Nghiên cứu về thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây lạc tân phụ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC HÙNG NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA CÂY LẠC TÂN PHỤ Astilbe rivularis Buc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN ĐỨC HÙNG

NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG

VIÊM CỦA CÂY LẠC TÂN PHỤ

Astilbe rivularis Buch.-Ham ex D Don,

họ Saxifragaceae

LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC

HÀ NỘI 2013

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN ĐỨC HÙNG

NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG

VIÊM CỦA CÂY LẠC TÂN PHỤ

Astilbe rivularis Buch.-Ham ex D Don,

họ Saxifragaceae

LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC

HÀ NỘI 2013

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN ĐỨC HÙNG

NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG

VIÊM CỦA CÂY LẠC TÂN PHỤ Astilbe rivularis Buch.-Ham ex D Don,

họ Saxifragaceae

LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC

CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN

MÃ SỐ: 60720406

Người hướng dẫn khoa học : 1 TSKH Nguyễn Minh Khởi

2 NCS Phạm Quốc Tuấn

HÀ NỘI 2013

LỜI CẢM ƠN

Sau thời gian nghiên cứu thực hiện đề tài, hoàn thành Luận văn Tôi xin

phép bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới:

TSKH Nguyễn Minh Khởi – Viện Dược liệu Hà Nội người đã động

viên, dành nhiều thời gian quí báu hướng dẫn tôi trong quá trình nghiên cứu và

thực hiện bản Luận văn này

NCS Phạm Quốc Tuấn – Trường Cao đẳng Dược Phú Thọ người đã chỉ

bảo tận tình và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực hiện nghiên cứu Luận văn

này

Tôi cũng xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới:

TS Phương Thiện Thương –Viện Dược liệu người đã giúp đỡ tôi trong

quá trình nghiên cứu, thực hiện Luận văn này

TS Hà Quang Lợi – Trường Cao đẳng Dược Phú Thọ người đã động

viên, khuyến khích tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên

cứu hoàn thành Luận văn này

Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Viện sinh thái và Tài nguyên

sinh vật, Khoa Phân tích và Tiêu chuẩn, Khoa Dược lý Viện Dược liệu và Bộ

môn Dược lý Trường Đại học Dược Hà Nội đã giúp đỡ Tôi hoàn thành Luận

văn này

Các thầy cô Trường Đại học Dược Hà Nội đã trang bị đầy đủ kiến thức

và động viên giúp đỡ tôi trong suốt những năm học tập và nghiên cứu

Cuối cùng Tôi xin cảm ơn gia đình tôi đã ủng hộ, khích lệ Tôi trong quá

trình học tập và nghiên cứu hoàn thành Luận văn này

Xin chân thành cảm ơn!

Nguyễn Đức Hùng

MỤC LỤC

N 3

3 3

ành phần hóa học chi Astilbe 8

1.1.2.1 Công dụng và tác dụng các loài trong chi Astilbe 8

1.2 CÂY LẠC TÂN PHỤ 9

1.2.1 Mô tả thực vật 9

1.2.2 Phân bố 9

1.2.3 Đặc điểm thứ loài Astible rivularis var rivularis 10

1.2.4 Đặc điểm thứ loài Astilbe rivularis var myriantha (Diels) J.T.acta phytotax 10

1.2.5 Đặc điểm thứ loài Astilbe rivularis var angustifoliolata H Hara, J.Jap.Bot.51 10

1.2.6 Thành phần hóa học, tác dụng sinh học và công dụng 10

1.2.6.1 Thành phần hóa học và tác dụng sinh học Lạc tân phụ 10

1.2.6.2 Công dụng Lạc tân phụ 11

1.3 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA THUỐC 11

1.3.1 Phương pháp xác định độc tính cấp 11

1.3.1.1 Đại cương về phương pháp xác định độc tính cấp 11

1.3.1.2 Phương pháp BEHRENS (1929) 12

1.3.2 Phương xác nghiên cứu tác dụng chống viêm 13

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUA 1.1 HỌ THƯỜNG SƠN VÀ CHI Astilbe

1.1.1 Về mặt thực vật 3

1.1.1.1 Họ Thường sơn

1.1.1.2 Chi Astilbe 3

1.1.2 Thành phần hóa học và tác dụng sinh học chi Astilbe 8

1.1.2.1 Th

1.3.2.1 Đại cương về viêm 13

1.3.2.2 Thử nghiệm trên phù chân chuột bằng carrageenan 14

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 15

2.1.1 Nguyên liệu 15

2.1.2 Hóa chất, dung môi 15

2.1.3 Động vật nghiên cứu 16

2.1.4 Một số thiết bị dùng trong nghiên cứu 16

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16

2.2.1 Phương pháp nghiên cứu thực vật 16

2.2.2 Phương pháp nghiên cứu hóa học 17

2.2.3 Phương pháp thử độc tính cấp 17

2.2.4 Phương pháp đánh giá tác dụng chống viêm cấp 17

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 20

3.1 NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT 20

3.1.1 Về tên khoa học của loài 20

3.1.2 Đặc điểm hình thái 20

3.1.3 Cấu tạo giải phẫu 26

3.1.3.1 Cấu tạo lá 26

3.1.3.2 Cấu tạo thân khí sinh 28

3.1.3.3 Cấu tạo thân rễ 29

3.1.3.4 Cấu tạo rễ 30

3.2 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC 31

3.2.1 Định tính các nhóm chất trong lá và rễ Lạc tân phụ 31

3.2.1.1 Định tính glycosid tim 31

3.2.1.2 Định tính tanin 33

3.2.1.3 Định tính flavonoid 33

3.2.1.4 Định tính alkaloid 34

3.2.1.5 Định tính anthranoid 35

3.2.1.6 Định tính chất béo 35

3.2.1.7 Định tính saponin 35

3.2.1.8 Định tính coumarin 36

3.2.1.9 Định tính protein + aminoacid 37

3.2.1.10 Định tính carbohydrat 38

3.2.1.11 Định tính acid hữu cơ 38

3.3 CHIẾT TÁCH CÁC CHẤT VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA BỘ PHẬN TRÊN MẶT ĐẤT CÂY LẠC TÂN PHỤ 41

3.3.1.Chuẩn bị mẫu 41

3.3.2 Nhận dạng các chất phân lập được 44

3.3.2.1 Hợp chất 1 44

3.3.2.2 Hợp chất 2 47

3.3.2.3 Hợp chất 3 49

3.3.2.4 Hợp chất 4 53

3.5 KẾT QUẢ THỬ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CẤP 57

CHƯƠNG 4 BÀN LUẬN 60

4.1 VỀ THỰC VẬT 60

4.2 VỀ HÓA HỌC 60

4.3 VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC 62

4.3.1 Thử độc tính cấp 62

4.3.2 Thử tác dụng chống viêm cấp 62

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63

1 KẾT LUẬN 63

2 KIẾN NGHỊ 65

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 2.1 Qui trình thí nghiệm tác dụng chống viêm

Hình 3.1 Thân rễ và thân khí sinh mang lá kép

Bảng 3.7 Ảnh hưởng của cao chiết toàn phần Lạc tân phụ lên

mức độ phù chân chuột (%) theo thời gian

1H-1H COSY Chemical Shift Correlation Spectroscopy

Phổ khối lượng

Phổ hồng ngoại

Liều chế trung bình làm chết 50% số con vật thí nghiệm

ĐẶT VẤN ĐỀ

Loài Astilbe rivularis Buch.-Ham ex D Don, họ Thường sơn

(Saxifragaceae), mọc hoang nhiều ở Sa Pa, được người dân nơi đây gọi là Dâm dương hoắc dại Theo Nguyễn Tiến Bân, Phạm Hoàng Hộ thì cây này còn được gọi là Lạc tân phụ [1], [6] Cây phân bố ở Ấn Độ, Pakistan, Bhutan, Nepal, Thái Lan, Indonesia, Myanmar, Nam Trung Quốc và Việt Nam (ở dãy Hoàng Liên Sơn, Lào Cai) Theo kinh nghiệm dân gian của một số nước, nước ép của cây Lạc tân phụ dùng để chữa bong gân và viêm cơ Rễ và thân

rễ của cây Lạc tân phụ được dùng để chữa tiêu chảy, kiết lỵ, viêm đường tiêu hóa, đau đầu, phong tê thấp, sa dạ con, chấn thương, lở loét chảy nước vàng… [28], [53]

Ở Việt Nam cho đến nay chưa có công trình nào nghiên cứu về cây Lạc tân phụ và các nghiên cứu về cây này trên thế giới còn nhiều hạn chế, chưa sâu đặc biệt là thành phần hóa học và tác dụng sinh học Theo một số tài liệu,

chỉ có duy nhất một loài Astilbe ở Việt Nam là loài A rivularis [1], [6] Các

công dụng chữa bệnh của cây Lạc tân phụ theo dân gian cũng chưa được chứng minh bằng các nghiên cứu khoa học Do vậy việc nghiên cứu cây Lạc

tân phụ (A rivularis) về thực vật, hóa học, sinh học là cần thiết Nghiên cứu

này sẽ làm sáng tỏ vấn đề khoa học về thực vật và hóa học của dược liệu Lạc tân phụ trong y học dân gian và có thể tìm ra các tác dụng chữa bệnh mới của một cây thuốc có ở Việt Nam

Vì những lý do trên, đề tài: “Nghiên cứu về thực vật, thành phần hóa

học và tác dụng chống viêm của cây Lạc tân phụ (Astilbe rivularis

Buch.-Ham ex D Don, họ Saxifragaceae)” được thực hiện với các mục tiêu sau:

1 Mô tả đặc điểm thực vật và thẩm định tên khoa học mẫu nghiên cứu;

2 Xác định thành phần hóa học, chiết xuất và phân lập một số chất của

bộ phận trên mặt đất cây Lạc tân phụ;

1

3 Thử độc tính cấp và tác dụng chống viêm cấp của cao chiết toàn phần bộ phận trên mặt đất cây Lạc tân phụ

2

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

1.1 HỌ THƯỜNG SƠN (Saxifragaceae) VÀ CHI Astilbe

1.1.1 Về mặt thực vật

1.1.1.1 Họ Thường sơn (Saxifragaceae) [1], [6], [53]

Họ Thường sơn (hay còn gọi là họ Cỏ tai hổ) là những cây bụi, thân cỏ hay cây gỗ nhỏ; lá đơn mọc cách hay lá kép, phiến nguyên hay có khía răng, gân lá hình lông chim hay chân vịt, không có lá kèm Cụm hoa: chùm, chùm xim hoặc xim có dạng ngù; hoa đều, ít khi hoa không đều, lưỡng tính hoặc tạp tính, mẫu 5 hay mẫu 4 Đế hoa phẳng hoặc lõm hình chén Bao hoa: lá đài rời

ít khi dính ở đáy, đôi khi có màu; thường có 5 cánh hoa Bộ nhị: 10 nhị, bộ nhị đảo lưỡng nhị nhưng vòng nhị trước cánh hoa thường bị trụy hoàn toàn hoặc mang nhị lép Bao phấn nứt dọc, hướng trong Bộ nhụy: lá noãn có số lượng thay đổi từ 2-5, đặt ở đáy đế hoa lõm hình chén, rời hoặc dính nhau ở bầu, rời ở vòi; mỗi lá noãn chứa nhiều noãn, đính noãn trung trụ hay trắc mô Bầu ở thể trên, giữa hay dưới Hoa hay có bộ phận phụ chứa mật như đĩa mật

ở trên bầu, nhị lép mang tuyến mật ở vị trí bao phấn Quả: nang hay quả mập Hạt nhiều, có nội nhũ, đôi khi có cánh

Trên thế giới họ Saxifragaceae có khoảng 30 chi, 580 loài [55] Một số

chi chính trong họ này là Astilbe, Astilboides, Bensoniella, Bergenia,

Lithophragma, Saxifraga, Saxifragella, Saxifragodes, Saxifragopsis…

Theo Phạm Hoàng Hộ [6], họ Saxifragaceae ở Việt Nam có các chi:

Astilbe, Penthorum, Saxifraga, Schizophragma, Pileostigma, Dichroa, Itea, Polyosma, Hydrangena

1.1.1.2 Chi Astilbe

Theo hệ thống phân loại của Takhtajan [50], chi Astilbe được xếp vào

họ Thường sơn (Saxifragaceae), bộ Hoa hồng (Rosales), lớp Thực vật hai lá

3

mầm (Magnoliopsida), ngành Magnoliophyta ngành Ngọc lan

(Magnoliophyta)

Chi Astilbe là một chi thuộc họ Thường sơn (Saxifragaceae), phân bố ở

Bắc Mỹ, Đông Á (Nhật Bản, Hàn Quốc, Trung Quốc), Đông Nam Á (Việt

Nam, Lào, Indonesia, Myanmar, Thái Lan), Nam Á (Nepal) [1], [6], [53],

[57] Ở Việt Nam chi Astilbe mới chỉ biết có 1 loài là A rivularis Buch.-Ham

ex D Don [1], [6]

Chi Astilbe ở Hàn Quốc có 8 taxon, dựa trên hình thái lông bên ngoài

của trục hoa và bề mặt phiến lá, kiểu cụm hoa, tỷ lệ chiều dài giữa cánh hoa

và nhị, phạm vi phân bố ở Hàn Quốc và các nước lân cận [18] Trên cơ sở đó

đã xây dựng khóa phân loại chi Astilbe đặc hữu tại Trung Quốc như sau:

Bảng 1.1 Khóa phân loại các loài của chi Astilbe ở Trung Quốc [53]

1 Cánh hoa 5, bình thường; cụm hoa dầy đặc hoa (Sect Simplicifoliae

……….….1 A chinensis (Maxim.) Franch Et Savat

4 Các cuống cụm hoa phủ lông tuyến; ngọn lá chét thường nhọn

thon ngắn đến nhọn thon 2 A grandis Stapf Ex Wils

3 Đài có lông tuyến ở mặt ngoài…… 3 A rubra Hook f et Thoms

2 Cánh hoa hình thìa, đài không có lông tuyến ở mép

5 Cánh hoa rộng đầu ở ngọn, một gân; đài tù ở đỉnh, hầu như

nguyên; cây kích thước trung bình, cao 40-150 cm

.4 A longicarpa (Hayata) Hayata

5 Cánh hoa nhọn ở ngọn, 4-6 gân; đài nhọn và rải rác răng cửa ở

4

5

ngọn; cây nhỏ, cao 15-30 cm 5 A macroflora Hayata

1 Cánh hoa 1-5, teo dần hoặc không có; cụm hoa thưa thớt hoa (Sect Astilbe)

6 Đài 5, gần như da, có lông tuyến ở mặt ngoài; cánh hoa thỉnh

thoảng 2-3-5, teo dần hoặc không có 6 A macrocarpa Knoll

6 Đài 4-5, gần như màng, nhẵn ở mặt ngoài; cánh 1-(2-3-5), teo dần hoặc không có

7 Cánh hoa 1-(2-3-5), teo dần hoặc không có

8 Lá chét hình mũi mác, hình trứng hẹp hoặc hình trứng -

thoi hẹp; cánh hoa thường không có hoặc thỉnh thoảng chỉ có 1

và teo dần 7b A rivularis var angusta C.Y Wu ex J.T Pan

8 Lá chét thường hình trứng, trứng rộng đến bầu dục rộng; cánh hoa 1-(2-3-5), teo dần hoặc không có 7a A rivularis var myriantha (Diels) J.T Pan

7 Cánh hoa không có 7 A rivularis Buch.-Ham Ex D.Don Đặc điểm thực vật chi Astilbe: Cây thảo sống lâu năm Thân rễ mập

Các cành có lông dạng vảy màu nâu hoặc nhiều lông dài Lá so le, có cuống dài, lá kép chụm ba 2 – 4 lần, hiếm khí lá đơn; lá kèm nhỏ màng mỏng; lá chét hình thon (mũi mác), trứng, hoặc hính trứng rộng đến hình bầu dục, mép

có răng cưa Cụm hoa là một chùm kép ở ngọn có lá bắc Hoa màu trắng, hoa

cà hoặc tía, lưỡng tính hoặc đơn tính, hiếm khi tạp tính hoặc khác gốc Đài 4 hoặc 5 Tràng thường 1 – 5, thỉnh thoảng nhiều hơn hoặc không có Nhị thường 5 hoặc 8 – 10 Lá noãn 2 hoặc 3, hàn liền hoặc tự do; bầu hơi trên hoặc hơi dưới, 2 hoặc 3 ngăn với đính noãn trung trụ hoặc 1 ngăn với đính noãn mép; nhiều noãn Quả nang hoặc quả đại Hạt nhỏ

Khoảng 18 loài: châu Á, bắc Mỹ; 7 loài đặc hữu ở Trung Quốc Một

cuộc điều tra toàn diện về chi Astilbe được tiến hành bởi Pan [37] và chủ yếu

tập trung vào các loài của Trung Quốc, Nhật Bản và Hàn Quốc

Bảng 1.1 Sự phân bố địa lý của chi Astilbe Buch.-Ham Ex D.Don

Các quốc gia hoặc vùng lãnh thổ

TT

Phân bố

Loài

Trung Quốc

Liên

Xô (cũ)

Nhật Bản

Hàn Quốc Philipin Indonesia

Thái Lan

1.1.2 Thành phần hóa học và tác dụng sinh học chi Astilbe

1.1.2.1 Thành phần hóa học chi Astilbe

Thành phần hóa học chính trong thân rễ của các cây thuộc chi Astilbe gồm có flavonoid, coumarin, triterpenoid, steroid và phytosterol [54], [55]

Triterpenoid: 3β-hydroxyolean-12-en-27-oic acid (acid astilbic) có trong thảo dược A chinensis, A.korea, Astilbe thunbergii [25], [33], [48] 3β- hydroxyurs-12-en-27β-oic acid có trong A chinensis, A myriantha [38], [48] 3β,6β-dihydroxyolean-12-en-27-oic acid có trong A chinensis, A myriantha Diels [38], [48] 3β-acetoxyolean-12-en-27-oic acid và [33] 3β,6β- dihydrolean-12-en-27-oic acid có trong A.myriantha [38] Trong loài A.korea

có các chất acid 3α,24-dihydroxyolean-12-en-27-oic, acid 27-oic [33]

3-oxoolean-12-en-Flavonoid: Astilbin có trong A thunbergii [25]

Steroid: β-sitosterol palmitate và daucosterol có trong A chinensis, A

myriantha [38], [48], [54]

1.1.2.1 Công dụng và tác dụng các loài trong chi Astilbe

Astilbe chinensis được sử dụng trong y học cổ truyền Trung Quốc để

chữa đau đầu, đau khớp, viêm phế quản và đau dạ dày mạn tính [36] Hỗn

hợp triperpenoid chiết từ thân rễ của A chinensis tác dụng chống khối u và

điều hòa miễn dịch, cao thô chiết từ thân và rễ cây có tác dụng ức chế enzym

elastase và tyrosinase [32] Acid astilbic trong Astilbe chinensis có tác dụng

chống viêm do ức chế 5- lipoxygenase (5-LOX) độc lập leukotrience C4(LTC4) [32]

Euchryphin, bergenin, astilbin trong thân rễ A thunbergii; các chất này

có tác dụng làm lành vết thương bỏng trên chuột [25], [26], [40]

Astilbe myriantha Diels có tác dụng kháng nấm C gloeosporioides, Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum f sp Niveum, Fusarium oxysporum

8

f sp Cubens, C gloeosporioides, Penicillium citrinum và Penicillium digitatum [38]

1.2 CÂY LẠC TÂN PHỤ (Astible rivularis Buch.-Ham ex D Don)

1.2.1 Mô tả thực vật [53]

Cây thảo sống lâu năm, cao 0,6-2,5 m Cành mang lông tiết dài màu nâu, lá kép 2 hoặc 3 lần lông chim; cuống chung và các cuống nhỏ nhiều lông

dài màu nâu Phiến lá chét thon, hình trứng hẹp đến rộng, hình bầu dục… kích

thước 4-14,5 x 1,7-8,4 cm, có nhiều lông dài màu nâu ngoài trục và nhiều lông tiết dọc theo gân, rải rác có nhiều lông tiết cứng màu nâu ngoài trục, gốc

lá hình tim lệch hoặc tròn đến hình nêm; mép lá có răng nhọn hai lần; ngọn lá nhọn thon

Chùm hoa dài tới 42 cm, có nhiều hoa; các nhánh dài từ 1-18 cm, lông tiết xoăn màu nâu, ba lá bắc hơi hình bầu dục, kích thước 1,1-1,4 x 0,2-0,6

mm, nhiều lông màu nâu, mép nguyên hoặc có răng nhọn; cuống nhỏ dài 1,8 mm Đài hoa 4 hoặc 5, màu xanh hình trứng hoặc bầu dục đến tròn dài Kích thước 1,2-1,5 x 1 mm, dạng màng, hơi lồi ngoài trục, hơi lõm gần trục, không có lông, 1 gân Không có tràng hoa, thỉnh thoảng có 1-5 và bị teo Nhị hoa 5-10 kích thước 0,2-2,4 mm Nhụy hoa khoảng 2 mm; 2 lá noãn, gốc dính liền, bầu hơi trên; vòi nhụy rời

0,8-1.2.2 Phân bố

Cây Lạc tân phụ Astilbe rivularis Buch.-Ham ex D Don

(Saxifragaceae) ở Nepal gọi là THULO AUSADHI [28], ở Trung Quốc gọi là Lạc tân phụ khe suối ( xi pan luo xin fu) [53], người dân địa phương ở huyện Sa Pa gọi là Dâm dương hoắc dại Lạc tân phụ phân bố ở Rừng, lề rừng, bụi rậm, đồng cỏ có nước, khe núi, ở độ cao 900-3200 m ở Trung Quốc (các tỉnh Cam Túc, Quý Châu, Hà Nam, Hồ Bắc, Thiểm Tây, Tứ Xuyên, Xizang, Vân Nam), Bhutan, Ấn Độ, Indonesia, Kashmir, Lào,

9

Myanmar, Nepal, Thái Lan, Việt Nam có ở huyện Sapa tỉnh Lào Cai [53], [58]

1.2.3 Đặc điểm thứ loài Astible rivularis var rivularis [53]

Theo tiếng Trung Quốc có tên là 溪畔落新妇 (原变种) xi pan luo xin

fu (yuan bian zhong) Lá chét hình thoi, hình trứng ngược hoặc hình trứng Không có tràng hoa

Mọc ở rừng, bìa rừng, đồng cỏ ở độ cao 900-320 m Phân bố ở Ấn Độ, Indonesia, Kashmir, Lào, Thái Lan, Việt Nam

1.2.4 Đặc điểm thứ loài Astilbe rivularis var myriantha (Diels) J.T.acta

phytotax [53]

Theo tiếng Trung Quốc có tên là : 多花落新妇 (duo hua luo xin fu)

Lá chét thường hình trứng hoặc rộng ra để phân thành elip Tràng hoa không có hoặc 1-5 và nhỏ dần

Mọc ở rừng, đồng cỏ, khe núi; độ cao 1100 – 2500 m Phân bố ở Trung Quốc (các tỉnh Cam Túc, Quý Châu, Hà Nam, Hồ Bắc, Thiểm Tây, Tứ Xuyên)

1.2.5 Đặc điểm thứ loài Astilbe rivularis var angustifoliolata H Hara,

J.Jap.Bot.51 [53]

Theo tiếng Trung Quốc có tên là : 狭叶落新妇 (xia ye luo xin fu).

Lá chét hình mũi mác hoặc trứng hẹp tới trứng ngược hẹp Tràng hoa thường không có, thỉnh thoảng 1 và teo dần đi

Mọc ở rừng, bìa rừng, khe núi; độ cao 1500 – 2800 m Phân bố ở Myanmar

1.2.6 Thành phần hóa học, tác dụng sinh học và công dụng

1.2.6.1 Thành phần hóa học và tác dụng sinh học Lạc tân phụ

Thành phần hóa học của A.rivularis có flavonoid, terpenoid, bergenin

10

[9], [41]

Các chất từ thân rễ lạc tân phụ có[30]: arbutin, bergenin và dimer của bergenin Thử tác dụng kháng khuẩn và virus herpes type 1 thấy rằng bergenin và dimer bergenin có tác dụng kháng virus herpes tốt, arbutin có tác dụng kháng khuẩn tốt

Bergenin có tác dụng làm giảm đường huyết khi thử trên chuột, có tiềm năng trong điều trị đái tháo đường typ 2 [40]

1.2.6.2 Công dụng Lạc tân phụ

Trong dân gian bột rễ Astilbe rivularis uống với nước nóng hoặc sữa để

điều trị sốt, chóng mặt, buồn nôn, đau đầu, hiếm muộn [31] Dịch chiết từ rễ của nó có tác dụng chống gốc tự do, chống peroxid hóa lipid [36] và có tác dụng kháng virus herpes type 1 [30]

1.3 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA THUỐC

1.3.1 Phương pháp xác định độc tính cấp

1.3.1.1 Đại cương về phương pháp xác định độc tính cấp [5]

Độc tính cấp của thuốc là độc tính xảy ra sau khi dùng thuốc một lần hoặc mấy lần trong ngày Nghiên cứu độc tính cấp của thuốc trên động vật thí nghiệm, chủ yếu là xác định liều chế trung bình (mean lethal dose), tức là làm chết 50% số con vật thí nghiệm (LD50)

LD50 là thông số rất quan trọng để đánh giá độc tính của thuốc, biết

LD50 sẽ có phương hướng dùng liều thí nghiệm dược lý một cách đúng đắn, liều có tác dụng dược lý thường là khoảng 1/10 LD50 (trong giới hạn 1/20-1/5

LD50) Liều LD50 và liều có tác dụng dược lý trên động vật thí nghiệm là một trong những cơ sở để suy ra liều dùng điều trị ở người dựa vào một số phương pháp tính ngoại suy Biết LD50 mới xác định được chỉ số điều trị là một thông

số rất quan trọng để quyết định xem có nên đưa thuốc vào dùng trên người

11

hay không.Chỉ số điều trị TI (therapeutic index) là tỉ số giữa liều chết trung bình LD50 và liều hữu hiệu trung bình ED50

TI = LD50 / ED50

Chỉ số điều trị được tính ở vùng một loại động vật thí nghiệm và cho khái niệm về phạm vi điều trị Nếu thử trên các loại động vật khác nhau thì phải dùng phép ngoại suy

Một chất có TI ≥ 10 dùng được trong điều trị và ít gây ra độc hại, nếu dùng ở liều điều trị Nếu chỉ số điều trị càng lớn thì phạm vi điều chỉnh càng lớn và độc tính càng thấp

Một chất có TI < 10 chỉ dùng trong điều trị nếu:

- Có tác dụng điều trị rất rõ rệt;

- Chưa có thuốc nào an toàn hơn thay thế;

- Khi dùng phải rất thận trọng, theo dõi sát tác dụng phụ có hại

Khi tính LD50 chỉ dựa vào 2 liều gần với liều chết 50 đó là:

Liều D1 (mg/kg) cho tỷ lệ chết theo tần số tích lũy là a (%)

Liều D2 (mg/kg) cho tỷ lệ chết theo tích lũy là b (%)

Tính hiệu số d = D2 – D1 và b-a

Tỷ lệ chết a (%) lên tỷ lệ chết 50% là (50-a)%

12

1.3.2 Phương xác nghiên cứu tác dụng chống viêm

1.3.2.1 Đại cương về viêm [4]

Viêm là phản ứng không đặc hiệu của mô do bị sự tấn công của các yếu

tố hóa học, vật lý hay sinh học Trong thành phần các yếu tố tấn công thường

có yếu tố miễn dịch hay vi sinh vật Phản ứng viêm phát triển thành hai giai đoạn Giai đoạn thứ nhất tiến triển rất nhanh và là giai đoạn cấp tính Giai đoạn thứ hai bao gồm những hiện tượng phức tạp, là sự phối hợp của những hiện tượng viêm và những quá trình sửa chữa, là giai đoạn mạn tính

Giai đoạn cấp tính gồm những hiện tượng về mạch máu và một phản ứng tế bào xuất hiện sớm Ở những mô bị yếu tố tấn công làm tổn thương, các tiểu động mạch bị giãn gây nên ứ huyết trong các mao mạch Trạng thái phù

nề của mô là do sự rỉ dịch huyết tương qua thành các mao mạch vào trong khoang ngoài tế bào Sự xuyên mạch bạch cầu xảy ra song song với sự rỉ huyết tương Những hiện tượng cấp tính này là do sự can thiệp của hai yếu tố: yếu tố thần kinh là sự tê liệt các dây thần kinh co mạch ở các mao mạch, và các yếu tố thể dịch là sự giải phóng các chất trung gian hóa học như histamin, serotonin, leucotaxin và bradykinin

Histamin được sản sinh bởi các dưỡng bào và một số cấu trúc thần kinh

và được giải phóng do sự kích thích của dây thần kinh giãn mạch gây giãn các mao mạch Serotonin, do các tế bào ưa bạc của ống tiêu hóa và các dưỡng bào sản sinh ra, có thể có vai trò trong sự giải phóng histamin Một số tác giả cho rằng serotonin có tác dụng trực tiếp gây giãn mạch các tiểu động mạch Leucotaxin, được tìm thấy ở các ổ viêm, không giống như histamin vì không

có tác dụng gây co bóp ruột cô lập ở chuột lang Leucotaxim làm tăng tính thấm mao mạch và sự di cư tế bào Một số tác giả cho rằng bradykinin cũng

có vai trò trong phản ứng viêm Trong thực nghiệm, chất này có thể gây hiện tượng phù xuất hiện nhanh mà cường độ phụ thuộc vào liều

13

Giai đoạn mạn tính của phản ứng viêm gồm một phản ứng tế bào phát triển chậm và sự tạo nên mô tạo keo Sự di cư tế bào nguồn gốc từ máu hoặc

từ trung mô vẫn tiếp diễn ở ổ viêm rất lâu sau sự can thiệp của yếu tố tấn công Ổ viêm có thể tiến tới chỗ làm mủ hoặc hoạt tử Sự tăng sinh nguyên bào sợi và những tân tạo mao mạch tạo thành u hạt U hạt này, khi tiến triển, mất các thành phần tế bào và các mao mạch tân tạo, trong khi đó, mô tạo keo xuất hiện dần dần

Mỗi giai đoạn của quá trình viêm này có thể được nghiên cứu bởi những phương pháp thích hợp Mỗi rối loạn có thể được sửa chữa bởi các thuốc đặc hiệu nhiều hay ít

1.3.2.2 Thử nghiệm trên phù chân chuột bằng carrageenan [4]

Trong thử nghiệm này, gây phù bàn chân sau của chuột bằng cách tiêm dưới da ở bề mặt gan bàn chân sau của chuột 0,1 ml dịch treo 0,8% carrageenan, pha trong nước cất hay dung dịch NaCl đẳng trương Cách pha dung dịch treo: cho carrageenan vào một cối nhỏ, cho dần nước vào và nghiền bằng chầy cho phân tán đều Để nửa giờ cho phồng lên rồi hãy dùng, chi pha trước khi dùng, vì nếu để lâu carrageenan sẽ lắng xuống

Trong quá trình viêm gây bởi carrageenan, mức độ viêm tối đa ở khoảng thời gian 3-4 giờ Nên để đánh giá mức độ viêm, do thể tích bàn chân tới khớp cổ chân trước và 3 giờ sau khi tiêm carrageenan Trừ một số đặc điểm nêu trên, thử nghiệm trên phù chân chuột gây bằng carrageenan được tiến hành tương tự như phù chân chuột gây bằng kaolin

Carrageenan (viscarin) là chất sulfopolygalactosid, chiết xuất từ

Chondrus crispus, có tác dụng gây viêm

14

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

2.1.1 Nguyên liệu

Đối tượng nghiên cứu là bộ phận trên mặt đất của cây Lạc tân phụ

(A.rivularis) do Phạm Quốc Tuấn, Phương Thiện Thương, Nguyễn Đức Hùng

thu thập ở các sườn núi, khe suối tại xã Bản Khoang, huyện Sapa, tỉnh Lào Cai vào tháng 8,11,12/2010, tháng 1,7,9/2011 Mẫu cây được giám định tên khoa học bởi TS Dương Đức Huyến, ThS Đỗ Văn Hải – Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật và CN Ngô Văn Trại – Viện Dược liệu Các mẫu tiêu bản mẫu có hoa, quả được lưu trữ tại Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật và Viện Dược liệu, số hiệu mẫu làPhamquoctuan02 ngày 21/09/2011

Thử độc tính cấp và tác dụng chống viêm cấp bằng cao chiết toàn phần

từ bộ phận trên mặt đất của cây Lạc tân phụ với hiệu suất 16,62%

2.1.2 Hóa chất, dung môi

- Hóa chất sử dụng trong nghiên cứu đạt tiêu chuẩn phân tích theo Dược Điển Việt Nam IV

- Indomethacin chuẩn do Viện kiểm nghiệm cung cấp

- Các dung môi MeOH, EtOH, Cloroform, EtOAc, n-BuOH, n-hexan…

- Sắc ký gel dùng loại Sephadex LH20 (Amersham Biosciences)

- Dung môi chiết suất, triển khai sắc ký cột:

+ MeOH và EtOH công nghiệp;

15

+ n-hexan, EtOAc, MeOH;

+ MeOH, nước cất

2.1.3 Động vật nghiên cứu

- Động vật thử độc tính cấp: chuột nhắt trắng có trọng lượng 20-22 g,

đạt tiêu chuẩn thí nghiệm do Viện Vệ sinh dịch tễ cung cấp

- Động vật thử tác dụng chống viêm cấp: chuột cống trắng cả hai giống, trọng lượng từ 160 – 200g, khỏe mạnh do Học viện Quân Y cung cấp

- Động vật được nuôi dưỡng theo chế độ tiêu chuẩn tại phòng nuôi động vật thí nghiệm của Viện Dược liệu và Trường Đại học Dược Hà Nội

2.1.4 Một số thiết bị dùng trong nghiên cứu

- Máy ảnh kỹ thuật số

- Kính lúp

- Kính hiển vi có gắn camera

- Cân phân tích Mettler Toledo

- Máy xác định điểm chảy

- Tủ ấm, tủ sấy, tủ lạnh

- Các máy đo quang phổ tử ngoại khả kiến UV-Vis Viện Dược liệu

- Máy đo điểm chảy lần lượt được ghi trên máy: UV-1800 (Shimadzu), Gallenkamp (Sanyo) của Khoa Phân tích tiêu chuẩn Viện Dược liệu

- Máy đo phổ hồng ngoại (IR), đo phổ khối (MS), máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, máy NMR Brucker–500 MHz tại Viện Hóa học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam)

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1 Phương pháp nghiên cứu thực vật

- Mẫu cây thu hái trong thời kỳ mang hoa, quả làm tiêu bản mẫu cây khô

16

- Mô tả đặc điểm thực vật bằng cách quan sát mắt thường, kính lúp, kính hiển vi Đối chiếu với bản mô tả và khóa phân loại thực vật trong các tài liệu chuyên khảo về thực vật để xác định loài

- So sánh đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu với tiêu bản lưu trữ tại phòng tiêu bản Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật (Viện Khoa học và

Kỹ thuật Việt Nam) để xác định tên khoa học

- Mô tả giải phẫu: làm tiêu bản các bộ phận thân (thân khí sinh, thân rễ), rễ, lá cây để phân tích đặc điểm cấu tạo Các tiêu bản được nhuộm theo phương pháp nhuộm kép (đỏ carmin và xanh methylen) Quan sát dưới kính hiển vi và chụp bằng máy ảnh kỹ thuật số

2.2.2 Phương pháp nghiên cứu hóa học

- Định tính các nhóm chất trong cây theo tài liệu

+ Bài giảng dược liệu tập I [2]

+ Thực tập dược liệu [2]

+ Tài liệu [6], [29]

- Phân lập các chất theo phương pháp sắc ký cột [43]

- Nhận dạng các chất phân lập được dựa vào số liệu phổ UV, IR, MS, NMR có so sánh với dữ liệu trong thư viện phổ

2.2.3 Phương pháp thử độc tính cấp

Thử độc tính cấp theo phương pháp ghi trong tài liệu [3], [5] Tính LD50 theo phương pháp BEHRENS (1929) [5]

2.2.4 Phương pháp đánh giá tác dụng chống viêm cấp

Tác dụng chống viêm cấp của dược liệu được thử bằng mô hình gây phù bằng theo Winter [4], [51] Thí nghiệm được tiến hành như sau:

Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành các lô:

- Lô chứng: dùng dung môi

- Lô đối chiếu: dùng thuốc đối chiếu

17

- Lô thử: dùng thuốc nghiên cứu

Chuột được uống dung môi hoặc thuốc nghiên cứu hàng ngày vào một giờ nhất định, trong vòng 7 ngày trước khi làm thực nghiệm Thuốc đối chiếu chỉ dùng vào ngày làm thực nghiệm

Ngày thứ 7, sau khi uống thuốc đo thể tích bàn chân sau phải chuột, ngay sau đó tiêm tác nhân gây viêm là dung dịch carrageenin 1% trong nước muối sinh lý (0,05ml/ chuột) vào dưới da gan bàn chân sau phải của chuột

Đo thể tích bàn chân sau phải của chuột vào thời điểm 1 giờ, 3 giờ, 5 giờ, 7 giờ sau khi tiêm

Quy trình tiến hành thí nghiệm được mô tả ở Hình 2.1

Uống thuốc

hàng ngày

Nhịn ăn

90 phút

- Gây viêm

- Uống thuốc

V0 Ngày làm

thực nghiệm

Hình 2.1 Qui trình thí nghiệm tác dụng chống viêm

Chỉ tiêu theo dõi

+ Đo thể tích bàn chân sau phải của chuột

+ Mức độ phù bàn chân sau phải chuột được tính theo công thức:

- V: Mức độ phù chân chuột tại thời điểm t giờ sau khi gây viêm

- Vo: Thể tích chân chuột trước khi gây viêm

- Vt: Thể tích chân chuột tại thời điểm t giờ sau khi gây viêm + % ức chế phù của các lô thử so với lô chứng được tính theo công thức:

Vc

VtVcΔ

Δ

Trong đó:

- I (%): Phần trăm ức chế phù của lô thử so với lô chứng

- Vc: Mức độ phù chân chuột trung bình ở lô chứng

- Vt: Mức độ phù chân chuột trung bình ở lô thử

19

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT

3.1.1 Về tên khoa học của loài

- Tiến hành phân tích, nghiên cứu đặc điểm hình thái của lá, thân rễ, thân khí sinh, cấu tạo giải phẫu của hoa, quả và hạt của các mẫu do Phạm Quốc Tuấn, Nguyễn Đức Hùng thu thập ở các sườn núi, khe suối tại xã Bản Khoang, huyện Sa Pa, tỉnh Lào Cai vào các ngày 11/11/2010; 12/09/2011

Đối chiếu với khóa phân loại thực vật, hình vẽ của chi Astilbe

Buchanan-Hamilton ex D Don, Prodr Fl Nepal 210 1825 trong tài liệu [1] và các thực vật chí: Ấn Anh, Trung Quốc, Pakistan [24], [52]; mô tả thực vật, hình vẽ của

Astilbe rivularis trong Cây cỏ Việt Nam của Phạm Hoàng Hộ [6]

- Đối chiếu các tiêu bản số: K000674066, K000674067, K000674068

có tên khoa học Astilbe rivularis lưu trữ trong website của KEW royal botanic gardens [57]

Chúng tôi khẳng định các mẫu tiêu bản do chúng tôi thu thập thuộc loài

Astibe rivularis Buch.-Ham ex D Don, họ Thường sơn (Saxifragaceae)

- Kết quả nghiên cứu này được giám định lại bởi TS Dương Đức Huyến, ThS Đỗ Văn Hải – Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật với tiêu bản

số Phạm Quốc Tuấn 001 22/11/2010 và CN Ngô Văn Trại – Viện Dược liệu

với tiêu bản số Phamquoctuan01 ngày 21/09/2011

3.1.2 Đặc điểm hình thái

Cây thảo có thân rễ, đường kính 0,5-3 cm, có rễ nhỏ và nhiều rễ nhủ tơ, sống lâu năm, thân khí sinh mang cụm hoa thẳng đứng cao 0,5 – 2,2 m, có rãnh dọc khi khô, đôi khi có màu tím, mang lông dài màu nâu Lá kép mọc ở thân rễ hoặc thân khí sinh, chụm 3 phức hợp hoặc 2-3 lần lông chim (ít khi 4 lần lông chim), mỗi nhánh lá kép thường mang 3-5 lá chét, hiếm khi 7 lá chét;

lá kép có bẹ, mép bẹ lá có lông dài màu nâu đối với lá kép mọc ở thân khí

20

sinh hoặc mặt trước của bẹ lá mọc ở thân rễ có một lớp lông dài màu nâu ôm vào thân rễ; gốc cuống chung và gốc các cuống lá chét nhiều lông dài màu nâu mọc thành cụm (Hình 3.1)

21

A Thân khí sinh, B Thân rễ mang lá, C Thân rễ mang các rễ nhỏ, D

Bẹ lá kép ôm vào thân rễ, E Bẹ lá kép ôm vào thân khí sinh

Hình 3.1 Thân rễ và thân khí sinh mang lá kép

22

Lá chét có cuống rất ngắn hoặc dài 0,3-4 cm; riêng cuống lá chét ngọn dài đến 9 cm; phiến lá chét nguyên, đôi khi phân thùy; phiến lá hình trứng, trứng ngược hoặc hình thoi – elip ở lá ngọn, hình trứng ở lá bên; kích thước 3,7-14,6 cm x 2,0-11,0 cm, có nhiều lông dài màu nâu ở mặt dưới và có nhiều lông tuyến dọc theo các gân; gốc lá cụt, hình tim, hình tim lệch, lệch, tròn đến hình nêm; mép lá có răng nhọn hai lần, không đều; ngọn lá nhọn thắt lại thành đuôi dài; hệ gân bên hình lông chim 7-8 đôi

Chùy hoa dài 13-50 cm, có nhiều nhánh, các nhánh tận cùng dài từ 1 –

20 cm, có nhiều lông tuyến xoăn màu nâu; ở kẽ có lá bắc mỏng như màng, hình tam giác hẹp, kích thước 1,1-1,8 x 0,2-0,6 mm, có nhiều lông màu nâu, mép nguyên hoặc có răng nhọn (Hình 3.2)

23

24

A B C

D E F

A Hoa; B Lá đài và nhị; C Các loại lá bắc, D Bầu;

E Bầu cắt ngang; F Tách dọc một lá

Hình 3.3 Cấu tạo hoa

Quả gồm 2 đại, dài khoảng 2,5 mm Hạt nhỏ, nhiều, màu nâu, dài

khoảng 2,0-2,5 mm, có cánh ở hai đầu vì vỏ hạt kéo dài, thuôn, có nếp nhăn

hoặc hơi nhăn, bóng (Hình 3.4) Ra hoa, kết quả tháng 9 – 12

25

A B C D

A Cụm quả; B Quả chưa mở; C Quả đã mở; D Hạt

Hình 3.4 Quả và hạt 3.1.3 Cấu tạo giải phẫu

3.1.3.1 Cấu tạo lá

a) Cuống lá

Cấu tạo giống thân cây khí sinh nhưng đối xứng qua mặt phẳng gồm:

Mô mềm vỏ ngoài, mô mềm vỏ trong, trong tế bào mô mềm có chứa tinh thể

calci oxalat hình cầu gai Vòng mô cứng xếp thành một vòng uốn lượn Một

vòng các bó li be-gỗ Mỗi bó thường có một bó gỗ và 1-3 bó li be

26

C D E [[

1.Biểu bì; 2.Mô mềm vỏ; 3 Mô cứng; 4 Mô mềm ruột cuống lá;

5 Li be; 6 Gỗ; 7 Tinh thể calci oxalat

A Vi phẫu cuống lá chét cắt; B Biểu bì, mô mềm vỏ, calci oxalat;

C Mô cứng, libe, gỗ; D Gỗ; E Mô mềm

Hình 3.5 Vi phẫu cuống lá chét cắt ngang

b) Phiến lá

Lá chét cắt ngang có cấu tạo giống với cuống lá gồm có biểu bì, mô

mềm vỏ, mô mềm ruột, vòng mô cứng và vòng bó li be-gỗ nhưng vòng mô

cứng và vòng các bó li be-gỗ bị đứt đoạn ở phía trên của gân giữa, trong các

tế bào mô mềm thường có tinh thể calci oxalat hình cầu gai

3.1.3.2 Cấu tạo thân khí sinh

Cấu tạo giống cuống lá gồm: biểu bì; mô mềm vỏ; vòng mô cứng gần như liên tục; các bó li be-gỗ xếp thành vòng uốn lượn gồm 24-30 bó, cứ một

bó to ở chỗ lồi của thân, xếp ở phía ngoài xen kẽ một bó nhỏ xếp ở trong, giữa

li be và gỗ là thượng tầng Giữa các bó li be-gỗ là tia ruột, các tia này có thể

đi từ trong mô mềm ruột đến mô mềm vỏ, nhưng phần lớn bị chặn bởi mô cứng Trong mô mềm vỏ và mô mềm ruột có tinh thể calci oxalat hình cầu gai

A B

28

C D

1 Biểu bì; 2 Tinh thể calci oxalat; 3 Mô mềm vỏ; 4 Mô cứng; 5 Li be; 6

thượng tầng; 7 Tia ruột; 8 Gỗ; 9 Mô mềm ruột

A Vi phẫu rễ cắt ngang; B Biểu bì, mô mềm vỏ chứa tinh thể calci oxalat;

C Tế bào mô mềm vỏ, tinh thể calci oxalat; D Mô cứng, libe, gỗ

Hình 3.7 Vi phẫu thân khí sinh

3.1.3.3 Cấu tạo thân rễ

Ngoài cùng là bần gồm 2-3 lớp tế bào, mô mềm vỏ có chứa tinh thể calci oxalat hình cầu gai, các bó li be- gỗ, mỗi bó có cung mô cứng ở phía ngoài và bó li be-gỗ xếp chồng ở trong

29