7 Săn thuyín Syzygium polyanthum (Wight) Walp Lâ
2.2.3. Đânh giâ khả năng ức chế sinh cytokine của câc dịch chiết thực vật Cao
cytokine của câc dịch chiết thực vật Cao
chiết thực vật được hòa tan trong dung môi hữu cơ thích họp ở
nồng độ 1 mg/ml. Sau đó, 10 jLil dịch tổng số được bổ sung văo câc giếng có chứa tế băo marcophage trong 60 phút. Tiếp theo, câc tế băo năy được ủ tiếp cùng với LPS 100 ng/ml đế gđy cảm ứng viím. Sau thời gian ủ thích hợp với LPS, dịch nuôi cấy tế băo được thu lại bằng ly tđm ở tốc độ 5000 g/phút trong 10 phút. Hăm lượng cytokine được giải phóng ra trong dịch thu được xâc định bằng phương phâp ELISA. Quy trình năy được tóm tắt như sau:
• Phủ đĩa bằng 100 ịú dung dịch khâng thể thứ nhất pha trong dung dịch đệm phủ theo tỉ lệ 1/250 sau đó tiến hănh ủ qua đím ở 4°c.
• Rửa lại đĩa 3 lần bằng dung dịch rửa với 200 Ịil/giếng.
• Thím 200 Ịil/giếng dung dịch phản ứng vă tiến hănh ủ 1 giờ ở nhiệt độ phòng. • Rửa lại đĩa 5 lần bằng dung dịch rửa.
• Bổ sung mẫu chuẩn có chứa khâng nguyín ở thể tích 100 ịil/giếng vă tiến hănh ủ 2 giờ ở nhiệt độ phòng.
• Rửa mỗi giếng 5 lần bằng dung dịch rửa.
• Thím 100 |il/giếng dung dịch có chứa khâng thể thứ cấp gắn với enzyme HRP (horse radish peroxidase) vă tiến hănh ủ trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng.
• Tiếp tục bổ sung 100 [LÌ dung dịch có chứa cơ chất của HRP văo mỗi giếng vă ủ đĩa 30 phút ở trong bóng tối.
• Cuối cùng, thím văo mỗi giếng 50 Ịil dung dịch dừng phản ứng
• Đọc kết quả bằng mây đọc ELIS A Biorad sử dụng bước sóng 450 nm.