Nghiên cứu điều chế cao đặc và thử một số tác dụng sinh học của bài thuốc nuna

ĐẶT VẤN ĐỀ Dị ứng là một bệnh khá phổ biến ở Việt Nam. Nó ảnh hưởng rất lớn đến tinh thần và chất lượng cuộc sống của con người. Vào những năm 1970 của thế kỷ trước, tỷ lệ các bệnh dị ứng (dị ứng thuốc, viêm mũi dị ứng, hen phế quản…) có xu thế tăng nhanh. Tiến hành điều tra cơ bản về tỷ lệ các bệnh dị ứng ở một số phường, xã ở TP Hà Nội, một số tỉnh, thành khác (Hải Phòng, Hải Dương, Hưng Yên…), tỷ lệ các bệnh dị ứng ở nước ta khá cao 20 25% ở các khu vực thành phố, khoảng 20% ở một số vùng nông thôn 37. Đặc biệt trong những năm gần đây, khi môi trường ngày càng ô nhiễm, khí hậu thường xuyên thay đổi đột ngột, các tác nhân gây dị ứng cũng xuất hiện nhiều hơn, làm ảnh hưởng đến chất lượng cuộc sống của con người. Các thuốc tây y điều trị dị ứng bao gồm thuốc kháng histamine và corticoid. Hai nhóm thuốc này đều có nhiều tác dụng phụ. Trong khi đó, nước ta có nguồn dược liệu phong phú, nhân dân ta có nhiều kinh nghiệm sử dụng các vị thuốc chữa dị ứng. Do đó việc nghiên cứu bài thuốc chống dị ứng là cần thiết. Vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài “Nghiên cứu điều chế cao đặc và thử một số tác dụng sinh học của bài thuốc Nuna” với mục đích hướng tới tạo ra sản phẩm hỗ trợ điều tri các bênh dị ứng. Trong khuôn khổ của khóa luận này chúng tôi mới chỉ thực hiện được các nội dung sau: 1. Nghiên cứu điều chế cao đặc, 2. Thử tác dụng chống viêm cấp của cao đặc bài thuốc.

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LÊ THU TRANG

NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO ĐẶC

VÀ THỬ MỘT SỐ TÁC DỤNG

SINH HỌC CỦA BÀI THUỐC NUNA

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI_2013

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LÊ THU TRANG

NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO ĐẶC

VÀ THỬ MỘT SỐ TÁC DỤNG

SINH HỌC CỦA BÀI THUỐC NUNA

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn

PGS.TS Vũ Văn Điền

Nơi thực hiện:

1 Bộ môn Dược học cổ truyền

2 Bộ môn Dược lý trường đại học Y

Hà Nội

HÀ NỘI_2013

LỜI CẢM ƠN

Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn tới PGS TS Vũ Văn Điền - người thầy

đã luôn quan tâm tận tình giúp đỡ, hướng dẫn, chỉ bảo và tạo điều kiện cho tôi trong suốt thời gian thực hiện và hoàn thiện khóa luận này

Đồng thời tôi xin gửi lời cảm ơn tới TS Phạm Thị Vân Anh - trưởng bộ

môn Dược lý trường đại học Y Hà Nội đã giúp tôi thử tác dụng sinh học của bài thuốc trên chuột được trình bày trong khóa luận này

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, các anh chị kỹ thuật viên trong

bộ môn Dược học cổ truyền - trường đại học Dược Hà Nội và bộ môn Dược lý - trường đại học Y Hà Nội đã tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện

đề tài

Tôi cũng xin gửi tới các thầy cô và cán bộ trường đại học Dược Hà Nội lời cảm ơn chân thành vì đã dạy bảo tôi trong suốt năm năm học tập và nghiên cứu tại trường

Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn vô hạn đến gia đình, người thân, bạn

bè và những người đã luôn giúp đỡ, động viên tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành khóa luận tốt nghiệp

Hà Nội, ngày tháng năm 2013

Sinh viên

Lê Thu Trang

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1 TỔNG QUAN 2

1.1 Tóm tắt đại cương về bệnh dị ứng 2

1.1.1 Theo YHHĐ 2

1.1.2 Theo YHCT 5

1.2 Tóm tắt thông tin về bài thuốc và vị thuốc 7

1.2.1 Thông tin về bài thuốc 7

1.2.2 Tóm tắt đặc điểm các vị thuốc 8

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21

2.1 Nguyên liệu, thiết bị nghiên cứu 21

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 21

2.1.2 Thiết bị, dung môi, hóa chất, súc vật nghiên cứu 21

2.2 Nội dung nghiên cứu 22

2.3 Phương pháp nghiên cứu 22

2.3.1 Kiểm tra chất lượng các vị thuốc đầu vào cho nghiên cứu 22

2.3.2 Điều chế cao đặc 23

2.3.3 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc 24

2.3.4 Dự kiến tiêu chuẩn cao đặc 25

2.3.5 Thử tác dụng chống viêm cấp 25

Chương 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 27

3.1 Kiểm tra chất lượng các vị thuốc 27

3.1.1 Núc nác 27

3.1.2 Kim ngân hoa 30

3.1.3 Đơn lá đỏ 32

3.1.4 Trần bì 34

3.1.5 Ké đầu ngựa 36

3.1.6 Cúc hoa 37

3.1.7 Tô mộc 39

3.2 Điều chế cao đặc 42

3.3 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc 45

3.3.1 Xác định các chỉ tiêu hóa lý 45

3.3.2 Định tính các nhóm chất hữu cơ trong cao đặc 47

3.3.3 Kiểm tra các vị thuốc trong cao đặc bằng SKLM 53

3.4 Dự kiến tiêu chuẩn cao đặc 58

3.4.1 Yêu cầu chất lượng 58

3.4.2 Phương pháp thử 59

3.4.3 Đóng gói và bảo quản 59

3.5 Thử tác dụng chống viêm cấp của cao đặc 59

3.6 Bàn luận 63

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

GIẢI NGHĨA KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT

Liều gây chết 50% số chuột thí nghiệm

Hệ số lưu giữ Sắc ký lớp mỏng

Số thứ tự Trung bình Thuốc thử

Y học cổ truyền

Y học hiện đại

Hàm lượng chất chiết được bằng ethanol của kim ngân hoa Kết quả xác định độ ẩm đơn lá đỏ

Kết quả xác định độ ẩm trần bì Kết quả xác định độ ẩm ké đầu ngựa Kết quả xác định độ ẩm cúc hoa Kết quả xác định độ ẩm tô mộc Hàm lượng chất chiết được bằng ethanol của tô mộc Các thông số trong quá trình chiết cao

Kết quả hiệu suất và tỷ lệ cao bài thuốc Kết quả xác định độ ẩm cao đặc bài thuốc Kết quả đo pH dung dịch cao thuốc 1% (kl/tt) Hàm lượng chất chiết được bằng nước của cao đặc bài thuốc Kết quả xác định tỷ lệ tro toàn phần của cao đặc

Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong cao đặc Cân nặng trung bình của các lô chuột

Chiều dày tai phải của chuột trước và sau khi gây mô hình 6h Khối lượng tai chuột và mức độ ức chế viêm

Ảnh đặc điểm bột Đơn lá đỏ Ảnh thuốc phiến Trần bì Ảnh đặc điểm bột Trần bì Ảnh vị thuốc Ké đầu ngựa Ảnh đặc điểm bột Ké đầu ngựa Ảnh vị thuốc Cúc hoa

Ảnh đặc điểm bột Cúc hoa Ảnh vị thuốc Tô mộc Ảnh đặc điểm bột Tô mộc

Sơ đồ bào chế cao đặc Ảnh sắc kí đồ Núc nác Ảnh sắc kí đồ Cúc hoa Ảnh sắc kí đồ Kim ngân hoa Ảnh sắc kí đồ Trần bì

Ảnh sắc kí đồ Tô mộc Ảnh sắc kí đồ Đơn lá đỏ Ảnh sắc kí đồ Ké đầu ngựa

ĐẶT VẤN ĐỀ

Dị ứng là một bệnh khá phổ biến ở Việt Nam Nó ảnh hưởng rất lớn đến tinh thần và chất lượng cuộc sống của con người Vào những năm 1970 của thế kỷ trước, tỷ lệ các bệnh dị ứng (dị ứng thuốc, viêm mũi dị ứng, hen phế quản…) có xu thế tăng nhanh Tiến hành điều tra cơ bản về tỷ lệ các bệnh dị ứng ở một số phường,

xã ở TP Hà Nội, một số tỉnh, thành khác (Hải Phòng, Hải Dương, Hưng Yên…), tỷ

lệ các bệnh dị ứng ở nước ta khá cao 20 - 25% ở các khu vực thành phố, khoảng 20% ở một số vùng nông thôn [37] Đặc biệt trong những năm gần đây, khi môi trường ngày càng ô nhiễm, khí hậu thường xuyên thay đổi đột ngột, các tác nhân gây dị ứng cũng xuất hiện nhiều hơn, làm ảnh hưởng đến chất lượng cuộc sống của con người

Các thuốc tây y điều trị dị ứng bao gồm thuốc kháng histamine và corticoid Hai nhóm thuốc này đều có nhiều tác dụng phụ Trong khi đó, nước ta có nguồn dược liệu phong phú, nhân dân ta có nhiều kinh nghiệm sử dụng các vị thuốc chữa dị ứng Do đó việc nghiên cứu bài thuốc chống dị ứng là cần thiết

Vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài “Nghiên cứu điều chế cao đặc và thử một số tác dụng sinh học của bài thuốc Nuna” với mục đích hướng tới tạo ra sản phẩm hỗ

trợ điều tri các bênh dị ứng Trong khuôn khổ của khóa luận này chúng tôi mới chỉ thực hiện được các nội dung sau:

1 Nghiên cứu điều chế cao đặc,

2 Thử tác dụng chống viêm cấp của cao đặc bài thuốc

Chương 1 TỔNG QUAN 1.1 Tóm tắt đại cương về bệnh dị ứng

1.1.1 Theo YHHĐ

a Định nghĩa:

Các bệnh dị ứng (Allergic Diseases) là những bệnh lý do phản ứng dị ứng gây

ra, có thể biểu hiện bệnh khu trú ở cơ quan hay toàn thân Phản ứng dị ứng là tình trạng bệnh lý của phản ứng miễn dịch với dị nguyên, gây ra tổn thương tổ chức và rối loạn chức năng của các cơ quan [11]

Vì dị nguyên là yếu tố của môi trường nên da và đường hô hấp là những cơ quan thường hay bị các bệnh dị ứng Dị ứng cũng có thể khu trú ở mạch máu, dạ dày – ruột hay các cơ quan nội tạng khác [11]

b Nguyên nhân:

Nguyên nhân gây dị ứng là các loại dị nguyên [11]:

 Dị nguyên ngoại sinh gồm khói bụi, lông súc vật, phấn hoa, thực phẩm, thuốc, hóa chất, vi sinh vật,…[11], [13], [14]

 Dị nguyên nội sinh được hình thành bên trong cơ thể do những điều kiện ảnh hưởng nhất định trở nên lạ đối với cơ thể và có đầy đủ đặc điểm của dị nguyên [11] Khi dị nguyên xâm nhập vào những cơ thể có yếu tố cơ địa dị ứng sẽ sinh kháng thể và các phản ứng quá mẫn gây biểu hiện bệnh lý ở một hay nhiều cơ quan [11]

c Phân loại, cơ chế bệnh sinh:[11]

Dị nguyên xâm nhập lần sau sẽ kết hợp với IgE ngay trên bề mặt tế bào mast và bạch cầu ái kiềm → AMPv giảm xuống → hoạt hóa tế bào, giải phóng các chất trung gian hóa học vào máu (Histamin, Leucotrien,…) gây ra phản ứng dị ứng [11]

Phản vệ

Bệnh lý qua

trung gian chất

vận mạch

Bệnh dị ứng do quá mẫn

typ II

Phản ứng kháng nguyên – kháng thể gây tổn thương

tế bào hoặc mô theo cơ chế:

 Kháng thể typ IgG kết hợp với kháng nguyên trên bề mặt tế bào, gây hoạt hóa hệ thống bổ thể, làm cho các

tế bào bị vỡ ra [11]

 Các tế bào có gắn kháng thể bị thực bào bởi các đại thực bào qua cơ chế kết dính của C3b và phần Fc của kháng thể [11]

 Bổ thể được hoạt hóa → hoạt hóa và thu hút bạch cầu trung tính tới vị trí lắng đọng phức hợp miễn dịch

và giải phóng các enzyme gây tổn thương và viêm thành mao mạch của tổ chức Tiểu cầu được huy động đến vị trí viêm, kết tụ tiểu cầu, làm đông máu các mao mạch nhỏ, càng làm cho phức hợp miễn dịch dễ lắng đọng [11]

d Đặc điểm chung của bệnh dị ứng:[11]

- Biểu hiện đa dạng ở nhiều cơ quan khác nhau, tùy từng cá thể

- Cơn xuất hiện và thoái lui đột ngột, hay tái phát

- Xuất hiện theo đợt và cơn, xen kẽ những khoảng thời gian hoàn toàn bình thường

- Thường có liên quan đến tiền sử dị ứng trong gia đình

- Khi có triệu chứng lâm sàng: tăng số lượng bạch cầu ái toan và IgE trong máu

 Loại trừ tác động của dị nguyên:

+ Tránh tiếp xúc với dị nguyên [11], [13], [14]

+ Corticoid: điều trị triệu chứng trong hầu hết các loại dị ứng với tác dụng chủ yếu

để gây bệnh, nhưng cần phân biệt với chứng nhiệt độc ở bên trong (lý) cũng gây ra ban chẩn, ngứa, hen suyễn, phong thấp

b Về cách trị bệnh dị ứng:

Một số loại thuốc thường được dùng để chữa dị ứng:

 Thuốc hoạt huyết (đơn lá đỏ, ngưu tất, hồng hoa…) đi kèm với thuốc hành khí (trần bì, hậu phác…) để trị bệnh phong [38]

 Các loại thuốc thanh can nhiệt [38]:

+ Thuốc thanh nhiệt giải độc: Kim ngân hoa, sài đất, bồ công anh,…[8], [38] + Thuốc thanh nhiệt táo thấp: Hoàng liên, hoàng cầm, hoàng bá, chi tử,…[38] + Thuốc thanh nhiệt lương huyết: Sinh địa, mẫu đơn bì, huyền sâm… trong trường hợp huyết nhiệt [38]

 Các thuốc lợi thấp với mục đích thanh giải các chất độc theo đường nước tiểu, dùng các vị thuốc tỳ giải, xa tiền, thổ phục linh, trạch tả…[38]

Tùy theo các bệnh, các bộ phận bị dị ứng, có thể phối hợp theo các nguyên tắc riêng với các vị thuốc khác nhau [38]

c Về một số bệnh dị ứng:

 Mày đay: YHCT gọi bệnh mày đay là phong chân khối [7]

Nguyên nhân do phong hàn, phong nhiệt hoặc các nhân tố khác như thức ăn, thuốc, nhiễm ký sinh trùng làm xuất hiện trên da những nốt ban, ngứa, đỏ da hoặc phù tại chỗ, [7] Trên lâm sàng thường chia 2 thể để điều trị:

+ Thể phong hàn: hay gặp ở bệnh nhân bị dị ứng nổi ban do lạnh (nhiễm lạnh do mưa, mùa lạnh, ngồi phòng lạnh, )

Triệu chứng: da vùng phát ban hơi đỏ hoặc trắng, thường hay phát bệnh khi gặp lạnh, rêu lưỡi trắng, mạch phù khẩn; trời nóng hoặc xông bệnh giảm [7]

Phép trị: Khu phong tán hàn, điều hòa dinh vệ [7]

+ Thể phong nhiệt:

Triệu chứng là da đỏ, các nốt ban đỏ, nóng rát trên vùng da phát ban, miệng khô khát nước, phiền táo, bệnh tăng khi trời nóng, giảm khi chườm mát; chất lưỡi

đỏ, rêu lưỡi vàng; mạch phù sác [7]

Phép chữa: Khu phong, thanh nhiệt lương huyết [7]

 Viêm mũi, viêm xoang dị ứng:

Nguyên nhân do phế khí và vệ khí hư không khống chế được phong hàn xâm nhập

mà gây ra bệnh [7]

Phương pháp chữa: Bổ khí cố biểu, khu phong tán hàn [7]

 Hen phế quản: theo YHCT, hen phế quản thuộc phạm vi của chứng háo suyễn, đàm ẩm, là một bệnh thường xảy ra ở người có cơ địa dị ứng [7]

Nguyên nhân gây bệnh là do cảm nhiễm phải ngoại tà, ăn uống, tình trí thất thường, làm việc quá sức,…[7]

+ Chữa hen phế quản khi đang có cơn hen:

YHCT chia làm 2 thể : hen hàn và hen nhiệt

./ Hen hàn:

Triệu chứng: người lạnh, sắc mặt trắng bệch, đờm loãng có bọt khí dễ khạc, không khát thích uống nước nóng, đại tiện nhão nát, chất lưỡi nhợt, rêu trắng mỏng, mạch huyền tế [7]

Phương pháp chữa: Ôn phế, tán hàn, trừ đàm, định suyễn [7]

./ Hen nhiệt:

Triệu chứng: Người bứt rứt, sợ nóng, mặt môi đỏ, đờm còn dính và vàng, miệng khát, thích uống nước lạnh, đại tiện táo, lưỡi đỏ, rêu dày, mạch hoạt sác [7] Phép trị: Thanh nhiệt, tuyên phế, hóa đàm, bình suyễn [7]

+ Chữa hen phế quản khi hết cơn hen: chữa về gốc bệnh, đặc biệt là phục hồi công năng của các tạng Phế, Tỳ, Thận [7]

Phế hư

Tỳ hư

Thận hư

→ Phép chữa: bổ phế cố biểu, ích khí định suyễn [7]

→ Phép chữa: kiện tỳ ích khí hay ôn trung kiện [7]

→ Phép chữa: - Thận dương hư: ôn thận nạp khí [7]

- Thận âm hư: Tư âm, bổ thận [7]

1.2 Tóm tắt thông tin về bài thuốc và vị thuốc

1.2.1 Thông tin về bài thuốc

 Công thức bài thuốc: Bài thuốc gồm các vị thuốc sau:

Kim ngân hoa Trần bì

Cúc hoa vàng

16g 10g 14g

 Xuất xứ bài thuốc: Bài thuốc do PGS.TS Vũ Văn Điền đã xây dựng nên, dựa

trên cơ sở sau:

+ Dựa vào lý luận của YHCT, các triệu chứng biểu hiện của bệnh dị ứng

+ Dựa vào tính năng của các vị thuốc phù hợp để điều trị bệnh dị ứng

+ Dựa vào tác dụng dược lý và thành phần hóa học của các vị thuốc đã được chứng minh có tác dụng chống dị ứng

 Công năng: Thanh nhiệt giải dị ứng

 Chủ trị: Ban chẩn lở ngứa ngoài da, mề đay, viêm mũi dị ứng do phong nhiệt

 Cách dùng: Sắc 3 lần, mỗi lần 45 phút, gộp 3 nước sắc lại cô còn 1/3, chia 3 lần

uống/ ngày, uống khi thuốc còn ấm, sau khi ăn nhẹ

 Kiêng kị: Phụ nữ có thai và người mẫn cảm bất cứ thành phần nào của thuốc

 Phân tích bài thuốc:

Quân: Kim ngân hoa: Thanh nhiệt giải độc, phát tán phong nhiệt, giải dị ứng Thần: Núc nác: Thanh nhiệt táo thấp, giải dị ứng

Tá: Đơn lá đỏ, ké đầu ngựa, tô mộc, trần bì

Sứ: Cúc hoa vàng

1.2.2 Tóm tắt đặc điểm các vị thuốc

1.2.2.1 Núc nác

 Tên khoa học: Cortex Oroxyli indici

 Bộ phận dùng: Vỏ thân cây đã phơi hoặc sấy khô của cây Núc nác (Oroxylum

indicum (L.) Vent.), họ Núc nác (Bignoniaceae) [3], [10]

 Tác dụng dược lý theo YHHĐ

+ Tác dụng chống dị ứng:

Vỏ núc nác có tác dụng chống dị ứng và tăng sức đề kháng của cơ thể với một số tác nhân gây hại [18] Làm giảm độ thấm mạch máu ở chuột đã được gây mẫn cảm bằng lòng trắng trứng hoặc ở nơi đã tiêm trong da chất formalin hay histamine cho chuột bình thường [18]

Trên động vật được gây mẫn cảm thì tác dụng chống viêm được thể hiện rõ hơn

so với những con không được gây mẫn cảm [18]

Có khả năng ức chế yếu tô nhân Nuclear factor Kappa B với IC50 là 47,45µg/ml, dẫn đến việc ức chế sự giải phóng Prostaglandin E2, Interleukin IL-6,

+ Tác dụng chống ung thư:

Các flavonoid phân lập từ cây Núc nác có khả năng ức chế PC – enzyme (nhóm enzyme liên quan đến bệnh ung thư, nhiễm trùng do virus và vi khuẩn, trong đó enzyme furin là enzyme quan trọng nhất) [23]

Baicalein phân lập từ cây Núc nác có tác dụng ức chế mạnh nhất sự phát triển và

di chuyển của dòng tế bào ung thư tăng sinh và di chuyển CT-26 [21]

Dịch chiết với dung môi không phân cực của cây Núc nác có tác dụng trên các tế bào ung thư vú, tạo ra quá trình apoptosis (chết cheo chương trình), mà không làm ảnh hưởng đến các tế bào bình thường [25]

+ Tác dụng kích thích điều hòa miễn dịch: Dịch chiết n-butanol của vỏ rễ cây Núc

nác có tác dụng điều hòa miễn dịch, có thể do khả năng tăng cường đáp ứng miễn dịch (cả miễn dịch dịch thể và miễn dịch tế bào) và khả năng chống oxy hóa [36]

+ Tác dụng chống loét dạ dày tá tràng: Các dẫn chất flavonoid có tác dụng bảo vệ

+ Chế phẩm Nunaxin bào chế từ flavonoid toàn phần của vỏ Núc nác:

1 Điều trị bệnh vảy nến:

Nunaxin được dùng trị bệnh vảy nến cho 37 bệnh nhân trong vòng 54 – 191 ngày Kết quả: 14 bệnh nhân khỏi, 18 bệnh nhân đỡ nhiều, 5 trường hợp không có kết quả [18]

2 Điều trị hen phế quản:

Nunaxin được dùng điều trị bệnh hen phế quản cho 62 trẻ em trong thời gian từ

3 đến 12 tháng Kết quả: 41 bệnh nhân thu được kết quả tốt hoặc khá, chiếm 66,1%;

21 bệnh nhân không có kết quả chiếm 33,9% và không thấy có biểu hiện độc tính [18]

3 Điều trị tổ đỉa:

Nunaxin sử dụng điều trị cho 23 bệnh nhân bị tổ đỉa phối hợp với bôi thuốc tây y ngoài da Kết quả: 18/21 bệnh nhân khỏi nhiễm trùng, 2/21 bệnh nhân đỡ nhiều, 1/21 không khỏi nhiễm trùng Khỏi mụn nước đạt 5/23, đỡ nhiều 7/23, đỡ ít 7/23, không khỏi 4/23 [18]

4 Điều trị 50 bệnh nhân mày đay với kết quả khỏi 58%, đỡ 28% và không kết quả 14% [18]

+ Chế phẩm Oroxin từ cao toàn phần vỏ Núc nác: điều trị 30 bệnh nhân mày đay Kết quả: 56,6% khỏi, 16,6% đỡ nhiều, 6,6% đỡ ít, 20% không đỡ [18]

c Công dụng, cách dùng:

 Công dụng: Chữa các chứng bệnh vàng da, dị ứng mẩn ngứa, viêm họng [10], [18], ho khàn tiếng, đau dạ dày, lỵ, viêm đường tiết niệu, đái buốt ra máu, trẻ con ban, sởi [18]

 Cách dùng: Ngày dùng 8 – 16g dưới dạng thuốc sắc hoặc cao lỏng [6], [10], [18]

 Kiêng kị: Người hư hàn, đầy bụng, đau bụng, tiêu chảy không nên dùng [10], [18]

1.2.2.2 Kim ngân hoa

 Tên khoa học: Flos Lonicerae japonicae

 Bộ phận dùng: Nụ hoa có lẫn một số hoa phơi hay sấy khô của cây Kim ngân

(Lonicera japonica Thunb.), họ Kim ngân (Caprifoliaceae) [3], [10]

a Tóm tắt thành phần hóa học:

 Các flavonoid: lonicerin, loniceraflavon, luteolin, luteolin – 7 – glucosid [3], [18]

 Tinh dầu gồm: α-pinen, eugenol, linalool, carvacrol,…[18]

 Ngoài ra còn có saponin [18], [6], một số iridoid glycoside như loganin, secoxyloganin,…và một số thành phần khác như: inositol 1% , acid clorogenic 6%, acid isoclorogenic [18],…

b Tác dụng sinh học:

 Theo YHCT

+ Tính, vị, quy kinh: vị ngọt, hơi đắng, tính mát, không độc [18]

Quy kinh: tâm, phế, vị và tỳ [8], [18]

+ Công năng: thanh nhiệt, giải độc, sát trùng [18], thanh thấp nhiệt ở vị tràng [8], thanh giải biểu nhiệt [8], lương huyết chỉ huyết [8]

 Tác dụng dược lý theo YHHĐ:

+ Tác dụng chống dị ứng:

Một polysaccharide tan trong nước (LJP-1) phân lập từ nụ hoa Kim ngân có tác dụng chống dị ứng trên mô hình gây viêm da tiếp xúc dị ứng bởi clorua picryl trong tai chuột, làm giảm đáng kể độ dày tai, nồng độ IgE và histamine huyết thanh [30] Acid chlorogenic và các dẫn chất iridoid trong nụ hoa cây Kim ngân có tác dụng phòng ngừa dị ứng, ức chế sự giảm lưu lượng máu trong tĩnh mạch đuôi chuột bị gây kích ứng bởi lòng trắng trứng gà [26]

 Tác dụng chống choáng phản vệ: Nước sắc kim ngân cho uống có tác dụng

ngăn chặn choáng phản vệ trên chuột lang [18]

 Tác dụng kháng khuẩn: Nước sắc hoa kim ngân có tác dụng ức chế mạnh đối

với tụ cầu khuẩn, trực khuẩn thương hàn, trực khuẩn kỵ Shiga [18]

 Tác dụng trên chuyển hóa chất béo: tăng cường chuyển hóa chất béo [18]

 Tác dụng trên đường huyết: nước sắc hoa kim ngân cho uống làm tăng lượng

đường huyết trên thỏ tác dụng kéo dài 5 – 6 giờ [18]

+ Tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh: Dịch chiết methanol từ Kim ngân hoa có tác

dụng bảo vệ các tế bào thần kinh chống lại excitotoxin (nhóm chất gây tổn hại tới

hệ thần kinh) thông qua tác dụng chống oxy hóa [34]

 Độc tính: Chuột nhắt trắng, sau khi được cho uống nước sắc kim ngân liên tục 7 ngày với liều gấp 150 lần liều điều trị cho người, vẫn sống bình thường, giải phẫu các bộ phận không thấy có thay đổi gì đặc biệt [18]

c Công dụng, cách dùng:

 Công dụng:

 Chữa mụn nhọt, mày đay, lở ngứa, ban sởi, tả, lỵ, ho do phế nhiệt [18]

 Điều trị thấp khớp, viêm mũi dị ứng và bệnh dị ứng khác [18]

 Tác dụng cải thiện chuyển hóa chất béo trong bệnh tăng lipid máu, sau khi uống thuốc, các ester trong huyết thanh giảm [18]

 Nước cất nụ hoa kim ngân được dùng tiêm để điều trị bệnh nhiễm khuẩn [18]

 Cách dùng: Dùng 4 – 6g hoa kim ngân dưới dạng thuốc sắc, hãm, cao, rượu thuốc hoặc hoàn tán Có thể dùng riêng hay phối hợp với nhiều vị thuốc khác [18]

 Kiêng kị: những người mụn nhọt đã lở loét [10], tỳ vị hư hàn không thực nhiệt,

hoặc mồ hôi ra nhiều không nên dùng [18]

1.2.2.3 Đơn lá đỏ:

 Tên khoa học: Folium Excoecariae cochinchinensis

 Bộ phận dùng: lá được phơi hay sấy khô của cây Đơn lá đỏ (Excoecaria

cochinchinensis Lour.), họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) [10]

a Tóm tắt thành phần hóa học:

Flavonoid 1,5%, saponin, coumarin, anthranoid, tannin, đường khử [6], [17]

b Tác dụng sinh học:

 Theo YHCT:

 Tính, vị: vị cay, hơi đắng, có tiểu độc [17], nhạt, tính mát [10]

 Công năng: Khư phong, thanh nhiệt, thông kinh, hoạt lạc, chỉ thống [17]

 Tác dụng dược lý theo YHHĐ:

+ Tác dụng chống viêm: dịch sắc lá đơn lá đỏ và dung dịch flavonoid toàn phần

chiết xuất từ đơn lá đỏ làm giảm mức độ phù chân chuột cống trắng được gây viêm cấp tính bằng caragenin [1]

+ Tác dụng chống dị ứng [1]

+ Tác dụng chống oxy hóa: Dịch sắc lá đơn lá đỏ và dung dịch tannin toàn phần

chiết xuất từ đơn lá đỏ có khả năng ức chế quá trình peroxy hóa lipid màng tế bào gan chuột nhắt trắng [1]

+ Tác dụng trên cơ trơn: dịch sắc lá đơn lá đỏ và dung dịch flavonoid toàn phần

chiết xuất từ đơn lá đỏ có tác dụng làm giảm co thắt cơ trơn trên hồi tràng cô lập chuột lang [1]

+ Tác dụng chống khối u: Đơn lá đỏ có tác dụng hạn chế sự phát triển khối u thực

nghiệm gây ra bởi benzo-α-pyren và dầu ba đậu (croton oil) trên chuột nhắt trắng có thể do hoạt tính của các thành phần polyphenol (flavonoid, tannin) có trong dược liệu mang lại [1]

+ Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm: lá Đơn lá đỏ có tác dụng trên một số vi khuẩn Gram (+) và trên nấm Candida albicans, đặc biệt là dịch chiết flavonoid của

Đơn lá đỏ có tác dụng tốt trên vi khuẩn (+) và dịch chiết saponin có tác dụng tốt

trên nấm Candida albicans [2]

 Độc tính: nước sắc lá đơn lá đỏ không có độc tính cấp [1], [2]

c Công dụng, cách dùng:

 Công dụng: Làm thuốc chữa mẩn ngứa, mụn nhọt, tiêu chảy lâu ngày không khỏi [6], [17], lỵ, đái ra máu, kinh nguyệt không đều, phong thấp đau nhức xương cốt do nhiệt [17]

 Cách dùng: Ngày 10 – 20g sắc uống [17]

1.2.2.4 Trần bì

 Tên khoa học: Pericarpium Citri reticulatae

 Bộ phận dùng: Vỏ quả chín đã phơi hoặc sấy khô và để lâu năm của cây Quít

(Citrus reticulata Blanco), họ Cam (Rutaceae) [10]

a Tóm tắt thành phần hóa học:

 Tinh dầu với thành phần chủ yếu là d limonene 91% [6], [18]

 Flavonoid: hesperidin, neohesperidin,…[6], [18]

 Acid hữu cơ, Vitamin A, B [6], [18]

 27 hợp chất gồm các loại: phenyl propanoid glucosid, terpenoid glucosid, limonoid glucosid và adenosine, trong đó có citrusin A [18]

b Tác dụng sinh học:

 Theo YHCT:

 Tính, vị, quy kinh: vị cay, đắng, tính ôn [18] Quy kinh: tỳ, phế [18]

 Công năng: hành khí, táo thấp, hóa đờm, kiện vị [18]

 Tác dụng dược lý theo YHHĐ:

 Tác dụng đối với tim mạch:

Nước sắc trần bì trên tim ếch cô lập và tim ếch tại chỗ đều có tác dụng tăng cường sức co bóp cơ tim, tăng lượng máu do tim đẩy ra, ảnh hưởng không lớn đến nhịp tim Với liều cao, nước sắc ức chế sức co bóp cơ tim và làm giãn mạch vành, trên tiêu bản tim thỏ cô lập Nước sắc trần bì thí nghiệm trên chó tiêm tĩnh mạch, có tác dụng gây co bóp mạch máu thận, giảm lượng nước tiểu, trên chó và thỏ lại có tác dụng tăng huyết áp, và khi huyết áp trở lại bình thường thì tiếp theo có hiện tượng hạ huyết áp trong thời gian ngắn, tác dụng giống như adrenalin [18]

Hesperidin có tác dụng duy trì tính thẩm thấu của mạch máu một cách bình thường, giảm tính giòn của thành mạch máu [8]

 Tác dụng ức chế co bóp cơ trơn: nước sắc trần bì trên tiêu bản ruột cô lập của

thỏ và chuột nhắt trắng có tác dụng ức chế co bóp ruột [18]

 Tác dụng chống viêm, chống loét, lợi mật: Hesperidin không có tác dụng làm

giảm phù chân chuột do formaldehyde gây nên Methylhesperidin có tác dụng ức chế loét dạ dày gây nên do thắt môn vị trên chuột cống trắng; tiêm xoang bụng cho chuột cống trắng có tác dụng lợi mật rõ rệt [18]

+ Tác dụng bảo vệ tế bào gan: Có tác dụng bảo vệ tế bào gan trước tác hại của tia

X ở chuột nhắt trắng [18]

/ Hesperidin chiết xuất từ Trần bì có tác dụng bảo vệ tế bào biểu mô sắc tố võng mạc thỏ [35]

/ Limonen có tác dụng ức chế thần kinh trung ương, thí nghiệm trên chuột nhắt

và chuột cống trắng bằng đường uống làm giảm hoạt động tự nhiên của chuột, hạ thân nhiệt, kéo dài tác dụng của các thuốc gây mê Ngoài ra limonene còn có tác dụng giải co thắt, chống viêm, kháng dị ứng [18]

c Công dụng, cách dùng:

 Công dụng:

+ Chữa ăn không tiêu, thức ăn tích trệ, đau bụng, bụng ngực đầy trướng, ợ hơi buồn nôn, ỉa chảy do lạnh [8], [18]

+ Chữa ho tức ngực, nhiều đờm, viêm phế, khí quản mạn tính [8], [18]

 Cách dùng: Ngày uống 4 – 12g dưới dạng thuốc sắc hay thuốc bột [8], [18]

 Kiêng kị: những người ho khan, âm hư không có đàm không nên dùng [8]

1.2.2.5 Ké đầu ngựa

 Tên khoa học: Fructus Xanthii strumarii

 Bộ phận dùng: Quả già đã phơi hoặc sấy khô của cây Ké đầu ngựa (Xanthium

strumarium L.), họ Cúc (Asteraceae) [10]

a Tóm tắt thành phần hóa học:

- Iod hàm lượng cao, 220 - 230µg/1g quả; 200µg/1g lá [17]

- Quả chứa sesquiterpen lacton: xanthinin, xanthumin, xanthol,…[17]

Ngoài ra còn có các thành phần khác: vitamin C, glucose, fructose, acid hữu cơ, phosphatid, kalinitrat,…[17]

- Hạt chứa dầu béo 30 - 35% [17] Trong đó, các acid béo chưa no gồm acid oleic 22,4 – 30,7%, linoleic 51,9 – 67,1%,…[17]

- Ngoài ra còn có alkaloid, saponin [6]

b Tác dụng sinh học:

 Theo YHCT:

+ Tính vị quy kinh: vị tân, khổ, tính ôn [10]; quy kinh phế [10]

+ Công năng:

Tán phong thấp, thông tỵ khai khiếu, sát trùng tiêu độc [10], [17], tán kết [8]

 Tác dụng dược lý theo YHHĐ:

+ Kháng histamine: đơn thuốc chứa ké đầu ngựa và 15 dược liệu khác đã được

chứng minh có tác dụng kháng histamine trong 3 phương pháp thí nghiệm: nghiệm pháp khí dung histamine gây khó thở và co giật trên chuột lang, tiêm tĩnh mạch histamine gây hạ áp và thí nghiệm histamine gây co thắt hồi tràng cô lập của động vật [17]

+ Làm giảm cường độ co bóp tim, giảm thân nhiệt và lợi tiểu [17]

+ Rễ làm giảm đường huyết trên chuột cống bình thường [17]

+ Tác dụng ức chế thần kinh trung ương: Hoạt chất xanthumin có tác dụng ức chế

thần kinh trung ương [17]

+ Tác dụng trên ruột cô lập: Nước sắc có tác dụng làm tăng nhu động ruột thỏ cô lập và gây phong bế tim ếch [17]

+ Tác dụng chống khối u

Trên động vật gây ung thư biểu mô cổ trướng Erhlich, dịch chiết nước rễ ké đầu ngựa kéo dài thời gian sống 39%, dịch chiết cồn làm giảm trọng lượng khối u 13%, kéo dài thời gian sống 14% [17]

+ Tác dụng kháng khuẩn:

Dịch chiết methanol, sesquiterpen xanthonol có tác dụng kháng khuẩn Bacillus

subtilis, Candida pseudotropicalis, Candida albicans, Proteus vulgaris [17]

c Công dụng, cách dùng:

 Công dụng: Chữa phong thấp, đau nhức khớp xương; phong ngứa, dị ứng, viêm ngạt mũi, viêm xoang, bướu cổ, nấm tóc, hắc lào, lỵ; phong hàn, đau đầu chân tay

co rút [8], [17]

 Cách dùng, liều dùng: 6 – 12g quả, dưới dạng thuốc sắc hoặc hoàn tán [8]

 Kiêng kị: những trường hợp nhức đầu do huyết hư không nên dùng, khi dùng cần

kiêng thịt lợn, thịt ngựa [8], [17]

1.2.2.6 Cúc hoa vàng

 Tên khoa học: Flos Chrysanthemi indici

 Bộ phận dùng: Cụm hoa đã chế biến và phơi hay sấy khô của cây Cúc hoa vàng

(Chrysanthemum indicum L.), họ Cúc (Asteraceae) [10]

a Tóm tắt thành phần hóa học:

Cúc hoa vàng chứa:

- Tinh dầu (21 thành phần) [17]

- Flavonoid: acaciin, chrysanthemin,…[17]

- Acid amin (adenin, cholin, stachydrin), vitamin A [6], [17]

- Carotenoid (chrysanthemoxanthin) [17]

- Sesquiterpen: angeloyl cumambrin B, arteglasin A,…[17]

- Các thành phần khác: Indicumenon, -sitosterol, -amyrin [17]

b Tác dụng sinh học:

 Theo YHCT

+ Tính, vị, quy kinh: Vị đắng, cay [17], ngọt, tính bình [8]

Quy kinh: Phế, can, thận [17], tỳ [8]

+ Công năng: Tán phong nhiệt, thanh can minh mục [17]

Bình can hạ áp, Giải độc trị nhọt [8]

 Tác dụng dược lý theo YHHĐ

+ Tác dụng chống viêm: Cúc hoa vàng có tác dụng chống viêm thực nghiệm trên

chuột cống trắng [17]

+ Tác dụng hạ huyết áp:

Cúc hoa vàng có tác dụng làm hạ huyết áp trên chó và người bệnh, có thể là hiệu quả của tác dụng ức chế phản xạ vận mạch có nguồn gốc trung tâm và tác dụng ức chế adrenalin Cao lỏng của cúc hoa vàng gây hạ huyết áp thỏ nhưng tác dụng không bền vững [17]

+ Tác dụng trên mạch: làm tăng độ bền mao mạch ruột thỏ cô lập [17]

+ Tác dụng kháng khuẩn:

Cao lỏng cúc hoa vàng có tác dụng kháng khuẩn đối với Bacillus mycoides,

Escherichia coli [17]

Tinh dầu cất từ nụ hoa cây cúc hoa vàng ức chế các chủng vi khuẩn Diplococcus

pneumonia, Streptococcus faecalis, Shigella shigae, Bacillus subtilis, Escherichia coli,… [17]

+ Tác dụng ức chế kết tập tiểu cầu:

Cúc hoa vàng có tác dụng ức chế in vitro sự kết tập tiểu cầu của máu động vật thí nghiệm gây bởi tụ cầu khuẩn vàng, trực khuẩn coli và trực khuẩn mủ xanh [17] + Tác dụng gây kích ứng da: Chất arteglasin A trong cúc hoa có tác dụng gây

kích ứng da trên da chuột lang và da người khi tiếp xúc gây viêm da dị ứng [17]

+ Tác dụng chống ung thư:

Dịch chiết ethanol của Cúc hoa vàng ức chế sự phát triển và xâm nhập của các tế bào MHCC97H - một trong những dòng tế bào HCC (Hepatocellular carcinoma – ung thư biểu mô tế bào gan) với tiềm năng di căn cao [33], gây ra quá trình apoptosis (chết theo chương trình) của các tế bào này mà không gây độc cho tế bào gan chuột và tế bào nội mô của con người [22]

c Công dụng, cách dùng:

 Công dụng:

+ Chữa cảm mạo phong nhiệt, các chứng của bệnh truyền nhiễm ở thời kỳ đầu [8] + Chữa giảm thị lực do nhiệt phạm kinh can, mắt sưng đau, đỏ [8]

+ Cao huyết áp do can hỏa vượng [8], [17]

+ Giải độc, chữa mụn nhọt, dị ứng mẩn ngứa do phong nhiệt [8], [17]

 Cách dùng, liều dùng: 8 - 16g / ngày dưới dạng thuốc sắc [17]

 Kiêng kị: tỳ vị hư hàn, hoặc đau dầu do phong hàn thì không dùng [8]

1.2.2.7 Tô mộc

 Tên khoa học: Lignum Sappan

 Bộ phận dùng: Gỗ lõi để nguyên hay chẻ nhỏ được phơi hay sấy khô của cây Vang

(Caesalpinia sappan L.), họ Đậu (Fabaceae) [10]

a Tóm tắt thành phần hóa học:

Chất màu đa phenol (sappanin, brazilin, ), tannin, acid galic,…[6]

b Tác dụng sinh học:

- Theo YHCT:

+ Tính, vị, quy kinh: vị đắng, chát, hơi ngọt, mặn, tính bình [18]

Quy kinh: tâm, can, tỳ [18]

+ Công năng: Hành huyết, thông kinh, giảm đau, tán ứ, tiêu sưng [18]

Thanh tràng chỉ lỵ [8]

- Tác dụng dược lý theo YHHĐ:

+ Tác dụng kháng histamine: Tô mộc có tác dụng kháng histamine và bảo vệ chống

lại độc tính của nọc rắn, nâng cao tỷ lệ sống hoặc kéo dài thời gian cầm cự của chuột nhắt tiêm nọc rắn hổ mang [18]

+ Tác dụng kháng khuẩn: ức chế một số chủng vi khuẩn: trực khuẩn bạch cầu, tụ

cầu vàng, phế cầu, trực khuẩn mủ xanh, một số nấm men,…[18]

+ Tác dụng diệt amip lỵ với nồng độ ức chế thấp [18]

+ Tác dụng chống viêm: Brazilin có hoạt tính chống viêm có ý nghĩa trên mô hình

phù chân chuột cống trắng gây bởi carragenin [18]

+ Tác dụng trên tim mạch: Nước sắc tô mộc làm tăng co bóp tim ếch cô lập và làm

phục hồi co bóp của tim suy yếu do cloral hydrat và có tác dụng co mạch nhẹ trong thí nghiệm chân sau ếch cô lập [18]

+ Tác dụng bảo vệ gan: dịch chiết methanol và dịch chiết nước của Tô mộc có tác

dụng bảo vệ tế bào gan chuột cô lập bị gây độc bởi CCl4 do có thể khôi phục lại mức độ sinh hóa bình thường của tế bào gan [29]

+ Tác dụng chống ung thư: Tô mộc có tác dụng chống ung thư trên bệnh bạch cầu

lympho bào P 388 [18]

+ Tác dụng an thần:

Protosappanin A từ tô mộc có tác dụng an thần yếu trên chuột nhắt [18]

Nước sắc tô mộc trên chuột nhắt, chuột lang, thỏ, tiêm hay cho uống, đều gây trấn

tĩnh, gây ngủ và đối kháng với co giật do strychnine [18]

Cao methanol của tô mộc kéo dài thời gian của giấc ngủ gây bởi thuốc ngủ

barbituric trên chuột nhắt [18]

+ Tác dụng trên lipid máu: Cao methanol của tô mộc làm giảm lipid và cholesterol

máu trên chuột nhắt trắng gây tăng lipid và cholesterol máu [18]

- Độc tính: nước sắc tô mộc tiêm dưới da chó với liều 3g/kg gây nôn và tiêu chảy

LD50 của cao khô tô mộc tiêm phúc mạc chuột nhắt là 750mg/kg [18]

c Công dụng, cách dùng:

- Công dụng:

+ Chữa đau bụng do kinh nguyệt bế, sau khi đẻ huyết ứ trướng đau, chấn thương, ứ

huyết, choáng váng hoa mắt và mất máu quá nhiều sau khi đẻ [8], [18]

+ Dùng chữa lỵ ra máu, đau ruột, chảy máu ruột, tiêu chảy do nhiễm trùng, xích

bạch đới [18]

+ Làm thuốc giảm đau và chống viêm trong điều trị bệnh chấn thương [18]

- Cách dùng: Ngày dùng 6 – 15g dạng thuốc sắc hoặc hoàn tán [18]

 Kiêng kị: Phụ nữ có thai, huyết hư không ứ trệ, không nên dùng [18]

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu, thiết bị nghiên cứu

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu

Các vị thuốc Núc nác, Kim ngân hoa, Đơn lá đỏ, Trần bì, Ké đầu ngựa, Cúc hoa,

Tô mộc được mua tại nhà thuốc Haphaco số 59 Lãn Ông, Hà Nội

2.1.2 Thiết bị, dung môi, hóa chất, súc vật nghiên cứu

 Thiết bị:

- Các dụng cụ xay, nghiền dược liệu

- Cân phân tích Sartorius – TE214S, cân kĩ thuật Precisa – XB320C

- Tủ sấy: Memmert, Shellab

- Kính hiển vi Labomed, các dụng cụ soi bột dược liệu

- Máy cất quay: Buchi R – 200 (Germany)

- Đèn tử ngoại Camag, Máy chấm sắc ký Linomat 5

- Máy đo pH Eutech

- Bộ dụng cụ xác định độ ẩm bằng phương pháp dung môi

- Kim đầu tù

- Thước đo độ dày (Độ chính xác 0,02mm)

- Thiết bị sinh thiết (biopsy punch) đường kích 7 mm

 Hóa chất, dung môi:

- Hóa chất, dung môi, bản mỏng sắc ký dùng trong nghiên cứu hóa học mua tại công ty TNHH hóa chất ứng dụng số 18 Lê Thánh Tông - Hà Nội, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm phân tích

- Hóa chất, dung môi dùng trong thử tác dụng sinh học do bộ môn Dược lý trường

ĐH Y Hà Nội cung cấp

+ Dầu croton (Hãng sản xuất: Sigma – Đức)

+ Dung môi aceton

+ Methyl prednisolon viên nén 4 mg

- Bản sắc ký lớp mỏng Silicagel GF254 (MERCK)

 Súc vật nghiên cứu:

Chuột nhắt trắng chủng Swiss, khỏe mạnh, cả hai giống, trọng lượng từ 22 – 26 g Súc vật được nuôi trong phòng thí nghiệm của Bộ môn Dược lý – Đại học Y Hà Nội một tuần trước khi tiến hành nghiên cứu bằng thức ăn chuẩn (Do viện Vệ sinh dịch tễ trung ương sản xuất)

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Kiểm tra chất lượng dược liệu đầu vào cho nghiên cứu

- Điều chế cao đặc bài thuốc

- Xây dựng tiêu chuẩn cao đặc

- Dự kiến tiêu chuẩn cao đặc bài thuốc

- Thử tác dụng chống viêm của cao đặc

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Kiểm tra chất lượng các vị thuốc đầu vào cho nghiên cứu

Các dược liệu mua về được sơ chế sạch để kiểm tra chất lượng Việc kiểm tra chất lượng được đối chiếu với tiêu chuẩn ghi trong DĐVN IV

- Mô tả: quan sát trực tiếp bằng mắt thường mô tả đặc điểm bên ngoài của dược liệu, dùng vị giác, khứu giác để xác định mùi vị

- Soi bột: Bằng phương pháp vi học theo tiêu chuẩn DĐVN IV

- Định tính các vị thuốc: Phương pháp hóa thực vật thường quy theo tiêu chuẩn DĐVN IV

- Xác định chất chiết được trong dược liệu: Phương pháp chiết nóng dùng ethanol làm dung môi (Tiến hành theo phụ lục 12.10 DĐVN IV)

Công thức tính: (sử dụng 2,000g dược liệu với 50,0ml dung môi)

Trong đó: C: Hàm lượng chất chiết được bằng ethanol của dược liệu (%)

m2: Tổng khối lượng cốc và cắn (g)

m1: Khối lượng cốc (g)

m: Khối lượng dược liệu đem thử (g)

H: Độ ẩm của dược liệu (%)

- Độ ẩm:

+ Phương pháp mất khối lượng do làm khô (Tiến hành theo phụ lục 9.6 DĐVN IV) Công thức tính:

Trong đó: H: Độ ẩm của dược liệu (%)

m: Khối lượng cốc (g)

m1: Khối lượng dược liệu đem đo độ ẩm (g)

m2: Khối lượng cốc và dược liệu sau khi sấy (g)

+ Phương pháp cất với dung môi (Tiến hành theo phụ lục 12.13 DĐVN IV)

Công thức tính:

Trong đó: H: Độ ẩm dược liệu (%)

V1: Số ml nước cất được sau lần cất đầu

V2: Số ml nước cất được sau hai lần cất

m: Số g mẫu đã cân đem thử

2.3.2 Điều chế cao đặc

Chiết riêng từng vị thuốc bằng phương pháp ngâm lạnh ở nhiệt độ phòng với

dung môi là ethanol 70%, chiết đến khi dịch thu được nhạt màu, lọc, cất thu hồi dung môi, cô cách thủy được cao lỏng 1:1 thì phối hợp cao của 7 vị thuốc, cô cách thủy đến khi thu được cao đặc [9]

Tiến hành chiết 3 mẻ

Xác định hiệu suất chiết cao và tỷ lệ cao đặc thu được theo công thức:

Trong đó: H: Hiệu suất chiết cao (%)

m2: Tổng khối lượng các dược liệu sử dụng để chiết cao (g)

m1: Khối lượng cao đặc thu được (g)

2.3.3 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc

2.3.3.1 Khảo sát các chỉ tiêu hóa lý:

- Nhận xét cảm quan: Bằng thị giác, vị giác, khứu giác

- Xác định độ ẩm: Bằng phương pháp cất với dung môi (Tiến hành theo phụ lục 12.13 DĐVN IV)

- Đo pH: Cao đặc được pha loãng thành dung dịch 1% (kl/tt)

Đo pH bằng máy đo pH

- Xác định chất chiết được bằng nước: Bằng phương pháp chiết lạnh (Tiến hành theo phụ lục 12.10 DĐVN IV)

Công thức tính:

Trong đó: C: Hàm lượng chất chiết được bằng nước của cao (%)

m1: Khối lượng cao (g)

m2: Tổng khối lượng chén nung và tro sau khi nung (g)

H: Độ ẩm cao đặc (%)

2.3.3.2 Định tính các nhóm chất hữu cơ:

Phương pháp hóa thực vật thường quy

Căn cứ các nhóm chất hóa học có trong các vị thuốc của bài thuốc để định hướng định tính Tiến hành phản ứng với các thuốc thử chung và thuốc thử đặc hiệu của từng nhóm chất [3], [4], [5], [16]

2.3.3.3 Kiểm tra các vị thuốc trong cao đặc bằng SKLM:

Chuẩn bị dịch chấm sắc ký, bản mỏng, dung môi khai triển; thể tích chấm sắc kí của vị thuốc và cao đặc là như nhau, tất cả tiến hành trong cùng điều kiện So sánh các vết trên sắc ký đồ của vị thuốc và cao đặc Nếu trong sắc ký đồ của cao đặc có các vết tương đương với vết trong sắc ký đồ của vị thuốc cả về màu sắc và Rf thì có thể sơ bộ xác định trong cao đặc có chứa vị thuốc đó [3], [4], [5], [10]

2.3.4 Dự kiến tiêu chuẩn cao đặc

+ Yêu cầu chất lượng: Dựa vào kết quả khảo sát cao đặc

+ Phương pháp đánh giá (phương pháp thử): Theo các phương pháp đã khảo sát

2.3.5 Thử tác dụng chống viêm cấp

- Phương pháp: mô hình gây viêm ở tai chuột nhắt trắng bởi dầu croton được tiến

hành dựa theo mô hình do Tubaro và cộng sự đã đưa ra (1985)

Hoạt chất chính của dầu croton là chất hữu cơ được gọi là phorbol Cơ chế gây kích ứng da của dầu croton được giải thích thông qua Phospholipase A2 (PLA2) Dầu croton làm tăng hoạt tính của PLA2 dẫn tới tăng tạo acid arachidonic và sau đó

là các yếu tố liên quan tới quá trình viêm như leucotrien và prostaglandin Cơ chế gây kích ứng da của dầu croton có sự tham gia hoạt hóa của hai hệ enzym là Cyclooxygenase (COX) và Lipooxigenase (LOX) [19], [24] Mô hình này đã được nhiều nhà nghiên cứu trên thế giới sử dụng để đánh giá tác dụng chống viêm của các thuốc hoặc dược chất [27], [32]

Tác nhân gây phù tai chuột là dầu croton pha trong aceton

Gây mô hình: Mặt ngoài của tai chuột được bôi 20 µl dung dịch dầu croton

(trong aceton) để gây mô hình viêm tai, tiến hành việc bôi dung dịch dầu croton bằng pipet Chỉ bôi tai phải, tai trái không bôi để đối chiếu

Methylprednisolon đường uống được dùng làm thuốc đối chứng dương trong nghiên cứu này Corticoid đã được chứng minh là có tác dụng mạnh nhất trên mô hình viêm cấp bằng dầu croton [31]

Thí nghiệm được tiến hành trên 3 lô chuột nhắt: Lô mô hình, lô thử thuốc chuẩn (methylprednisolone) và lô thử cao thuốc

Xác định mức độ ức chế viêm ở tai chuột để đánh giá tác dụng chống viêm của cao đặc bài thuốc

- Chỉ tiêu quan sát: chênh lệch độ dày, trọng lượng tai

- Chỉ tiêu đánh giá: mức độ ức chế viêm giữa các lô Tính theo công thức:

Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05

X

Chương 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN

3.1 Kiểm tra chất lượng các vị thuốc

Sơ chế: Các vị thuốc sau khi mua về được rửa sạch, sấy khô ở nhiệt độ 60oC, nghiền thành bột mịn, bột thô để kiểm tra theo tiêu chuẩn DĐVN IV

3.1.1 Núc nác

3.1.1.1 Mô tả:

Vỏ cuộn lại thành hình ống hay hình cung, dày 0,6 - 1,3 cm, dài ngắn không nhất định Mặt ngoài màu vàng nâu nhạt, nhăn nheo, có nhiều đường vân dọc, ngang Mặt trong nhẵn, màu vàng xám hay vàng lục Mặt bẻ ngang có lớp bần mỏng Mô mềm vỏ lổn nhổn như có nhiều sạn, trong cùng có lớp sợi dễ tách theo chiều dọc Trên thị trường bán dạng thuốc phiến, phiến dày 1 – 2cm, dài 4 – 5cm, hình cung (Hình 3.1)

3.1.1.2 Soi bột:

Tiến hành: Lấy 1 lượng bột nhỏ đã nghiền mịn, cho vào 1 giọt nước đã có sẵn

trên lam kính, đậy lam kính, quan sát dưới kính hiển vi

Bột có những đặc điểm sau: nhiều sợi dài, màu vàng nhạt, thành dày, khoang rộng Tế bào mô cứng màu vàng, hình nhiều cạnh, thành hơi dày, khoang rộng Rất nhiều tinh thể calci oxalat hình kim, 2 đầu thuôn nhọn hoặc vuông Mảnh mô mềm hình đa giác, thường chứa tinh thể calci oxalat hình kim

Các đặc điểm được thể hiện ở hình 3.2:

Hình 3.1 Ảnh thuốc phiến Núc nác Hình 3.2 Ảnh đặc điểm bột núc nác Ghi chú: 1 Tế bào mô cứng; 2 Sợi; 3 Mảnh mô mềm; 4 Tinh thể calci oxalate

Nhận xét: Các đặc điểm của bột Núc nác phù hợp với tiêu chuẩn DĐVN IV

3.1.1.3 Định tính bằng phản ứng hóa học:

Tiến hành:

Lấy 0,5 g bột thô dược liệu vào ống nghiệm, thêm 5 ml ethanol (TT), lắc Đun

cách thuỷ 5 - 10 phút, lọc Lấy dịch lọc cho vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1ml, làm

các phản ứng sau:

Ống 1: Thêm 3 giọt acid hydrocloric (TT), thêm một ít bột magnesi (TT)

Ống 2: Thêm 1 giọt dung dịch sắt (III) clorid 5% (TT)

Ống 3: Thêm từ từ theo thành ống 5 ml 0,5 ml acid sulfuric (TT)

- Sấy ở 105oC trong 4 giờ

- Lấy ra cho vào bình hút ẩm 30 phút

- Cân xác định khối lượng

Làm 3 lần lấy kết quả trung bình

Yêu cầu: độ ẩm không quá 14%

Kết quả: ghi ở bảng 3.1

Nhận xét: Độ ẩm của Núc nác đạt tiêu chuẩn DĐVN IV

3.1.1.5 Chất chiết được trong dược liệu:

Xác định chất chiết được trong ethanol bằng phương pháp chiết hồi lưu

Tiến hành:

- Cân chính xác khoảng 2,000g bột dược liệu có cỡ bột nửa thô cho vào bình nón

100 ml Thêm chính xác 50,0 ethanol 96%, đậy kín, cân xác định khối lượng, để yên 1 giờ

- Đun sôi nhẹ dưới hồi lưu 1 giờ, để nguội, lấy bình nón ra, đậy kín, cân để xác định lại khối lượng, dùng ethanol 96% để bổ sung phần khối lượng bị giảm

- Lọc qua phễu lọc khô vào một bình hứng khô thích hợp, lấy chính xác 25 ml dịch lọc vào cốc thủy tinh đã cân bì trước, cô trong cách thủy đến cắn khô

- Cắn thu được sấy ở 105 0C trong 3 giờ, lấy ra để nguội trong bình hút ẩm 30 phút

- Cân xác định khối lượng cắn

- Tính phần trăm lượng chất chiết được bằng nước theo dược liệu khô

Yêu cầu: không được ít hơn 10,0% tính theo dược liệu khô kiệt

 Nhận xét chung: Từ các đặc điểm đã kiểm tra ở trên, về cơ bản có thể xác

định vị thuốc núc nác đạt tiêu chuẩn DĐVN IV

3.1.2 Kim ngân hoa

3.1.2.2 Soi bột:

Tiến hành: tương tự như soi bột núc nác (Mục 3.1.1.2 trang 27)

Bột có những đặc điểm sau: Bột màu vàng nâu nhạt, có mùi thơm nhẹ, vị hơi đắng Soi kính hiển vi thấy: hạt phấn hình cầu, màu vàng, có 3 lỗ rãnh nảy mầm rõ,

bề mặt có nhiều gai nhỏ, thưa Lông che chở đơn bào thành dầy, nhẵn hoặc có những chấm lồi nhỏ Mảnh biểu bì cánh hoa mang lông che chở Mảnh cánh hoa mang các bó mạch xếp song song

Các đặc điểm được thể hiện ở hình 3.4

Hình 3.3 Ảnh vị thuốc Kim ngân hoa Hình 3.4 Đặc điểm bột Kim ngân hoa

Ghi chú: 1 Mảnh biểu bì mang lông che chở; 2 Mảnh biểu bì; 3 Mảnh cánh hoa;

4 Mảnh cánh hoa mang bó mạch; 5,6 Lông che chở; 7 Hạt phấn

Nhận xét: Các đặc điểm của bột Kim ngân hoa phù hợp với tiêu chuẩn DĐVN IV

3.1.2.3 Định tính bằng các phản ứng hóa học:

 Phản ứng 1:

Tiến hành: Lấy 5 g bột dược liệu cho vào bình nón có dung tích 100 ml, thêm

20 ml ethanol 90% (TT) Lắc kỹ, đun cách thủy trong 15 phút, lọc Cô dịch lọc trên

cách thủy đến khi còn khoảng 5 ml Lấy 1 ml dung dịch vào ống nghiệm, thêm 2 - 3

giọt dung dịch acid HCl (TT) và một ít bột magnesi (TT)

Kết quả: Phản ứng dương tính Dung dịch chuyển từ màu vàng sang cam đỏ

(phù hợp tiêu chuẩn DĐVN IV)

 Phản ứng 2:

Tiến hành: Lấy 1 g bột dược liệu cho vào ống nghiệm, thêm 10 ml nước cất, lắc

nhẹ trong 5 phút, lọc Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2 ml dịch lọc Thêm 2 – 3

giọt dung dịch natri hydroxyd 10% (TT) vào ống nghiệm thứ nhất

Kết quả: Phản ứng dương tính Dung dịch có màu vàng đậm hơn ống nghiệm

không thêm dung dịch NaOH 10% (TT) (phù hợp tiêu chuẩn DĐVN IV)

Nhận xét: Các phản ứng phù hợp với DĐVN IV

3.1.2.4 Độ ẩm:

Tiến hành: Tương tự như xác định độ ẩm núc nác (Mục 3.1.1.4 trang 28)

Sử dụng 1,00g bột Kim ngân hoa, sấy ở 85oC trong 4 giờ

Yêu cầu: độ ẩm không quá 12%

Nhận xét: Độ ẩm của Kim ngân hoa đạt tiêu chuẩn DĐVN IV

3.1.2.5 Chất chiết được trong dược liệu:

Tiến hành: Làm tương tự như với núc nác (Mục 3.1.1.5 trang 29)

Sử dụng ethanol 90% làm dung môi

Yêu cầu: Không được ít hơn 29,0%, tính theo dược liệu khô kiệt

Nhận xét: Hàm lượng chất chiết được trong Kim ngân hoa đạt tiêu chuẩn DĐVN IV

 Nhận xét chung: Từ các đặc điểm đã kiểm tra ở trên, về cơ bản có thể xác

định vị thuốc kim ngân hoa đạt tiêu chuẩn DĐVN IV

Tiến hành: Tương tự như soi bột núc nác (Mục 3.1.1.2 trang 27)

Bột có những đặc điểm sau: Bột lá có màu xanh nâu, mùi hắc nhẹ Quan sát dưới kính hiển vi cho thấy có: mảnh mô mềm chứa chất màu, mạch mạng, mạch xoắn, tinh thể calci oxalat

Các đặc điểm được thể hiện ở hình 3.6