Sàng lọc và nghiên cứu một số chủng Bacillus có khả năng sinh enzyme ngoại bào được phân lập từ rừng Quốc gia Ba Vì và vườn Quốc gia Bidoup Núi Bà của Việt Nam

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM VŨ HẢI SƠN Tên đề tài: SÀNG LỌC VÀ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỦNG BACILLUS CÓ KHẢ NĂNG SINH ENZYME NGOẠI BÀO ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ RỪNG QUỐC GIA BA VÌ VÀ VƯỜN QUỐC GIA BIDOUP NÚI BÀ CỦA VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Khoa : Công nghệ Sinh học - Công nghệ Thực phẩm Khóa học : 2010 - 2014 Thái Nguyên, năm 2014 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM VŨ HẢI SƠN Tên đề tài: SÀNG LỌC VÀ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỦNG BACILLUS CÓ KHẢ NĂNG SINH ENZYME NGOẠI BÀO ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ RỪNG QUỐC GIA BA VÌ VÀ VƯỜN QUỐC GIA BIDOUP NÚI BÀ CỦA VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Khoa : Công nghệ Sinh học - Công nghệ Thực phẩm Khóa học : 2010 - 2014 Người hướng dẫn: T.S Đinh Thị Thu Hằng (Viện Công nghệ Sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam) T.S Dương Văn Cường (Khoa CNSH-CNTP - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên) Thái Nguyên, năm 2014 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Đặng Thị Cẩm Hà, TS Đinh Thị Thu Hằng, KS Nguyễn Đăng Thắng cán nghiên cứu phịng phịng Cơng nghệ sinh học tái tạo môi trường, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam tận tình bảo dìu dắt tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thiện khóa luận tốt nghiệp Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Dương Văn Cường, thầy cô Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm ân cần dạy dỗ, truyền đạt kiến thức chuyên môn kinh nghiệm sống Từ đáy lịng mình, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, người thân bạn bè tạo điều kiện, giúp đỡ để tơi có tảng đạo đức kiến thức vô giá Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2014 Sinh viên VŨ HẢI SƠN MỤC LỤC Trang PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu .2 1.3 Mục đích nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Enzyme ngoại bào 2.1.1 Laccase 2.1.2 Protease .8 2.1.3 Chitinase 2.1.4 Cellulase 11 2.2 Thuốc nhuộm 12 2.3 Một số phương pháp xử lý nước thải dệt nhuộm 15 2.3.1 Phương pháp hóa lý 15 2.3.2 Phương pháp oxy hóa bậc cao 15 2.3.3 Phương pháp sinh học .15 PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 17 3.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị .17 3.1.1 Vật liệu 17 3.1.2 Hóa chất mơi trường ni cấy 17 3.1.3 Máy móc thiết bị 18 3.2 Phương pháp nghiên cứu 18 3.2.1 Sàng lọc chủng vi khuẩn sinh enzyme ngoại bào (chitinase, cellulase, protease) 18 3.2.2 Sàng lọc vi khuẩn sinh laccase ngoại bào 19 3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng số điều kiện môi trường đến khả sinh trưởng sinh laccase chủng BBV11 20 3.3.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 20 3.3.2 Ảnh hưởng nồng độ CuSO4 20 3.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ 20 3.3.4 Ảnh hưởng pH môi trường ban đầu 21 3.4 Nghiên cứu khả loại màu thuốc nhuộmcủa chủng BBV11 21 3.4.1 Phân loại theo phương pháp truyền thống 21 3.4.2 Phân loại phương pháp xác định so sánh trình tự gen mã hóa 16S rRNA 21 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Sàng lọc chủng vi khuẩn có khả sinh enzyme ngoại bào 24 4.1.1 Khả sinh protease, chitinase, cellulase .24 4.1.2 Khả sinh laccase 26 4.2 Phân loại chủng BBV1 27 4.2.1 Phân loại theo phương pháp truyền thống 27 4.2.2 Phân loại phương pháp xác định so sánh trình tự gene mã hóa 16S rRNA 28 4.3 Ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến khả sinh laccase chủng BBV11 29 4.3.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 29 4.3.2 Ảnh hưởng nồng độ CuSO4 30 4.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ 31 4.3.4 Ảnh hưởng pH môi trường 32 4.4 Khả loại màu chủng BBV11 34 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 DANH MỤC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Trang Hình 2.1 Cấu trúc không gian phân tử laccase Hình 4.1 Hình thái khuẩn lạc chủng BBV11 môi trường PDA-M không bổ sung (A) có bổ sung guaiacol (B) 26 Hình 4.2 Hoạt tính laccase chủng vi khuẩn BBV11, BBD9 BBD38 27 Hình 4.3 Hình thái khuẩn lạc (A) hình thái tế bào quan sát kính hiển vi điện tử với độ phóng đại 13000 lần (B) 28 Hình 4.4 Ảnh hưởng nồng độ CuSO4 đến khả sinh laccase chủng BBV11 30 Hình 4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh laccase chủng BBV11 32 Hình 4.6 Ảnh hưởng pH đến khả sinh laccase 33 Hình 4.7 Hiệu loại màu khả sinh laccase chủng BBV11 sau ngày nuôi 34 Hình 4.8 Màu Dimaren Black CLS thời điểm ban đầu (A) sau ngày nuôi (B) 34 DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Các vi sinh vật sinh laccase Bảng 2.2 Một số vi sinh vật sinh laccase ứng dụng Bảng 2.3 Nguồn vi sinh vật sinh cellulase 12 Bảng 3.1 Thành phần phản ứng xác định hoạt tính laccase 19 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng PCR 23 Bảng 4.1 Khả sinh chitinase, cellulase protease số chủng vi khuẩn nghiên cứu 24 Bảng 4.2 Hoạt tính laccase chủng BBV11 môi trường khác 29 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-DCP 2,4 – dichlorophenol 2,6-DMP 2,6 – dimethoxyphenol ABTS 2,2’–azino–bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) DDT 1,1,1-trichloro-2,2-bis(4-chlorophenyl) ethane LMS Laccase-mediator system OD Optical density PAH Polycyclic aromatic hydrocarbons PCB Polychlorinated biphenyls POPs Persistent organic pollutants RBBR Remazol Brilliant Blue R TNT Trinitrotoluen U/l Unit per litre PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Trong kỷ XXI, Các lĩnh vực sản xuất công nghiệp xương sống hầu hết quốc gia Thế giới Hiện Việt Nam, gia tăng dân số vượt ngưỡng 90 triệu người hội thách thức không nhỏ Được thiên nhiên ưu đãi với nguồn tài nguyên, thiên nhiên phong phú, phát triển nhanh chóng cơng nghiệp đem lại lợi ích khơng thể phủ nhận Tuy nhiên, với phát triển mơi trường ngày bị ô nhiễm nghiêm trọng chất thải công nghiệp gây Môi trường đất nước nhiều đô thị, khu công nghiệp làng nghề bị nhiễm thiếu cơng trình, thiết bị biện pháp xử lý chất thải hiệu Mỗi ngành công nghiệp khác lại tạo nguồn ô nhiễm gây ô nhiễm môi trường đất, nước, khơng khí mức độ khác Tùy vào loại mức độ nhiễm mà có biện pháp xử lý riêng biệt Tuy nhiên, có số phương pháp xử lý nhiễm phương pháp vật lý, phương pháp hóa học, phương pháp sinh học kết hợp phương pháp So với phương pháp vật lý phương pháp hóa học phương pháp xứ lý nhiễm mơi trường sinh học sử dụng vi sinh vật đặc biệt quan tâm lợi ích mặt kinh tế thân thiện với môi trường mà phương pháp đem lại Vi sinh vật sử dụng xử lý bao gồm nấm, xạ khuẩn vi khuẩn sinh enzyme ngoại bào có khả chuyển hóa phân hủy hợp chất hữu khó phân hủy Trong số enzyme ngoại bào laccase, chitinase, cellulase, protease quan tâm nghiên cứu giới Việt Nam khả ứng dụng chúng nhiều lĩnh vực Đặc biệt, laccase có phổ chất rộng ứng dụng công nghệ sinh học môi trường (phân hủy chất vịng thơm, loại màu thuốc nhuộm v.v.), cơng nghệ thực phẩm, dược phẩm mỹ phẩm Vi khuẩn Bacillus tìm thấy nhiều tự nhiên, nghiên cứu ứng dụng rộng rãi chúng có khả sinh bào tử, sinh trưởng điều kiện khắc nghiệt khả sinh số enzyme ngoại bào đề cập Một số đại diện vi khuẩn Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis… Do đề tài “Sàng lọc nghiên cứu số chủng Bacillus có khả sinh enzyme ngoại bào phân lập từ rừng Quốc gia Ba Vì vườn Quốc gia Bidoup Núi Bà Việt Nam” tiến hành, với nội dung sau: • Sàng lọc chủng vi khuẩn phân lập từ mục đất mùn rừng Quốc Gia Ba Vì vườn Quốc Gia Bidoup Núi Bà có khả sinh enzyme ngoại bào • Phân loại định tên chủng vi khuẩn có khả sinh enzyme ngoại bào với hoạt tính cao theo phương pháp truyền thống xác định trình tự gene mã hóa 16S rRNA • Nghiên cứu ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy môi trường, pH, nồng độ chất cảm ứng, nhiệt độ lên khả sinh tổng hợp laccase chủng vi khuẩn tuyển chọn • Đánh giá khả loại màu thuốc nhuộm chủng tuyển chọn 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Sàng lọc chủng Bacillus có khả sinh số enzyme ngoại bào (laccase, proteinase, chitinase, cellulase) Xác định số điều kiện ni cấy thích hợp để chủng Bacillus lựa chọn sinh tổng hợp enzyme ngoại bào có hoạt tính cao ổn định 1.3 Mục đích nghiên cứu Tăng cường, nâng cao kĩ thực hành, kiến thức chuyên môn đóng góp phần khả nghiên cứu khoa học sinh viên 1.4 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài Tuyển chọn chủng có họat tính enzyme tốt ứng dụng xử lý nhiễm mơi trường 28 A B Hình 4.3 Hình thái khuẩn lạc (A) hình thái tế bào quan sát kính hiển vi điện tử với độ phóng đại 13000 lần (B) Tế bào BBV11 có kích thước theo chiều ngang: 1,2 µm chiều dài: – 2,4 µm 4.2.2 Phân loại phương pháp xác định so sánh trình tự gene mã hóa 16S rRNA Sản phẩm PCR nhân đoạn gene mã hóa 16S rRNA chủng BBV11 gel agarose 1,0% cho thấy có băng DNA đơn rõ nét chứng tỏ cặp mồi sử dụng đặc hiệu Kích thước gene dài khoảng gần 1500 bp Kết so sánh với trình tự đoạn gene mã hóa 16S rRNA chủng vi khuẩn công bố GeneBank cho thấy chủng vi khuẩn BBV11 có độ tương đồng cao 97% với chủng vi khuẩn thuộc chi Bacillus Vì vậy, chủng đặt tên Bacillus sp BBV11 29 4.3 Ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến khả sinh laccase chủng BBV11 Từ kết sàng lọc thu trên, chúng tơi nhận thấy chủng BBV11 có khả sinh tổng hợp enzyme thủy phân chitinase, cellulase protease cóhoạt tính cao Đồng thời, chủng có khả sinh tổng hợp laccase – enzyme oxy hóa – với hoạt tính cao mơi trường PDBM Bởi khả oxy hóa mạnh phổ chất rộng bao gồm chất nhiễm hữu bền vững (POPs) nên laccase sử dụng để loại màu thuốc nhuộm, xử lý ô nhiễm môi trường v.v Do đó, chủng BBV11 lựa chọn để tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố môi trường nuôi cấy lên khả sinh laccase 4.3.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy Chủng BBV11 nuôi môi trường khác gồm: LB, PDBM, MT1, MT2, MT3, MT4, kết đo hoạt tính laccase chủng mơi trường khác trình bày bảng 3.2 Trong đó, mơi trường PDB-M chủng BBV11 có khả sinh laccase, cịn mơi trường khác khơng có khả sinh laccase sinh trưởng Chủng BBV11 sinh laccase hoạt tính cao đạt 29,4 U/l sau ngày nuôi môi trường PDB-M, pH Do đó, mơi trường PDB-M chọn mơi trường cho nghiên cứu Bảng 4.2 Hoạt tính laccase chủng BBV11 mơi trường khác STT Mơi trường ni cấy Hoạt tính laccase (U/l) LB PDB-M 29,4 MT1 MT2 MT3 MT4 30 Trên giới, nghiên cứu Bacillus sinh tổng hợp laccase chủ yếu môi trường M9, M162, MSM [13], [51], [20] Khả sinh laccase môi trường PDB-M chưa công bố nhiều 4.3.2 Ảnh hưởng nồng độ CuSO4 Nhiều nghiên cứu cho thấy bổ sung chất cảm ứng vào môi trường nuôi cấyvi sinh vật làm tăng đáng kể khả sinh tổng hợp laccase chúng [50] Các nguồn bao gồm amino acid, hợp chất thơm, chất chiết từ thực vật Cu2+.Trong nghiên cứu này, CuSO4 chọn để nghiên cứu ảnh hưởng chất cảm ứng đến khả sinh laccase chủng BBV11, nồng độ khác nhau: 0,1; 0,5; 1; 1,5 mM Hoạt tính laccase chủng BBV11 môi trường PDB-M, pH xác định trình bày hình 3.4 Thời gian(ngày) Hình 4.4 Ảnh hưởng nồng độ CuSO4 đến khả sinh laccase chủng BBV11 31 Sau ngày ni cấy, hoạt tính laccase chủng cao đạt 320.5 U/l nồng độ CuSO4 0,5 mM Vì vậy, nồng độ CuSO4 0,5mM bổ sung vào mơi trường ni cấy thí nghiệm Trong nghiên cứu này, kết khảo sát nồng độ Cu2+ tương đối khác với nghiên cứu giới công bố ảnh hưởng Cu2+ đến khả sinh laccase chủng Bacillus Zhao đồng tác giả (2011) nhận thấy hiệu suất sinh tổng hợp laccase từ chủng vi khuẩn Bacillus subtilis WD23 phân lập từ đất rừng với hoạt tính cao 960 U/l mơi trường M9, bổ sung Cu2+ 0,4mM [13] Theo Galai cộng (2009), chủng vi khuẩn Stenotrophomonas maltophilia AAP56 sinh laccase môi trường LB sử dụng Cu2+ làm chất cảm ứng với nồng độ 0,4 mM [19] Một nghiên cứu khác Kaushik Thakur (2014) cho thấy khả sinh laccase chủng Bacillus sp môi trường MSM bổ sung 1mM CuSO4 đạt 51,95 U/ml [20] 4.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ Bên cạnh yếu tố môi trường, pH, nồng độ chất cảm ứng, nhiệt độ yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp laccase vi sinh vật Trong nghiên cứu này, với nhiệt độ nuôi cấy khác từ 25 đến 37oC, hoạt tính laccase chủng BBV11 môi trường PDB-M bổ sung 0,5 mM CuSO4, pH xác định trình bày hình 3.5 32 Thời gian(ngày) Hình 4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh laccase chủng BBV11 Sau ngày ni cấy, hoạt tính laccase chủng cao đạt 302,6 U/l nuôi 33oC Tại nhiệt độ khác, chủng BBV11 sinh laccase nhiên hoạt tính khơng cịn tốt 33oC Như 25oC sau ngày ni hoạt tính enzyme đạt 83,6 U/l, tương tự 167.1 232.8 U/l 30 37oC Do đó, 33oC nhiệt độ thích hợp cho khả sinh laccase chủng BBV11 sử dụng cho thí nghiệm 4.3.4 Ảnh hưởng pH mơi trường pH môi trường nuôi cấy yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng khả sinh enzyme vi sinh vật Trên môi trường PDB-M bổ sung 0,5mM CuSO4, 33oC với pH từ đến 10, hoạt tính laccase chủng BBV11 xác định hình 3.6 33 Thời gian(ngày) Hình 4.6 Ảnh hưởng pH đến khả sinh laccase Chủng BBV11 sinh trưởng tốt pH 6-8 sinh laccase có hoạt tính cao 366,4 U/l pH sau ngày nuôi cấy Như pH phù hợp cho khả sinh chủng BBV11 lựa chọn cho thí nghiệm Sự ảnh hưởng pH lên khả sinh tổng hợp enzyme chủng vi khuẩn công bố nhiều nghiên cứu Theo Singh cộng (2009), chủng vi khuẩn γ– Proteobacterium JB sinh laccase có hoạt tính cao mơi trường M162 pH [49] Ngồi ra, chủng Bacillus phân lập từ bùn nhà máy sản xuất rượu sử dụng để sinh laccase điều kiện mơi trường tối ưu, pH chứng minh phù hợp cho khả sinh laccase chủng vi khuẩn này, với hoạt tính cao ghi nhận 107,32U/ml [20] 34 4.4 Khả loại màu chủng BBV11 Sau lựa chọn yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp laccase với khả oxy hóanhiều hợp chất khó phân hủy loại màu enzyme này, nghiên cứu khả loại màu thuốc nhuộm chủng BBV11 thực Trên môi trường PDB-M bổ sung 0,5mM CuSO4, 33oC, pH 8, bổ sung màu Dimaren Black CLS 60 ppm, khả loại màu hoạt tính laccase trình bày trênhình 3.7 3.8 Thời gian(ngày) Hình 4.7 Hiệu loại màu khả sinh laccase chủng BBV11 sau ngày ni A B Hình 4.8 Màu Dimaren Black CLS thời điểm ban đầu (A) sau ngày ni (B) 35 Từ kết nhận thấy chủng BBV11 có khả loại 65% màu Dimaren Black CLS sau ngày Trong trình loại màu, laccase tiếp tục chủng BBV11 sinh tổng hợp, nhiên hoạt tính giảm nhiều (66,5 U/l) Joe cộng (2011) cho thấy khả loại màu Remazol Black B với nồng độ 50mg/l chủng Pseudomonas aeruginosa CR-25 phân lập từ nhà máy xử lý nước thải lên đến 97% [27] Ponraj cộng (2011) chứng minh khả loại màu Orange 3R (200mg/l) tốt Chủng Bacillus sp 86.72% pH [41] Theo Maulin cộng (2014) Chủng vi khuẩn Bacillus spp có khả loại 95 ± 0,3% màu Reactive Black (RB5) sau ngày 25oC [35] Một nghiên cứu khác Gurulakshimi cộng (2008) cho thấy khả loại 90% màu thuốc nhuộm acid blue 113 với nồng độ 200mg/l môi trường BHM, pH 50 37oC [25] 36 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu đạt được, rút số kết luận sau: Từ 54 chủng vi khuẩn phân lập từ rừng Quốc Gia Ba Vì vườn Quốc Gia Bidoup, sàng lọc 47 chủng sinh chitinase, 42 chủng sinh cellulase, 43 chủng sinh protease Đặc biệt chủng BBV11 khả sinh enzyme cịn có khả sinh laccase với hoạt tính ban đầu đạt 49,2 U/l Chủng BBV11 đặt tên Bacillus sp BBV11 Đã xác định số điều kiện ni cấy thích hợp cho chủng BBV11 sinh laccase hoạt tính cao ổn định, là: môi trường PDB-M, pH 8, nhiệt độ 33oC, nồng độ CuSO4 bổ sung 0,5 mM, chủng Bacillus sp BBV11 sinh laccase với hoạt tính cao 366,4 U/l Chủng Bacillus sp BBV11 có khả loại 65% màu Dimaren Black CLS sau ngày Kiến nghị Nghiên cứu khả sinh laccase chủng Bacillus sp BBV11 nguồn carbon, nitrogen bổ sung chất cảm ứng khác Nghiên cứu số đặc tính laccase chủng Bacillus sp BBV11 độ bền pH, độ bền nhiệt độ Nghiên cứu điều kiện ni cấy thích hợp để chủng Bacillus sp BBV11 sinh enzyme ngoại chitinase, cellulase protease hoạt tính cao ổn định 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Thị Cẩm, Nguyễn Thị Thiên Trúc, Trần Ngọc Thiên Kim, Nguyễn Thị Thanh Hà (2010), Khảo sát khả tổng hợp chất chitin từ nấm sợi, Tạp chí Khoa học-Cơng nghệ, 18: 520-527 Nguyễn Thị Hà (2012), Tối ưu hóa điều kiện ni cấy chủng Aspergillus protuberus sinh tổng hợp enzyme chitinase phân lập từ rừng ngập mặn Cần Giờ, Tạp chí khoa học Trường Đại học Cần Thơ,22b: 26-35 Thạch Thành Trung, Hồ Thị Thu Linh, Đinh Minh Hiệp (2009), Nghiên cứu cảm ứng isozyme endochitinase Trichoderma longibrachiatum Tđ16, Science & Technology Development, 12(17): 34-41 Trần Đình Toại, Nguyễn Văn Thiết, Nguyễn Bích Thủy, Đỗ Trung Sĩ (2008), Động học trình hoạt hóa chitinase phản ứng thủy phân chitin thành glucosamine, Tạp chí Khoa học- Cơng nghệ, 1: 79-85 TÀI LIỆU TIẾNG ANH Abidi, F., F Limam and M.M Nejib, (2008), Production of alkaline proteases by Botrytis cinerea using economic raw materials: Assay as biodetergent Proc Biochem., 43: 1202-1208 Akcan N, Uyar F, (2011), Production of extracellular alkaline protease from Bacillus subtilis RSKK96 with solid state fermentation Eurasia J Biosci 5: 64-72 Alfred M Mayer, Richard C Staples, 2002, laccase new functions for an old enzyme, Phytochemistry ;60(6):551-65 Bhatnagar A., Sillanpaa M (2010) “Utilization of agro-industrial and municipal waste materials as potential adsorbents for water treatment: a review” Chem Eng J, 157:277-96 Bugg T D., Ahmad M., Hardiman E.M., Singh R., 2011, The emerging role for bacteria in lignin degradation and bio-product formation, Environmental Biotechnology, 22(3) 394-400 38 10 C Held, A Kandelbauer, M Schroeder, A Cavaco-Paulo, G M Guebitz (2005), biotransformation of phenolics with laccase containing bacterial spores, Environ Chem Lett 3: 74–77 11 C P Kubicek, (1993), “From cellulose to cellulase inducers: facts and fiction,” in Proceedings of the 2nd Symposium Trichoderma Reesei Cellulases and Other Hydrolases (TRICEL ’93), P Suominen and T Reinikainen, Eds., vol 8, pp 181–188, Foundation for Biotechnical and Industrial Fermentation Research, Espoo, Finland 12 Chacko J T., Subramaniam K (2011) "Enzymatic degradation of azo dyes: a review" Int J Environ Sci, 1:1250-60 13 CL Wang, M Zhao, L Lu, XD Wei, TL Li, (2011), Characterization of spore laccase from Bacillus subtilis WD23 and its use in dye decolorization, African Journal of Biotechnology Vol 10(11), pp 21862192 14 Couto and Herrera (2006), Industrial and biotechnological applications of laccases:A review, Biotechnology advances 24, 500-513 15 D S Manamgoda & Lei Cai (2011), Cochliobolus: an overview and current status of species, Fungal Diversity, 51:3–42 16 Domínguez A, Couto S R, Sanroman R A (2005), Dye decolorization by Trametes hirsutaimmobilized into alginate beads, World Journal of Microbiology and Biotechnology, Vol 21 405-409 17 E A Bayer, J P Belaich, Y Shoham, and R Lamed, (2004),“The cellulosomes: multienzyme machines for degradation of plant cell wall polysaccharides,”Annual Review of Microbiology,vol 58, pp 521–554 18 Gabriella Kova´cs, La´szlo´ Sa´gi, Ge´raldine Jacon, (2012), Expression of a rice chitinase gene in transgenic banana (‘Gros Michel’, AAA genome group) confers resistance to black leaf streak disease, 2013, Transgenic Res, 22:117–130 19 Galai S., Limam F., Marzouki M N (2009), A New Stenotrophomonas maltophilia Strain Producing Laccase Use in Decolorization of Synthetics Dyes, Appl Biochem Biotechnol, 416-431 39 20 Garima Kaushik & Indu Shekhar Thakur (2014), Production of laccase and optimization of its production by Bacillus sp using distillery spent wash as inducer, Bioremediation Journal, 18:1, 28-37 21 Ghafoor A, Hasnain S (2010), Purification and Characterization of an Extracellular Protease from Bacillus subtillis EAG-2 Strain isolated from Ornamental Plant Nursery, Pol J Microbiol, Vol 59(2): 107-112 22 Gianfreda L., Xu F & Bollag J.M, 1999, Laccases: A Useful Group of Oxidoreductive Enzymes, Bioremediation Journal, 3:1, 1-26 23 Giongo, J.L., F.S Lucas, F Casarin, P Heeb and A Brandelli, (2007) Keratinolytic protease of Bacillus species isolated from the Amazon basin showing remarkable dehairing activity World J Microbiol Biotechnol., 23: 375-382 24 Givaudan A, Effosse A, Faure D, Potier P, Bouillant ML, Bally R, (1993), Polyphenol oxidase in Azospirillum lipoferum isolated from rice rhizosphere : evidence for laccase activity in nonmotile strains of Azospirillum lipoferum FEMS Microbiol Lett 108:205–210 25 Gurulakshimi M, Sudarmani D.N.P and Venba R (2008), Biodegradation of leather acid dye by Bacillus subtilis, Advanced Biotechnology, 12-17 26 Hiroshi Ihui, Hirano S., Kosaki H., Uno Y., (1994), “Biotechnology and bioactive polymers”, International Journal of Science, 2: 34-35 27 Joe J, Kothari RK, Raval CM, Kothari CR, Akbari VG, et al (2011) “Decolorization of Textile Dye Remazol Black B by Pseudomonas aeruginosa CR- 25 Isolated from the Common Effluent Treatment Plant” J Bioremed Biodegrad 2:118 28 K Narayanan, Nagosh Chopada, P Vasanhth Raj (2013), “Fungal chitinase production and its application in biowaste management”, Journal of Scientific and Industrial Research, 72: 393-399 29 K Vega ; Kalkum, Markus (2012), Chitin, Chitinase Responses, and Invasive Fungal Infections, International Journal of Microbiology, 44: 1-11 40 30 Kalyani D., Dhiman S.S., Kim H., Lee J K (2012) "Characterization of a novel laccase from the isolated Coltricia perennis and its application to detoxification of biomass" Process Biochem 47(4):671–678 31 L Sang-Mok and Y M Koo (2001), “Pilot-scale production of cellulase using Trichoderma reesei Rut C-30 in fed-batch mode,”Journal of Microbiology and Biotechnology, vol.11,no 2, pp 229–233 32 Laura-Leena Kiiskinen, (2005), characterization and heterologous production of a novel laccase from Melanocarpus albomycetes 33 Marie-Franỗoise Hullo, Ivan Moszer, Antoine Danchin and Isabelle Martin-Verstraete (2001), CotA of Bacillus subtilis Is a CopperDependent Laccase, Journal of Bacteriology, 183(18), p 5426–5430 34 Mathiasen TE Laccase and beer storage PCT international application, WO 9521240 A2, (1995) 35 Maulin P S, Kavita A P, Sunu S N, and Darji A M (2014) “Microbial degradation and decolorization of reactive dyes by Bacillus Spp ETL-1979.” American Journal of Microbiological Research, vol 2, no 1: 16-23 36 Mikolasch and Schauer., (2009), Fungal laccases as tools for the synthesis of new hybrid molecules and biomaterials, Applied Microbiology and Biotechnology, , Volume 82, pp 605-624 37 Nunes, A.S and M.L Martins, (2001) Isolation, properties and kinetics of growth of a thermophilic Bacillus Braz J Microbiol., 32: 271-275 38 Olumide D Olukanni, Aliu Adenopo1, Ayodeji O Awotula and Akinniyi A Osuntoki (2013), Biodegradation of Malachite Green by Extracellular Laccase Producing Bacillus thuringiensis RUN1, Journal of Basic & Applied Sciences, Vol 9, 543-549 39 P Mishra, R Kshirsagar, S Nilegaonkar1 and S Singh (2012), Statistical optimization of medium components for production of extracellular chitinase by Basidiobolus ranarum: a novel biocontrol agent against plant pathogenic fungi, ,Journal of Basic Microbiology, 52: 1–10 41 40 Piontek K, Antorini M, Choinowski T (2002), Crystal structure of a laccase from the fungus Trametes versicolor at 1.90-A resolution containing a full complement of coppers, J Biol Chem ;277(40):37663-9 41 Ponraj M, Gokila K and Zambare V (2011), Bacterial decolorization of textile dye ORANGE 3R Intl J Advanced Biotechnol &Res 2, 168177 42 R C Kuhad, M Manchanda, and A Singh (1999), Hydrolytic potential of extracellular enzymes from a mutant strain of Fusarium oxysporum,Bioprocess Engineering, vol 20, no 2, pp 133–135 43 R.K.Sukumaran, R.R.Singhania and A Pandey (2005), Microbial cellulases production, applications and challenges, Journal of Scientific and Industrial Research, vol 64, no 11, pp 832– 844 44 Renate Reiss, Julian Ihssen, Linda Thöny-Meyer (2011), Bacillus pumilus laccase: a heat stable enzyme with a wide substrate spectrum, BMC Biotechnology 45 Rossana C Minussi, Glaucia M Pastore, Nelson Duran (2002), Potential applications of laccase in the food industry, Trends in Food Science & Technology, Vol13, pp: 205-216 46 S.S Desai and C Nityanand (2011), Microbial Laccases and their Applications: A Review Asian Journal of Biotechnology, 3: 98-124 47 Sambrook J., Russel D.W (2001) Molecular cloning A laboratory manual, 3rd ed Cold spring harbor laboratory press, Cold spring harbor, NewYork 48 Saratale R.G., Saratale G.D., Chang J.S., Govindwar SP (2011) "Bacterial decolorization and degradation of azo dyes: a review" J Taiwan Inst Chem Eng, Vol 42:138-57 49 Singh G, Ahuja N, Sharma P and Capalash N (2009), Response surface methodology for the optimized production of an alkaphilic laccase from γ – Proteobacterium JB, BioResources 4(2),544-553 42 50 Soares M.A, Cavallazzi J.R.P, Kasuyal C.M (2005), Screening of inducers for laccase production by Lentinula edodes in liquid medium, Brazilian J Microb 36: 383-387 51 Sondhi S, Sharma P., George N., Chauhan P.S., Puri N., Gupta N, (2014), An extracellular thermo-alkali-stable laccase from Bacillus tequilensis SN4, with a potential to biobleach softwood pulp, Biotech 52 Vishalakshi N.,Lingappa K., Amena S.,Prabhakar M., Dayanand A (2009), Production of alkaline protease from Streptomyces gulbargensis and its application in removal blood stains, Indian Journal of Biotechnology, vol 8, July , 280-285 53 Wu Y., Li T., Yang L (2012) "Mechanisms of removing pollutants from aqueous solution bu microorganisms and their aggretaes: a review" Bioresource Technol, Vol 107:10-8 54 Y H Percival Zhang, M E Himmel, and J R Mielenz (2006), “Outlook for cellulase improvement: screening and selection strategies,” Biotechnology Advances, vol 24, no 5, pp 452– 481 55 Zaharia C., Suteu D., Muresan A., Muresan R&Popescu A (2009) "textile wastewater treatment by homogenous oxidation with hydrogen peroxide" Environmental Engineering and Management Journal, Vol.8, No.6, pp.1359-1369 56 Zu F., Viraraghavan T (2001) "Fungal decolorrization of dye wastewaters: a review" Bioresource Technol, 79:251-62 ... HẢI SƠN Tên đề tài: SÀNG LỌC VÀ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỦNG BACILLUS CÓ KHẢ NĂNG SINH ENZYME NGOẠI BÀO ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ RỪNG QUỐC GIA BA VÌ VÀ VƯỜN QUỐC GIA BIDOUP NÚI BÀ CỦA VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT... phân lập từ rừng Quốc Gia Ba Vì 36 chủng phân lập từ vườn Quốc Gia Bidoup, 42 chủng sinh cellulase có chủng phân lập từ rừng Quốc Gia Ba Vì 36 chủng phân lập từ vườn Quốc Gia Bidoup, 43 chủng sinh. .. đề tài ? ?Sàng lọc nghiên cứu số chủng Bacillus có khả sinh enzyme ngoại bào phân lập từ rừng Quốc gia Ba Vì vườn Quốc gia Bidoup Núi Bà Việt Nam? ?? tiến hành, với nội dung sau: • Sàng lọc chủng vi