Báo cáo thực tập tốt nghiệp bệnh viện từ dũ

Báo cáo thực tập tốt nghiệp bệnh viện từ dũ

BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH Hình 1. Các giai đoạn của 1 phản ứng PCR……………………………………17 Hình 2. Đường cong khuếch đại. Tín hiệu huỳnh quang được trình bày đã trừ đường nền…………………………………………………………………………… 20 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 1 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 3. FISH chẩn đoán nhanh hội chứng Down, Patau, Edward, Turner, Kleinerfelter trong chẩn đoán trước sinh. Thai nhi mắc hội chúng Patau (trisomy 13) …………………………………………………………………………………… 23 Hình 4. Lấy máu ngoại vi ở người lớn………………………………………….24 Hình 5. Lấy máu ngoại vi ở trẻ…………………………………………………24 Hình 6. Cấy máu……………………………………………………………… 25 Hình 7. Dung dịch Demecolcine……………………………………………… 26 Hình 8. Ly tâm 1800 rpm trong 8 phút………………………………………….26 Hình 9. Nhỏ KCl vào mẫu trong ống ly tâm………………………………… 26 Hình 10. Nhỏ axit acetic vào mẫu đã được ly tâm………………………………27 Hình 11. Sau khi cho dung dịch carnoy vào lần 2………………………………27 Hình 12. Dung dịch có màu trắng khi nhỏ dung dịch Carnoy lần 3…………….27 Hình 13. Nhỏ lame (kiểu nhỏ ngang)………………………………………… 28 Hình 14. Nhỏ lame cao (kiểu nhỏ cao)………………………………………….28 Hình 15. Nhuộm lame bằng Giemsa: buffer…………………………………….28 Hình 16. Quan sát NST dưới kính hiển vi………………………………………29 Hình 17. Ống type được đánh số theo mã số của ống chứa dịch ối…………….31 Hình 18. Mẫu được lắc ủ 99 0 C 800rpm trong 10 phút………………………….31 Hình 19. Màng lọc cuả ống type có màng lọc………………………………….31 Hình 20. Nhỏ dung dịch wash buffer type 6………………………………… 31 Hình 21. Máy PCR……………………………………………………… …….32 Hình 22. Điện di mao quản sản phẩm………………………………………… 33 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 2 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 23. Cho vào máy lai PCR…………………………………………………35 Hình 24. Gỡ keo sau lai…………………………………………………………35 Hình 25. Đánh mã số cho mẫu………………………………………………… 36 Hình 26. Bật tia UV trong tủ cấy an toàn sinh học cấp 2……………………….37 Hình 27. Máy trích ly DNA tự động…………………………………………….38 Hình 28. Nhỏ mẫu vào Plate………………………………………………… 38 Hình 29. Plate đựng mẫu và dung dịch AW1………………………………… 38 Hình 30. Kết quả NST trên màn hình vi tính chưa sắp xếp…………………….39 Hình 31. Kết quả NST trên màn hình vi tính sau khi sắp xếp………………….39 Hình 32. Kết quả NST in trên giấy…………………………………………… 40 Hình 33. Kết quả Trisomy XXX……………………………………………… 41 Hình 34. Kết quả bị hội chứng Turner………………………………………… 41 Hình 35. Kết quả bị hội chứng Klinefelte…………………………………… 41 Hình 36. Kết quả Trisomy 21( hội chứng down)…………………… ……….42 Hình 37. Kết quả Trisomy 13 (hội chứng Patau)…………………………… 42 Hình 38. Kết quả Trisomy 18 (hội chứng Edward)………………………… 42 Hình 39. Kết quả FISH NST 21 và NST 13 bình thường……………….………43 Hình 40. Kết quả FISH 3 NST 21 hội chứng down….………………………….43 Hình 41. Kết quả FISH NST XX và NST 18 bình thường…….……………… 43 Hình 42. Kết quả FISH NST XY và NST 18 bình thường………….………… 43 Hình 43. Kết quả âm tính………………………………………………….…….45 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 3 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 44. Kết quả dương tính………………………………………… 45 CHỮ VIẾT TẮT CHỮ VIẾT TẮT NỘI DUNG NST Nhiễm sắc thể GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 4 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ LỜI MỞ ÐẦU Trong sự phát triển của mỗi quốc gia hiện nay, ngành Y nắm một vai trò vô cùng quan trọng. Không những đóng góp to lớn cho nền kinh tế mà ngành Y còn góp phần củng cố mặt đời sống nhân sinh cho quốc gia đó. Với một quốc gia khỏe mạnh về thể chất người lao động, quốc gia đó mới có chỗ dựa vững chắc để phát triển mạnh mẽ nền kinh tế của mình. Cùng với sự tiến triển của khoa học, bệnh di truyền ngày càng được mọi người chú ý. Theo thống kê của nhi khoa, gần 20 năm nay, tỉ lệ trẻ em chết vì bệnh di truyền đã giảm mạnh, cò tỉ lệ trẻ phát bệnh và tỷ lệ tử vong do dị tật bẩm sinh và bệnh di truyền dần dần tăng cao. GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 5 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Trong quá trình phát triển tự nhiên của nhân loại, do ảnh hưởng của các nhân tố, làm cho chất di truyền trong cơ thể biến đổi. Trong những biến đổi này có một loại biến đổi về con số và kết cấu của nhiễm sắc thể nhân tế bào được gọi là dị dạng nhiễm sắc thể, một loại khác là đột biến gen. Vì vậy tất cả bệnh do nhiễm sắc thể và gen trong nhân tế bào biến dạng gây cản trở cho sự thay thế, gây ra sự thiếu hụt dung môi có liên quan dẫn đến cơ thể di truyền sang đời sau, tạo nên sự hỗn hợp về sinh lý nhân thể, cơ năng sinh hóa, gây cản trở quá trình thay thế, loại bệnh này uy hiếp sức khỏe của con người. Vì thế việc xét nghiệm sớm trước sinh là việc rất quan trọng nhằm ngăn chặn việc sinh con bị tật gây nên gánh nặng cho gia đình và xã hội. Với nội dụng thực tập tốt nghiệp: “một số kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán các bệnh” tại khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ TpHCM. Chúng em đã hiểu rõ hơn các kỹ thuật xét nghiệm một số bệnh và quan trọng hơn là đã trải nghiệm thực tế nâng cao tay nghề hơn biết được sự khác nhau giữa lý thuyết và thực tế. CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Giới thiệu về khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ Bệnh viện Từ Dũ là bệnh viện đầu ngành về sản phụ khoa của cả nước, đồng thời là trung tâm sản phụ khoa lớn nhất khu vực phía Nam tọa lạc tại 284 Cống Quỳnh, phường Phạm Ngũ Lão, quận 1, Tp.HCM. Trong đó khoa xét nghiệm di truyền y học tự hào là đơn vị đi đầu cả nước về di truyền người và chẩn đoán trước sinh. Di truyền và sinh học phân tử là chuyên khoa mũi nhọn của bệnh viện Từ Dũ, là lĩnh vực tiên phong trong xu hướng phát triển y học của thế giới. Khoa có đội ngũ cán bộ y tế trẻ giỏi, có đầy đủ các thiết bị xét nghiệm sàng lọc và chẩn đoán gen hiện đại. Khoa xét nghiệm di truyền y học được thành lập GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 6 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ ngày 8/10/2010 từ tiền thân là buồng di truyền thuộc khoa giải phẫu bệnh - tế bào - di truyền, gồm 2 bộ phận chính: -Xét nghiệm sàng lọc: sàng lọc trước sinh (double test và combined test, triple test) và sàng lọc sơ sinh (thiếu G6PD, suy giáp bẩm sinh, tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh). -Xét nghiệm gen và nhiễm sắc thể: karryotube, QF-PCR, FISH, đột biến gen Thalassemia, loạn dưỡng cơ Duchenne, Digeorge, AZF, SRY, Hemophilia, nhận dạng gen người, đột biến gen sẩy thai, HPV, Rubella PCR, CMV PCR, Toxoplasma PCR và nhiều bệnh khác (nguồn: http://tudu.com.vn/vn/gioi-thieu/cac-chuyen-khoa/khoa-can- lam-sang/khoa-xet-nghiem-di-truyen-y-hoc/) Sơ đồ quy trình xét nghiệm của khoa - Sơ đồ quy trình xét nghiệm karyotube +Lấy mẫu: Tiếp nhận bệnh nhân, ghi thông tin, lấy mẫu hoặc nhận mẫu lừ các nơi gửi đến, và ký nhận. +Kiểm tra: Kiểm tra mẫu máu lấy có đạt yêu cầu thực hiện xét nghiệm không. +Nhập liệu: Nhập thông tin bệnh nhân và bệnh phẩm, ghi nhận chất lượng mẫu. Lấy mẫu Kiểm tra Nhập liệu Thực hiện xét nghiệm Trả về nơi giới thiệu hoặc điều trị chuyên khoa Tư vấn Kiểm tra kết quả GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 7 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Ra kết quả Lưu hồ sơ Kết thúc Nhập kết quả Không đạt Đạt Không đạt Đạt +Thực hiện xét nghiệm: Thực hiện xét nghiệm theo quy trình kỹ thuật xét nghiệm nhiễm sắc thể đồ máu gồm các bước nuôi cấy 72 giờ, thu hoạch và chuẩn bị lam 2 ngày, đọc và phân tích. GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 8 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ +Ra kết quả xét nghiệm. +Kiểm tra kết quả, nếu không đạt thì lấy mẫu lại. +Nhập kết quả xét nghiệm và in phiếu trả kết quả qua phần mềm nhiễm sắc thể đồ máu cho bệnh nhân. +Tư vấn về mặt di truyền cho bệnh nhân: Tranh ảnh, tài liệu tư vấn. +Chuyển bệnh nhân về lại nơi chỉ định xét nghiệm hoặc nơi có điều trị chuyên khoa phù hợp. +Lưu hồ sơ. Trả kết quả bệnh nhân Nhận mẫu Kiểm tra thông tin Nhập liệu Ly trích DNA PCR Chạy điện di Ra kết quả và phân tích -Sơ đồ quy trình xét nghiệm sinh học phân tử GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 9 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ +Nhận mẫu: Nhận mẫu dịch ối, mẫu máu, gai nhau từ các khoa khác tại bệnh viện. +Kiểm tra thông tin: Thông tin trên ống chứa mẫu với thông tin trên giấy, nếu không khớp thì báo lại. +Nhập liệu: Nhập thông tin bệnh nhân và bệnh phẩm, ghi nhận chất lượng mẫu. +Ly trích DNA: Dùng các bộ kit để thu được DNA. +Chạy PCR: Cho DNA vào máy chạy PCR +Điện di: Tùy xét nghiệm mà chạy điện di gel hoặc điện di mao quản từ sản phẩm PCR +Ra kết quả và phân tích: Nếu đạt yêu cầu in trả kết quả bệnh nhân, nếu kết quả bị nghi ngờ là sai thì chạy mẫu lại. 1.2.Tổng quan về các phương pháp 1.2.1.Karyotype Xét nghiệm karyotube hay Lập bộ nhiễm sắc thể là xét nghiệm khảo sát bộ nhiễm sắc thể trong 1 tế bào. Xét nghiệm được thực hiện bằng cách nuôi cấy tế bào trong môi trường đặc biệt. Sau thời gian thích hợp tế bào được thu hoạch và được nhuộm đặc trưng. Kỹ thuật nhuộm hiện nay là GTG (Giemsa trypsin G-banding). GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 10 LẠI ĐÌNH BIÊN [...]... BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 8 Ly tâm 1800 rpm trong 8 phút Hình 7 Dung dịch Demecolcine Cho tiếp 8 – 10 ml KCl 7,5%, ủ 37 0C trong 30 phút, ly tâm 1800 vòng/phút trong 8 phút rồi hút bỏ dịch nổi Hình 9 Nhỏ KCl vào ống ly tâm GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN 25 LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Nhỏ thêm 5ml axit acetic 5%: vừa lắc vừa nhỏ từng giọt,... Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Tư vấn về mặt di truyền cho bệnh nhân: Tranh ảnh, tài liệu tư vấn -Bước 9: Chuyển bệnh nhân về lại nơi chỉ định xét nghiệm hoặc nơi có điều trị chuyên khoa phù hợp -Bước 10: Lưu hồ sơ 2.2.Sinh học phân tử 2.2.1.QF-PCR 2.2.1.1.Vật liệu: Dịch ối từ các thai phụ có nguy cơ cao về rối loạn NST được tư vấn và đồng ý tham gia chọc ối tại bệnh viện Từ Dũ 2.2.1.2.Dụng... Kiểm tra mẫu máu lấy có đạt yêu cầu thực hiện xét nghiệm không -Bước 3: Nhập liệu Nhập thông tin bệnh nhân và bệnh phẩm, ghi nhận chất lượng mẫu -Bước 4: Thực hiện xét nghiệm: Cấy mẫu -> Thu hoạch -> Nhỏ lam -> Nướng lam -> Nhuộm lam -> đọc lam, phân tích kết quả +Cấy mẫu: GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN 23 LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hút 0,5 -1 ml máu (hút lấy phần trắng... một từ trường điện E nhất định được cung cấp bởi một nguồn thế cao một chiều (V: 10-30kV) đặt vào hai đầu mao quản Nghĩa là CE là kỹ thuật tách được thực hiện trong mao quản nhờ lực từ trường điện E điều khiển sự tách của các chất Việc dùng cột mao quản có nhiều ưu việt, như tốn ít mẫu và các hoá chất khác GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN 16 LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ... quản được xuất dưới dạng tập tin fsa và được phân tích kết quả trisomy bằng phần mềm GeneMarker 1.85 Tất cả các tiêu chuẩn phân tích, đánh giá được căn cứ theo Hướng dẫn thực hành chẩn đoán lệch bội GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN 34 LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ bằng QF-PCR (2007) của Hiệp hội Di truyền Lâm sàng Vương quốc Anh, ra kết quả và trả cho bệnh nhân Hình 22 Điện... đoán trước sinh Thai nhi mắc hội chúng Patau (trisomy 13) GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN 21 LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Karyotype: 2.1.1.Vật liệu: Mẫu máu từ các cặp vợ chồng, đứa trẻ có nghi ngờ đột biến nhiễm sắc thể, dịch ối từ các bà mẹ mang thai 2.1.2 Dụng cụ và thiết bị: Kính hiển vi, lam kính, máy ly tâm, ống chứa máu chân không,... lần 2 Hình 12 Dung dịch có màu trắng Khi nhỏ dung dịch Carnoy lần 3 +Nhỏ lam: Có 2 cách nhỏ lam: Nhỏ cao (nhỏ từ trên cao xuống) và nhỏ ngang ( nhỏ chạm trên mép lam kính  đập) GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN 27 LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Đầu tiên lấy lam kính từ trong cồn tuyệt đối để lạnh rửa lần lượt qua 2 hủ đá có nước rồi sau đó lấy pipet hút mẫu nhỏ lên lam kính... BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 16 Quan sát dưới kính hiển vi -Bước 5: Ra kết quả Một bệnh nhân lấy 25 mẫu NST lựa chon 10 bộ đẹp nhất đem đi phân tích ra kết quả -Bước 6: Kiểm tra kết quả Kiểm tra các bộ NST có đủ 22 cặp không Nếu không đạt thì lấy mẫu lại -Bước 7: Nhập kết quả Nhập kết quả xét nghiệm và in phiếu trả kết quả qua phần mềm nhiễm sắc thể đồ máu cho bệnh nhân... NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN 22 LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ 2.1.4.Quy trình: - Bước 1: Lấy mẫu Tiếp nhận bệnh nhân, ghi thông tin, lấy mẫu hoặc nhận mẫu lừ các nơi gửi đến, và ký nhận Hình 4 Lấy máu người lớn Hình 5 Lấy máu em bé Xác định chổ cần lấy máu, dùng kim tiêm đâm vào mạch máu ở tay lấy máu ngoại vi, lấy gần 2/3 ống máu, lắc đều Tốt nhất lấy máu và cấy máu trong ngày... 4 và 5 Các NST này có kích thước lớn và đều có tâm lệch GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN 11 LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ -Nhóm C có 7 cặp từ số 6 đến 12 có chiều dài trung bình NST X cũng được xếp vào nhóm này Tất cả đều tâm gần giữa và khó phân biệt -Nhóm D có 3 cặp từ số 13 đến 15 gồm các NST có nhánh ngắn rất ngắn, gần như không đáng kể gọi là các NST tâm đầu (acrocentric) . KHẮC HÂN HOAN Trang 9 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ +Nhận mẫu: Nhận mẫu dịch ối, mẫu máu, gai nhau từ các khoa khác tại bệnh viện. +Kiểm tra thông tin: Thông tin. HOAN Trang 7 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Ra kết quả Lưu hồ sơ Kết thúc Nhập kết quả Không đạt Đạt Không đạt Đạt +Thực hiện xét nghiệm: Thực hiện xét nghiệm theo quy. NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 6 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ ngày 8/10/2010 từ tiền thân là buồng di truyền thuộc khoa giải phẫu bệnh - tế bào - di truyền, gồm 2 bộ phận