Sàng lọc, tinh sạch và bước đầu nghiên cứu chất kháng viêm từ thực vật sử dụng thụ thể Toll-like 4 (TLR4

Trong quá trình thực hiện luận văn, tôi đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ, khích lệ, động viên của các Thầy, Cô, đồng nghiệp, bạn bè và những người thân trong gia đình. Qua đây, tôi xin được gửi lời cảm ơn sâu sắc của mình đến những cá nhân và tập thế đã hết lòng giúp đỡ để tôi có thể hoàn thành luận văn này. Trước hết, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Thị Mai Phương, người thầy đã trực tiếp hướng dẫn cho tôi, luôn chỉ bảo tận tình đế tôi hoàn thành công trình nghiên cứu này. Tôi xin chân thành cảm ơn các cán bộ nghiên cứu của phòng Hóa sinh Thực vật, Viện Công nghệ Sinh học, đã giúp tôi hoàn thành luận văn này. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới PGS.TS. Đặng Ngọc Quang, TS. Trịnh Tất Cường, các anh chị nghiên cứu sinh, các bạn cao học và các em sinh viên trực thuộc phòng thí nghiệm bộ môn Hóa hữu cơ, thuộc khoa Hóa học, trường ĐHSP Hà Nội và phòng thí nghiệm Trọng Điếm Công nghệ Enzyme và Protein, trường ĐH Khoa Học Tự Nhiên đã nhiệt tình dạy bảo, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi nhất để tôi hoàn thành bản luận văn này. Cuối cùng, tôi xin cảm ơn gia đình thân yêu, bạn bè và đồng nghiệp - những người đã luôn luôn ở bên tôi, luôn động viên, khích lệ và là chỗ dựa vững chắc cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu. Hà Nội, ngày 20 thảng 06 nẵm 2013 Học viên Dương Thị Nụ LỜI CẢM ƠN Luận văn của tôi đã được thực hiện theo đề tài: "Xây dựng và hoàn thiện mô hình sàng lọc hoạt tính kháng viêm mới thông qua các thụ thể glucocorticoid và họ thụ thể toll-like trên tế bào macrophage của động vật thí nghiệm" thuộc Viện Hàn lâm Khoa Học & Công Nghệ Việt Nam, mã số VAST03/11-13 do TS. Nguyễn Thị Mai Phương làm chủ nhiệm. Tôi xin cam đoan rằng các số liệu và kết quả nghiên cún trong luận văn tốt nghiệp của tôi là trung thực và không trùng lặp với các đề tài khác. Tôi cũng xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đã được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày 20 tháng 06 năm 2013 Hộc viên Dương Thị Nụ Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục Danh mục các thuật ngữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ, đồ thị LỜI CAM ĐOAN 3.1.2. Gây cảm ứng viêm trên dòng tế bào macrophage chuột sử Bảng 2.1. Danh sách các dịch chiết thực vật được lựa chọn cho nghiên ASP Aspirin BMDM Bone marrow derived macrophage cox Cyclo - oxygenase DMSO Dimethyl sulfoxide ELISA Enzyme - Linked Immuno Sorbent Assay GC Glucocorticoid GR Glucocorticoid receptor HPLC High performed liquid chromatography IL Interleukin kDa Kilo dalton LPS Lipopolysaccharide MAPK Mitogen activated protein kinase NF-&B Nuclear factor kappa, light chain enhancer of activated B cell NMR Nuclear magnetic resonance NSAID Non - steroidal anti - inflammatory drug OD Optical density PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis SDS Sodium dodecyl sulphate TLC Thin layer chromatography (Sac kí bản mỏng) TLR Toll - like receptor TNFa Tumor Necrosis Factor alpha [...]... RNA) sẽ được sử dụng để sàng lọc thứ cấp Nếu kết quả nhận được là tương tự vói kếtquả sàng lọc ban đầu thì có thể khẳng định chắc chắn phối tử của thụ thể glucocorticoid có mặt trong dịch chiết nghiên cứu và cơ chế kháng viêm của nó là ức chế hoạt động của thụ the glucocorticoid thông qua ức chế NF-&B di chuyến vào nhân tế bào 1.5.3 Mô hình sàng lọc sử dụng thụ thể TLR Kế từ khi TLR của động vật có vú... được bàng huỳnh quang kế (luminator) Khi chất nghiên cứu có tác dụng ức chế biểu hiện của NF-Ấ:B, nó sẽ làm giảm hoạt độ của enzyme luciferase Sử dụng mô hình này, Chao và Lin đã sàng lọc và phát hiện thấy 8 chất từ dịch chiết ethyl acetate của thực vật Andrographỉs panỉculata có khả năng kháng viêm [12] Trong số này, chất andrograpanin thế hiện cả tính kháng viêm và chống nhiễm trùng thông qua ức chế... này sẽ bị thụ the glucocorticoid bắt cặp và cản trở liên kết với các đoạn gene gây viêm Các kết quả thu được là rất có giá trị trong việc tìm ra những phối tủ’ của thụ thể glucocorticoid tổng họp và tự nhiên từ thực vật có tính kháng viêm ưu việt hơn các thuốc glucocorticoid đã tìm thấy trước đó Điều này đã được khắng định trong việc nghiên cứu của Schãcke và cộng sự [36] Sử dụng mô hình sàng lọc in... Hướng nghiên cứu này đã được Yang và cộng sự ở Đại học Chungnam, Hàn Quốc rất quan tâm Nhóm nghiên cún đã chứng minh được chất compoud K chiết xuất từ sâm của Hàn Quốc là phối tử của thụ thể glucocorticoid thông qua mô hình sàng lọc thụ the glucocorticoid [44 ] Gần đây, nhóm nghiên cứu của Elewaut đã phát hiện một chất tụ’ nhiên khác có tên là Compound A (CpdA) tách từ cây Salsola ở Namibia có tính chất. .. in vitro Hiện nay, để sàng lọc các chất kháng viêm các phòng thí nghiệm trên thế giới đều sử dụng chủ yếu mô hình in vitro thay thế cho mô hình in vivo trước kia Khác với mô hình ỉn vivo cố điến, tốn nhiều thời gian và thiếu tin cậy, mô hình sàng lọc in vitro cho phép sàng lọc nhanh và hiệu quả các chất kháng viêm mới từ các nguồn nguyên liệu khác nhau 1.5.1 Mô hình sàng lọc sử dụng gene chỉ thị luciferase... vật đế điều trị các bệnh viêm nhiễm mà không gây ra các phản ứng phụ [16] LPS I Tế bào Marcropha ge có G R I 1 Đo mức độ ức chế chất trung gian giải phóng ra ức chế biểu hiện gene GR-siRNA trong macrophage ị Khẳn g định là phối tử của GR trong mẫu nghiê n cứu Hình 1.8 Mô hình sàng lọc sử dụng thụ thể glucocorticoid (GR) Trong mô hình sàng lọc chất kháng viêm in vỉtro sử dụng thụ thể glucocorticoid (GR)... việc làm giảm tiết các chất chemotaxis của bạch cầu đa nhân và giải phóng enzyme lysosome Colchicin có tác dụng ức chế đặc hiệu sự giải phóng một glycoprotein có trọng lượng phân tử 840 0 Da Đây là một chất chemotaxis của bạch cầu đa nhân đối với các bạch cầu trung tính và monocyte có khả năng thực bào các thể urate [42 ] 1.3 Khái niệm về thụ thể 1.3.1 Thụ thể và phân loại Thụ thể là những protein biệt... tế bào và dẫn tới sản sinh ra cytokine, chemokine, quá trình oxy hóa (ROS) và quá trình nitơ hóa (RNS) kích thích tăng cường khả năng thực bào của cơ thể [40 40] Nhiều nghiên cứu đã công bố vai trò của Dectin-1 trong quá trình sản xuất cytokine tiền viêm đế ức chế sự phát triến của Mycobacterium tuberculosis [25] Dựa vào những tín hiệu của thụ thế Dectin-1, một số hợp chất tách chiết từ thực vật đã... bạch cầu [45 ] viêm Macrophage là tế bào có kích thước tương đối lớn và có khả năng đáp ứng nhanh với các kích thích viêm tạo ra bởi LPS Ngoài ra, các TLR ở macrophage được biểu hiện mạnh hơn so với các tế bào bạch cầu khác (Hình 1.6) nên nó thường được lựa chọn trong các mô hình sàng lọc và nghiên cún cơ chế kháng viêm ỉn vitro của chất quan tâm [45 ] 1.5 Một số mô hình sàng lọc chất kháng viêm in vitro... phương pháp rất ưu việt và được nhiều phòng thí nghiệm trên thế giới sử dụng (Hình 1.7) LPS Tế bào macroph age \8 of Marcrophage mang ► gen luciferase phụ thuộc NFKB Ưc chế biểu - hiện gen ► luciferase phụ thuộc NF-KB t Dịch chiết thực vật Chất Hình 1.7 Mô hình sàng lọc sử dụng gene chỉ thị luciferase gắn NF-fcB 1.5.2 Dịch chiết tiềm năng Chất tiềm Mô hình sàng lọc sử dụng thụ thể glucocoticoid (GR) . Sàng lọc, tinh sạch và bưó’c đầu nghiên cứu chất kháng viêm từ thực vật sử dụng thụ thể Toll-like 4 (TLR4) ” với mục tiêu trước mắt là xây dựng được một mô hình sàng lọc in vỉtro các chất kháng. kháng viêm mới, có chất lượng tốt dùng điều trị bệnh cho con người. 2. Mục đích nghiên cửu Sàng lọc, tinh sạch và bước đầu nghiên cứu chất kháng viêm từ thực vật sử dụng thụ thể Toll-like 4. viêm mới và bước đâu nghiên cứu tác dụng kháng viêm củã chât tinh sạch từ dịch chiêt tiêm năng. Mục tiêu lâu dài của nghiên cứu này là phát hiện và định hướng ứng dụng các chất kháng viêm từ