1 VI NHÂN GIỐNG LAN GẤM ANOECTOCHILUS FORMOSANUS HAYATA Lê Linh Dung 1 , Nguyễn Thị Kiều Linh 2 linhdungsh@gmail.com 1 ,nguyenkieulinh9x@gmail.com 2 1 Khoa công nghệ sinh học – Môi trường, Đại học Lạc Hồng, Biên Hòa, Đồng Nai. Tóm tắt: Đề tài: “Vi nhân giống lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata” khảo sát vai trò các chất điều hòa sinh trưởng đến sự tái sinh cây lan Gấm hoàn chỉnh trong điều kiện in vitro. Môi trường TS5 sử dụng môi trường nền Knudson C có b sung 2 ppm BAP + 0,2 ppm Kinetin + 0,1 ppm GA 3 thích hợp cho sự tái sinh chồi. Kết quả đạt 94,3 % số lượng mẫu tái sinh. Môi trường KC7 sử dụng môi trường nền Knudson C có b sung 0,35 ppm BAP + 0,1 ppm NAA + 0,25 ppm B1 thích hợp nhất cho sự nhân chồi. Kết quả đạt 96,2 % số lượng mẫu tái sinh với 5,55 chồi/ mẫu. Các chồi có chiều cao từ 4 - 5cm được sử dụng để ra rễ in vitro. Tỷ lệ ra rễ là 98,1 % và số rễ/ mẫu ( 4,5 rễ/ mẫu) cao nhất trên môi trường có b sung 0,7 ppm NAA + 0,2 ppm BAP. Từ khóa: Lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata, nhân giống invitro. 1. ĐẶT VẤN ĐỀ Sự phát triển của y học cổ truyền đặc biệt là Đông y Trung Quốc đã khiến cho lan Gấm, đặc biệt là loài lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata trở thành một loài dược liệu quý. Theo y học cổ truyền Đài Loan, A. formosanus Hayata tươi hoặc khô nấu nưc uống trị các chng bệnh đau ngực, đau bụng, tiểu đường, viêm thận, sốt, huyết áp cao, liệt dương, rối loạn gan, lá lách và chng đau nhói ngực (Lin và Wu 2007). Đại học Công nghệ Y dược và Cao đẳng Y học Quốc gia Dương Minh Đài Loan đã sử dụng A. formosanus Hayata làm thuốc kháng viêm, hạ sốt, giảm suy nhược cơ thể và kháng virus cúm A. A. formosanus Hayata cha hợp chất chuyển hoá arachidonic acid liên quan đến chc năng tim mạch. Dịch chiết A. formosanus Hayata có khả năng kháng virus, kháng sưng viêm và bảo vệ gan (Takatsuki, 1992). Ngoài ra trên thị trường còn có một số thực phẩm chc năng chiết xuất từ lan Gấm có tác dụng mát gan giải độc, tăng cường sc khỏe…Ở Việt Nam cây lan Gấm chủ yếu dùng làm cảnh, chưa có tài liệu nghiên cu và chưa dùng làm thuốc. Vi nhu cầu nguyên liệu ln, Trung Quốc tận thu nguồn lan Gấm trong khu vực Đông Nam Á mà chủ yếu ở Việt Nam. Lan Gấm tươi được thu mua từ 200 – 300 USD/ kg (thân, rễ, lá, hoa), cây khô có giá 3.200 USD/ kg, nếu thu hái trong tự nhiên giá cao gấp 3 lần. Vi giá trị kinh tế cao dẫn đến việc khai thác quá mc nguồn nguyên liệu này đã khiến lan Gấm đng trưc nguy cơ tuyệt chủng. Nhận thc được tiềm năng, giá trị kinh tế của loài lan này, nhiều nghiên cu xây dựng quy trình nhân giống các loài lan Gấm trong điều kiện in vitro ra đời. Chen ZY và cs (1992) nghiên cu môi trường thích hợp ra rễ lan Gấm là môi trường ½ MS + 0,7 μg/l NAA. Nồng độ BA 1,0 – 2,0 μg/l, IBA 0,5 – 0,7μg/l, 0,1 – 0,5 μg/l zeatin cho chồi phát triển tốt nhất. Fan Zinan và cs (1997) nghiên cu ảnh hưởng của than hoạt tính đối vi sự phát triển rễ của lan Gấm, kết quả cho thấy bổ sung 0,2% than hoạt tính giúp rễ phát triển tốt, lão hóa chậm. Wang Yaying, Linrong Yao (2005) đã chỉ ra bổ sung 3,5 ppm BA, 0,5 ppm KT, 0,2 ppm NAA vào môi trường ½ MS là tốt nhất cho sự phát triển rễ lan Gấm. Phùng Văn Phê và cs (2010) nghiên cu môi trường phù hợp nhất để nhân nhanh chồi Lan kim tuyến - Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl in vitro là Knudson C. Thể chồi 8 tuần tuổi từ phôi hạt chín, cao 2-3 cm là phù hợp nhất để nhân nhanh trong môi trường có bổ sung 0,5 ppm BAP + 0,3 ppm Kinetin + 0,3 ppm. 2 Nguyễn Quang Thạch, Phí Thị Cẩm Miện (2012) nghiên cu xác định môi trường thích hợp nhất để nhân nhanh thể chồi và mắt đốt ngang thân lan Kim Tuyến - Anoectochilus setaceus Blume là Knudson C bổ sung 0,5 ppm BAP + 0,3 ppm Kinetin + 0,3 ppm αNAA. Những nghiên cu trên đã đóng góp thiết thực khôi phục và bảo tồn nhiều loài lan Gấm. Tuy nhiên, ở Việt Nam loài Anoectochilus formosanus - Loài có giá trị thương mại cao trên thế gii chưa được quan tâm nghiên cu. Đề tài “Vi nhân giống lan gấm Anoectochilus formosanus Hayata” được thực hiện vi mục đích nhân nhanh số lượng ln cây lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata in vitro làm cơ sở cho việc nhân nhanh nguồn vật liệu khởi đầu và cung cấp cơ sở khoa học nhằm khôi phục lại nguồn giống cũng như đáp ng nhu cầu tiêu thụ trong nưc và xuất khẩu. 2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đề tài được thực hiện tại Phòng thí nghiệm Nuôi cấy mô trường Đại học Lạc Hồng, thời gian từ 07/2013 - 11/2013. Đề tài “Vi nhân giống lan gấm Anoectochilus formosanus Hayata” nghiên cu tái sinh chồi, nhân chồi và tái sinh rễ tiến hành qua 3 thí nghiệm, mỗi thí nghiệm gồm 10 nghiệm thc, lặp lại 3 lần trong đó có nghiệm thc đối chng. Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên. Điều kiện nuôi cấy trong tất cả các thí nghiệm đều giống nhau. Nhiệt độ nuôi cấy 24 ± 2 0 C, sử dụng đèn huỳnh quang ánh sáng trắng, cường độ chiếu sáng 1800 - 2000 lux, chiếu sáng 16h/ ngày, pH của môi trường là 5,5 – 5,8. Tiến hành xác định số chồi, đặc điểm chồi, số rễ, đặc điểm rễ tạo thành sau mỗi lần cấy chuyền. Số liệu thô được thống kê bằng phần mềm Excel 2010, sau đó được xử l bằng phần mềm của chương trnh thống kê STATGRAPHICS. Th nghim 1: Khảo sát ảnh hưởng của tổ hợp BAP, Kinetin, GA 3 tới môi trường tái sinh chồi. Mục đích: Khảo sát ảnh hưởng và tìm ra các khoảng nồng độ các chất điều hòa sinh trưởng thích hợp cho sự tái sinh chồi. Vật liệu: Các đốt thân lan Gấm được nuôi cấy trong điều kiện in vitro. Số lượng mẫu cấy: 6 mẫu/ bnh. Mỗi nghiệm thc pha 3 bnh (3 lần lặp lại). Dung tích mỗi bnh là 500 ml, thể tích môi trường là 65 ml/ bnh. Thời gian theo di: 6 tuần Môi trường nuôi cấy: Sử dụng môi trường Knudson C có bổ sung: 20 g/l sucrose; 0,2 g/l than hoạt tính; 150 ml/l nưc dừa; 100 ml/l dịch chiết khoai tây; 8 g/l agar và bổ sung chất điều hòa sinh trưởng theo bảng sau: Bảng 1: Nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật trong môi trường tái sinh chồi CĐHSTTV Môi trường BAP (ppm) Kinetin (ppm) GA 3 (ppm) TS0 (Đối chng) 0 0 0 TS1 0 0,2 0,1 TS2 0,5 0 0,1 3 Chỉ tiêu theo di: Số mẫu sống sót, số mẫu tái sinh, số chồi, hình thái chồi sau 2, 4, 6 tuần. Th nghim 2: Khảo st ảnh hưởng của tổ hợp BAP, NAA, B1 đến sự phát sinh hình thái và h số nhân chồi Mục đích: Khảo sát ảnh hưởng và tìm ra các khoảng nồng độ các chất điều hòa sinh trưởng thích hợp cho sự nhân chồi. Vật liệu: Chồi non được tái sinh từ thí nghiệm 1. Số lượng mẫu cấy: 6 mẫu/ bnh. Mỗi nghiệm thc pha 3 bnh (3 lần lặp lại). Dung tích mỗi bnh là 500ml, thể tích môi trường là 65ml/ bnh. Thời gian theo di: 6 tuần Môi trường nuôi cấy: Sử dụng môi trường Knudson C có bổ sung: 20 g/l sucrose; 0,5 g/l than hoạt tính; 150 ml/l nưc dừa; 100 ml dịch chiết khoai tây; 8 g/l agar và bổ sung chất điều hòa sinh trưởng theo bảng sau: Bảng 2: Nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật trong môi trường nhân nhanh chồi TS3 1,0 0,2 0 TS4 1,5 0,2 0,1 TS5 2,0 0,2 0,1 TS6 2,5 0,2 0,1 TS7 3,0 0,2 0,1 TS8 3,5 0,2 0,1 TS9 4,0 0,2 0,1 CĐHSTTV Môi trường BAP ( ppm) NAA (ppm) B1(ppm) KC0 (Đối chng) 0 0 0 KC1 0 0,1 0,25 KC2 0,1 0 0,25 KC3 0,15 0,1 0,25 KC4 0,2 0,1 0,25 KC5 0,25 0,1 0,25 KC6 0,3 0,1 0,25 KC7 0,35 0,1 0,25 4 Chỉ tiêu theo di: Số mẫu sống sót, số mẫu tạo chồi, số chồi, chiều dài chồi, đặc điểm chồi. Th nghim 3: Khảo st ảnh hưởng của tổ hợp NAA, BAP tới sự pht sinh r Mục đích: Khảo sát và tm ra các khoảng nồng độ cũng như các chất điều hòa sinh trưởng thích hợp cho sự phát sinh rễ lan Gấm trong điều kiện in vitro. Vật liệu: Các chồi xanh tốt thu được ở thí nghiệm 1 và thí nghiệm 2. Số lượng mẫu cấy: 6 mẫu/ bnh. Mỗi nghiệm thc pha 3 bnh (3 lần lặp lại). Dung tích mỗi bnh là 500 ml, thể tích môi trường là 65 ml/ bnh. Thời gian theo di: 6 tuần Môi trường nuôi cấy: Sử dụng môi trường Knudson C có bổ sung: 20 g/l sucrose; 0,5 g/l than hoạt tính; 150 ml/l nưc dừa; 100 ml dịch chiết khoai tây; 8 g/l agar và bổ sung chất điều hòa sinh trưởng theo bảng sau: Bảng 3: Nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật trong môi trường phát sinh rễ Chỉ tiêu theo di: Số mẫu sống sót, số mẫu tạo rễ, số rễ và chiều dài rễ tái sinh được trên mỗi chồi sau 2, 4, 6 tuần. 3. KẾT QUẢ 3.1. Khảo sát ảnh hưởng của tổ hợp BAP, Kinetin, GA 3 tới môi trường tái sinh chồi. Mẫu cây con in vitro được cắt thành từng đoạn có cha đốt thân được cấy vào môi trường khảo sát. Kết quả sau 6 tuần nuôi cấy thể hiện ở bảng 4. KC8 0,4 0,1 0,25 KC9 0,45 0,1 0,25 CĐHST Môi trường NAA ( ppm) BAP ( ppm) KR0 0 0 KR1 0 0,2 KR2 0,2 0 KR3 0,3 0,2 KR4 0,4 0,2 KR5 0,5 0,2 KR6 0,6 0,2 KR7 0,7 0,2 KR8 0,8 0,2 KR9 0,9 0,2 5 Bảng 4: Ảnh hưởng của môi trưởng nuôi cấy đến sự tái sinh chồi và hình thái chồi Môi trường Số mẫu cấy Số mẫu sống sót Số mẫu tái sinh Tỉ l mẫu tái sinh (%) Tổng số chồi tái sinh Số chồi / mẫu TS0 54 44 34 77,3 48 1,41 TS1 54 44 36 81,8 104 2,89 TS2 54 45 38 84,4 129 3,4 TS3 54 46 40 86,9 165 4,13 TS4 54 48 45 93,75 211 4,68 TS5 54 53 50 94,3 264 5,27 TS6 54 50 41 82 208 5,07 TS7 54 49 40 81,6 197 4,94 TS8 54 47 38 80,8 177 4,66 TS9 54 46 37 80,4 160 4,33 Kết quả thí nghiệm sau 6 tuần cho thấy nghiệm thc TS5 gồm Knudson C + 2,0 ppm BAP + 0,2 ppm Kinetin + 0,1 ppm GA 3 cho tỉ lệ tái sinh chồi cao nhất đạt 5,27 chồi/ mẫu cấy, chồi khỏe, phát triển tốt. Hình 1: Số chồi hình thành trên môi trường TS5 sau 2, 4, 6 tuần 3.2. Khảo st ảnh hưởng của tổ hợp BAP, NAA, B1 đến sự phát sinh hình thái và h số nhân chồi Kết quả thí nghiệm sau 6 tuần nuôi cấy thể hiện ở bảng 5. Bảng 5: Ảnh hưởng của môi trưởng nuôi cấy đến khả năng nhân nhanh chồi 6 Môi trường Số mẫu cấy Số mẫu sống sót Số mẫu tạo chồi Tỉ l mẫu tạo chồi (%) Tổng số chồi tạo thành Số chồi / mẫu Chiều cao chồi (cm) KC0 54 40 32 80 53 1,66 3,17 KC1 54 44 37 84,1 63 1,7 3,22 KC2 54 46 38 82,6 114 2,99 4,51 KC3 54 47 39 82,9 137 3,5 4,61 KC4 54 49 45 91,8 171 3,8 4,76 KC5 54 50 47 87,5 197 4,2 5,22 KC6 54 51 49 94 230 4,7 5,22 KC7 54 53 52 96,2 289 5,55 5,7 KC8 54 49 39 80 217 5,55 5,66 KC9 54 45 34 75,6 181 5,33 5,73 Sau 6 tuần nuôi cấy cho thấy môi trường nhân nhanh lan Gấm phù hợp nhất là môi trường Knudson C + 0,35 ppm BAP + 0,1ppm NAA + 0,25 ppm B1 vi tỉ lệ tái sinh chồi đạt 5,27 chồi/ mẫu cấy. Hình 2: Số chồi hnh thành trên môi trường KC7 sau 2, 4, 6 tuần 7 3.3. Khảo st ảnh hưởng của tổ hợp NAA, BAP tới sự pht sinh r Chồi sau 6 tuần nhân nhanh được tách ra và chuyển qua môi trường tái sinh rễ để tạo cây con in vitro hoàn chỉnh. Kết quả sau 6 tuần nuôi cấy thể hiện ở bảng 6. Bảng 6: Ảnh hưởng của môi trưởng nuôi cấy đến sự tái sinh rễ và chiều dài rễ Hình 3: Sự phát triển của rễ sau 6 tuần Kết quả cho thấy môi trường phù hợp nhất cho số lượng rễ ln nhất 4,5 rễ/ mẫu cấy và chiều dài rễ dài nhất đạt được 2,8 cm là môi trường Knudson C bổ sung 0,7 ppm NAA + 0,2 ppm BAP. Môi trường Số mẫu cấy Số mẫu sống sót Số mẫu tạo r Tỉ l mẫu tạo r (%) Tổng số r tạo thành Số r / mẫu Chiều dài r (cm) KR0 54 40 34 85 34 1 1,8 KR1 54 45 38 86,7 38 1 1,5 KR2 54 46 40 86,9 56 1,4 2 KR3 54 48 43 89,6 73 1,7 2 KR4 54 49 45 91,8 122 2,7 2,1 KR5 54 50 47 94 165 3,5 2,2 KR6 54 51 48 94,1 206 4,3 2,5 KR7 54 54 53 98,1 239 4,5 2,8 KR8 54 46 39 84,8 164 4,2 2,3 KR9 54 41 36 87,8 90 2,5 1,9 8 4. BÀN LUẬN “Vi nhân giống lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata” mục đích tái sinh chồi, nhân chồi và tạo rễ, sử dụng môi trường nền tối ưu Knudson C bổ sung 20 g/l sucrose + 0,5 g/l than hoạt tính + 150 ml/l nưc dừa + 100 ml dịch chiết khoai tây + 8 g/l agar. Kết quả đạt được có điểm giống và khác các nghiên cu đi trưc do sự phối hợp các chất chất điều hòa sinh trưởng thực vật khác nhau vi nồng độ khảo sát không giống nhau. Đối tượng nghiên cu cùng chi (Anoectochilus) nhưng khác loài cũng như hàm lượng nưc dừa, dịch chiết khoai tây không xác định góp phần tạo sự khác biệt. Ngoài ra thời gian nghiên cu hạn chế cũng ảnh hưởng đến kết quả sau cùng. Quá trình tái sinh chồi sử dụng môi trường Knudson C bổ sung 2 ppm BAP + 0,2 ppm Kinetin + 0, 1 ppm GA 3 cho kết quả tái sinh chồi tốt nhất bởi vì vi hàm lượng BAP thích hợp đã kích thích sự tổng hợp các Cytokinin nội sinh dẫn đến hàm lượng Cytokinin nội sinh cao nên kích thích sự phân chia phân hóa và gia tăng kích thưc của tế , mặt khác BAP còn có tác dụng kích thích tế bào huy động nguồn dinh dưỡng từ môi trường nhằm thúc đẩy quá trình tổng hợp protein và axit nucleic thúc đẩy tế bào phát sinh chồi Kinetin có hoạt tính tương tự như BAP nhưng khi hai Cytokinin BAP và Kinetin kết hợp vi nhau có vai trò điều phối trong việc cảm ng tạo chồi. GA 3 thuộc nhóm Giberelin kết hợp vi Cytokinin làm tăng hiệu quả tạo chồi. Kích thích sự tổng hợp amylase, protease và tăng hoạt tính của chúng, tăng quá trnh thủy phân các polymer thành monomer tạo điều kiện về nguyên liệu và năng lượng cho nảy mầm, phá vỡ sự ngủ nghỉ của hạt và chồi. Quá trình nhân nhanh chồi tốt nhất là môi trường khoáng Knudson C bổ sung 0,35 ppm BAP + 0,1 ppm NAA + 0,25 ppm B1. Vì BAP có khả năng kích thích tạo chồi bên, vượt qua ảnh hưởng ưu thế ngọn, sự cân bằng tỉ lệ giữa Auxin và Xytokinin có nghĩa quyết định trong quá trình phát sinh hình thái của mô nuôi cấy in vitro, trong thí nghiệm này tỉ lệ BAP cao hơn NAA đã kích thích sự xuất hiện và phát triển của chồi. NAA phối hợp vi BAP giúp sự tăng trưởng chồi non và khởi phát sự tạo mô phân sinh ngọn chồi từ nhu mô giúp chồi phát triển tốt, cân đối. B1 là vitamin căn bản cần thiết cho sự tăng trưởng của tất cả tế bào, xúc tác các quá trình biến dưỡng khác nhau, duy trì sự phân chia tế bào để mô có sc sinh trưởng tốt. Ghi nhận này cho thấy vi hàm lượng BAP, NAA nhỏ hơn nhưng hệ số nhân chồi vẫn tương đương vi kết quả của Phí Thị Cẩm Miện (2012). Đối vi môi trường tạo rễ sử dụng môi trường khoáng Knudson C bổ sung 0,7 ppm NAA + 0,2 ppm BAP cho kết quả tái sinh rễ tốt nhất. NAA là một Auxin có hoạt tính khá mạnh so vi các Auxin khác. Khi bổ sung vào môi trường nuôi cấy, NAA có tác dụng hoạt hóa sự dãn thành tế bào cũng như sự tổng hợp các chất tham gia cấu tạo nên chất nguyên sinh và thành tế bào, cảm ng cho sự tổng hợp chuỗi polyamine dẫn đến các tế bào vùng xuất hiện rễ để tạo nên mầm rễ, sau đó các mầm rễ này sẽ dài ra và chui ra khỏi vỏ tế bào và hình thành rễ. Tỉ lệ NAA cao hơn BAP kích thích sự ra rễ mà vẫn đảm bảo sự phát triển tốt của cây. Việc phối hợp Auxin và Cytokinin cho hệ số tạo rễ và chất lượng cây cao hơn hẳn chỉ sử dụng Auxin mà các công trnh trưc đó đã nghiên cu. 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1. Kết luận Từ kết quả nghiên cu đề tài chúng tôi rút ra một số kết luận như sau: Môi trường thích hợp cho sự tái sinh chồi sử dụng môi trường nền Knudson C + 2 ppm BAP + 0,2 ppm Kinetin + 0.1 ppm GA 3 . Kết quả đạt 94,3 % số lượng mẫu tái sinh. 9 Môi trường thích hợp nhất cho sự nhân chồi sử dụng môi trường nền Knudson C + 0,35 ppm BAP + 0,1 ppm NAA + 0,25 ppm B1. Kết quả đạt 96,2 % số lượng mẫu tái sinh vi 5,55 chồi/ mẫu. Các chồi có chiều cao từ 4 - 5cm được sử dụng để ra rễ in vitro. Tỷ lệ ra rễ là 98,1 % và số rễ/ mẫu ( 4,5 rễ/ mẫu) cao nhất trên môi trường có bổ sung 0,7 ppm NAA + 0,2 ppm BAP. 5.2. Kiến nghị Lặp lại thí nghiệm nhiều lần và tăng số nghiệm thc, nhằm mở rộng nghiên cu ảnh hưởng của một số yếu tố đến quá trình nhân giống lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata. Nghiên cu cụ thể tác động riêng lẻ của các thành phần như nưc dừa, dịch chiết khoai tây, ánh sáng, nhiệt độ, pH…lên sự tái sinh chồi, rễ của lan Gấm Anoectochilus fiormosanus Hayata. Tm môi trường phù hợp để tạo mô sẹo nhằm giảm thiểu thoái hóa giống. Tiến hành đem cây ra thuần hóa ở vườn ươm và theo di, đánh gia ảnh hưởng của các điều kiện ngoại cảnh lên sự sinh trưởng, phát triển của lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata. Lời cảm ơn Chúng tôi xin trân trọng cảm ơn Khoa Công Nghệ Sinh Học – Môi Trường, trường Đại học Lạc Hồng đã cho phép và giúp đỡ chúng tôi thực hiện nghiên cu này. TÀI LIỆU THAM KHẢO Walter Hood Fitch, (1844), "Curtis's botanical magazine", tập 70 tab. 4123 Trần Văn Bảo (1999), Kỹ thuật nuôi trồng phong lan, nhà xuất bản Trẻ. Nguyễn Đc Lượng, Lê Thị Thủy Tiên (2002), Công nghệ tế bào, Nhà xuất bản Đại học quốc gia tp HCM. Dương Công Kiên (2003),Nuôi cấy mô thực vật(tập 1,2,3), Nhà xuất bản Đại học quốcgia tp HCM. Guo Qiaosheng, Changlin (08/06/2012), “Agricultural technology in the production of medicinal plants”, Chinesemedicine, truy cập ngày 10 tháng 07 năm 2013, <http://jpkc.njau.edu.cn/Chinesemedicine/html/9/3.htm> Vưu Ngọc Dung (8/2010), Giáo trình công nghệ Nuôi cấy mô, Đại học Lạc Hồng, Biên Hòa, Đồng Nai. Nguyễn Ngọc Quỳnh, (25/10/2012), “Cây Lan Gấm (Anoectochilus formosanus Hayata), giá trị kinh tế và tiềm năng phát triển trên vùng đất Tây Nguyên”, Phòng Công nghệ Sinh học-Viện KHKT Nông nghiệp miền Nam, truy cập ngày 15 tháng 7 năm2013, <http://iasvn.org/homepage/Cay-Lan-Ga%CC%81m-(Anoectochilus-formosanus-Hayata),-gia- tri-kinh-te-va-tiem-nang-phat-trien-tren-vung-dat-Tay-Nguyen-1973.html> Fan Zinan (1997), “Anoectochilus cultured tissue culture studies”, Fujian Normal University, số 13, tr. 82-87 Phạm Cường (31/03/2007), “ Cymbidium( sym – BID – ee – um)”, Báo điện tử Hoa lan Việt Nam, truy cập ngày 12 tháng 7 năm 2013, <http://hoalanvietnam.org/a312/cymbidium-sym-bid- ee-um-tho-lan> Nguyễn Đc Thành, 2000, Nuôi cấy mô tế bào thực vật – Nghiên cu ng dụng, Nhà xuất bản Đại học Nông nghiệp I HàNội. 10 Giáo viên hưng dẫn Sinh viên thực hiện Vưu Ngọc Dung Lê Linh Dung Mai Hương Trà Nguyễn Thị Kiều Linh . khóa: Lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata, nhân giống invitro. 1. ĐẶT VẤN ĐỀ Sự phát triển của y học cổ truyền đặc biệt là Đông y Trung Quốc đã khiến cho lan Gấm, đặc biệt là loài lan Gấm Anoectochilus. loài lan Gấm. Tuy nhiên, ở Vi t Nam loài Anoectochilus formosanus - Loài có giá trị thương mại cao trên thế gii chưa được quan tâm nghiên cu. Đề tài Vi nhân giống lan gấm Anoectochilus formosanus. Đại học Lạc Hồng, Biên Hòa, Đồng Nai. Tóm tắt: Đề tài: Vi nhân giống lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata” khảo sát vai trò các chất điều hòa sinh trưởng đến sự tái sinh cây lan Gấm hoàn