Đánh giá số lượng sống, đặc điểm của sản phẩm vi khuẩn lactic thương mại
Viable counts, characteristic evaluation for commercial lactic acid bacteria products GVHD: Lê Phương Chung Trường đại học Nha Trang Viện CNSH &MT NỘI DUNG • Abstract 1. Introduction 2. Materials, methods and results 3. Discussion TÓM TẮT (Abstract) • Kiểm nghiệm 8 sản phẩm probiotic thương mại của chủng vi khuẩn lactic acid( LAB) – Số lượng tế bào – Chịu acid, dịch mật – Khả năng bám dính vào tế bào biểu mô ruột – Khả năng kháng các nhân gây bệnh TÓM TẮT Kết quả: – Mật độ tế bào trong các sản phẩm chất lỏng cao hơn các sản phẩm rắn. – 2 sản phẩm LAB dạng rắn, số lượng LAB sống sót không đúng như thông tin trên bao bì – Các chủng LAB từ các sản phẩm thương mại khác nhau có khả năng thích nghi với độ acid và dịch mật khác nhau – Phân lập được 25 chủng có khả năng kháng các tác nhân gây bệnh đường ruột – Trong 25 chủng thì chỉ có 5 chủng có khả năng bám vào biểu mô ruột Kết luận • Chỉ có vài sản phẩm LAB thương mại mới đáp ứng yêu cầu cơ bản về chức năng của probiotic. GIỚI THIỆU (Introduction) Giới thiệu • Cải thiện sức khỏe • Hỗ trợ người bị rối loạn tiêu hóa và viêm ruột cấp tính • Cải thiện chức năng tiêu hóa Sản phẩm LAB Dạng lỏng: sữa chua Dạng rắn: Bột, hạt nhỏ, viên nén Gồm 2 dạng Sản phẩm LAB • Hai hoặc nhiều chủng LAB được kết hợp sử dụng trong một sản phẩm • Gồm các chủng: Lactobacillus thermophilus Streptococcus bulgaricus L. acidophilus L. casei Bifidobacterium longum [...]...Điều kiện vi khuẩn lactic được sử dụng làm chế phẩm sinh học: • An toàn • Khả năng tồn tại khi chế biến và bảo quản • Chịu được acid và dịch mật • Kháng tác nhân gây bệnh • Bám vào tế bào biểu mô ruột VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP VÀ KẾT QUẢ (Materials, methods and results) Sản phẩm thương mại LAB Khảo sát số lượng tế bào sống Khảo sát số lượng tế bào sống Môi trường MRS: (De Man, RoGoSa,... lọc và phân lập (Selection and identification) • Mỗi sản phẩm, chọn ngẫu nhiên 5 khuẩn lạc rời • Có 25 chủng được chọn từ các sản phẩm LAB • Test sinh hóa – Catalase (-) – Gram dương – Không di động – Hình que( rod) hoặc dạng cầu khuẩn Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn (Antibacterial activity assay) Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn (Antibacterial activity assay) • Sử dụng phương pháp khuếch tán môi trường... lệ sống trong điều kiện acid Môi trường MRS, kỵ khí ở 37oC, 48h Kiểm tra ảnh hưởng của dịch mật đến sự phát triển của tế bào LAB LAB pH=2 Ly tâm Rửa PBS + 10ml MRS 7000rpm, 5 phút Có hoặc không 0.3% mật bò 37oC , 6h Kỵ khí Khả năng chịu mật bò của LAB được xác định bằng cách so sánh với các tế bào LAB sống trong môi trường thạch MRS KẾT QUẢ Chọn lọc và phân lập (Selection and identification) • Mỗi sản. .. acid có thể ức chế sự phát triển của các vi sinh vật có hại Khảo sát sự bám gắn của LAB (Adherence assay of LAB) Nuôi cấy tế bào biểu mô Int-407 • Int-407( ATCC CCL 6) là tế bào ở người có nguồn gốc từ ruột và hồi tràng của phôi người • Nuôi cấy tế bào đơn lớp để khảo sát Nuôi cấy tế bào biểu mô Int-407 Khảo nghiệm sự bám gắn của tế bào LAB Khảo nghiệm sự bám gắn của tế bào LAB Lấy các tế bào Int-407... ức chế yếu (+) - > 15 mm : ức chế mạnh mẽ (+ +) • Mỗi khảo sát được thực hiện trong ba lần Sự kháng lại vi khuẩn gây bệnh của tế bào LAB Tế bào LAB có nguồn gốc từ các sản phẩm A, B và D thì ức chế (inhibitory) tất cả các chủng chỉ thị Tế bào LAB có nguồn gốc từ các sản phẩm từ C và E không ức chế các chủng chỉ thị trừ S aureus (không biểu hiện kết quả) Nếu các tế bào LAB... Cresol purple) Quy trình nuôi cấy Nghiền 10g dạng vi n nén hoặc dạng hạt Lấy 1g bột hoặc 1ml sữa chua Dung dịch: 9ml đệm phosphate PBS, pH =7.2 • Tiến hành pha loãng dung dịch 10 lần liên tiếp với PBS 1/10 1/10 1/10 1/10 Ủ ở 37 0 C trong 48h( mt MRS) or 72h( BCP) 1/10 1 ml KẾT QUẢ Khảo sát tỷ lệ sống trong điều kiện acid và dịch mật Khảo sát tỷ lệ sống trong điều kiện acid 1ml sữa chua hoặc 1g bột... ngẫu nhiên rửa 2 lần với PBS, trộn với formallin 10% trong 30 phút, nhuộm với thuốc tím trong 5 phút, rửa lại 3 lần với PBS, rổi quan sát dưới kính hiên vi (độ phóng đại gấp 200X) Đếm tế bào LAB trên khoảng 100 tế bào Int-407 để xác định số lượng tế bào LAB bị dính chặt vào tế bào Int-407 . trong các sản phẩm chất lỏng cao hơn các sản phẩm rắn. – 2 sản phẩm LAB dạng rắn, số lượng LAB sống sót không đúng như thông tin trên bao bì – Các chủng LAB từ các sản phẩm thương mại khác nhau. and results 3. Discussion TÓM TẮT (Abstract) • Kiểm nghiệm 8 sản phẩm probiotic thương mại của chủng vi khuẩn lactic acid( LAB) – Số lượng tế bào – Chịu acid, dịch mật – Khả năng bám dính vào. PHƯƠNG PHÁP VÀ KẾT QUẢ (Materials, methods and results) Sản phẩm thương mại LAB Khảo sát số lượng tế bào sống Khảo sát số lượng tế bào sống Môi trường MRS: (De Man, RoGoSa, Sharpe ) Môi