Bước đầu nghiên cứu sử dụng vi sinh vật để sản xuất chế phẩm probiotic phòng và trị bệnh đường ruột cho heo

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SỬ PHẠM TP. HỒ CHÍ MINH KHOA SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ ĐỀ TÀI : BƢỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG VI SINH VẬT ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC PHÒNG VÀ TRỊ BỆNH ĐƢỜNG RUỘT CHO HEO MÃ SỐ CS. 2005. 23. 92 CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI TS. Trần Thanh Thúy TP. HỒ CHÍ MINH - 2006 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SỬ PHẠM TP. HỒ CHÍ MINH KHOA SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ ĐỀ TÀI : BƢỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG VI SINH VẬT ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC PHÒNG VÀ TRỊ BỆNH ĐƢỜNG RUỘT CHO HEO MÃ SỐ CS. 2005. 23. 92 CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI TS. Trần Thanh Thúy TP. HỒ CHÍ MINH - 2006 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Tổng quan về probiotic 3 1.1.1. Lƣợc sử nghiên cứu probiotic 3 1.1.2. Thành phần và đặc điểm vi sinh vật đƣợc sử dụng trong probiotic 3 1.1.3. Cơ chế tác động của probiotic 5 1.1.4. Vai trò của probiotic 8 1.1.5. Tình hình nghiên cứu và sử dụng probiotic trên TG và VN 11 1.2. Sơ lƣợc về vi sinh vật probiotic 13 A. Vi khuẩn lactic 13 1.2.1. Đặc điểm hình thái 14 1.2.2. Phân loại vi khuẩn lactic 14 1.2.3. Quá trình lên men lactic 16 1.2.3.1. Lên men lactic đồng hình 16 1.2.3.2. Lên men Lactic dị hình 17 1.2.4. Các yếu tố ảnh hƣởng đến sự sinh trƣởng, phát triển của vi khuẩn lactic 17 1.2.4.1. Nguồn cacbon 17 1.2.4.2. Nguồn nitơ 18 1.2.4.3. Các muối vô cơ 18 1.2.4.4. Các chất sinh trƣởng 18 1.2.4.5. Oxy 19 1.2.4.6. Nhiệt độ 19 1.2.4.7. pH 20 1.2.5. ứng dụng của vi khuẩn lactic trong sản xuất các chế phẩm sình học phục vụ đời sống 20 B. Nấm men 21 1.3. Tổng quan về heo 24 1.3.1. Vị trí phân loại của heo 24 1.3.2. Đặc điểm sinh lý tiêu hóa ở heo con 24 1.3.2.1. Đặc điểm bộ máy tiêu hóa 24 1.3.2.2. Thành phần hệ vi sinh vật đƣờng ruột 25 1.3.3. Các bệnh đƣờng ruột ở heo con 25 1.3.3.1. Bệnh tiêu chảy ở heo con do E. coli 25 1.3.3.2. Tiêu chảy do Saimonella (Phó thƣơng hàn) 26 1.3.4. Các biện pháp phòng và điều trị 26 1.3.4.1. Phòng bệnh 26 1.3.4.2. Điều trị 27 CHƢƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1. Vật liệu 29 2.1.1. Nguyên liệu 29 2.1.2. Môi trƣờng (xem Phần phụ lục) 29 2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu 29 2.2.1. Phân lập vi khuẩn lactic theo phƣơng pháp Koch [13] 29 2.2.2. Xác định khả năng sinh axit tổng bằng phƣơng pháp cấy chấm điểm [12], [13], [25], [36], [37] 29 2.2.3. Định lƣợng axit lactic bằng phƣơng pháp chuẩn độ Therner [12], [13], [25], [36], [37] 30 2.2.4. Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa 30 2.2.5. Xác định hoạt tính ức chế vỉ khuẩn kiểm định bằng phƣơng pháp khoan lỗ thạch [12], [13], [25], [36], [37]. 32 2.2.6. Hoạt tính đề kháng với các chất kháng sinh của vi khuẩn lactic 33 2.2.7. Phƣơng pháp bảo quản giống VK lactic bằng phƣớng pháp đông khô 34 2.2.8. Xác định gián tiếp mật độ tế bào bằng phƣơng pháp đếm số khuẩn lạc mọc trên môi trƣờng thạch [12], [13], [36], [37] 35 2.2.9. Khảo sát sự sinh trƣởng và và các yếu tố ảnh hƣởng đến khả năng sinh trƣởng của vi khuẩn lactic bằng phƣơng pháp đo mật độ quang [12], [13] 35 2.2.10. Khảo sát sự ảnh hƣởng của các yếu tố môi trƣờng đến khả năng tạo sinh khối của tế bào nấm men bằng phƣơng pháp cân sinh khối tƣơi 38 2.2.11. Phƣơng pháp tổ hợp giống vi khuẩn lactic [12], [13], [36], [37] 38 2.2.12. Tạo chế phẩm probiotic 39 2.2.13. Phƣơng pháp thử nghiệm chế phẩm trên heo con sau cai sữa 40 CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 42 3.1. Phân lập tuyển chọn các chủng VSV có các đặc tính phù hợp với yêu cầu tạo chế phẩm probiotic 42 3.1.1. Phân lập và sơ bộ tuyển chọn Vklactic 42 3.1.2.Tuyển chọn các chủng VK lactic - probiotic 42 3.1.2.1. Khả năng sinh axit lactic của các chủng 43 3.1.2.2. Khả năng đối kháng với các vi khuẩn kiểm định 44 3.1.2.3. Khảo sát hoạt tính đề kháng với các chất kháng sinh 46 3.2. Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của 3 chủng vi khuẩn lactic tuyển chọn 48 3.2.1. Các đặc điểm hình thái của chủng B, N 4 , L 2 48 3.2.2. Các đặc điểm sinh lý, sinh hóa của 3 chủng B, N 4 , L 2 48 3.3. Nghiên cứu đặc điểm sinh học của chủng nấm men 52 3.3.1. Khả năng đề kháng các kháng sinh của chủng Saccharomyces cerevisiae 52 3.3.2. Khảo sát khả năng đối kháng với các vi khuẩn kiểm định 53 3.3.3. Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa chủng nấm men 54 3.4. Ảnh hƣởng một số điều kiện môi trƣờng đến sự tạo thành sinh khối các chủng nghiên cứu 55 A. Vi khuẩn lactic 55 3.4.1. Ảnh hƣởng của môi trƣờng nuôi cấy 55 3.4.2. Ảnh hƣởng của các điều kiện môi trƣờng đến sự tạo thành sinh khối của các chủng vi khuẩn lactic 57 3.4.2.1. Nhiệt độ nuôi cấy 57 3.4.2.2. pH ban đầu 59 3.4.2.3. Nguồn thức ăn nitơ 60 3.4.2.4. Nồng độ cao nấm men 62 3.4.2.5. Nguồn thức ăn cacbon 63 3.4.2.6. Nồng độ saccharose 64 3.4.3. Động thái quá trình tạo sinh khối tế bào của các chủng vi khuẩn lactic trong điều kiện tối ƣu 65 B. Nấm men 66 3.5. Tạo chế phẩm probiotic 68 3.5.1. Đông khô các chủng VSV 68 3.5.2. Xác định tỷ lệ phối trộn các chủng trong các chế phẩm 68 3.5.3. Đóng gói tạo chế phẩm probiotic 71 3.6. Kiểm tra chất lƣợng chế phẩm 72 3.6.1. Khả năng sống sót của các chủng vsv sau quá trình đông khô 72 3.6.2. Khả năng đối kháng với các VK kiểm định của các chủng trong chế phẩm 73 3.7. Xây dựng quy trình công nghệ tạo chế phẩm probiotic 75 3.8. Bƣớc đầu thử nghiệm chế phẩm P-SP-01 trên heo con sau cai sữa 76 3.8.1. Tỷ lệ tiêu chảy ở heo con sau cai sữa 76 3.8.2. Tăng trọng ở heo con sau cai sữa 78 3.8.3. Hệ số tiêu tốn thức ăn 79 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 82 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TRONG NƢỚC 84 PHỤ LỤC i BẢNG CÁC CHỮ VIẾT TẮT CNSH Công nghệ sinh học ĐHNN Đại học Nông nghiệp ĐHQG Đại học Quốc gia ĐHSP Đại học Sƣ phạm MT Môi trƣờng PTN Phòng thí nghiệm SHPT Sinh học phân tử TB Tế bào TBC Tế bào chất TG Thế giới VK Vi khuẩn VN Việt Nam VSV Vi sinh vật Mẫu 1.10 TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CỞ SỞ Tên đề tài: Bước đầu nghiên cứu sử dụng Vi sình vật để sản xuất chế phẩm probiotic phòng và trị bệnh đường ruột cho heo. Mã số: CS.2005.23.92 Chủ nhiệm đề tài: Trần Thanh Thủy Tel:0908 402 475 Email: thanhthuydhsp2000@yahoo.com. Cơ quan chủ trì đề tài: Trường Đại học Sư phạm Tp.HCM Cơ quan và cá nhân phối hợp thực hiện : 1. TS. Nguyễn Thị Hoài Hà, Trung tâm CNSH, Đại học Quốc gia Hà Nội. 2. TS. Võ Thị Hạnh, Phòng Vi sinh, Viện sinh học Nhiệt đới TP.HCM. Thời gian thực hiện: 1 năm. 1. Mục tiêu: Sử dụng một số chủng VSV có lợi (Vi khuẩn lactỉc, nấm men) tạo chế phẩm có khả năng phòng và trị bệnh tiêu chảy cho heo cỏ hiệu quả. 2. Nội dung chính: - Phân lập, tuyển chọn các chủng vi khuẩn lactic, nấm men có hoạt tính cần thiết của chủng probiotic. - Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa và phân loại các chủng VSV đã tuyển chọn. - Nghiên cứu các điều kiện tối ƣu cho sự tạo sinh khối các chủng. - Tạo chế phẩm probiotic. - Kiểm tra chất lƣợng chế phẩm. - Bƣớc đầu thử nghiệm chế phẩm trên heo con sau cai sữa. 3. Thành quả chính đạt đƣợc (khoa học, ứng dụng, đào tạo, kinh tế - xã hội): - Đã có 2 bài báo : "Nghiên cứu đặc điểm sinh học chủng nấm men Saccharomyces sp.02", Tạp chí Khoa học Trƣờng ĐHSP TP.HCM năm 2006. " Đặc điểm các chủng vi khuẩn lactic dùng trong chế phẩm probiotic phòng và trị bệnh tiêu chảy cho heo," Hội nghị khoa học lần thứ 20 Trƣờng ĐHBK Hà Nội, năm 2006). - Hoàn thành 1 luận văn Thạc Sĩ Sinh học, 2 cử nhân Sinh học. Mẫu 1.10 SUMMARY Project Title: Onfirst study on utilliation microorganisms stains to produce the preparation probiotic for preventing and treating the digestive disorder in pigs Code number: CS.2005.23.92 Coordinator: Dr. Trần Thanh Thủy Tel: 0908 402 475 Implementing Institution : Hồ Chí Minh city University of Pedagogy Cooperating Institution(s): Dr. Nguyễn Thị Hoài Hà - Center of Biotechnology Việt Nam national University, Hà Nội Dr. Võ Thị Hạnh - Institute of Tropical Biology, National center for Science and Technology of Việt Nam. Duration: from 6/ 2005 to 6/2006 Objectives: On first study on utilization microorganisms stains to produce the preparation probiotic for preventing and treating the digestive disorder in pigs Main contents: - Isolation and selection of some acid lactic bacteria, yeast strains with high probiotic activity. - Studies biological characteristisct of the yast and acid lactic bacteria strains. - Studies the optimal conditions for their receiving biomass . - Research on technology to produce probiotic. - To appraise the quality of products. - On first test probiotic on weaned piglings, we find good resuls. Results obtained : + " Lactic acid bacteria characteristics in probiotic for preventing and treatirtg the digestive disorder of pigs ", proceeding of the 20 th scientfic conference Ha Noi University of Technology, 10/2006. + "Studying some biological characteristisct of the strain Saccharomyces sp.02, Journal of science Ho Chi Minh city University of Pedagogy, 7/2006. + Finish 1 dissertation of Biology master, 2 dỉssertation Biology bachelors. 1 MỞ ĐẦU Đã từ lâu, VK lactic và nấm men vốn nổi tiếng với vai trò quan trọng trong các thực phẩm lên men đem lại nhiều tác dụng tốt cho sức khỏe con ngƣời. Những năm gần đây, nhóm VSV này đƣợc biết đến nhiều hơn với chức năng "VK probiotic" nhằm ngăn ngừa, hạn chế dịch bệnh cho ngƣời và vật nuôi. Probiotic là chế phẩm có bổ sung các vi sinh vật sống có lợi giúp cải thiện sự cân bằng hệ VSV tự nhiên nơi đƣờng ruột, có khả năng cạnh tranh và đối kháng với mầm bệnh, tiết các chất trung hòa các độc tố, tăng cƣờng chuyển hóa thức ăn, bổ sung các dƣỡng chất (protein, khoáng, vitamin), kích thích miễn dịch trên cơ thể ngƣời cũng nhƣ vật nuôi. Trong chăn nuôi heo, bệnh tiêu chảy là căn bệnh khá phổ biến, gây thiệt hại không nhỏ đến năng suất và chất lƣợng sản phẩm nuôi. Việc sử dụng kháng sinh để trị bệnh này thƣờng dẫn đến hiện tƣợng loạn khuẩn khiến tiêu chảy kéo dài cùng với những hậu quả nghiêm trọng cho sức khỏe con ngƣời cũng nhƣ môi trƣờng sinh thái. Phƣơng pháp hữu hiệu nhất khắc phục tình trạng này là tái lập cân bằng hệ vi khuẩn đƣờng ruột bằng cách bổ sung một hệ vi khuẩn có lợi mới dƣới dạng các chế phẩm probiotic. Phòng bệnh bằng chế phẩm tiền sinh học hay còn gọi là probiotic nhằm tăng cƣờng khả năng tự đề kháng bệnh cho vật nuôi là cách làm có hiệu quả lâu bền và an toàn sinh học. Trên thị trƣờng hiện đang lƣu hành nhiều loại chế phẩm probiotic ngoại nhập nhƣ Bye (Mỹ), Neo-Perk-Porcine (Anh), Lacfeed 66G (Nhật), cho kết quả tốt nhƣng không ổn định và giá thành còn cao. 2 Do đó, việc nghiên cứu sử dụng các VSV có lợi để tạo chế phẩm probiotic nhằm khắc phục tình trạng trên là việc làm hết sức cần thiết trong điều kiện hiện nay. Đó cũng chính là lý do khiến chúng tôi chọn đề tài nghiên cứu : "Bước đầu nghiên cứu sử dụng các vi sinh vật tạo chế phẩm Probiotic phòng và trị bệnh đường ruột cho heo" Mục tiêu của đề tài: Sử dụng một số chủng VSV có lợi (VK lactic, nấm men) nhằm tạo chế phẩm có khả năng phòng và trị bệnh đƣờng ruột cho heo con hiệu quả. Nhiệm vụ của đề tài: 1. Phân lập, tuyển chọn các chủng vi khuẩn lactic, nấm men có các hoạt tính cần thiết của một chủng probiotic. 2. Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa và phân loại các chủng VSV đã tuyển chọn. 3. Nghiên cứu các điều kiện tối ƣu cho sự tạo sinh khối các chủng. 4. Xác định tỷ lệ tổ hợp giống và tạo chế phẩm probiotic. 5. Kiểm tra chất lƣợng chế phẩm. 6. Bƣớc đầu thử nghiệm chế phẩm trên heo con sau cai sữa. 7. Xây dựng quy trình công nghệ tạo chế phẩm probiotic quy mô PTN. Đề tài được thực hiện tại: - Phòng thí nghiệm Sinh lí - Sinh hóa - Vi sinh Trƣờng ĐHSP Tp.HCM - Phòng thí nghiệm Vi sinh - Viện Sinh học Nhiệt đới Tp.HCM. - Phòng thí nghiệm CNSH và SHPT thuộc Trung tâm bảo tàng giống chuẩn ĐHQG Hà Nội. - Bƣớc đầu thử nghiệm chế phẩm tại trại chăn nuôi heo xã Đại Hải, huyện Kế Sách, tỉnh Sóc Trăng. [...]... phẩm BioI để phòng trị bệnh đƣờng ruột của heo (Vi n Sinh học nhiệt đới TP HCM, 2003) 12 Các nghiên cứu trên khẳng định vi c sử dụng chế phẩm probiotic đều cho kết quả tốt trong phòng, trị bệnh đƣờng ruột cũng nhƣ khả năng điều hòa và kích thích sự sinh trƣởng của heo Năm 2002, Tạ Thị Vịnh và cộng sự đã sử dụng chế phẩm VITOM.l và VITOM.3 của Nga trong phòng trị bệnh đƣờng tiêu hóa trên heo và gà Kết... kháng bệnh Khảo sát trên 312 heo con mới sinh, chia 2 lô thí nghiệm Ở lô có sử dụng chế phẩm probiotic - VBP (B pseudolongum preparation), còn lô đối chứng không sử dụng chế phẩm Khi sử dụng chế phẩm VBP cho heo ngay sau khi sinh với liều lƣợng 0,5g/ ngày, liên tục trong 10 ngày và tiến hành theo dõi bệnh tiêu chảy trong 3 tuần Kết quả là hiếm thấy bệnh tiêu chảy ở nhóm cho ăn VBP trong suốt tuần đầu heo. .. trị bệnh phân trắng của heo con (Đào Trọng Đạt, Vũ Đình Hƣng, 1962) + Vi n Subtilis để phòng trị các hội chứng nhiễm khuẩn đƣờng ruột của gia súc (Lê Thị Tài và cộng sự, 1968 - 1978) + Chế phẩm VSV (Saccharomyces boulardi) với bệnh phân trắng heo con (Phan Thanh Phƣợng và cộng sự, 1968 - 1978) + Chế phẩm Biolactyl để phòng trị bệnh đƣờng ruột của heo (Phan Thanh Phƣợng và cộng sự, 1979 - 1984) + Chế phẩm. .. sự xuất hiện bệnh tiêu chảy, sức khỏe tốt hơn Heo cai sữa L bulgaricus 500 ml/1l 36 g/1l Tỷ lệ % E coli thấp ở trực tràng, giảm tỷ lệ chết ỡ heo 1.1.5 Tình hình nghiên cứu và sử dụng probiotic trên TG và VN a Những nghiên cứu và ứng dụng trong nƣớc Ở Vi t Nam hiện nay, có thể kể đến các công trình nghiên cứu về lĩnh vực này của Vi n Thú y quốc gia : + Yaourt và canh trùng Subtilis dùng trong phòng trị. .. nhờ chế phẩm probiotic có VK lactic hoặc có nấm men Khi cho bệnh nhân bị chứng rối loạn dạ dày hay đƣờng ruột sử dụng L acidophilus, B biỷidum và B breve sẽ làm gia tăng số lƣợng của Lactobacillus và giảm số lƣợng của E coli trong ruột Bệnh nhân sử dụng thuốc trị bệnh bạch cầu sẽ làm chết một số VSV có lợi trong đƣờng ruột 8 nên ngƣời ta thƣờng dùng chế phẩm có Bifidobacterium sp và L acidophilus để. .. hóa thức ăn Sử dụng probiotic trong chăn nuôi gia súc và gia cầm sẽ làm tăng hiệu quả kinh tế cho ngƣời sản xuất Phần lớn chế phẩm probiotic đều bao gồm một hay nhiều chủng VK lactic có chức năng cải thiện khu hệ VSV đƣờng ruột, nâng cao chất lƣợng sản phẩm, tận dụng thức ăn, Nghiên cứu trên heo con 4 tuần tuổi và heo trƣởng thành với 4 lô thí nghiệm Kết quả thu đƣợc cho thấy, khi sử dụng L acidophilus... acidophilus để phục hồi hệ VK đƣờng ruột cho những bệnh nhân này [46] 1.1.4 Vai trò của probiotic a Với con ngƣời - Phòng và trị bệnh tiêu chảy, bệnh nhiễm khuẩn ở dạ dày, đường ruột Nghiên cứu cho thấy sử dụng Lactobacillus acidophilus và L reuteri sẽ làm giảm 1/2 số trẻ bị tiêu chảy do Rotavirus và giúp tăng cƣờng hệ thống miễn dịch IgA của cơ thể, [11], [41], [46] Khi sử dụng Lactobacillus rhamnosus dƣới... lactic trong sản xuất các chế phẩm sinh học phục vụ đời sống VK lactic đƣợc ứng dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực khác nhau nhƣ công nghiệp, nông nghiệp, chế biến bảo quản thực phẩm, y học, trong sản xuất các chế phẩm sinh học phục vụ đời sống Trong công nghiệp, VK lactic đƣợc sử dụng để lên men thu nhận axit lactic Trong công nghiệp chế biến thực phẩm, VK này đƣợc dùng để lên men các sản phẩm từ sữa,... kháng sinh bị giảm là do sự nhờn thuốc của VK đƣờng ruột Ngoài kháng sinh có thể dùng các chế phẩm sulíamid và nitrofuran để điều trị Tuy nhiên vi c điều trị bằng kháng sinh dài ngày thƣờng dẫn đến tiêu chảy kéo dài do sự mất cân bằng sinh thái của hệ VSV đƣờng ruột cùng với dƣ lƣợng kháng sinh tồn dƣ trong sản phẩm gây hậu quả khôn lƣờng cho sức khỏe ngƣời dùng b Điều trị bằng các chế phẩm probiotic. .. hay là thức ăn bổ sung có chứa VSV sống có ảnh hưởng tốt cho sức khỏe của vật chủ bằng cách cải thiện sự cân bằng hệ vi sinh đường ruột" [41], [42], [46] 1.1.2 Thành phần và đặc điểm vi sinh vật được sử dụng trong probiotic Hiện biết có khoảng gần 20 loài VK đƣợc sử dụng trong chế phẩm probiotic Các VK lactic có lợi giữ vai trò chính đƣợc sử dụng nhƣ L acidophỉlus, Lactobacillus delbrueckii subs, Lactobacillus . KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CỞ SỞ Tên đề tài: Bước đầu nghiên cứu sử dụng Vi sình vật để sản xuất chế phẩm probiotic phòng và trị bệnh đường ruột cho heo. Mã số: CS.2005.23.92 Chủ nhiệm đề tài:. đầu nghiên cứu sử dụng các vi sinh vật tạo chế phẩm Probiotic phòng và trị bệnh đường ruột cho heo& quot; Mục tiêu của đề tài: Sử dụng một số chủng VSV có lợi (VK lactic, nấm men) nhằm tạo chế. Chế phẩm BioI để phòng trị bệnh đƣờng ruột của heo (Vi n Sinh học nhiệt đới TP. HCM, 2003). 12 Các nghiên cứu trên khẳng định vi c sử dụng chế phẩm probiotic đều cho kết quả tốt trong phòng,