 7 ngày sau khi uống TEC-01

Các chỉ tiêu theo dõi:

- Tình trạng chung của chuột: hoạt động tự nhiên, tư thế, màu sắc (mũi, tai, đuôi), lông, phân, nước tiểu

- Tỉ lệ chết trong 72 giờ và các dấu hiệu khác trong vòng 7 ngày sau khi thử nghiệm

- Khi có chuột chết, mổ để quan sát đại thể cơ quan phủ tạng Nếu cần, làm vi thể xác định nguyên nhân

- Xác định LD50 (nếu có) theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon 2.2.1.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn

Nghiên cứu độc tính bán trường diễn được tiến hành trên chuột nhắt trắng [12],[45]

Chuột thực nghiệm được nuôi ổn định trong điều kiện phòng thí nghiệm 5 ngày, sau đó chia ngẫu chuột thành 3 lô, mỗi lô 30 con

- Lô chứng: cho uống dung dịch NaCMC 1%

- Lô thử 1: uống TEC-01 với liều 100 mg/kg

- Lô thử 2: uống TEC-01 với liều 300 mg/kg

TEC-01 được pha trong dung dịch NaCMC 1% để đảm bảo thể tích cho uống đồng đều ở tất cả các lô (0,2ml/10g chuột)

Chuột nhắt trắng được cho uống dung dịch NaCMC 1% hoặc TEC-01 hàng ngày vào khoảng 9 giờ sáng, liên tục trong 28 ngày Tại 3 thời điểm: trước uống thuốc, sau 14 ngày và 28 ngày uống thuốc; giết chuột (mỗi thời điểm 10 con/lô) và lấy máu để đánh giá các chỉ tiêu:

- Tình trạng chung, thể trọng của chuột