7 Săn thuyín Syzygium polyanthum (Wight) Walp Lâ
3.2.1. Cđy Bâch bộ
Cđy Bâch bộ (Stemona tuberosa Lour.) lă cđy thđn leo có thđn mảnh, nhẵn, dăi đến 6-8m, ở gốc có nhiều rễ củ mọc thănh chùm, 10-20 hoặc 30 củ (nín được gọi lă củ ba mươi), có khi tới gần 100 củ, dăi 15-20m, rộng 1,5- 2cm. Lâ mọc đối hay so le, giống lâ Củ nđu, nhưng đặc biệt có hệ gđn ngang dăy song song với câc gđn chính hình cung, dăi 10-15cm, rộng 4-7cm, đầu lânhọn kĩo dăi. Theo đông y, củ cđy Bâch bộ có vị đắng, tính hơi ấm, hơi độc; có tâc dụng nhuận phế, sât trùng, diệt sđu, trừ ngứa [5].
Hình 3.7. Cđy Bâch bộ 3.2.2. Tinh sạch chất khâng viím tiềm năng
Nhằm tinh sạch chất có hoạt tính khâng viím trong dịch chiết rễ cđy Bâch bộ, chúng tỏi đê tiín hănh chiít bột rí cđy (2,0 kg) trõng thời gian 3 giờ với hệ dung môi methanol - nước (Me0H-H20) theo tỉ lệ 4-1 trín hệ thống chiết siíu đm. Toăn bộ dịch chiết sau đó được cô cạn trong hệ thống cô quay chđn không để thu hồi cao chiết tổng số (18 g). Sau đó, sắc kí bản mỏng cao chiết được tiến hănh với câc hệ dung môi khâc nhau nhằm tìm ra dung môi chạy tối ưu cho sắc kí cột. Ket quả thu được cho thấy hệ dung môi phù hợp cho tâch chiết câc chất trong rễ cđy Bâch bộ lă hệ gradient ether-acetone.
Quâ trình tinh sạch chất quan tđm được thực hiện sử dụng phương phâp sắc ký qua cột silica gel (2 X 50 cm) với hệ dung môi ether - acetone (9-1), sau đó tăng dan acetone đến tỉ lệ 1-1 vă tiến hănh thu câc phđn đoạn 10 ml. Câc phđn đoạn năy sau đó được kiểm tra hoạt tính ức chế cytokine IL6 vă
TNFa. Trong tổng số 10 phđn đoạn thu được thì phđn đoạn số 4 (820 mg) thể hiện hoạt tính quan tđm mạnh nhất vă đê được chúng tôi lựa chọn đế tiếp tục tinh sạch. Ở bước tinh sạch tiếp theo, chúng tôi tiếp tục sử dụng cột silica gel với hệ dung môi ít phđn cực hơn lă gradient hexane - ethyl acetate (theo tỉ lệ 2-1). Câc phđn đoạn 10 ml được thu lại vă đânh giâ hoạt tính ức chế sinh cytokine của BMDM. Sau khi qua bước tinh sạch năy, chúng tôi đê thu được phđn đoạn 5. Sử dụng hệ sắc ký điều chế với phđn đoạn 5, chúng tôi đê thu được chất 1 với tổng khối lượng đạt 85 mg. Độ sạch của chất 1 đê được đânh giâ bằng sắc ký bản mỏng (TLC) trong hệ dung môi n- hexane : ethyl acetate tỷ lệ 2:1 vă sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Kết quả sắc ký đồ TLC chất nghiín cứu chỉ còn một vạch duy nhất (Hình 3.8) với giâ trị Rf đạt 0,78, chứng tỏ chất thu được đê tinh sạch vă lă chất có độ phđn cực không cao. Câc số liệu thu được từ HPLC cũng chỉ ra rằng chất thu được có độ sạch đạt tới > 99% (Hình 3.9). Như vậy chất 1 đê được tinh sạch vă có thể sử dụng để xâc định cấu trúc hóa học bằng cộng hưởng từ hạt nhđn (NMR).
Hình 3.8. Sắc ký đồ của sắc ký lóp mỏng chất khâng viím tính sạch từ rễ cđy Bâch bộ trong hệ dung môi n-hexane : ethyl acetate tỷ lệ 2:1