Điều tra nghiên cứu một số hoạt chất có khả năng kháng vi sinh vật và kháng dòng tế bào ung thư từ xạ khuẩn

ðẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI VIỆN VI SINH VẬT VÀ CÔNG NGHỆ SINH HỌC ========000======== BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC HIỆN ðỀ TÀI KHCN ðẶC BIỆT CẤP ðẠI HỌC QUỐC GIA Tên ñề tài: ðiều tra, nghiên cứu số hoạt chất có khả kháng vi sinh vật kháng dòng tế bào ung thư từ xạ khuẩn Mã số: QG 09 48 Chủ trì đề tài: TS Nguyễn Huỳnh Minh Quyên Cơ quan: Viện Vi sinh vật & Công nghệ Sinh học Hà Nội, năm 2011 MỤC LỤC PHẦN I BÁO CÁO TÓM TẮT Bằng tiếng Việt Bằng tiếng Anh PHẦN II BÁO CÁO TỔNG KẾT 12 Giải thích chữ viết tắt Danh sách người tham gia thực ñề tài 13 13 Danh mục bảng hình 14 MỞ ðẦU 15 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 16 1.1 Kháng sinh 16 1.1.1 Khái niệm chung 16 1.1.2 Lịch sử phát triển kháng sinh 16 1.1.3 Phân loại kháng sinh 18 1.1.4 Kháng sinh kháng khối u 1.1.5 Nhu cầu phát triển kháng sinh 21 21 1.2 Xạ khuẩn 1.2.1 Các ñặc ñiểm chung 22 22 1.2.2 Xạ khuẩn chất thứ sinh 23 1.3 Tình hình nghiên cứu xạ khuẩn Việt Nam 1.4 Nội dung mục ñích nghiên cứu 23 24 CHƯƠNG II - NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu 2.1.1 ðối tượng nghiên cứu 2.1.2 Hóa chất 25 25 25 25 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu 25 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp phân lập xạ khuẩn 25 25 2.2.2 Các vi sinh vật kiểm ñịnh 2.2.3 Sàng lọc xạ khuẩn sinh kháng sinh 2.2.4 Chiết ethyl-acetate 26 27 28 2.2.5 Sắc ký chất chiết thu ñược 28 2.2.6 Sàng lọc chủng xạ khuẩn sinh anthracycline 2.2.7 Phép thử ñộc tế bào 29 30 2.2.8 Các phương pháp phân loại xạ khuẩn 30 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 ða dạng sinh học chủng xạ khuẩn thu thập ñược Vườn Quốc gia Cát Bà 3.2 Sàng lọc xạ khuẩn sinh kháng sinh 32 33 3.3 Hiệu tách chiết dịch nuôi cấy chủng xạ khuẩn chọn lọc 35 3.4 Phân tích sắc ký dịch nuôi chủng xạ khuẩn chiết ethyl acetate 3.4.1 Sắc ký mỏng (TLC) 36 36 3.4.2 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 3.5 ðặc ñiểm nhận dạng chủng xạ khuẩn chọn lọc ñược 3.5.1 ðặc ñiểm hình thái chủng thuộc Streptomyces 38 42 42 3.5.2 Giải trình tự rDNA 16S ñối với chủng xạ khuẩn thuộc chi Nonomuraea 44 3.6 Sàng lọc khả sinh anthracyline chủng xạ khuẩn chọn lọc ñược 3.7 Các nghiên cứu liên quan đến chủng có hoạt tính độc tế bào 45 46 3.7.1 Hoạt tính gây độc tế bào 46 3.7.2 Phân tích HPLC dịch ni chiết ethyl acetate chủng có hoạt tính độc tế bào 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 PHỤ LỤC 62 PHẦN I BÁO CÁO TÓM TẮT Tên ñề tài: ðiều tra, nghiên cứu số hoạt chất có khả kháng vi sinh vật kháng dòng tế bào ung thư từ xạ khuẩn Mã số:QG.09.48 Thời gian thực hiện: năm (2009 - 2011) Cấp quản lý: ðại học Quốc gia Hà nội Chủ trì đề tài: TS Nguyễn Huỳnh Minh Quyên Viện Vi sinh vật Công nghệ sinh học - ðHQGHN ðiện thoại: 37547694; Fax: 37547407; Email: quyennhm@vnu.edu.vn Cán tham gia: - TS Nguyễn Quỳnh Uyển - TS ðinh Thúy Hằng - CN Lê Phương Chung - ThS Phan Thị Hà - CN Lê Hồng Anh Mục tiêu nội dung nghiên cứu Nghiên cứu nhằm tìm hiểu đa dạng sinh học sàng lọc chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng vi sinh vật sưu tập chủng xạ khuẩn thu thập từ ñảo Cát Bà, vườn quốc gia có đa dạng sinh học cao Việt Nam Các chất kháng sinh chủng lựa chọn sinh tiếp tục nghiên cứu nhằm tìm kiếm chất chúng Cụ thể là: - Phân lập xạ khuẩn từ mẫu ñất mục ñảo Cát Bà, Hải Phịng qua đánh giá mức độ ña dạng ñối tượng - Sàng lọc chủng có hoạt tính kháng sinh cao - Tách chiết sơ thu chất có hoạt tính kháng sinh từ chủng chọn lọc - Nghiên cứu tính chất chất kháng sinh thu ñược sắc ký mỏng (TLC) sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) - Phân loại, ñịnh danh chủng xạ khuẩn (bằng mơ tả hình thái giải trình tự gene 16S rDNA) có hoạt tính kháng sinh cao - Thử nghiệm hoạt tính kháng dịng tế bào ung thư người chất chiết từ dịch nuôi số chủng có tiềm - Phân tích HPLC chất chiết từ dịch ni chủng có hoạt tính kháng tế bào ung thư làm sở cho nghiên cứu chất hợp chất Các kết ñạt ñược 8.1 Kết mặt khoa học - 424 chủng xạ khuẩn (gồm 353 chủng từ mẫu ñất 71 chủng từ mẫu mục) thu thập vườn Quốc gia ñã ñược phân loại (bằng quan sát hình thái kết hợp với ñọc trình tự gene rDNA 16S) cho thấy gần 70% thuộc chi Streptomyces, cịn lại thuộc nhóm xạ khuẩn Các chi xạ khuẩn có tỷ lệ cao sưu tập Micromonospora (hơn 7% tổng số 424 chủng), Nonomuraea (4%) Nocardia (gần 3%) - 424 chủng xạ khuẩn ñã ñược sàng lọc hoạt tính kháng sinh với vi sinh vật kiểm định ñại diện cho nhóm vi sinh vật lớn vi khuẩn (Gram âm: Escherichia coli, Gram dương: Micrococcus luteus), nấm men (Candida albicans) nấm sợi (Fusarium oxysporium) - 115 chủng số 424 chủng nói biểu hoạt tính kháng bốn vi sinh vật kiểm định - Với 115 chủng có hoạt tính có chủng (A1073, A1393) kháng chủng vi sinh vật kiểm ñịnh, chủng (A232, A390, A1018, A1022, A1041, A1043 A1470) kháng với chủng kiểm ñịnh, chủng (A45, A149, A154, A160, A396, A410, A427 A444) có hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định Xét đối tượng bị kháng 14 chủng có hoạt tính kìm hãm vi khuẩn Gram âm (E coli), 14 chủng kìm hãm vi khuẩn Gram dương (M luteus); 11 chủng có hoạt tính kháng hai nhóm vi khuẩn; 12 chủng có hoạt tính kháng nấm sợi (F oxysporium) chủng có hoạt tính kháng nấm men (C albicans) Như tổng cộng có 17 chủng có hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm ñịnh ñã ñược lựa chọn cho nghiên cứu ðiều thú vị 17 chủng thuộc chi Streptomyces (10 chủng) Nonomuraea (7 chủng) - 17 chủng ni cấy thu dịch ni dịch ni chiết ethyl acetate để thu hợp chất có hoạt tính sinh học Hiệu chiết chất tan ethyl acetate (từ lít dịch ni cấy) dao động từ 30mg (chủng A154) ñến 2152mg (chủng A444) So với chất khơ chất chiết chiếm từ 0,51% (chủng A154) ñến 14,89% (chủng A396) - Các chất tan ethyl acetate dịch ni 17 chủng xạ khuẩn phân tích sắc ký mỏng (TLC) để so sánh với ba kháng sinh chloramphenicol, kitasamycin, erythromycin với dịch ni chủng đối chứng sinh anthracycline (A16) Số băng thu ñược sau sắc ký dao ñộng từ ñến băng Có chủng (A149, A154, A160, A232, A410, A427, A1073, A1393) cho băng, chủng (A396, A444, A1018) cho phổ có băng, chủng (A45, A1041, A1043, A1470) cho phổ băng chủng (A390, A1022) cho phổ băng So với kháng sinh chuẩn thấy chất chiết từ dịch ni chủng A396 có băng tương ứng với chloramphenicol; chất chiết từ dịch ni chủng A45 A410 có băng trùng với băng erythromycin, khơng có mẫu có băng tương đồng với băng kháng sinh kitasamycin So với dịch ni chủng đối chứng sinh anthracycline, mẫu A1018 A1022 có phổ sắc ký gần với ñối chứng - Các chất tan ethyl acetate 17 chủng lựa chọn ñược ñược tiếp tục phân tích qua sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) với ñiều kiện sắc ký với kháng sinh chuẩn Kết cho thấy chủng A396 có đỉnh tương tự với đỉnh thu từ chloramphenicol, tất mẫu cịn lại khơng tìm thấy mối tương quan so với kháng sinh ñối chứng - Một nghiên cứu ñược thực với 17 chủng chọn lọc ñược thực thử nghiệm biến ñổi màu phụ thuộc pH ðây phép thử ñặc hiệu ñối với chủng sinh kháng sinh thuộc nhóm anthracycline Qua nhận thấy có hai chủng có biểu dương tính với phép thử A1018 A1073 - Như với bước nghiên cứu liên quan, từ 17 chủng có hoạt tính kháng sinh tương ñối cao, chủng ñược lựa chọn thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào ung thư người A1018 (có phổ TLC phản ứng đổi màu pH tương tự chủng đối chứng), A1022 (có phổ TLC tương tự ñối chứng) A1073 (phản ứng ñổi màu pH) - Bằng thử nghiệm với ba dòng tế bào ung thư người ung thư gan, phổi vân tim, hợp chất chiết từ dịch nuôi ba chủng chọn lọc ñược ñề tài có tác dụng dương tính với ba dịng tế bào ung thư So sánh số IC50 (nồng ñộ gây chết 50% tế bào ung thư, tức số nhỏ hiệu gây độc tế bào lớn) thấy ba mẫu nghiên cứu chất chiết từ dịch chiết chủng A1073 có số thấp thấp gần ñối chứng dương (một chất có khả diệt tế bào) phép thử; thấp so với chủng ñối chứng sinh anthracycline thấp ñáng kể so với hai chủng lại ðây kết bật ñề tài, làm tiền ñề cho hướng nghiên cứu - Chất tan ethyl acetate dịch nuôi chủng có hoạt tính kháng tế bào ung thư nói ñã ñược phân tích HPLC với ñiều kiện sắc ký với ñối tượng tương tự ñang thực Phịng thí nghiệm Vi sinh vật học phân tử, Trung tâm công nghệ sinh học quốc tế, ðại học Tổng hợp Osaka Qua phân tích kết sau sắc ký chất chiết ñược từ dịch ni chủng A1018 cho đỉnh khác nhau, từ chủng A1022 cho ñỉnh khác chủng A1073 cho ñỉnh khác Các liệu liên quan ñang ñược so sánh phân tích với sở liệu có sở nói nhằm tìm kiếm chất chất ðây kết thể hợp tác quốc tế ñề tài 8.2 Kết ñào tạo ðề tài ñã góp phần đào tạo 01 Thạc sỹ chun ngành cơng nghệ sinh học thuộc chương trình đào tạo liên kết quốc tế với ðại học Liege, Vương quốc Bỉ với tên ñề tài là: “Biodiversity and antibiotic activity of actinomycetes isolated from Catba island, Vietnam” Học viên Nguyễn Phương Chung ñã bảo vệ thành công luận văn với kết xuất sắc trước Hội ñồng ngày 24 tháng năm 2011 8.3 Bài báo Kết ñề tài ñã ñược ñúc kết thành 02 báo: • Diversity and antibiotic activity of actinomycetes isolated from Catba island, Vietnam Tạp chí Cơng nghệ sinh học (đã nhận đăng) • Bước ñầu nghiên cứu sàng lọc kháng sinh chống ung thư từ xạ khuẩn thu thập vườn Quốc gia Cát Bà, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, ðại học Quốc gia Hà Nội (đã nhận đăng) Tình hình sử dụng kinh phí - Tổng kinh phí đề tài duyệt: - Tổng kinh phí đề tài ñã toán: 100.000.000 VNð 100.011.400 VNð, bao gồm mục: + Chi phí thuê mướn: 40.000.000 + Chi phí nghiệp vụ chuyên môn: 49.084.000 + Photo tài liệu, văn phịng phẩm: 4.235.000 + Hội họp: 1.500.000 + Thơng tin liên lạc: 442.000 + Chi khác (lệ phí ñơn vị DT): 4.750.000 Chủ trì ñề tài Xác nhận quan Xác nhận ðại học Quốc gia SUMMARY Investigation and study some substances which have antibiotic Project title: activities against microorganisms and cancer cell lines from actinomycetes Code: QG.09.48 Duration: Organizer: 2009 – 2011 Institute of Microbiology and Biotechnology, Vietnam National University, Hanoi (VNUH) Project leader: Key participants: Dr Nguyen Huynh Minh Quyen Dr Nguyễn Quỳnh Uyển Dr ðinh Thúy Hằng BSc Lê Phương Chung MSc Phan Thị Hà BSc Lê Hồng Anh Objectives and study contents Objective: This project was carried out to study biodiversity and to screen antibiotics from actinomycete strains collected from a national park with high biodiversity in Vietnam, named Catba National Park The antibiotics produced by these strains were studied further in order to find out their nature Study contents: • Isolating actinomycete strains from soil and litter samples on Catba island (Hai Phong) and then evaluating their biodiversity • Screening the strains possessing high antibiotic activities • Primary extracting the antibiotics from these strains • Studying the properties of these antibiotics by use thin layer chromatography (TLC) and high pressure liquid chromatography (HPLC) • Classifying and identifying the strains possessing high antibiotic activities by use their morphology and the sequences of 16S rDNA gene • Testing cytotoxic activity of some potential strains • HPLC analyses of the extracts from the strains capable of producing anticancer agents to obtain data base in order to study their nature The obtained results • 424 actinomycete strains, including 353 strains from soil and 71 strains form litter samples, were collected at Cat Ba island and then were classified As the result through their observation morphology and the sequences of 16S rDNA gene, the genus Streptomyces occupied about 70%, the rare actinomycetes were the rest Among the latter, Micromonospora occupied more than 7%, Nonomuraea appeared about 4% and Nocardia was 3% in total • 424 above strains were screened their antibiotic activity against tested microorganisms, representative for bacteria (Negative Bacterium: Escherichia coli; Positive Bacterium: Micrococcus luteus), yeast (Candida albicans) and fungi (Fusarium oxysporium) • Of 424 strains above, 115 strains out were shown antimicrobial activity against at least one of the testes microrganisms • Among these 115 strains, strains (A1073, A1393) were shown activity against all of the tested microrganisms, strains (A232, A390, A1018, A1022, A1041, A1043 A1470) against 3, strains (A45, A149, A154, A160, A396, A410, A427 A444) against testes microrganisms Regarding the tested microorganisms, 14 strains were shown inhibitory activity to Negative bacterium (E coli), 14 strains were shown inhibitory activity to Positive bacterium (M luteus); 11 strains were shown activity against both of these; 12 strains were shown activity against fungi (F oxysporium) and just only strains were shown activity against yeast (C albicans) In general, 17 strains in total possessing activity against at least tested microoragnisms were selected for further study Interestingly, 17 these strains jsut belonged to genus Streptomyces (10 strains) and Nonomuraea (7 strains) • 17 strains were cultured to get their cultured broths and the cultured broths were extracted by ethyl acetate in order to obtain bioactive compounds The yeild of extracted substances soluble in ethyl acetate (from liter cultured broth) was variable from 30mg (strains A154) to 2152mg (strains A444) In comparison with their respective dry mass, extracted subtances occupied from 0,51% (strains A154) to 14,89% (strains A396) • The substances soluble in ethyl acetate of the cultured broths of 17 actinomycete strains were analysed by thin layer chromatography (TLC) to compare their profile with that of three standard antibiotics (chloramphenicol, kitasamycin, 37 Nduka O (2007), Modern Industrial Microbiology and Biotechnology, Science, Enfield, USA, pp 429 – 453 38 Newman D J., Cragg G M., and Snader K M (2003), Natural Products as Sources of New Drugs over the Period 1981-2002, J Nat Prod 2003, 66, 1022-1037 39 Nonomura H., Ohara Y (1969), “Distribution of actinomycetes in soil VI A culture method effective for broth preferential isolation and enumeration of Mircobispora and Streptosporangium strains in soil (Part 1)”, J Ferment Technol, 47, pp 463 – 469 40 Pasti M B., Pometto A P., Nuti M P., Crawford D L (1990), “Lignin-solubilizing ability of actinomycetes isolated from termite (Termitidae) gutt”, Appl Environ Microbiol, pp 2213-2218 41 Saga T., Yamaguchi K (2008), “History of antimicrobial agents and resistant bacteria”, J Japan Med Assoc, 137, pp 513 – 517 42 Saito H., Miura K (1963), “Preparation of transforming deoxyribonucleic acid by phenol treatment”, Biochim Biophys Acta, 72, pp 619–629 43 Saitou N., Nei M (1987), “The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees”, Mol Biol Evol, 4, pp 406 – 425 44 Seong C.N., Kim Y.S., Baik K.S., Lee S.D., Hah Y.C., Kim S.B., Goodfellow M (1999), “Mycolic acid-containing actinomycetes associated with activated sludge foam”, J Microbiol, 37, pp 66-72 45 Skehan P., Storeng R., Scudiero D., Monks A., McMahon J., Vistica D., Warren J.T., Bokesch H., Kenney S., Boyd M.R (1990), “New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening”, J Nat Cancer Inst, 82, pp 1107-1112 46 Steger K (2006), PhD Thesis: Composition of microbial communities in composts A tool to assess process development and quality of the final product Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala 47 Stuart H (2005), Essential microbiology, John Wiley & Sons Ltd., England, pp 191 – 369 48 Stubbs C., Haigh J M., Kanfer I (1985), “Determination of erythromycin in serum and urine by HPLC with ultraviolet”, J Pharm Sci, 74, pp 1126-1128 60 49 Thomson C.J., Bialphos S.H (1995), Genetics and Biochemistry of antibiotic production L.C Vining, C Stuttard (eds), Butterworth-Heinemann, Boston, pp 197 – 222 50 Thompson J D., Gibson T J., Plewniak F., Jeanmougin F., Higgins D G (1997), “The CLUSTAL X Windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools”, Nucleic Acids Res, 25, pp 4876–4882 51 Tomoo S., Keizo Y (2009), “History of antimicrobial agents and resistant bacteria”, J Japan Med Assoc, 52, pp 103 – 108 52 Tortora J G., Funke R B., Case L C (2010), Microbiology – An Introduction, 10th ed, Pearson Education, Inc, pp 553 – 583 53 Trease GE, Evans WC (1996), A textbook of Pharmacognosy 14th ed Bailliere Tindall Ltd, London, pp 832 54 Westley J.W., Evans R.H., Sello L.H., Troupe N., Liu C.M., Blount J.F (1979), “Isolation and characterization of antibiotic X-14547A, a novel monocarboxylic acid ionophore produced by Streptomyces antibiotics NRRL 8167”, J Antibiot, 32, pp 100-107 55 Young S.R., Wan J.K., Dong J.Y., Heun S.K., Soon R.C (2001), “Synthesis and antitumor activity of new anthracycline analogues”, Bull Korean Chem Soc, Vol 22, 9, pp 963 – 968 56 http://science.howstuffworks.com/question479.htm 61 PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần môi trường nuôi cấy Môi trường Mueller – Hinton (MHA) - Cao thịt 3g - Casein thủy phân 17,5 g - Tinh bột - Thạch 1,5 g 17 g - Nước cất - pH lít 7,4 Mơi trường tinh bột-cao nấm men - Glucose 10 g - Cao nấm men 2g - Thạch 17 g - Nước cất - pH lít 7,0 Mơi trường dinh dưỡng đậu tương - Tinh bột 25 g - ðậu tương 15 g - Cao nấm men 1g - CaCO3 4g - Nước cất - pH lít 6,2 Mơi trường cao malt- nấm men - Cao malt 3g - Cao nấm men 3g - Glucose 10 g - Pepton - Thạch - Nước cất 5g 17 g lít Mơi trường thạch vitamin-acid humic - Acid humic 1g - CaCO3 0,02 g - FeSO4.7H2O 0,01 g - KCl 1,71 g 62 - MgSO4.7H2O - Na2HPO4 0,05 g 0,5 g - Cycloheximide - Nalidixic acid 50 mg 20 mg - Kabicidine 14 mg - Thạch 14 g - pH 7,2 63 Phụ lục Trình tự gene rDNA 16S chủng thuộc chi Nonomuraea >A0045 Contig1, 1495 bases TTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGAAAGGCCCTTC GGGGTACTCGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGCAACCTGCCCCTGACTCTGGGATAAGCCCG GGAAACTGGGTCTAATACCGGATACGACCGCCCCCGGCATCGGGTGGTGGTGGAAAGTTTTTTCGGTT GGGGATGGGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAGTGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCC GGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGT GGGGAATATTGCGCAATGGGCGGAAGCCTGACGCAGCGACGCCGCGTGGGGGATGACGGCCTTCGGG TTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGTTGACGTGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTG CCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGG TGGCTGGTCGCGTCTGCCGTGAAAGCCCGCAGCTTAACTGCGGGTCTGCGGTGGATACGGGCCGGCTA GAGGTAGGTAGGGGCAAGTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACC GGTGGCGAAGGCGGCTTGCTGGGCCTTACCTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGA TTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGTTGGGCGCTAGGTGTGGGGATCTTCCACGATCTCCGTG CCGGAGCTAACGCATTAAGCGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTG ACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTTGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGT TTGACATCACCCGGAAACGCTCAGAGATGGGCGCCTCTTCGGACTGGGTGACAGGTGGTGCATGGCTG TCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGCTCCATGTTGCCA GCACGCCCTTCGGGGTGGTGGGGACTCATGGGGGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGAT GACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCAAACATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGTTG CGATACCGTGAGGTGGAGCGAATCCCTAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACC CCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGT ACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGCAACACCCGAAGCCCGTGGCCCAACCACTTTGTGGGGG GAGCGGTCGAAGGTGGGGCTGGCGATTGGGACGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCG GCT >A0149 Contig1, 1436 bases TGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGAAAGGCCCTTCGGGGTACTCGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACA CGTGAGCAACCTGCCCCTGACTCTGGGATAAGCCCGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATACGACCGCC CCCGGCATCGGGTGGTGGTGGAAAGTTTTTTCGGTTGGGGATGGGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGT GGGGTAGTGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACT GAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCGCAATGGGCGGAAGCCTGAC GCAGCGACGCCGCGTGGGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGTTGAC GTGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGC GTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGTGGCTGGTCGCGTCTGCCGTGAAAGCCCGCAG CTTAACTGCGGGTCTGCGGTGGATACGGGCCGGCTAGAGGTAGGTAGGGGCAAGTGGAATTCCTGGTG TAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGCTTGCTGGGCCTTACCTGA CGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGTTG GGCGCTAGGTGTGGGGATCTTCCACGATCTCCGTGCCGGAGCTAACGCATTAAGCGCCCCGCCTGGGG AGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTTGC TTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGTTTGACATCACCCGGAAACGCCTGGAGACAGGCG CCTCTTCGGACTGGGTGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGT CCCGCAACGAGCGCAACCCTTGCTCCATGTTGCCAGCACGCCCTTCGGGGTGGTGGGGACTCATGGGG GACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGC TGCAAACATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGTTGCGATACCGTGAGGTGGAGCGAATCCCTAAAAGC CGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATC AGCAATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGCAA CACCCGAAGCCCGTGGCCCAACCACTTTGTGGGGGGAGCGGTCGAAGGTGGGGCTGGCGATTGGGACG AAGTCGTAAC >A0154 Contig1, 1476 bases CATGCAAGTCGAGCGGAAAGGCCCTTCGGGGTACTCGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGCA ACCTGCCCCTGACTCTGGGATAAGCCCGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATACGACGTTCTGTCGCAT GACATGAACGTGGAAAGTTTTTTCGGTCGGGGATGGGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAGT GGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACG GCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCGCAATGGGCGGAAGCCTGACGCAGCGAC GCCGCGTGGGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGTTGACGTGTACCT 64 GCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCG GAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGTGGCTGGTCGCGTCTGCCGTGAAAGCCCGCAGCTTAACTG CGGGTCTGCGGTGGATACGGGCCGGCTAGAGGTAGGTAGGGGCAAGCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTG AAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGCTTGCTGGGCCTTACCTGACGCTGAGG AGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGTTGGGCGCTAG GTGTGGGACCCTTCCACGGGTTCCGTGCCGGAGCTAACGCATTAAGCGCCCCGCCTGGGGAGTACGGC CGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTTGCTTAATTCGA CGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGTTTGACATCACCCGGAAAGCTCTGGAGACAGAGCCCTCTTCGG ACTGGGTGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAAC GAGCGCAACCCTTGCTCCATGTTGCCAGCACGCCCTTCTACGTGGTGGGGACTCATGGGGGACTGCCG GGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCAAACA TGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGCTGCTAAGCCGTGAGGCGGAGCGAATCCCTAAAAGCCGGTCTCA GTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGC TGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGCAACACCCGAA GCCCGTGGGCCAACCCCCAAGGGGGGGAGAGGGCGAAAGTGGGGCTGGCGATTGTGACAAAATCGTA ACAAGGTAGCCGTACCGCAAAGTGCGGCTGGATCACCTCCTTATAAAGGAGC >A0160 Contig1, 1440 bases, TGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGAAAGGCCCTTCGGGGTACTCGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACA CGTGAGCAACCTGCCCCTGACTCTGGGATAAGCCCGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATATGACCGCC TCCGGCATCGGATGGTGGTGGAAAGTTTTTCGGTCGGGGATGGGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTG GGGTAGTGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTG AGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCGCAATGGGCGGAAGCCTGACG CAGCGACGCCGCGTGGGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGTTGACG TGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGT TGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGTGGCTGGTCGCGTCTGCCGTGAAAGCCCGCAGCT TAACTGCGGGTCTGCGGTGGATACGGGCCGGCTAGAGGTAGGTAGGGGCAAGTGGAATTCCTGGTGTA GCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGCTTGCTGGGCCTTACCTGACG CTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGTTGG GCGCTAGGTGTGGGACCCTTCCACGGGTTCCGTGCCGGAGCTAACGCATTAAGCGCCCCGCCTGGGGA GTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTTGCT TAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGTTTGACATCACCCGGACCGGTCCAGAGATAGGCCT TCCCTTTTGGGCTGGGTGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAG TCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGCTCCATGTTGCCAGCAACACCTTCGGGTGGTTGGGGACTCATGGG GGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGG CTGCAAACATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGTTGCGATACCGTGAGGTGGAGCGAATCCCTAAAAG CCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATC AGCAATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGCAA CACCCGAAGCCCGTGGCCCAACCAGCTTGCTGGGGGGAGCGGTCGAAGGTGGGGCTGGCGATTGGGA CGAAGTCGTAACAA >A0232 Contig1, 1441 bases GCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGAAAGGCCCTTCGGGGTACTCGAGCGGCGAACGGGTGAGTA ACACGTGAGCAACCTGCCCCTGACTCTGGGATAAGCCCGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATACGACA CACCCCGGCATCGGGTGTGTGTGGAAAGTTTTTCGGTTGGGGATGGGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTG GTGGGGTAGTGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGA CTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCGCAATGGGCGGAAGCCTG ACGCAGCGACGCCGCGTGGGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGTTG ACGTGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAA GCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGTGGCTGGTCGCGTCTGCCGTGAAAGCCCGC AGCTTAACTGCGGGTCTGCGGTGGATACGGGCCGGCTAGAGGTAGGCAGGGGCAAGTGGAATTCCTGG TGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGCTTGCTGGGCCTTACCT GACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACG TTGGGCGCTAGGTGTGGGACCCTTCCACGGGTTCCGTGCCGGAGCTAACGCATTAAGCGCCCCGCCTG GGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGT TGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGTTTGACATCACCCGGAAACGGCCAGAGATGG TCGCCTCTTCGGACTGGGTGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTA AGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTCCATGTTGCCAGCACGCCCTTCGGGGTGGTGGGGACTCATG 65 GGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTG GGCTGCAAACATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGCTGCTAAACCGCGAGGTGGAGCGAATCCCTAA AAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCA GATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCG GCAACACCCGAAGCCCGTGGCCCAACCAGCTTGCTGGGGGGAGCGGTCGAAGGTGGGGCTGGCGATT GGGACGAAGTCGTAACAA >A0396 Contig1, 1432 bases TGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGAAAGGCCCTTCGGGGTACTCGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACA CGTGAGCAACCTGCCCCTGACTCTGGGATAAGCCCGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATATGACCGCC TCCGGCATCGGATGGTGGTGGAAAGTTTTTCGGTCGGGGATGGGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTG GGGTAGTGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTG AGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCGCAATGGGCGGAAGCCTGACG CAGCGACGCCGCGTGGGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGTTGACG TGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGT TGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGTGGCTGGTCGCGTCTGCCGTGAAAGCCCGCAGCT TAACTGCGGGTCTGCGGTGGATACGGGCCGGCTAGAGGTAGGTAGGGGCAAGTGGAATTCCTGGTGTA GCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGCTTGCTGGGCCTTACCTGACG CTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGTTGG GCGCTAGGTGTGGGACCCTTCCACGGGTTCCGTGCCGGAGCTAACGCATTAAGCGCCCCGCCTGGGGA GTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTTGCT TAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGTTTGACATCACCCGGACCGCCTCAGAGATGGGGCT TCCCTTTTGGGCTGGGTGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAG TCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGCTCCATGTTGCCAGCAACACCTTCGGGTGGTTGGGGACTCATGGG GGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGG CTGCAAACATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGTTGCGATACCGTGAGGTGGAGCGAATCCCTAAAAG CCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATC AGCAATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGCAA CACCCGAAGCCCGTGGCCCAACCAGCTTGCTGGGGGGAGCGGTCGAAGGTGGGGCTGGCGATTGGGA CGAAGT >A0444 Contig1, 1496 bases GTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGAAAGGCCCT TCGGGGTACTCGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGCAACCTGCCCCTGACTCTGGGATAAGCC CGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATATGACCGCCTCCGGCATCGGATGGTGGTGGAAAGTTTTTCGGT TGGGGATGGGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAGTGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGC CGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAG TGGGGAATATTGCGCAATGGGCGGAAGCCTGACGCAGCGACGCCGCGTGGGGGATGACGGCCTTCGG GTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGTTGACGTGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGT GCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAG GTGGCTGGTCGCGTCTGCCGTGAAAGCCCGCAGCTTAACTGCGGGTCTGCGGTGGATACGGGCCGGCT AGAGGTAGGTAGGGGCAAGTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACAC CGGTGGCGAAGGCGGCTTGCTGGGCCTTACCTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGG ATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGTTGGGCGCTAGGTGTGGGACCCTTCCACGGGTTCCGT GCCGGAGCTAACGCATTAAGCGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATT GACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTTGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAG GTTTGACATCACCCGGACCGGTCTAGAGATAGGCCTTCCCTTTTGGGCTGGGTGACAGGTGGTGCATGG CTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGCTCCATGTTG CCAGCAACACTTTCGGGTGGTTGGGGACTCATGGGGGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGG ATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCAAACATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGT TGCGATACCGTGAGGTGGAGCGAATCCCTAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGA CCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTT GTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGCAACACCCGAAGCCCGTGGCCCAACCAGCTTGCTGG GGGGAGCGGTCGAAGGTGGGGCTGGCGATTGGGACGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGT GCG 66 Phụ lục Kết phân tích HPLC chất chiết từ dịch ni chủng chọn lọc với ñiều kiện tương ứng với kháng sinh chuẩn 67 Phụ lục Bản kết thử nghiệm gây ñộc tế bào 68 Phụ lục Kết phân tích HPLC chất chiết thu từ dịch ni ba chủng có hoạt tính kháng tế bào ung thư người 69 SẢN PHẨM CỦA ðỀ TÀI Bài báo • Diversity and antibiotic activity of actinomycetes isolated from Catba island, Vietnam Tạp chí Cơng nghệ sinh học (đã nhận ñăng) • Bước ñầu nghiên cứu sàng lọc kháng sinh chống ung thư từ xạ khuẩn thu thập vườn Quốc gia Cát Bà, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, ðại học Quốc gia Hà Nội (ñã nhận ñăng) ðào tạo ðề tài góp phần đào tạo 01 Thạc sỹ chuyên ngành công nghệ sinh học thuộc chương trình đào tạo liên kết quốc tế với ðại học Liege, Vương quốc Bỉ với tên ñề tài là: “Biodiversity and antibiotic activity of actinomycetes isolated from Catba island, Vietnam” Học viên Nguyễn Phương Chung bảo vệ thành cơng luận văn với kết xuất sắc trước Hội ñồng ngày 24 tháng năm 2011 70 PHIẾU ðĂNG KÝ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ðỀ TÀI KHCN Tên ñề tài: Mã số: ðiều tra, nghiên cứu số hoạt chất có khả kháng vi sinh vật kháng dịng tế bào ung thư từ xạ khuẩn QG.09.48 Cơ quan quản lý ñề tài: ðại học Quốc gia Hà Nội ðịa chỉ: ðiện thoại: 144 ñường Xuân Thủy, Cầu Giấy – Hà Nội 37 54 86 64 Cơ quan chủ trì đề tài: Viện Vi sinh vật Cơng nghệ sinh học, ðHQGHN ðịa chỉ: Nhà E2, 144 Xuân Thủy, Cầu Giấy – Hà Nội ðiện thoại: 37547407 100.000.000 ñ Tổng chi phí thực chi: Trong đó: − Từ ngân sách NN: 100% − Nguồn khác: khơng có Thời gian nghiên cứu: năm − Thời gian bắt ñầu: 3/2009 − Thời gian kết thúc: 3/2011 Tên cán phối hợp nghiên cứu: − Chủ trì đề tài: TS Nguyễn Huỳnh Minh Quyên − Cán tham gia: TS Nguyễn Quỳnh Uyển Số ñăng ký ñề tài - TS ðinh Thúy Hằng - CN Lê Phương Chung - ThS Phan Thị Hà - CN Lê Hồng Anh Số chứng nhận ñăng ký KQNC Bảo mật A Phổ biến rộng rãi Ngày Ngày Tóm tắt ý nghĩa, kết nghiên cứu: - 424 chủng xạ khuẩn (gồm 353 chủng từ mẫu ñất 71 chủng từ mẫu mục) thu thập vườn Quốc gia ñã ñược phân loại 71 - 424 chủng xạ khuẩn ñã ñược sàng lọc hoạt tính kháng sinh với vi sinh vật kiểm ñịnh cho thấy ñó có 115 chủng biểu hoạt tính kháng bốn vi sinh vật kiểm định - Với 115 chủng có hoạt tính có chủng (A1073, A1393) kháng chủng vi sinh vật kiểm ñịnh, chủng (A232, A390, A1018, A1022, A1041, A1043 A1470) kháng với chủng kiểm ñịnh, chủng (A45, A149, A154, A160, A396, A410, A427 A444) có hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định Xét đối tượng bị kháng 14 chủng có hoạt tính kìm hãm vi khuẩn Gram âm (E coli), 14 chủng kìm hãm vi khuẩn Gram dương (M luteus); 11 chủng có hoạt tính kháng hai nhóm vi khuẩn; 12 chủng có hoạt tính kháng nấm sợi (F oxysporium) chủng có hoạt tính kháng nấm men (C albicans) Như tổng cộng có 17 chủng có hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm ñịnh ñã ñược lựa chọn cho nghiên cứu - 17 chủng ni cấy thu dịch ni dịch ni chiết ethyl acetate để thu hợp chất có hoạt tính sinh học Hiệu chiết chất tan ethyl acetate (từ lít dịch ni cấy) dao động từ 30mg (chủng A154) ñến 2152mg (chủng A444) So với chất khơ chất chiết chiếm từ 0,51% (chủng A154) ñến 14,89% (chủng A396) - Các chất tan ethyl acetate dịch ni 17 chủng xạ khuẩn phân tích sắc ký mỏng (TCL) để so sánh với ba kháng sinh chloramphenicol, kitasamycin, erythromycin với dịch ni chủng đối chứng sinh anthracycline (A16) Số băng thu ñược sau sắc ký dao ñộng từ ñến băng Có chủng (A149, A154, A160, A232, A410, A427, A1073, A1393) cho băng, chủng (A396, A444, A1018) cho phổ có băng, chủng (A45, A1041, A1043, A1470) cho phổ băng chủng (A390, A1022) cho phổ băng So với kháng sinh chuẩn thấy chất chiết từ dịch ni chủng A396 có băng tương ứng với chloramphenicol; chất chiết từ dịch ni chủng A45 A410 có băng trùng với băng erythromycin, khơng có mẫu có băng tương đồng với băng kháng sinh kitasamycin So với dịch ni chủng đối chứng sinh anthracycline, mẫu A1018 A1022 có phổ sắc ký gần với ñối chứng - Các chất tan ethyl acetate 17 chủng lựa chọn ñược phân tích qua sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) với ñiều kiện sắc ký với kháng sinh chuẩn cho thấy ngồi chủng A396 có đỉnh tương tự với ñỉnh thu ñược từ chloramphenicol, tất mẫu cịn lại khơng tìm thấy mối tương quan so với kháng sinh ñối chứng 72 - Bằng phép thử ñặc hiệu (ñổi màu theo pH) với chủng sinh kháng sinh thuộc nhóm anthracycline nhận thấy có hai chủng có biểu dương tính với phép thử A1018 A1073 - chủng ñược lựa chọn thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào ung thư người A1018 (có phổ TLC phản ứng đổi màu pH tương tự chủng đối chứng), A1022 (có phổ TLC tương tự ñối chứng) A1073 (phản ứng ñổi màu pH) Bằng thử nghiệm với ba dòng tế bào ung thư người ung thư gan, phổi vân tim, hợp chất chiết từ dịch nuôi ba chủng chọn lọc ñược ñề tài ñều có tác dụng dương tính với ba dịng tế bào ung thư So sánh số IC50 (nồng ñộ gây chết 50% tế bào ung thư, tức số nhỏ hiệu gây độc tế bào lớn) thấy ba mẫu nghiên cứu chất chiết từ dịch chiết chủng A1073 có số thấp thấp gần ñối chứng dương (một chất có khả diệt tế bào) phép thử; thấp so với chủng ñối chứng sinh anthracycline thấp ñáng kể so với hai chủng lại - Chất tan ethyl acetate dịch ni chủng có hoạt tính kháng tế bào ung thư nói phân tích HPLC với ñiều kiện sắc ký với ñối tượng tương tự thực Phịng thí nghiệm Vi sinh vật học phân tử, Trung tâm công nghệ sinh học quốc tế, ðại học Tổng hợp Osaka Qua phân tích kết sau sắc ký chất chiết từ dịch ni chủng A1018 cho ñỉnh khác nhau, từ chủng A1022 cho ñỉnh khác chủng A1073 cho ñỉnh khác Các liệu liên quan ñang ñược so sánh phân tích với sở liệu có sở nói nhằm tìm kiếm chất chất - ðã đào tạo 01 thạc sỹ Cơng nghệ sinh học thuộc chương trình đào tạo liên kết quốc tế - 02 báo ñã ñược tạp chí Cơng nghệ sinh học tạp chí Khoa học ðại học Quốc gia Hà Nội nhận ñăng Kiến nghị qui mơ đối tượng áp dụng kết nghiên cứu: - Nghiên cứu chất/cấu trúc hóa học chất định hoạt tính sinh học - Sàng lọc ñối tượng thu thập ñịa danh khác Việt Nam nhằm tìm kiếm thêm nguồn gene quý giá - Xây dựng sở liệu sử dụng phân tích chất kháng sinh phương pháp HPLC 73 Chức vụ Chủ nhiệm ñề Thủ trưởng quan chủ trì đề Chủ tịch hội ñồng ñánh giá Thủ trưởng quan quản lý ñề tài tài thức tài Họ tên Nguyễn Huỳnh Dương Văn Hợp Minh Quyên Phạm Thị Trân Châu Học vị TS GS TSKH TS Ký tên ðóng dấu 74 ... “ðiều tra, nghiên cứu số hoạt chất có khả kháng vi sinh vật kháng dòng tế bào ung thư từ xạ khuẩn? ?? 15 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1 Kháng sinh 1.1.1 Khái niệm chung Theo ñịnh nghĩa truyền thống kháng. .. đến kháng sinh kháng ung thư có nguồn gốc từ xạ khuẩn Vi? ??t Nam 1.4 Nội dung mục đích nghiên cứu Nghiên cứu nhằm tìm hiểu ña dạng sinh học sàng lọc chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng vi sinh vật. .. loại dựa vi sinh vật sản sinh kháng sinh Nhưng có trường hợp vi sinh vật sinh số kháng sinh Streptomyces sp sinh penicillin N cephalosporin Ngược lại kháng sinh nhiều vi sinh vật sinh Kháng sinh