Đề tài Kỹ thuật nhân giống lan Dendrobium

Nguyễn Xuân Linh, 1998 I.2 Đặc điểm về phân loại Orchidaceae là họ lớn thuộc đơn tử diệp, phân bố khắp nơi trên thế giới trong đất kháng nước hoặc sống bám trên các loại thảo mộc khác, t

A Mục đích đề tài

Từ lâu hoa, cây cảnh đã trở thành giá trị tinh thần không thể thiếu của con người Mọi người thích trồng hoa cây cảnh vừa trang trí cho đẹp, vừa để giải trí tinh thần Hoa lan được nhiều người yêu thích bởi vẻ đẹp kiêu kì, phức tạp và tinh vi, lại rất thích hợp với điều kiện khí hậu Việt Nam.

Dendrobium là giống hoa lan đặc sắc nhất từ màu sắc, dạng hoa cho đến giống loài Dendrobium cũng rất dễ trồng, siêng hoa và lâu tàn, do đó rất được ưu chuộng và được trồng phổ biến nhất nước ta hiện nay nhằm phục vụ cho nhu cầu cuộc sống Ngoài ra, lan

Dendrobium còn mang nhiều giá trị y học, thực phẩm cũng như giá trị kinh tế cao

Các nhà trồng lan không ngừng tìm kiếm các giống lan mới để làm phong phú thêm các chủng loại lan Dendrobium, người ta thường áp dụng nhiều phương pháp để nhân giống cho Dendrobium.

Đề tài: “ Kỹ thuật nhân giống lan Dendrobium” sẽ tìm hiểu rõ hơn về về lan cũng như các phương pháp nhân giống, kỹ thuật chăm sóc cũng như các giá trị mà nó đem lại.

1

B Tổng quan tài liệu

I Giới thiệu chung

Ngành Lan học được sáng lập bởi nhà triết gia người Hy Lạp Theophrastus (372- 287 trước Công Nguyên), sau đó là nhà thực vật học người Thụy Điển Linnaeus (1707-1778) Chính Theopharastus là người đầu tiên sử dụng từ Hy Lạp “Orchis” để chỉ nhóm Lan

Họ lan (Orchidaceae) là một họ thực vật có hoa, thuộc bộ Măng tây

(Asparagales), lớp thực vật một lá mầm Đây là một trong những họ lớn nhất của thực vật, có khoảng 25.000 loài khác nhau, được phân bố rộng lớn trên khắpthế giới trải dài từ xích đạo cho đến Bắc cực, từ đồng bằng đến vùng núi băng tuyết

Phong lan ở nước ta rất phong phú và đa dạng, có nhiều giống khác nhau

như : Cattaleya, Phalaenopsis, Oncidium, Mokara, Vanda, Dendrobium,…Hoa

của chúng đều rất đẹp và mang nhiều màu sắc khác nhau Các nhà trồng lan không ngừng tìm kiếm các giống lan mới Có 2 cách để tạo giống lan mới:

hóa Phương pháp này gặp nhiều rủi ro do điều kiện môi trường không thuận lợi cho cây phát triển

tốt vượt trội của bố mẹ, tuy nhiên khi hai cây lan lai với nhau đạt kết quả và tạo trái cần phải kết hợp với phương pháp gieo hạt trong ống nghiệm để hạt lan nảy mầm dễ dàng, có như vật mới có thể kiểm tra kết quả của việc lai hai cây lan

Lan thường được dùng trang trí, trưng bày, làm đẹp, dùng trong các buổi lễ, hoặc dùng tách chiết phục vụ cho ngành công nghiệp thực phẩm, lan cũng mang nhiều giá trị về y học và thực phẩm Hiện nay, phong lan được đưa vào kinh doanh cho nguồn thu nhập rất lớn

I.1 Đặc điểm hình thái:

I.1.1 Cơ quan dinh dưỡng:

thiết cho sự sinh trưởng và phát triển của lan Giả hành tuy là thân nhung lại chứa diệp lục, là bộ phận dự trữ chất dinh dưỡng cho sự phát triển của giả hành mới, đây cũng là cơ quan dự trữ nước

thân có đốt, trên mỗi đột mọc một nhánh lá hoặc lá bao Thân là cơ quan

dự trữ nước và chất dinh dưỡng, mẫm hoa và mầm lá đều mọc từ phần góc của bộ phận thân rễ Chỉ có loại đơn thân và một số laoif giồng

Dendrrobium và Epidendrum vừa có hành giả vừa có thân Các loài lan

thông thường không có cơ quan dự trữ nước và chất dinh dưỡng

dài, số lượng và hình dạng lá khác nhau tùy chủng loại lan khác nhau Lá

có thể mọc đối xứng qua gân chính hay không, lá sát nhau ở gốc hay xếp cách có bẹ úp lên nhau, chia đốt đều đặn, có khi thoái hóa thành vảy hay phình lên, mọng nước, hình dạng rất khác nhau

dưỡng mới, trên căn hành có nhiều mắt sống, chết hoặc hưu niên Mắt lá nơi hình thành cũng mang rất nhiều rễ để nuôi sống cây lan

rễ mọc thẳng từ thân và thường xen kẽ với lá Rễ trên không của lan phụ sinh có trục chính bao quanh bởi mô không chặt, giống bịt biển bao quanh gọi là mạc Mạc có thể hấp thụ hơi nước của không khí, cũng như tích trữ nước và sương đọng

( Nguyễn Xuân Vinh, 1998)

I.1.2 Cơ quan sinh sản:

hai bên Bao hoa dạng cánh, rời nhau, xếp thành 2 vòng: 3 mảnh vòng ngoài (đài hoa) và 2 mảnh vòng trong (cánh hoa) bé hơn mảnh thứ 3 ở vòng trong Mảnh này có hình dạng và màu sắc khác hẳn, gọi là cánh môi.Cánh môi của các loài cũng rất phong phú, có loài cánh môi rất to, cótua, có gờ, nhưng cánh môi một số loài rất nhỏ, trơn láng hay nhăn,

thường có cựa, có móc, có túi ở đằng sau

Do nhẹ nên hạt dễ phát tán nhờ gió.ở nhiều loài, trong quả có nhữn lông

3

hút nước dùng để phát tán hạt đi Phôi trong hạt phát triển yếu, không phân hóa thành cơ quan, hạt muốn nảy mầm cần có nấm cộng sinh.

mạng lưới nhỏ, xốp Hạt lan phải trải qua 2-18 tháng mới chín, phần lớn hạt thường chết vì khó gặp nấm cộng sinh cần thiết để nảy mầm do đó hạt nhiều, theo gió bay xa nhưng hạt nảy mầm thành cây thường hiếm Chỉ ở trong những rừng già, ẩm ướt, vùng nhiệt đới mới đủ điều kiện để cho hạt lan nảy mầm

( Nguyễn Xuân Linh, 1998)

I.2 Đặc điểm về phân loại

Orchidaceae là họ lớn thuộc đơn tử diệp, phân bố khắp nơi trên thế giới

trong đất kháng nước

hoặc sống bám trên các loại thảo mộc khác, thu hút chất dinh dưỡng và nước từ môi trường xung quanh

ngay cả dưới mặt đất (phát triển dưới bề mặt của môi trường cấy trồng)Cây lan chia làm 2 nhóm:

nhóm phụ:

- Lá mọc đối xứng: Vanda, Aerides, Phalaenopsis

- Lá dẹp thẳng hay tròn: Papilionanthe, Luisia

- Nhóm ra hoa phía trên: Cymbidium,Dendrobium, Oncidium

- Nhóm ra hoa ở đỉnh: Cattaleya, Laelia, Epidendrum

Centropetatum, Phachyphllum, Dichaea…

( Nguyễn Vũ Thị Hoàng Uyên,2005)

II Giới thiệu về Dendrobium:

II.1 Nguồn gốc

Lan Dendrobium được đặt tên vào năm 1799, có nguồn gốc của chữ Hy Lạp

Dendro có nghĩa là cây gỗ, bio là sống, tất cả các loại của Dendrobium đầu là phụ sinh sống bám trên cây gỗ Ở Việt nam, lan Dendrobium được gọi là Lan Hoàng

Thảo hay Đăng Lan

II.2 Phân bố

Dendrobium rất phong phú về chủng loại, lớn thứ hai trong họ lan với khoảng

1.600 loài phân bố thuộc châu Á nhiệt đới, tập trung nhiều nhất ở Đông Nam Á và

Úc Châu

Dendrobium có điều kiện sống đa dạng, nhiều loài chỉ sống ở vùng lạnh, có

loài vùng nóng, có loài trung gian, có loài thích nghi ở bất cứ điều kiện khí hậu nào

II.3 Phân loại thực vật

Hiện nay có nhiều cách phân loại Dendrobium khác nhau, chưa thống nhất và

ngay cả các nhà khoa học gia cũng còn nhiều ý kiến trái ngược Ví dụ như theo

cuốn "Dendrobium and Its Relatives"của Bill Lavarack, Wayne Harris và Geoff

Stocker thì Dendrobium chia ra tới 34 nhóm và theo Internet Orchid Species có tới

40 nhóm Theo phân loại của Phạm Hoàng Hộ, Dendrobium phân thành các loại như sau: Bobidium, Callista, Aporum, Strongyle, Gastridium, Conostalix,

Pedilonum, Dendrobium, Breviflores, Distichophyllum, Stachybium.( Phạm Hoàng

Hộ)

Một cách phân loại nữa là dựa vào những điểm tương đồng của những giống

lan cũng như cách sống, mùa nghỉ, mùa hoa Đây cũng là cách phân loại dễ nhớ nên được nhiều người sử dụng so với các cách phân loại khác (Nguyễn Duy, 2013):

1 Phalaenanthe:

5

Nhóm này lá thường xanh trong nhiều năm, giả hành ốm, cao (trong từng giống có những biến thể với giả hành thấp), phát hoa mọc ra trên các mắt ngủ ở ngọn Mùa hoa thường là một lần vào mùa Thu hay cũng có thể hai lần trong năm vào mùa Xuân và Thu Những cây lan trong nhóm có cánh hoa tròn trịa hay hơi kéo dài, nổi

bật với các giống như Den affine, Den bigibbum(phalaenopsis), Den Dicuphum

và Den williamsianum Nhóm lan này phát triển tốt trong môi trường quanh năm

ấm áp, với ban đêm không dưới 60°F (16°C) Cần nhiều nước và phân bón trong mùa tăng trưởng, ánh sáng trung bình Lan có một mùa nghỉ ngắn (3 đến 4 tuần) khô và mát với nhiệt độ có thể chịu được khoảng 55°F (12°C) và ra hoa sau đó khi nhiệt độ ấm trở lại

Den bigibbum var compactum

Ảnh: www.flickr.com

Den antennatum Ảnh: www.flickr.com

2 Spatulata:

Nhóm lan này có cánh hoa dài và xoắn như sừng con linh dương nên trong Anh Ngữ còn được gọi là "Antelope Type" Lá xanh quanh năm với giả hành to cao mạnh mẽ Ra hoa một lượt với nhiều cành hoa hay có thể ra hoa liên tiếp trong mùa

Hè ấm áp, hoa lâu tàn Có các giống như Den antennatum, Den canaliculatum, Den discolor, Den gouldii, Den johannis, Den lineale(veratrifolium), Den

stratiotes, Den streblocerasvà Den taurinum Những cây lan trong nhóm này phát

triển tốt trong môi trường có khí hậu ấm áp quanh năm 60-65°F (15-18°C) vào ban đêm và 75-90°F (24-32°C) vào ban ngày Có thể chịu nóng cao hơn nhưng phải

nhưng phải có môi trường khô ráo Ánh sáng từ trung bình đến mạnh Các giống lan lai từ nhóm lan này thường được giới chơi lan tại Việt Nam gọi là Dendro Nắng

do cây khỏe mạnh to lớn và có thể chịu được nắng cao từ 80% đến 100% nắng

3 Dendrobium:

Nhóm lan này nổi bật với đa số đều có giả hành mọc rũ xuống với lá mọc dọc hai bên Lá sẽ rụng khi thời tiết bắt đầu lạnh và khô Nhóm lan này cần một mùa nghỉ lạnh và khô ráo Vào cuối mùa Đông cho đến đầu mùa Xuân hoa bắt đầu mọc từ 1 đến 5 hoa tại các nách lá Trong nhóm này chia ra làm hai loại dựa vào khả năng chịu lạnh như sau

Nhóm D1:Khả năng chịu được lạnh cao, gồm các cây như Den chrysanthum

(Hoàng thảo hoa vàng), Den friedricksianum, Den nobile (Thạch hộc, Hoàng thảo dẹt) và Den wardianum (Hoàng thảo ngũ tinh) Lan cần tưới nhiều nước và phân

bón khi cây bắt đầu phát triển mạnh cho đến khi các lá ở ngọn ngừng phát triển

Lúc này lan cần nhiều ánh sáng hơn, giảm nước mạnh hoặc ngưng hẳn không tưới nước, không bón phân, đêm có thể chịu lạnh 40-50°F (4-10°C) Vào thời gian nghỉ này nói vui một chút là "quên chúng đi"

Den nobile

Ảnh: Hà Khắc Hiếu

Den falconeri Ảnh: Bùi Xuân Đáng

Nhóm D2:Những cây trong nhóm này chịu lạnh kém hơn nhóm 1, gồm có những

cây như Den anosmum(Giã hạc, Phi điệp), Den falconeri(Hoàng thảo trúc mành), Den fimbriatum(Hoàng thảo long nhãn), Den findlayanum(Hoàng thảo chuỗi ngọc), Den heterocarpum(Hoàng thảo lụa vàng), Den loddigesii(Hoàng thảo nghệ

7

tâm), Den moniliforme, Den parishii(Hoàng thảo tím hồng), Den

pendulum(Hoàng thảo u lồi), Den primulinum(Long tu) và Den transparens(Phi

điệp trắng tím) Cách nuôi trồng tương tự như nhóm một, nhưng vào mùa Đông banđêm không nên để lạnh dưới 55°F (12°C) và gần như không tưới nước vào thời gian này Các cây lan trong nhóm này không chịu được lạnh nhiều như nhóm 1

4 Callista:

Những cây thuộc nhóm này có giả hành cứng cáp, có từ 1-6 lá mọc phía trên đỉnh giả hành Hoa mọc thành chùm rũ xuống Những giống nổi bật trong nhóm này

gồm có Den amabile(Thuỷ tiên tím), Den chrysotoxum(Hoàng lạp), Den

densiflorum(Thuỷ tiên vàng), Den farmeri(Thuỷ tiên trắng), Den griffithianum, Den lindleyi(Vẩy cá, Vẩy rồng), Den thyrsiflorum(Thuỷ tiên), Den

sulcatum(Thủy tiên dẹt)… Nhóm lan này cần có mức ánh sáng cũng như tưới nước

và phân bón vừa phải vào mùa Hè ấm áp, nhiệt độ vào khoảng 60-90°F (16-32°C)

Và giữ mát vào mùa Đông với khoảng 50°F (10°C) vào ban đêm, tưới nước vừa phải đủ để giữ cho giả hành không bị teo tóp và không cần phân bón vào thời gian này

Den thyrsiflorum

Ảnh: Nguyễn Thị Khuyên

Den spectabile Ảnh: www.flickr.com

5 Latouria:

thẳng với các hoa thường có màu chủ đạo từ trắng đến vàng hơi xanh và hoa trông

có vẻ hơi quái dị Vài giống lan tiêu biểu trong nhóm này là Den alexandrae, Den atroviolaceum, Den johnsoniae, Den macrophyllumvà Den spectabile Phát triển

tốt trong môi trường giống như nhóm Spatulata tuy nhiên chỉ cần ánh sáng vừa đủ

và cần khô ráo để lan nghỉ ngơi vào mùa Đông

6 Formosae:

Bao gồm những cây có giả hành mọc thẳng với một lớp lông đen trên thân và

lá có thể nhìn thấy bằng mắt thường Hoa thường có màu trắng giữa hoa có màu từ vàng đến đỏ hoặc xanh lá

Thường có từ 2-3 hoa mọc tại các nách

lá gần ngọn và có thể to đến 4 inches (10 cm) Hoa lâu tàn Những cây tiêu

biểu như Den bellatulum(Bạch hỏa hoàng), Den dearii, Den draconis(Nhất điểm hồng), Den formosum(Bạch nhạn), Den infundibulum(Hoàng thảo

Bù Đăng), Den lowii, Den

margaritaceum(Bạch hoàng), Den sanderaevà Den schuetzii…

Nhóm lan này phát triển tốt trong môi trường khí hậu mát với khoảng 50-60°F 16°C) vào ban đêm và không quá 85°F (30°C) vào ban ngày Tưới nước và phân bón hợp lý khi cây phát triển mạnh và cần để khô nhẹ khi cây ngừng tăng trưởng Giữ ẩm nhẹ cho đến khi cây bắt đầu phát triển trở lại

(10-7 Nhóm cuối cùng bao gồm những nhóm nhỏ với những cây đặc trưng sau: Den

linguiforme, Den tetragonum, Den gracillimumvà Den cuthbertsonii

(sophronitis)

Trồng tốt tùy theo môi trường sống của từng cây tuy nhiên vẫn có điểm chung là cần một nhiệt độ từ trung bình đến ấm áp với nhiệt độ ban đêm vào khoảng 55-60°F (12-16°C) Giữ khô vào mùa Đông hoặc khi thấy cây ngừng tăng trưởng

Den draconis

Ảnh: Lê Trọng Châu

9

Den linguiforme

Ảnh: www.flickr.com

Den tetragonum Ảnh: www.flickr.com

Tuy nhiên như đã trình bầy ở trên, đây là cách phân loại dễ nhớ nên được nhiều người sử dụng và các cây lan trong cùng một nhóm thường được các nhà lai giống lan tuyển chọn và lai tạo tạo với nhau để cho ra các giống lan lai đẹp đẽ nhưng vẫn mang đặc trưng nổi bật

Den gracillimum

Ảnh: www.flickr.com

Den cuthbertsonii Ảnh: www.flickr.com

II.4 Đặc điểm hình thái

II.4.1 Cơ quan sinh dưỡng

bò dài hay ngắn, mập hay mảnh mai

đều giúp đưa cơ thể bò đi xa hay

chụm lại thành bụi dày Rễ vừa lấy

nước, muối khoáng, chất dinh dưỡng

trên vỏ cây gỗ, chúng được bao bởi

một lớp mô hút ẩm dày, bao gồm

những lớp tế bào chết chứa đầy

không khí, do đó ánh lên màu xám

bạc Hệ rễ còn làm nhiệm vụ bám

chặt vào giá thể để giữ cây khỏi gió

cuốn đi Hệ rễ phát triền nhiều hay ít

phụ thuộc chung vào cơ thể

Ở loài hoại sinh, rễ có dạng búi

nhỏ dày đặc các vòi hút ngắn hút chất

dinh dưỡng từ xác thực vật Nhiều loại lại có hệ rễ đan thành búi chằng chịt, là nơi gom mùn vỏ cây để làm nguồn dự trữ chất dinh dưỡng

hành Giả hành tuy là thân nhưng lại chứa diệp lục, dữ trữ nước và chất dinh

dưỡng cần thiết cho sự phát triển của giả hành mới Cấu tạo giả hành gồm nhiều

mô mềm chứa đầy dịch nhầy, phía ngoài có lớp biểu bì với vách tế bào dày, nhẵn bong bảo vệ để tránh sự mất nước do ánh nắng mặt trời Đa số giả hành có màu xanh bong, nên cùng với lá có nhiệm vụ quang hợp

thường là màu xanh bóng, đôi khi hai mặt lá có màu sắc khác nhau, mặt trên khảm thêm nhiều màu sặc sỡ

II.4.2 Cơ quan sinh sản

mọc trên các giả hành mới mà có thể mọc trên giả hành cũ Bên trong hoa có cột nhị nhụy nằm chính giữa hoa, mang phần đực ở phía trên và phần cái ở mặt trước Cột này dài, thẳng hay cong về phía trước

Nhị gồm 2 phần: bao phấn và hốc phấn Bao phấn nằm ở cột nhị nhụy, hốc phấnlõm lại mang khối phấn và thường song song với bao phấn Khối phấn gồm toàn bộhạt phấn dính lại với nhau, có tinh bột, sáp hay chất sừng nên rất cứng, do đó hoa

Dendrobium là hoa lâu tàn, trung bình 1-2 tháng.

11

Hình: Tổng quan về lan Dendrobium

Nguồn: Nguyễn Vũ Thị Hoàng Uyên

• Quả: quả nang nở ra theo 3-6 đường nứt dọc Khi chín quả nở ra và mảnh vỏ còn dính lại với nhau ở phía đỉnh và phía gốc Một số loài quả chỉ mở theo 1-2 khía dọc, thậm chí không nứt ra, hạt chỉ ra khỏi vỏ này mục nát.

khí Hạt rất nhiều và nhỏ bé, trọng lượng toàn bộ hạt trong một quả nặng chỉ bằng 1/10 -1/100 mg

C Các kỹ thuật nhân giống Lan Dendrobium

Với sự phát triển của công nghệ nhân giống, ngày nay có rất nhiều cách để nhân

giống Lan Gồm cả phương pháp hữu tính và vô tính.

- Phương pháp hữu tính: nuôi trồng bằng hạt có hỗ trợ kỹ thuật.

- Phương pháp vô tính: phương pháp tách bụi, chiết cành, cắt đoạn thân,

phương pháp cắt từng đoạn thân, hay cao hơn là kỹ thuật nhân giống bằng nuôi cấy đỉnh sinh trưởng

III Phương pháp nhân giống hữu tính:

III.1 Phương pháp gieo hạt

III.1.1Sự thụ phấn:

Trong tự nhiên sự thụ phấn của Lan do côn trùng thực hiện Cấu trúc của hoaLan cũng để thích nghi với sự thụ phấn nhờ côn trùng

Có hai cách thụ phấn:

- Tự thụ phấn: Khi phấn hoa của bông hoa này rơi được vào đầu nuốm của

chính hoa đấy Điều này hiếm khi xảy ra vì do cấu trúc của bộ phân sinh dục đực và cái ở hoa Lan

- Thụ phấn chéo: Khi phấn của hoa này được để vào nuốm của hoa khác cùng

loài( thường do côn trùng thực hiện), hay khác loài( phương pháp lai do con người thực hiện)

- Thụ phấn nhờ côn trùng Do con người thực hiện

13

Kỹ thuật thụ phấn được thực hiện khá đơn giản: Chúng ta dùng một cái tăm gỗ

để cấy phấn hoa Thời gian tốt nhất để thụ phấn hoa lan là khi bông hoa nở hoàntoàn Đưa đầu tăm vào trong hoa và lấy nhị hoa ra Đôi khi nhị hoa không dính vào que tăm Trong trường hợp này, nên dùng một cái kẹp (nhíp) để lấy ra Bước kế tiếp lấy cái nắp bao phấn ra và đặt phấn hoa vào trong nhuỵ cái của bông hoa khác, càng gần ống nhuỵ (stigma channel) càng tốt

III.1.2Quả Lan:

Nếu sự thụ phấn có kết quả, thì có thể ngay trong

ngày hay sang ngày hôm sau, các phiến hoa xụ lại nhưng

không rụng Và để tránh sự thụ phấn khác do côn trùng

người ta dùng bao nilon trùm hoa lại, nhưng không buộc

kín miệng vì như vậy sẽ bị hư quả do sự bí nước

Khoảng thời gian từ khi lấy phấn hoa cho đến khi kết

trái cũng khá dài, với lan Dendrobium Nobile là khoảng 75-80 ngày (Nguyễn Nam

Sách, 2007)

Sau khi thụ phấn, bầu noãn từ từ trương phù to ra thành trái Mỗi trái có thể chứ hàng ngàn hay cả hàng triệu hột Khi trái từ màu lục chuyển sang màu vàng lụcthì nên hái trái

III.1.3Thu hạt và gieo hạt

Các hạt lan trong quả lan sẽ trưởng thành trong khoảng thời gian 3/4 đến- 4/5

từ khi thụ phấn đến khi chín Thí dụ từ khi thụ phấn cho đến khi quả lan chín là 200ngày, tức là ta có thể gieo hạt đã được từ 150 ngày trở đi Nếu cần gieo hạt quả xanh trong ống nghiệm, có thể thu hoạch chúng trong thời gian này Điều quan trọng là quả lan xanh phải kín, không có lỗ hoặc các nấm mốc có thể xâm nhập vàocác hạt lan, nói khác đi là không bị nhiễm (nấm mốc, vi khuẩn,…) Muốn gieo hạt chín khô, ta phải chờ cho đến khi quả lan nứt ra và thu hoạch chúng Thời gian từ

khi thụ phấn cho đến khi thu hoạch qủa lan của một số loài như: Dendrobium là 12

Hạt lan rất nhỏ giống như hạt bụi và không có dự trữ chất dinh dưỡng cung cấp cho hạt trong giai đoạn đầu tiên của cuộc sống Trong thiên nhiên muốn hạt Lannảy mầm thì hạt Lan phải được nhiễm một loại nấm kí sinh các nấm này cung cấp đường và chất dinh dưỡng cần thiết cho các cây con cho đến khi cây này đủ sức tự sản xuất ra "thức ăn" Người ta đã khám phá ra một số loài nấm giúp nảy mầm ở

hạt Lan, mỗi loài chỉ giúp này mầm một giống Lan mà thôi VD: Rhizoctonia repens giúp nảy mầm ở Cattleya, Laelia, Angraecum, Cypripedium

(Paphiopedilum).Rhizoctonia mucoroides giúp nẩy mầm ở Vanda,

Phalaenopsis.Rhizoctonia lanugiosa giúp cho hột nẩy mầm ở Oncidium,

Odontoglossum và Miltonoa.

III.2 Kỹ thuật gieo hạt trong ống nghiệm (invitro)

Trong phòng thí nghiệm Lan Dendrobium được nhân giống bằng phương pháp gieo hạt invitro Trong thiên nhiên hạt Lan nảy mầm và phát triển thành cây trưởng thành gặp rất nhiều khó khăn Năm 1922, Knudson ở Mỹ, thành công trong việc thay thế nấm bằng đường ở môi trường thạch để gieo hạt Phương pháp này có nhiều ưu điểm như:

- Kết hợp với kỹ thuật lai giống tạo nhiều giống Lan mới cung cấp cho thị

III.2.2Quy trình tiến hành:

- Sử dụng chai thủy tinh 100ml và 500ml để nuôi cấy

- Tất cả môi trường được hấp khử trùng ở 1atm, 1210C trong 20 phút

- Nhiệt độ phòng nuôi 24-280C

- Cường độ chiếu sáng: 2000-3000lux

- Thời gian chiếu sáng : 8 giờ/ngày

- Ẩm độ trung bình: 60-70%

Khử trùng quả

III.2.2.3 Khử trùng quả Lan:

Việc khử trùng quả Lan có thể thực hiện theo hai phương pháp:

- Mẫu lấy từ thiên nhiên

- Rửa mẫu bằng nước chảy khoảng 10 phút

- Rửa mẫu bằng xà phòng pha loãng

- Rửa lại nhiều lần bằng nước cất

Chuyển mẫu vào tủ cấy vô trùng

- Ngâm mẫu trong Ca(OCl)2 và

thường xuyên lắc mẫu

- Rửa lại mẫu nhiều lần bằng

nước cất vô trùng khoảng 3-4

lần cho thật sạch

- Đặt quả lan vào đĩa petri

- Nhúng vào cồn 900 và hơ nhanhqua ngọn lửa

- Nhanh chóng đặt quả lan vào

đĩa petri và đậy nắp lại

- Sau đó quả lan được cắt gọt 2 đầu, dùng dao mỏ dọc quả, tách làm 2

- Dùng dao giữ phần vỏ quả, dùng kẹp lấy hết hột ra đĩa petri

- Hạt được lấy ra đem gieo vào môi trường

đốt cồn 1 lần, tye lê sống, không nhiễm là như nhau Tuy nhiên, dùng phươngpháp đốt cồn thì hạt gieo phục hồi và nảy mầm nhanh hơn Ngoài ra, phươngpháp này còn tiết kiệm nhiều thời gian khử trùng, thao tác đơn giản, kinh tếhơn

- Sau 4 tuần, hạt nảy mầm được chuyển sang trồng trong môi trường

Knudson’C có bổ sung 2ppm kích tố BA (cytokinin), protocorm được tạo ra nhiều, phát triển nhanh, sự tăng trưởng protocorm đồng đều nhau, có nhiều lá mầm khỏe, màu xanh tươi

- 4 tuần tiếp theo, protocorm được tách ra: một cụm chồi ban đầu được

tách làm 3, đem cấy vào môi trường Knudson’C có bổ sung 2ppm BA

và 2ppm IAA Kết quả sau 2 tuần cấy, xuất hiện các protocorm mới Đến tuần thứ 3, các protocorm bật chồi, sang tuần thứ 4 các protocorm phát triển mạnh, chồi mới xanh mướt, một số chồi có rễ nhỏ màu trắng, dài từ 0,1-0,3 cm, từ một cụm chồi nhỏ cho ra 4 chồi con cao 3-

- Các cây con trong sau khi đã được nhân lên, có chiều cao 3-4 cm, 2-3

lá đưa vào môi trường ra rễ là môi trường Knudson’C bổ sung 2ppm NAA Sau 4 tuần, cây con có nhiều lá, rễ dài, mập, xanh

- Cây con có nhiều lá, khỏe mạnh sẽ được đưa vào giai đoạn chuyển tiếp

trước khi ra vườn ươm, đây là giai đoạn tạo cây con hoàn chỉnh đủ thân, lá , rễ chuẩn bị đưa ra vườn ươm Các thể chồi được đưa sang môi trường tạo rễ (chứa nhiều auxin) Điều kiện nuôi cấy gần như giống với môi trường bên ngoài Giai đoạn này thường mất khoảng 4-5tháng để chồi sang cây con

- Khi cây cao 4-5 cm, lá và bộ rễ phát triển đầy đủ có thể chuyển sang

vườn ươm Cây con lấy ra khỏi ống nghiệm, rửa sạch agar và đặt vào chậu có bóng râm, độ ẩm cao, cường độ chiếu sáng thấp,… để cây thích nghi từ từ Sau khoảng 2 tuần cây đã quen với điều kiện bên ngoài, lúc đó có thể tăng cường chiếu sáng và hạ độ ẩm

19

IV Phương pháp nhân giống vô tính:

IV.1 Phương pháp tách chiết cây con từ cây mẹ

Phương pháp này thường dùng cho quy mô nhỏ, các kỹ thuật của các phương

pháp như trồng từ đoạn thân, đoạn thân nhỏ… cũng tương tự

Dendrobium là giống lan đa thân, sau khi trồng vài năm chúng sinh sôi nẩy nở ra nhiều thân khác, làm chật kín cả chậu thì phải tách chiết ra để trồng lại Tất nhiên khi tách chiết cây lan bao giờ cũng bị ảnh hưởng, một thời gian sau đó chúng sẽ ra thêm rễ mới, hồi phục dần, rồi phát triển tươi tốt và cho bôngbình thường

Các thao tác tách cây con khá đơn giản:

- Trước khi tách cây lan ra khỏi chậu phải tưới đẫm nước ( hoặc ngâm cả

chậu vào trong nước), chờ vài phút cho rễ mềm ra, có như vậy mới dễ bóc, tách, cây lan ra khỏi chậu Khi rễ đã mềm, đặt chậu nằm ngang, nắm chặt phần gốc kéo mạnh để cả bụi lan tụt ra khỏi chậu, nếu chặt quá nên dùng mũi dao sắc, nhọn khoanh nhẹ một vòng xung quanh mép chậu để cắt đứt những rễ bám chắc vào thành chậu, nếu vẫn không rút ra được thì phải đập bỏ chậu cũ để lấy cây

- Sau khi đã lấy bụi lan ra khỏi chậu, tỉa, rửa sạch gốc rễ để loại bỏ chất

trồng cũ đã hư mục, cắt bỏ rễ quá già, rễ bị hư thối, chỉ giữ lại những rễ còn tốt

- Ở dưới gốc của mỗi thân cây lan bao giờ cũng có vài mắt mầm ngủ, dùng dao sắc hơ qua ngọn lửa hoặc lau bằng cồn 90°, cắt tách mỗi bụi ra thành

nhiều đơn vị, mỗi đơn vị có 2 – 3 thân, dùng vôi bôi vào chỗ vết cắt để tránh vết cắt bị hư thối

- Chất để trồng lan có nhiều loại, nhưng dễ kiếm và tiện dụng nhất vẫn là

dùng than gỗ, ngâm trong nước khoảng một ngày đêm, sau khi ngâm vớt

ra cho ráo nước, rồi đập nhỏ sao cho cục than có kích thước khoảng năm,

ba phân là vừa Cục to xếp xuống phía dưới, cục nhỏ để ở phía trên Nhớ phải để mặt trên của lớp than cách mép chậu khoảng một, hai phân

- Dùng cây kẽm lớn cỡ 2mm, làm cây ty, uốn gắn cây ty vào mép chậu Sau

đó đặt cây lan lên mặt lớp than rồi cột thân cây lan vào cây ty sao cho chắc chắn để cây lan không bị đổ ngã khi chúng chưa kịp ra rễ để bám chắc vào lớp than và mép chậu Khi trồng nhớ đặc cây lan ở vị trí gần mép chậu và xoay hướng mọc của cây lan con vào giữa chậu để sau này cây lan mọc dần về phía giữa chậu, làm cho bụi lan dần cân đối trong chậu để giữ ẩm cho chất trồng(than) nên phủ một lớp mỏng xơ dừa hay dớn sợi lên phía trên lớp than

- Sau khi trồng xong đưa chậu lan vào chỗ mát, có độ ẩm cao, tiếp tục tưới

nước, tưới phân hay phun phân bón lá như Atonic, Bayfolan, Grow

more( loại 30 – 10 – 10) và thuốc kích thích ra rễ Rootone để cây phát triển bộ rễ, thân lá Khi rễ non phát triển thì đưa dần chậu lan ra chỗ có ánh sáng rồi đưa lên giàn

Dendrobium có thể nhân giống bằng cách cắt từng đoạn thân mang khoảng 2 mắt một, nhúng 2 đầu đoạn cắt, vào parafin hoặc bôi son, vôi… Đặt các đoạn nằm ngang, trên mặt cát ẩm, che lại bởi một lồng kính, ba ngày phun một lần dung dịch urê, 1 muỗng càphê/4 lít nước, cộng thêm cả sinh tố B1, với một nồng

độ 10 phần triệu (10 ppm) trong thời gian 2 tuần liên tục Sau đó chỉ phun mỗi dung dịch nửa muỗng cà-phê trong 4 lít + sinh tố B1 cho đến khi cây mọc các cây con Phun hàng tuần trong các tuần kế tiếp

IV.2 Nuôi cấy mô

Nhân giống in vitro hay nuôi cấy mô đều là thuật ngữ mô tả phương thức nuôi cấy các bộ phận thực vật trong ống nghiệm có chứa môi trường xác định ở điều kiện vô trùng Kĩ thuật in vitro dựa trên nguyên lí là tế bào thực vật có tính toàn thể, nghĩa là từ một mô, một cơ quan hoặc một tế bào của bất kì bộ phận nào của cây đều có thể phát triển thành một cây hoàn chỉnh nếu được nuôi trong môi trường thích hợp

IV.2.1Điều kiện nuôi cấy

- Đảm bảo vô trùng môi trường cấy và đảm bảo cho mẫu nuôi cấy được hoàn toàn vô trùng

IV.2.2Yêu cầu cơ bản của kĩ thuật nuôi cấy

suốt quá trình nuôi cấy mô

thực vật và từng giai đoạn nuôi cấy

IV.2.3Các thành phần cơ bản của môi trường nuôi cấy (đối với môi trường rắn)

ion, tốt nhất là nước cất hai lần từ các máy cất nước hoàn toàn bằng thủy tinh

không phải do quang hợp của mô cây tạo nên; đường sử dụng phổ biển là

v) glucose (2% w/v)

21

- Các muối khoáng đa lượng: nuôi cấy mô thực vật đòi hỏi một lượng nhất định các nguyên tố đa lượng như N, P, K, Ca, Mg, S, Fe,

Chúng tham gia vào các quá trình sinh hóa trong tế bào, tham gia vào trung tâm hoạt tính của enzyme và viatmin, tăng tính chống chịu của thựcvật với các điều kiện môi trường bất lợi Các vi lượng thông dụng là Mn,

B, Zn, Cu, Co, I, nồng độ sử dụng trong môi trường rất thấp

các nồng độ và tổ hợp các chất điều hòa sinh trưởng phù hợp Các chất điều hòa sinh trưởng thường là IAA, NAA, 2,4D, Kinetin, BAP, IBA…

tùy hãng chế tạo

IV.2.4 Nhiệt độ, ánh sáng và pH ảnh hưởng đến quá trình cấy:

nhau

yếu tố ảnh hưởng bao gồm: cường độ, chu kì, thành phần quang phổ ánh sáng Cường độ ánh sáng từ: 1000-2500 lux được dùng phổ biến cũng khác nhau

trao đổi các chất trong tế bào Để điều chỉnh pH môi trường có thể dùng dung dịch 10% hoặc 1N NaOH hoặc 1N HCl

IV.2.5 Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng

dài 10-15 cm vừa mới nhú lá thường được dùng làm nguyên liệu cho việcnuôi cấy đỉnh sinh trưởng

khởi lá u lên và cuối cùng tạo thành protocorm Còn đối với Cattleya khi nuôi cấy đỉnh sinh trưởng thường bị hóa nâu Vì lý do đó mà đỉnh sinh trưởng thường được cắt trong môi trường lỏng hoặc nước cất vô trùng và được nuôi trong môi trường không có agar, nhờ đó các chất nâu dễ

khuyếch tán vào môi trường Sự thành lập protocorm ở cattleya mất nhiều

thời gian và luôn tạo ra ở phần gốc mẫu cấy Các protocorm tạo thành được tách ra và cấy chuyền vào môi trường mới để thành lập các

protocorm bất định từ các protocorm ban đầu, nếu không được cấy

chuyền chúng sẽ phát triển thành chồi và ra rễ

Sơ đồ cắt dọc đỉnh sinh trưởng chồi lan

Các bước thực hiện tách đỉnh sinh trưởng lan Dendrobium

1 Rửa sạch chồi Dendrobium dưới vòi nước chảy Dùng dao mổ lột sạchcác lá non bao xung quanh chồi cho đến khi để lộ chồi ngọn

2.Dùng gòn lau nhẹ lên thân chồi, ngâm chồi trong xà bông loãng trong

10 phút, rửa cho sạch xà phòng dưới vòi nước chảy

3 Trong tủ cấy, ngâm chồi vào cồn 70 độ trong 1 phút, sau đó cho chồi vào becher có chứa dung dịch javel có nồng độ (1 thể tích javel: 4 thể tíchnước cất vô trùng) trong 10 phút, lắc đều tay

4 Dùng kẹp vô trùng cho chồi vừa được khử trùng vào becher vô trùng, rửa các chồi này bằng nước cất vô trùng cho sạch javel (rửa 3 lần)

5 Cắt bỏ các mô chết phần gốc chồi, tách bỏ các lá bên bằng kim mũi nhọn để có được một đỉnh chồi mang 4 – 5 tiền phát khởi lá, cấy từng chồi vào ống nghiệm có chứa môi trường Dùng viết aceton ghi rõ tên giống , ngày cấy, tên môi trường nuôi cấy

6 Đặt tất cả vào phòng nuôi và qua sát

Môi trường nuôi cấy: thường môi trường nuôi cấy đỉnh sinh trưởng tương đối đơn giản Môi trường khoáng MS (1962) có bổ sung chất điều hòa tăng trưởng BA 1mg/l và NAA 0.1 mg/l Ngoài ra các chất chiết từ trái cây cũng được sử dụng như nước dừa 10%, khoai tây

Sau 10-12 tuần nuôi cấy, các đỉnh sinh trưởng chuyển sang màu xanh lục

và tạo ra các khối tròn nhỏ gọi PLB (protocorm like body) Để có được

số lượng lớn PLB làm nguồn mẫu để phục vụ sản xuất Các PLB này

23

được tách ra thành những cụm nhỏ và cấy sang môi trường kích thích nhân nhanh PLB, tuy nhiên chúng cũng dễ dàng tái sinh chồi ngay trên chính môi trường nhân nhanh Để có cây con hoàn chỉnh cần tách các chồi riêng lẻ rồi cấy lên môi trường kích thích ra rễ, cây con có thể xuất vườn sau 4-5 tháng nuôi cấy.

COC12 6H20 CuS04 5H20 ZnS04 4H20

Na2Mo04 2H20

KI

6.20 mg/122.3 mg/1

0.025 mg/1 0.025 mg/1 8.60 mg/10.25 mg/1 0.83 mg/

27.8 mg/1 37.8 mg/1