Tình trạng nhiễm Virut trên cà chua ở tỉnh Lâm Đồng

Cà chua được trồng rộng rãi trên thế giới ở thể kỉ 19 cho đến nay

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NHIỄM BỆNH VIRUS (CUCUMBER MOSAIC VIRUS, TOBACCO MOSAIC VIRUS VÀ TOMATO

SPOTTED WILT VIRUS) TRÊN CÀ CHUA

(Solanum lycopersicum) Ở TỈNH LÂM ĐỒNG BẰNG KỸ THUẬT

ELISA VÀ BƯỚC ĐẦU XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHẨN ĐOÁN

TOBACCO MOSAIC VIRUS BẰNG KỸ THUẬT RT-PCR

Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Niên khóa : 2001-2005

Sinh viên thực hiện : LÂM NGỌC HẠNH

Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2005

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC

BÁO CÁO TÓM TẮT

ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NHIỄM BỆNH VIRUS

(CUCUMBER MOSAIC VIRUS, TOBACCO MOSAIC VIRUS

VÀ TOMATO SPOTTED WILT VIRUS) TRÊN CÀ CHUA

(Solanum lycopersicum) Ở TỈNH LÂM ĐỒNG BẰNG KỸ THUẬT

ELISA VÀ BƯỚC ĐẦU XÂY DỰNG QUY TRÌNH

CHẨN ĐOÁN TOBACCO MOSAIC VIRUS

BẰNG KỸ THUẬT RT-PCR

Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện:

Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2005

iii

LỜI CẢM TẠ

Tôi xin chân thành cảm tạ:

Gia đình là chỗ dựa về vật chất và tinh thần cho tôi trong suốt thời gian học tập và làm luận văn

Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Nông Lâm Tp HCM

Ban Chủ Nhiệm bộ môn Công Nghệ Sinh Học cùng toàn thể quý Thầy Cô trong bộ môn

PGS TS Bùi Cách Tuyến đã tận tình hướng dẫn tôi hoàn thành luận văn này PGS TS Trần Thị Dân, TS Đinh Duy Kháng, TS Bùi Minh Trí, TS Lê Đình Đôn, anh Nguyễn Đức Toàn đã tận tình giúp đỡ tôi thực hiện luận văn tốt nghiệp này

Các thầy cô đã cho tôi nhiều kiến thức bổ ích

Anh Nguyễn Văn Sơn cùng các anh chị trong Chi Cục Bảo vệ Thực vật tỉnh Lâm Đồng đã tạo điều kiện, giúp đỡ tôi trong quá trình làm luận văn

Chú Nguyễn Văn Sang và các anh chị trong Phòng Nông Nghiệp huyện Đơn Dương, anh Nguyễn Tấn Ngọc cùng các anh chị trong Phòng Nông Nghiệp huyện Đức Trọng đã tận tình hỗ trợ, chỉ dẫn tôi

Các thầy cô, anh chị tại Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm trường Đại học Nông Lâm đã giúp đỡ, tạo điều kiện cho tôi hoàn thành tốt luận văn

Tập thể lớp Công Nghệ Sinh Học khóa 27 và tất cả các anh chị, bạn bè đã gắn bó, góp sức cùng tôi trong suốt thời gian học tập và làm luận văn vừa qua

iv

TÓM TẮT

Lâm Ngọc Hạnh Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Tháng 9/2005 ”Đánh giá tình trạng nhiễm bệnh virus (Cucumber Mosaic Virus, Tobacco Mosaic Virus và Tomato

Spotted Wilt Virus) trên cà chua (Solanum lycopersicum) ở tỉnh Lâm Đồng bằng kỹ

thuật ELISA và bước đầu xây dựng quy trình chẩn đoán virus Tobacco Mosaic Virus bằng kỹ thuật RT-PCR” được tiến hành tại huyện Đơn Dương, huyện Đức Trọng

và Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa Sinh trường Đại học Nông Lâm, từ tháng 3/2005 đến tháng 8/2005

Thí nghiệm được thực hiện gồm 3 nội dung chính

1 Mẫu được thu theo triệu chứng bệnh virus, mỗi ruộng 5 mẫu kết hợp với điều tra

sơ bộ tình hình bệnh trên cà chua ở 21 thôn và 2 thị trấn thuộc huyện Đơn Dương

và Đức Trọng Từ đó, đánh giá tình hình bệnh virus trên cà chua ở địa bàn nghiên cứu

2 Xác định tác nhân gây bệnh virus chính trên cà chua (TMV, CMV, TSWV) bằng phương pháp DAS-ELISA sử dụng kháng thể đa dòng Mẫu được phân tích là những lá cà chua có triệu chứng bệnh virus Mỗi mẫu lá được kiểm tra trên 3 virus

để xác định có virus nào trong 3 virus trên nhiễm riêng lẻ hay đồng thời lên mẫu đang nghiên cứu hay không

3 Mẫu dương tính TMV được chọn để thực hiện RT-PCR nhằm bước đầu xây dựng quy trình RT-PCR để chẩn đoán TMV Từ đó, khẳng định lại kết quả ELISA đồng thời sản phẩm thu được từ RT-PCR sẽ được dùng cho những nghiên cứu xa hơn Kết quả thu được:

- Điều tra sơ bộ tình hình bệnh ở Đơn Dương và Đức Trọng cho thấy tại thời điểm nghiên cứu cà chua ở Đức Trọng bị tàn phá nặng nề bởi bệnh virus trong khi cà chua ở Đơn Dương vẫn tốt

- Kết quả DAS-ELISA cho thấy dịch bệnh virus ở Đức Trọng chủ yếu là do CMV gây ra TMV có gây bệnh nhưng ít hơn TSWV chưa gây bệnh ở khu vực này vào thời điểm nghiên cứu

- Bước đầu tìm được một quy trình RT-PCR tạo ra sản phẩm khá đặc hiệu nhưng chưa khẳng định được đó là sản phẩm khuếch đại từ khuôn mẫu nào

v

SUMMARY

This is Lam Ngoc Hanh studying at Nong Lam University and finishing the thesis on 9th,

2005 The thesis entitled “Diagnosing Cucumber Mosaic Virus, Tobacco Mosaic Virus and Tomato Spotted Wilt Virus by DAS-ELISA and formulating the RT-PCR process to diagnose Tobacco Mosaic Virus in Viet Nam” This research was conducted from 3th,

2005 to 8th, 2005 at Don Duong, Duc Trong districts and in the laboratory of biotechnology and chemistry of Nong Lam University

The objects of this research are as follows:

- Collecting the samples with the virus symptoms, 5 samples per each field and generally investigating the virus infection on tomato in Don Duong and Duc Trong districts so that the virus disease incidence in Don Duong and Duc Trong districts can be evaluated

- Diagnosing pathogens in tomato such as Cucumber Mosaic Virus, Tobacco Mosaic Virus and Tomato Spotted Wilt Virus by DAS-ELISA kit using polyclonal antibodies from rabbit The samples tested are tomato leaves appearing the virus symptoms Each sample is tested for Cucumber Mosaic Virus, Tobacco Mosaic Virus and Tomato Spotted Wilt Virus

- Samples of Tobacco Mosaic Virus positive are seleted to conduct the RT-PCR We try to formulate the RT-PCR process used to both diagnose Tobacco Mosaic Virus and confirm DAS-ELISA results

The results of this research are as follows:

- Through the general investigation on tomato in Don Duong and Duc Trong districts, we find out that tomato in Duc Trong have been severely destroyed by viruses

- DAS-ELISA result data show that Cucumber Mosaic Virus is the key pathogen creating virus disease epidemic in Duc Trong on 3th, 2005 while Tobacco Mosaic Virus appears mildly and Tomato Spotted Wilt Virus is not found now in these areas

- Finding out the RT-PCR process that can amplify the pretty specific product but the product has not been confirmed yet

vi

MỤC LỤC

Lời cảm tạ i

Tóm tắt ii

Tóm tắt bằng tiếng Anh iii

Mục lục iv

Danh sách các chữ viết tắt viii

Danh sách các bảng, biểu đồ ix

Danh sách các hình x

PHẦN I MỞ ĐẦU 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục đích yêu cầu 2

1.2.1 Mục đích 2

1.2.2 Yêu cầu 2

PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Cà chua 3

2.1.1 Sơ lƣợc về cà chua 3

2.1.2 Tình hình phát triển của cà chua trên thế giới 3

2.1.3 Tình hình sản xuất cà chua ở Đà Lạt 4

2.2 Bệnh hại trên cà chua 4

2.2.1 Sơ lƣợc về Tomato Spotted Wilt Virus (TSWV) 6

2.2.1.1 Lịch sử của bệnh do TSWV gây ra 6

2.2.1.2 Phân loại của TSWV 7

2.2.1.3 Phân bố về địa lý và tầm quan trọng về kinh tế 7

2.2.1.4 Dãy kí chủ của TSWV 8

2.2.1.5 Cấu tạo của TSWV 8

2.2.1.6 Tính chất của TSWV 9

2.2.1.7 Vector truyền 9

vii

2.2.1.8 Điều kiện phát triển của bệnh do TSWV 10

2.2.1.9 Triệu chứng bệnh 11

2.2.1.10 Khống chế bệnh do TSWV 11

Cây kháng 11

Quản lý TSWV 12

2.2.2 Sơ lược về Tobacco Mosaic Virus (TMV) 14

2.2.2.1 Lịch sử của bệnh 14

2.2.2.2 Phân loại của TMV 14

2.2.2.3 Sự phân bố của TMV 14

2.2.2.4 Ký chủ của TMV 14

2.2.2.5 Đặc điểm cấu tạo của TMV 14

2.2.2.6 Tính chất của TMV 16

2.2.2.7 Đặc điểm truyền bệnh 17

2.2.2.8 Sự phát sinh phát triển của TMV 17

2.2.2.9 Triệu chứng bệnh do TMV 17

2.2.2.10 Phòng trừ 19

2.2.3 Sơ lược về Cucumber Mosaic Virus (CMV) 19

2.2.3.1 Lịch sử của bệnh do CMV 19

2.2.3.2 Phân loại CMV 20

2.2.3.3 Phạm vi phân bố 21

2.2.3.4 Ký chủ 21

2.2.3.5 Đặc điểm cấu tạo của CMV 21

2.2.3.6 Tính chất lý hóa của CMV 23

2.2.3.7 Sự truyền bệnh 24

2.2.3.8 Điều kiện phát triển của bệnh 24

2.2.3.9 Triệu chứng 25

2.2.3.10 Phòng trừ 25

2.3 Các phương pháp chẩn đoán bệnh virus trên thực vật 26

2.3.1 Phương pháp chẩn đoán nhanh bằng cây chỉ thị 26

viii

2.3.2 Phương pháp chẩn đoán bằng chỉ thị màu 26

2.3.3 Phương pháp chẩn đoán dựa vào triệu chứng học 26

2.3.4 Phương pháp chẩn đoán dựa vào kháng huyết thanh 27

2.3.4.1 Phương pháp Direct ELISA 28

2.3.4.2 Phương pháp Indirect ELISA 28

2.3.4.3 Phương pháp Sanwich ELISA 28

Direct Sanwich ELISA hay DAS-ELISA (Double antibody sandwich-ELISA) 28

Indirect Sanwich ELISA 28

2.3.4.4 Tissue blot immunoassay (TIBA) 28

2.3.4.5 Quartz crystal microbalance (QCM) immunosensor 28

2.3.5 Phương pháp chẩn đoán dựa vào trình tự đoạn DNA 29

2.3.5.1 Phương pháp RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphirm) 29

2.3.5.2 Phương pháp PCR hay RT-PCR đối với RNA 29

2.3.5.3 Các kỹ thuật liên quan đến PCR khác 29

2.3.5.4 Phương pháp sử dụng probe đánh dấu 29

2.3.5.5 Array 29

2.4 Phương pháp DAS-ELISA và phương pháp RT-PCR 30

2.4.1 Phương pháp DAS-ELISA 30

2.4.2 Phương pháp RT-PCR 30

2.5 Một số kết quả nghiên cứu trong và ngoài nước về bệnh do CMV, TMV và TSWV gây ra trong thời gian gần đây 32

2.5.1 Ở nước ngoài 32

2.5.2 Ở Việt Nam 33

PHẦN III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34

3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện 34

3.1.1 Thời gian thực hiện đề tài 34

3.1.2 Địa điểm thực hiện đề tài 34

ix

3.2 Vật liệu 34

3.2.1 Dụng cụ 34

3.2.2 Hóa chất 34

3.3 Phương pháp 35

3.3.1 Điều tra và lấy mẫu 35

3.3.2 Phương pháp nghiên cứu 35

3.3.2.1 Chẩn đoán bằng DAS-ELISA 35

3.3.2.2 Chẩn đoán bằng RT-PCR 36

Ly trích RNA 36

Phản ứng reverse transcriptase (RT) tạo cDNA 37

Phản ứng PCR 38

3.3.2.3 Phân tích sản phẩm PCR 44

PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 46

4.1 Phản ứng ELISA 46

4.1.1 Kết quả ELISA 46

4.1.2 Tỷ lệ các mẫu nhiễm hỗn hợp virus CMV và TMV so với các mẫu nhiễm chỉ CMV hay TMV 47

4.1.3 Tỷ lệ bệnh theo tuổi cây thể hiện trong số mẫu điều tra 48

4.1.4 Tỷ lệ bệnh theo địa điểm thể hiện trong số mẫu điều tra 49

4.1.5 Tỷ lệ bệnh theo giống cà thể hiện trong số mẫu điều tra 51

4.1.6 Triệu chứng thực tế trong các mẫu thí nghiệm 52

4.1.7 Tỷ lệ bệnh theo loại triệu chứng quan sát được 53

4.2 Kết quả của phản ứng RT-PCR 57

Kết quả RT-PCR sử dụng cặp primer 1 57

Kết quả RT-PCR sử dụng 2 cặp primer 2 và 3 62

PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 70

5.1 Kết luận 70

5.2 Đề nghị 71

PHẦN VI TÀI LIỆU THAM KHẢO 73

1 2

x

PHỤ LỤC 1 Thành phần các dung dịch trong phản ứng ELISA 76

PHỤ LỤC 2 Thành phần các chất trong kit tổng hợp iScriptTM 77

PHỤ LỤC 3 Thành phần các hóa chất trong phản ứng PCR 78

PHỤ LỤC 4 Hình chụp các đĩa chứa mẫu phân tích bằng ELISA 79

PHỤ LỤC 5 Bảng câu hỏi điều tra 80

PHỤ LỤC 6 Danh sách các trình tự tương đồng với TMV dòng ở Trung Quốc dùng để thiết kế primer 81

xi

DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT

TLCV: Tomato Leaf Curl Virus (bệnh xoăn ngọn cà chua)

TYLCV: Tomato Yellow Leaf Curl Virus (bệnh xoăn vàng ngọn), TRSV: Tomato Black Ring Virus (bệnh đốm hình nhẫn)

TBSV: Tomato Bushy Stunt Virus (bệnh lùn bụi cà chua)

ELISA: enzyme linked immunosorbent assay

DAS-ELISA: double antibody sanwich-enzyme linked immunosorbent assay RT-PCR: Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction

ssRNA : single strand RNA

MP: Movement Protein (Protein di chuyển)

m7Gppp: 7- methyl guanosine triphosphate

HR: Hypersensitive Response (phản ứng siêu nhạy cảm)

SAR: system acquired resistance (tính kháng có hệ thống)

PR protein: pathogenesis- related protein

VPg : protein liên kết với genome

satRNA: satellite RNAs (RNA vệ tinh)

TIR : thermal inactivation range

so với các mẫu nhiễm chỉ CMV hay TMV 48 Bảng 4.3 Tỷ lệ (%) bệnh virus theo tuổi cây trong tổng số mẫu

điều tra 49 Bảng 4.4 Tỷ lệ mẫu nhiễm bệnh TMV, CMV và TSWV giữa

Đơn Dương và Đức Trọng 50 Bảng 4.5 Tỷ lệ bệnh TMV và CMV trên 2 giống cà được

trồng phổ biến ở Đơn Dương và Đức Trọng 53 Bảng 4.6 Tỷ lệ cà chua bệnh theo triệu chứng quan sát được 53 Biểu đồ 4.1 Biểu diễn tỷ lệ dương tính và âm tính CMV, TMV, TSWV 47

Biểu đồ 4.2 Biểu diễn tỷ lệ phần trăm giữa các mẫu nhiễm hỗn hợp

TMV và CMV và các mẫu chỉ nhiễm CMV hay TMV 48 Biểu đồ 4.3 Biểu diễn tỷ lệ phần trăm mẫu bị nhiễm virus theo tuổi cây 49

Biểu đồ 4.4 Biểu diễn tỷ lệ bệnh TMV và CMV trên 2 giống cà

được trồng phổ biến ở Đơn Dương và Đức Trọng 51 Biểu đồ 4.5 Biểu diễn tỷ lệ bệnh TMV và CMV trên 2 giống cà được

trồng phổ biến ở Đơn Dương và Đức Trọng 53 Biểu đồ 4.6 Tỷ lệ cà chua bệnh theo triệu chứng quan sát được 54

xiii

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Hình 2.1 Chu trình sống của bọ trĩ 10

Hình 2.2 Amblyserus cucumeris 13

Hình 2.3 Amblyseius degenerans 13

Hình 2.4 Hypoaspis aculeifer 13

Hình 2.5 Orius insidiosus 13

Hình 2.6 A, B: virion của TMV; C,D: tinh thể TMV 16

Hình 2.7 Triệu chứng điển hình của TMV ở cà chua 18

Hình 2.8 Cấu tạo của CMV 22

Hình 2.9 Triệu chứng điển hình của CMV ở cà chua 25

Hình 4.1 Ruộng cà chua bị nhiễm bệnh virus ở ở Đức Trọng 52

Hình 4.2 Ruộng cà chua khỏe ở Đơn Dương 52

Hình 4.3 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm TMV và CMV 55

Hình 4.4 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm TMV và CMV 55

Hình 4.5 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm CMV 55

Hình 4.6.1 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm CMV 55

Hình 4.6.2 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm CMV 55

Hình 4.7 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm CMV 55

Hình 4.8 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm CMV 56

Hình 4.9 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm CMV 56

Hình 4.10 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm CMV 56

Hình 4.11 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm CMV 56

Hình 4.12 Triệu chứng lá cà chua có nhiễm CMV 56

Hình 4.13 Kết quả điện di sản phẩm PCR lần 2 58

Hình 4.14 Kết quả điện di sản phẩm PCR lần 3 59

Hình 4.15 Kết quả điện di sản phẩm PCR lần 4 59

Hình 4.16 Kết quả điện di sản phẩm PCR lần 5 60

Hình 4.17 Kết quả PCR lần 1 và 2 trên 4 mẫu 62

xiv

Hình 4.18 Kết quả PCR lần 3 64

Hình 4.19 Kết quả PCR lần 8, 9, 10, 11, 12 trên 2 mẫu 2 và 3 66

Hình 4 20a Kết quả RT-PCR lần thứ 13 67

Hình 4.20b Kết quả RT-PCR lần thứ 13 67

Hình 4.21 Mức độ tương đồng của trình tự các dòng TMV trên thế giới 69

PHẦN I MỞ ĐẦU

1.1 Đặt vấn đề

Cà chua (Solanum lycopersicum) được trồng rộng rãi trên thế giới từ thế kỷ thứ 19

cho đến nay (http://web.uk.ask.com/redir?u=http%3a%2f%2ftm.uk.ask.com) Đây là cây trồng thích hợp với hoạt động trồng trọt bán thời gian và qui mô nhỏ Cà chua có giá trị thương mại khá cao Mỗi năm, nước Mỹ thu về hàng tỷ đô la từ thị trường xuất khẩu cà chua Cà chua là loại rau cao cấp rất được ưa chuộng vì nó có giá trị dinh dưỡng cao Các nhà khoa học Nga còn cho biết: quả cà chua có thể dùng làm vắc - xin phòng chống bệnh viêm gan siêu vi A, B, bệnh AIDS và bệnh viêm não Nhu cầu cà chua luôn luôn lớn và

kỹ thuật trồng cà chua lại không quá phức tạp hay khó khăn, không tốn nhiều trang thiết

bị đặc biệt

Vì những lý do đó mà cà chua thường được trồng xen canh với các cây rau màu khác trên những vùng đất thích hợp Thế nhưng, cà chua có thể bị ảnh hưởng bởi rất nhiều bệnh, bao gồm bệnh do ký sinh (như nấm, vi khuẩn, virus, mycoplasma, tuyến trùng) và bệnh không do ký sinh (như độ ẩm của đất, nhiệt độ, ánh sáng không thích hợp hay bởi sự mất cân bằng dinh dưỡng) Bệnh do virus gây ra là khó khống chế nhất và có thể tạo ra tổn thất rất nặng nề khi bệnh lan ra thành dịch

Trong 10 năm trở lại đây, bệnh virus thực vật đã lan rộng hơn và xuất hiện nhiều dịch bệnh virus hơn Ở Việt Nam, bệnh virus trên cà chua cũng xuất hiện ở nhiều nơi trên diện tích lớn Ví dụ như dịch virus vào tháng 3 năm 2005 ở huyện Đức Trọng, tỉnh Lâm Đồng đã làm cho 27 ha cà chua ở đây thiệt hại gần như 100% (Chi Cục Bảo Vệ Thực Vật tỉnh Lâm Đồng) Do đó, cần phải xác định xu hướng lây lan của virus trên thế giới và tiến hành những hoạt động kiểm dịch ở những nơi cần thiết đồng thời tiến hành những nghiên cứu xa hơn nhằm phục vụ cho việc phòng chống bệnh virus cho cây trồng

Xuất phát từ tình hình phát triển của cà chua và bệnh virus trên cà chua mà chúng

tôi thực hiện đề tài: ”Đánh giá tình trạng nhiễm bệnh virus (Cucumber Mosaic Virus,

Tobacco Mosaic Virus và Tomato Spotted Wilt Virus) trên cà chua (Solanum

lycopersicum) ở tỉnh Lâm Đồng bằng kỹ thuật ELISA và bước đầu xây dựng quy

trình chẩn đoán virus Tobacco Mosaic Virus bằng kỹ thuật RT - PCR”

1.2 Mục đích yêu cầu

1.2.1 Mục đích

- Chẩn đoán và phát hiện CMV (Cucumber Mosaic Virus), TMV (Tobacco Mosaic Virus) và TSWV (Tomato Spotted Wilt Virus) trong mẫu lá nghi ngờ bệnh virus bằng kỹ thuật DAS - ELISA (double antibody sanwich - enzyme linked immunosorbent assay) Từ

đó, đánh giá tình hình bệnh ở khu vực nghiên cứu

- Bước đầu xây dựng quy trình chẩn đoán TMV bằng RT - PCR

1.2.2 Yêu cầu

- Xác định tỉ lệ bệnh do các virus TMV, CMV, TSWV gây ra trên đồng ruộng Từ

đó khuyến cáo tác hại và các biện pháp khống chế bệnh do các virus này gây ra

- Nắm vững nguyên tắc và các bước tiến hành của kỹ thuật ELISA và RT - PCR

PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Cà chua

2.1.1 Sơ lược về cà chua

Cà chua (Solanum lycopersicum) có xuất xứ ở miền Nam và Trung Mỹ Cà chua

thuộc giới thực vật (Plantae), thuộc chi Magnoliopsida, chi phụ là Asteridae, thuộc bộ

Solanales, thuộc họ Solanaceae, thuộc giống Solanum , thuộc loài Solanum lycopersicum

(http://web.uk.ask.com/redir?u=http%3a%2f%2ftm.uk.ask.com)

2.1.2 Tình hình phát triển của cà chua trên thế giới và Việt Nam

Sự xuất hiện của cà chua (Solanum lycopersicum) được xác định là từ những năm

70 trước công nguyên ở Nam Mỹ Vào thế kỉ 16, cà chua còn mọc hoang ở vùng núi Andes của Nam Mỹ và phát triển ở Mêxicô Sau đó, những người Châu Âu khám phá vùng đất mới này và cà chua được vận chuyển về châu Âu bằng tàu Do có hàm lượng Licopen cao nên cà chua nhanh chóng được trồng ở Châu Âu để sử dụng vào các bữa ăn hàng ngày và đưa vào công nghiệp chế biến rau quả

Người phương Tây đặc biệt sùng bái quả cà chua Từ năm 1931 - 1999, ở châu Âu

có khoảng 131 công trình nghiên cứu về cà chua Sản lượng cà chua ước tính ở một số nước Châu Âu năm 2004 như sau: Tây Ban Nha (2.300 tỷ tấn) tăng 34% so với năm

2003, Italy (5.800 tỷ tấn) tăng 9% so với năm 2003, Hy Lạp (1.050 tỷ tấn) tăng 8% so với năm 2003 (Nguồn: Attaché Reports, USDA/FAS and USDA/ERS) Mỹ đã tạo ra cây khoai - cà có đặc điểm cho củ (ở dưới đất) giống khoai tây và cho trái (ở trên cây) giống

cà chua

Tại Nhật Bản, cà chua cũng được khuyến khích ăn hàng ngày để phòng chống các bệnh tim mạch và ung thư Trung Quốc cũng cho phép các giống “rau quả không gian” được trồng trên diện rộng khắp đất nước Trong đó, diện tích “cà chua không gian” (tạo giống mới bằng tia vũ trụ trên không gian) chiếm hơn 2000 ha (Nguồn:

http://www.quandoinhandan.org.vn "Rau quả không gian” ở Trung Quốc Ngày

26 tháng 09 năm 2004) Chính phủ Malaysia đã thực hiện nhiều giải pháp nhằm phát triển

công nghệ sau chế biến rau quả, trong đó cà chua là một trong 8 loại rau được đưa vào danh sách ưu tiên

Ở Việt Nam, trong định hướng và mục tiêu phát triển nông nghiệp, nhà nước ta khuyến khích trồng các loại rau quả xuất khẩu, trong đó có cà chua Năm 2003 diện tích

cà chua thu đông và vụ đông cả nước ta đạt 11.936 ha Vụ Đông 2003 ở Hà Tây - một trọng điểm cà chua cho xuất khẩu của Nam Định, huyện Hải Tây trồng 135 ha cà chua, huyện Hải Hậu đưa diện tích cà chua lên trên 40 ha Trên diện tích 1.450 ha cà chua vụ đông của Nam Định có 652 ha được ký hợp đồng bao tiêu sản phẩm giữa nhà máy chế biến và nông dân Việt Nam đã đưa ra thị trường giống cà chua HT mang thương hiệu Việt Nam Đây là giống rau lai cao cấp đầu tiên ở nước ta có khả năng cạnh tranh trên thị trường

Như vậy, trên thế giới và cả ở Việt Nam cà chua luôn được quan tâm và khai thác như là một nguồn lợi không nhỏ, không thể thiếu được

2.1.3 Tình hình sản xuất cà chua ở Đà Lạt

Với điều kiện thiên phú về nhiệt độ, ẩm độ và bức xạ, Đức Trọng và Đơn Dương là

2 huyện trọng điểm về rau và cà chua của tỉnh Lâm đồng Hàng năm 2 huyện này trồng đến 3.500 ha cà chua (trong tổng diện tích 4.500 ha trồng rau màu của toàn tỉnh Lâm Đồng) với sản lượng ước tính khoảng 150.000 tấn Cà chua đã trở thành cây trồng chủ lực cho vùng rau này Những năm trước, bệnh héo rũ do vi khuẩn luôn đe dọa cà chua ở đây Nông dân đã chuyển qua trồng giống cà ghép (ghép giống M186 với gốc cà dại) để tăng sức chống chịu với điều kiện ngoại cảnh và bệnh, trong đó chủ yếu là bệnh héo rũ do vi khuẩn Năm 2005, do thời tiết phức tạp: nắng hạn kéo dài kết hợp với tiết trời khô hanh

đã làm cho bệnh virus phát triển nhanh chóng Ở Đức Trọng, hàng loạt cây cà chua đã bị phá bỏ vì bệnh virus Ước tính vào tháng 3 năm 2005 có khoảng 27 ha cà chua bị nhiễm bệnh virus (gần 100%) ở Đức Trọng (Nguồn: Chi Cục Bảo Vệ Thực Vật Tỉnh Lâm Đồng)

2.2 Bệnh hại trên cà chua

Bệnh cà chua trở thành yếu tố giới hạn trong sản xuất cà chua ở nhiều vùng trên thế giới Gần 200 bệnh cà chua đã được biết đến do những nguyên nhân khác nhau gây ra

Có 2 nhóm nguyên nhân gây bệnh chính trên cà chua là bệnh do ký sinh và bệnh không

do ký sinh Bệnh do ký sinh gồm có: bệnh do nấm, vi khuẩn, virus, tuyến trùng Bệnh không do ký sinh thường là do độ ẩm của đất, nhiệt độ, ánh sáng không thích hợp hay bởi

sự mất cân bằng dinh dưỡng, mối quan hệ về oxy không hợp lý, hay ảnh hưởng của thuốc trừ cỏ, thuốc trừ sâu, sấm chớp Những triệu chứng không do ký sinh gây ra thường nhẹ hơn những triệu chứng gây ra bởi ký sinh và gây khó khăn thêm cho việc chẩn đoán bệnh

cho cây trồng

Riêng đối với bệnh virus thì trên cây cà chua vùng nhiệt đới có rất nhiều loại virus gây hại như CMV (Cucumber Mosaic Virus), TMV (Tobacco Mosaic Virus), TSWV (Tomato Spotted Wilt Virus), CTV (Citrus Tristeza Virus) Các virus này gây ra những triệu chứng tương đối giống nhau là lá vàng loang lổ, xoăn, cây nhỏ, đều lan truyền qua

bọ phấn Bemisia Mật độ bọ phấn càng cao thì tỷ lệ cây bị bệnh xoăn lá càng nhiều Bệnh

phát triển nhiều trong điều kiện thời tiết ấm áp, nhiệt độ từ 20 - 30oC, nhiều nắng, ít mưa

Tỷ lệ mắc bệnh và tính nghiêm trọng của bệnh thay đổi từ mùa này sang mùa khác vì những mối quan hệ phức tạp (2)

Bệnh virus hại cà chua

Bệnh virus hại cà chua là 1 tập đoàn có rất nhiều bệnh hại, trong đó các loại virus quan trọng gây ra rất nhiều tác hại cho cà chua ở vùng cận nhiệt đới và nhiệt đới gồm: bệnh khảm vàng (TMV: Tomato Mosaic Virus), bệnh khảm mảng lồi lõm (CMV: Cucumber Mosaic Virus), bệnh đốm héo (TSWV: Tomato Spotted Wilt Virus), bệnh xoăn ngọn cà chua (TLCV: Tomato Leaf Curl Virus), bệnh xoăn vàng ngọn (TYLCV: Tomato Yellow Leaf Curl Virus), bệnh đốm hình nhẫn (TRSV: Tomato Black Ring Virus), bệnh lùn bụi cà chua (TBSV: Tomato Bushy Stunt Virus) và virus X, Y của khoai tây (5)

Bệnh virus đang gây thiệt hại nặng nề cho nền sản xuất cà chua ở nước ta và ở nhiều nước vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới và ôn đới Cây cà chua bị bệnh thường không có quả hoặc quả rất nhỏ Nhiều trường hợp bệnh rất nặng, không cho thu hoạch gây ra mất mùa cà chua

Sơ lược về CMV, TMV và TSWV

Hiện nay, thuật ngữ “emerging plant virus” đã được hình thành Thuật ngữ này xuất phát từ thuật ngữ “emerging virus” được đúc kết từ đầu những năm 1980 để mô tả tình cảnh bi kịch do bệnh AIDS gây ra Sau đó, thuật ngữ này dường như trở nên thích hợp với tình hình dịch bệnh virus trên cây trồng Ba virus điển hình cho thuật ngữ này là CMV, TMV, CTV vì ba virus này phân bố rất rộng về địa lý, rất dễ gây ra dịch bệnh cho những cây trồng quan trọng về kinh tế TSWV (có khi được gọi là “Super virus”) trong những năm gần đây lại gây dịch bệnh nghiêm trọng trên hai đối tượng có giá trị kinh tế cao là cà chua và thuốc lá Người ta xếp TSWV vào loại “re - emerging plant virus” Hiện nay, ba virus CMV, TMV, TSWV đang gây bệnh rất nguy hiểm trên cà chua

2.2.1 Sơ lược về Tomato Spotted Wilt Virus (TSWV)

2.2.1.1 Lịch sử của bệnh do TSWV gây ra

Trước đây, virus TSWV được báo cáo dưới nhiều tên khác nhau, ví dụ: virus đồng thau cà chua (Tomato Bronzing Virus), Kromnek Virus, Pineapple Yellow Potyvirus, Makhorka Tip Chlorosis Virus, Vira Cabeca Virus và nhiều tên khác (Sakimura, 1962; Best, 1968; Smith, 1972) (1) Hiện nay, virus TSWV thường được gọi là Tomato Spotted Wilt Virus hay Tomato Spotted Wilt Tospovirus hay Pineapple Yellow Spot Virus Nó còn có các tên khác như Spotted Wilt, Bronze Leaf (ở Anh), Maladie bronze’e (ở Pháp), Bronceado (ở Tây Ban Nha) Ngoài ra, tên Lycopersicon Virus 3 cũng được sử dụng rộng rãi để chỉ virus TSWV Sự thay đổi trong thuật ngữ phản ánh sự thay đổi nhiều của triệu chứng bệnh, tùy thuộc vào loài virus, cây chủ và vùng địa lý nơi bệnh đó được tìm thấy

Báo cáo đầu tiên về bệnh do TSWV (bệnh héo đốm cà chua) trên cà chua có từ năm 1915 ở miền Nam nước Úc (Brittlebank, 1919) Bệnh gây ra thiệt hại nghiêm trọng cho cà chua ở Úc trong nhiều năm và vẫn là vấn đề nghiêm trọng ở New South Wales Những vùng khác cũng có tổn thất nặng như Argentina, Hawaii

Sau chiến tranh thế giới thứ hai, bệnh héo đốm cà chua giảm rõ rệt ở Tây Âu và

Mỹ (có thể do việc phòng trừ bọ trĩ bằng hóa chất) trong khi ở Đông Âu, Nam Mỹ và Nam Phi, virus này vẫn còn là vấn đề nghiêm trọng Những năm đầu của thập niên 80, TSWV đã phát triển nhanh chóng và lan rộng ra nhiều vùng địa lý khác nhau (Barker, 1989; Marchoux và cộng sự, 1991; Varia và cộng sự, 1993) cùng với sự phát triển nhanh

chóng của vectơ bọ trĩ cẩm chướng (Frankliniella occidentalis) (Mantel và Van de Vrie,

1998; Brodsgaard, 1989) Từ năm 1998, TSWV đã trở thành vấn đề chính cho những ruộng cà chua (4)

Bệnh do virus TSWV bộc phát trên nhiều quốc gia sản xuất nông nghiệp trên khắp các lục địa, chủ yếu trong vùng khí hậu nóng Ở vùng khí hậu ôn đới thì TSWV phổ biến trong canh tác nhà lưới

2.2.1.2 Phân loại của virus TSWV

TSWV thuộc họ Bunyaviridae, một họ lớn của những virus được mang bởi động vật chân đốt Họ Bunyaviridae có 5 giống là Bunyavirus, Hantavirus, Nairovirus,

Phlebovirus và Tospovirus Trong đó, Tospovirus được xem là thuộc 10 virus gây bệnh

cây nổi bật nhất Tác động của Tospovirus rất lớn

Một thời gian dài TSWV được phân loại như là đại diện duy nhất của nhóm virus cây đơn xuất xứ từ nhóm “Tomato Spotted Wilt Virus” (Mathews, 1979) Năm 1989, TSWV được chia thành TSWV dòng L và TSWV dòng I Giữa năm 1989 và 1992, hai dòng này được xác định là khác nhau về huyết thanh học và tên của chúng đã được thay đổi thành TSWV (TSWV dòng L) và INSV (TSWV dòng I) Nhờ sinh học phân tử, người

ta nhận thấy virus TSWV có những đặc tính chung của họ Bunyaviridae Vì vậy, hiện nay TSWV được phân loại như là nhóm nguyên thủy của chi Tospovirus mới trong họ

Bunyaviridae Sử dụng kháng huyết thanh đơn dòng và đa dòng để xác định cấu trúc

nucleoprotein của TSWV, người ta thấy rằng TSWV là loài gây bệnh cho nhiều cây trồng trên thế giới (de Avila và cộng sự, 1990) Những nghiên cứu này cũng chứng minh sự tồn

tại của những loài Tospovirus khác nhau là TSWV: Tomato Spotted Wilt Virus (nhóm

huyết thanh I), GRSV: Groundnut Ringspot Virus (nhóm huyết thanh II), TCSV: Tomato Chlorotic Spot Virus (nhóm huyết thanh III), INSV: Impatiens Necrotic Spot Virus (nhóm huyết thanh IV), GBNV: Groundnut Bud Necrosis Virus (nhóm huyết thanh V), WSMV: Wattermelon Silver Molt Virus

2.2.1.3 Phân bố về địa lý và tầm quan trọng về kinh tế

TSWV thường ở vùng ôn đới và cận nhiệt đới TSWV đã được ghi nhận ở Ấn Độ, châu Á, châu Úc, Macedonia, Nam Serbia, Nam và Bắc Mỹ Ở châu Âu, TSWV xuất hiện

ở nơi có khí hậu ấm và trong các nhà kính Ở Yugoslavia, TSWV trãi rộng ở những vùng khô, ấm và có nắng nhiều

TSWV gây đe dọa nghiêm trọng trong sản xuất cà chua và thuốc lá TSWV là một trong 10 virus gây hại nghiêm trọng nhất TSWV gây thiệt hại trên toàn thế giới hơn 1 tỉ

đô la hàng năm (Goldbach and Peter, 1994)

2.2.1.4 Dãy kí chủ của TSWV

TSWV có phổ ký chủ rất rộng Chúng tấn công trên nhiều cây cảnh, cỏ dại và nhiều cây trồng khác nhau Những công trình nghiên cứu về loài ký chủ mới của TSWV được xuất bản với tốc độ rất nhanh (German và cộng sự, 1992) Cho đến nay, danh sách

ký chủ của TSWV là 1090 loài cây, thuộc 15 họ thực vật một lá mầm, 69 họ thực vật hai

lá mầm và một họ thực vật có hoa ẩn Ký chủ mẫn cảm với TSWV gồm nhiều cây công nghiệp quan trọng như ớt, đậu nành, khoai tây, thuốc lá, cà chua, các loại rau như cần tây,

rau diếp Hoa thược dược (Dahlia pinnata Cav.) rất mẫn cảm với virus này Đậu phộng được xem là ký chủ chính của virus này ở Úc và Hoa Kỳ Cây bồ công anh (Taraxacum

officinalis L.), dền gai (Amaranthus spinosus L.), và nhiều loài cà hoang dại đều là ký chủ

của TSWV Cây cảnh và cỏ dại thường là nguồn chứa TSWV Ở những vùng có mùa đông băng giá thì cây kí chủ đa niên là nguồn chứa TSWV đáng kể, các vùng có mùa đông mát mẻ thì cây ký chủ hàng niên là nguồn chứa TSWV để lây lan cho cây trồng Việc lây nhiễm nhân tạo trên Petunia là nhanh nhất, chính vì vậy nó là cây chỉ thị tốt cho TSWV

2.2.1.5 Cấu tạo của TSWV Các phần tử virus bằng nhau về kích cỡ và có đường kính khoảng 85nm Đặc trưng của những phần tử TSWV là vỏ lipid chứa 2 loại glycoprotein G1 và G2 bao quanh một genome RNA gồm ba phần đã được đóng gói chặt chẽ bởi nhiều bản sao của tiểu đơn vị nucleoprotein (N) và 10 - 20 bản sao của protein lớn (L) là polymerase của virus (Van Poelwijk và cộng sự, 1993)

Bộ gen virus là RNA chia thành 3 phần, là loại ambisense ssRNA chứa 5 gen mã hóa ít nhất 6 protein cấu trúc của virus:

- LRNA (dài 8.897 nucleotide) là RNA lớn nhất Đó là sợi negative sense và là sợi đơn cistron LRNA mã hóa cho RNA polymerase phụ thuộc RNA

- MRNA (4.821 nucleotide) mã hóa 2 protein vỏ (G1 và G2) và một protein phi cấu trúc được xem như là protein di chuyển từ tế bào đến tế bào (NSm)

- SRNA (2.916 nucleotide) mã hóa nucleoprotein (N) và một protein phi cấu trúc thứ 2 (NSs)

RNA có những trình tự cuối bổ sung từng phần, cho phép RNA thích nghi với sự thành lập vòng giả (Elliott và cộng sự,2000)

Bộ gen của virus mã hóa cho 6 protein đặc biệt:

- RNA polymerase (330kDa) được mã hóa bởi LRNA

- Protein NSM (34kDa) có mặt trong sự di chuyển từ tế bào virus sang tế bào chủ, được mã hóa bởi MRNA sense

- Glycoprotein G1 (78kDa) và G2 (58kDa) nhô ra trên bề mặt của virus, được mã hóa bởi MRNA sense bổ sung

- Protein NSS (52kDa) được mã hóa bởi SRNA sense (chức năng chưa biết)

- Protein N (29kDa) là protein cấu trúc bao phủ đoạn RNA genome tạo ra nucleocapside, được mã hóa bởi sợi RNA sense bổ sung (Hull, 2002)

2.2.1.6 Tính chất của virus TSWV

TSWV có nhiệt độ Q10 là 41,2oC, độ pha loãng tối thiểu (DEP) là 1: 10-5, thời

gian sống trong in vitro (LIV) của nó ở 24oC từ 2 đến 5 giờ, điểm nhiệt độ virus không hoạt động (TIR) là 40 - 46oC Virion được tìm thấy trong tất cả các phần của cây chủ, trong tế bào chất Thể vùi có trong tế bào nhiễm, có hình dạng bất thường Những cụm viron hay không bào có thể nảy chồi từ túi chứa dịch của lưới nội chất

2.2.1.7 Vector truyền Tất cả virus đều kí sinh bắt buộc, có nghĩa là chúng không thể sống sót ở bên ngoài

kí chủ và lan truyền bởi hạt hay côn trùng TSWV được mang bởi bọ trĩ (thrips) Chúng là những côn trùng cực nhỏ (khoảng 0,5mm) sống ở trên hoa, lá và đất Có chín loài bọ trĩ được xem là vector truyền TSWV Trong đó, có những loài quan trọng nhất vì chúng

phân bố rất rộng rãi, đó là: Western Flower Thrip (Frankliniella occidentalis), F schultzei (Trybom), F fusca (Hind), Thrips tabaci Lind Vì sự phân bố rộng của Western Flower Thrip (Frankliniella occidentalis), Onion thrips (Thrips tabaci) nên chúng được xem là

vector chính của bệnh

Sự nhiễm tự nhiên trên đồng ruộng gây ra bởi bọ trĩ theo kiểu bền vững (Hình 2.1)

Bọ trĩ đẻ trứng trong những mô mềm của thân, lá hay hoa Ấu trùng vừa nở ra (có màu vàng) bắt đầu ăn ngay Khi ấu trùng ăn mô bị nhiễm khoảng 15 phút, chúng thu virus vào

bên trong Thời gian ăn kéo dài thì khả năng mang virus tăng lên Ấu trùng phát triển đầy

đủ sẽ chui vào đất (sâu khoảng 8cm) và trở thành nhộng, không ăn nữa Sau đó chúng trưởng thành, có cánh, nhô lên khỏi mặt đất Ấu trùng bọ trĩ chưa lan truyền bệnh cho cây ngay được mà phải chờ đến khi chúng trưởng thành Có 2 lý do để cần thời gian này: (1) phải có thời gian để virus di chuyển bên trong cơ thể bọ trĩ, chúng đi từ miệng vào tuyến nước bọt, khi đó chúng sẵn sàng cho sự truyền qua một cây khác; (2) bọ trĩ non không có cánh nên khó có cơ hội di chuyển từ cây này sang cây khác và hầu như hoàn toàn không thể tiếp cận được những cây mới trồng ra ruộng Những con bọ trĩ trưởng thành có thể mang virus suốt đời nhưng không truyền cho giai đoạn trứng Thế hệ kế tiếp mang virus bằng việc ăn cây bị nhiễm Thời gian từ trứng đến giai đoạn trưởng thành có thể thay đổi

do nhiều yếu tố, người ta xác định được là 14 ngày ở 29,5oC đối với Western Flower

Thrip

Hình 2.1 Chu trình sống của bọ trĩ

(Nguồn: T.A Zitter and M.L Daughtrey và J.P Sanderson, 1989.)

Câu hỏi đặt ra là TSWV có được truyền qua hạt không? Người ta đã chứng minh rằng cây nhiễm TSWV không thể truyền virus sang hạt của nó và hạt nhiễm virus là do từ bên ngoài (Y Antignus et al, 1997)

2.2.1.8 Điều kiện phát triển của bệnh do TSWV

Theo Best, ánh sáng mặt trời ngăn cản sự hình thành vết hoại tử Do đó, khi cây được chiếu sáng liên tục cây sẽ ít bệnh hơn và thời điểm xuất hiện bệnh cũng trễ hơn Bệnh thích nghi với điều kiện thời tiết ấm áp (đối với các nước nhiệt đới là thời tiết mát

và ẩm) Nhiệt độ cao, ẩm độ thấp là điều kiện rất bất lợi cho bọ trĩ Mưa nhiều và to trong mùa đông cũng làm giảm số bọ trĩ xuống mức thấp Thời tiết ấm áp và khô là điều kiện tốt nhất cho bọ trĩ sinh sản Bệnh trở thành dịch trong suốt giai đoạn sinh trưởng sinh

dưỡng của cây, giai đoạn mà virus được bọ trĩ lan truyền từ cây này sang cây kia dễ dàng Theo nhận định của các nhà nghiên cứu thì nhiệt độ bình quân trong ngày vào khoảng

25oC kết hợp với lượng mưa giảm là điều kiện tối ưu cho bọ trĩ lẫn TSWV phát triển

Virus này có thể qua đông trên nhiều loại cây trồng Thrips tabaci qua đông dưới dạng

thành trùng, nằm trong đất Vào mùa xuân khi thời tiết ấm áp, bọ trĩ di chuyển từ cỏ dại chờ cơ hội tấn công cây trồng Người ta thấy rằng, các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động của côn trùng môi giới trong việc di chuyển từ cây này sang cây khác có lẽ quan trọng hơn kích thước quần thể côn trùng Bởi vì chỉ cần một côn trùng mang mầm bệnh cũng có thể gây bệnh cho cây Theo Selman và Grant, sự thay đổi độ dài ngày không ảnh hưởng đến thời gian ủ bệnh của triệu chứng toàn diện nhưng nhiệt độ thì có ảnh hưởng

2.2.1.9 Triệu chứng bệnh Triệu chứng cây nhiễm TSWV rất đa dạng, thay đổi tùy theo giai đoạn sinh trưởng của cây, điều kiện môi trường (nhất là nhiệt độ), mức độ lây nhiễm, số lượng và thành phần các nòi virus cùng phối hợp gây hại cho cây ký chủ Cây bệnh có triệu chứng là: lá non thường chuyển màu vàng và sau đó phát triển nhiều vết đen nhỏ, đốm tròn Sau đó những đỉnh đang sinh trưởng có thể chết và gốc có thể có sọc Những cây bị nhiễm thường phát triển một bên hay bị còi cọc (lùn) và rũ xuống Triệu chứng này có thể giống với bệnh do nấm, vi khuẩn hay stress do môi trường Nếu chỉ dựa vào triệu chứng mà xác

định bệnh thì có thể dẫn đến kết quả không chính xác

Cây bị nhiễm vào đầu mùa có thể không cho quả và những cây bị nhiễm sau khi đã tạo quả sẽ cho quả rất nhỏ Biểu hiện triệu chứng của trái bệnh là ở trái xanh có nhiều vùng có vòng tròn đồng tâm mờ, có vết tròn mất màu xanh, ở trái chín những vòng này chuyển sang màu đỏ trắng hay đỏ vàng rất dễ quan sát

2.2.1.10 Khống chế bệnh do TSWV

Hai phương pháp chung được sử dụng là sử dụng cây kháng TSWV và chiến lược quản lý nhằm giảm tác hại của virus

Cây kháng

Sử dụng kỹ thuật DNA tái tổ hợp cho phép thúc đẩy quá trình nhận dạng, chọn lọc

và lai tạo cây mới Những marker phân tử liên kết với tính kháng TSWV đã được tìm thấy

trong những dòng cà chua phát triển từ những dòng lai giữa SW 307 (Brommonschenkel, Tanksley và Cho, chưa xuất bản) và cây kháng TSWV với những khoảng cách liên kết nhỏ nhất được chọn lọc Trong tương lai, sử dụng những cây này cùng với những marker liên kết sẽ thúc đẩy sự phát triển tính kháng cho những cây cà chua thương mại khác với khoảng cách liên kết nhỏ nhất (10)

Một số giống cà chua lai kháng TSWV sẵn có trong thương mại:

- Giống Amelia (HMX - 0800) do công ty Harris Moran Seed cung cấp Đặc tính

của giống này là trái chín khá sớm, trái to, kháng TSWV, tuyến trùng, và 3 nòi nấm fusarium gây héo Amelia được thử nghiệm ở Mountain Horticultural Crops Research Station ở Fletcher trên 3 năm gần đây và cho kết quả tốt

- Giống EX 1405037 do công ty Seminis Seeds cung cấp Đặc tính của giống này

là trái cà chua to, chín hơi trễ EX 1405037 không cho kết quả tốt như Amelia ở Mountain Horticultural Crops Research Station ở Fletcher vào năm 2002 vì thời gian chín lâu hơn

- Giống BHN 444 và BNN 640 do Seigers và công ty hạt Seedway cung cấp Đặc

tính của giống BHN 444 là cho trái lớn nhưng hình dạng trái hơi thô, giống BHN 640 có tính kháng với ba nòi nấm fusarium gây héo và kháng TSWV và trái của nó nhỏ hơn nhưng bóng hơn BHN 444

Quản lý TSWV

Hiểu biết rõ về mối quan hệ giữa kí chủ - ký sinh - vectơ sẽ giúp ta phát triển những biện pháp canh tác mà làm cho tổn thất do TSWV gây ra với những cây trồng nhạy cảm là nhỏ nhất Không có biện pháp nào có hiệu quả đáng kể nếu sử dụng riêng rẽ Người ta thường kết hợp những biện pháp với nhau để giảm mức độ thiệt hại một cách đáng kể Chiến lược quản lý hiệu quả nhất là phòng ngừa, gồm những kỹ thuật sau:

1 Bảo vệ cây con: Cây con dễ bị nhiễm TSWV khi không được bảo vệ Bọ trĩ sẽ tấn công vào những lá có màu xanh nhạt của cây non Vì thế cây con cần được trồng ở những nơi có cây trồng nhạy cảm với TSWV nếu không thì nên trồng cây con trong nhà kính hoặc sử dụng màng che cẩn thận Phun thuốc diệt côn trùng đều đặn có thể làm giảm khả năng sống của bọ trĩ trong vườn ươm

2 Tránh trồng độc canh: Nên hạn chế việc trồng liên tục cùng một loại cây trồng trên cùng một vùng đất

3 Luân canh: Tránh trồng những cây nhạy cảm với TSWV trong những vùng đang

bị tác động mạnh của TSWV Trồng những cây không nhạy cảm với TSWV vào vùng này trong khoảng 3 tuần để cho bọ trĩ đi ra khỏi vùng đó sẽ làm giảm tác hại của TSWV và cho phép trồng những cây nhạy cảm với TSWV hiệu quả hơn

4 Loại bỏ những nguồn chứa TSWV: Cày lại đất ở nơi đã thu hoạch hay nơi đã từng bị bỏ hoang để loại bỏ nguồn chứa virus và nguồn thức ăn của bọ trĩ

5 Quản lý cỏ: Có nhiều loại cỏ là kí chủ của TSWV, chúng đóng vai trò là nguồn chứa virus Quan trọng là loại bỏ cỏ ngay thời điểm quần thể bọ trĩ thấp để giảm tối thiểu việc bọ trĩ tích lũy và di chuyển vào đồng ruộng

6 Trồng cỏ trên đồng ruộng sẽ kích thích bọ trĩ trưởng thành di chuyển đến Vì thế, cần hạn chế điều này

7 Trồng xen cây nhạy cảm với cây không nhạy cảm Có rất nhiều cây không nhạy cảm với TSWV như: cây bông cải xanh, cải bắp, bí, dưa chuột, hành, cà rốt, khoai lang

8 Loại bỏ những cây có triệu chứng bệnh ngay lập tức

9 Khống chế bọ trĩ bằng phương pháp sinh học là hiệu quả nhất và có lợi cho môi trường nhất Bốn tác nhân sinh học đã được sử dụng

(Nguồn:http//:www.substratus.com/sw8529.asp.tomato spotted wilt virus fact sheet.html)

1 Amblyserus cucumeris: Ăn chủ yếu ở giai đoạn ấu trùng của bọ trĩ (Hình 2.2)

2 Amblyseius degenerans: Tương tự như Amblyserus cucumeris nhưng di chuyển nhanh

hơn và có thể sống được trong điều kiện độ ẩm thấp (Hình 2.3)

3 Hypoaspisspp: Là rệp cây ăn thịt, sống trong đất, ăn nhộng của bọ trĩ (Hình 2.4)

4 Orius insidiosus: Ăn tất cả các giai đoạn mà bọ trĩ có thể di động, nhạy cảm với ngày

dài và phát triển ít nhất 13 giờ chiếu sáng/ngày (Hình 2.5)

2.2.2 Sơ lược về Tobacco Mosaic Virus (TMV)

2.2.2.1 Lịch sử của bệnh do TMV gây ra

Bệnh khảm thuốc lá được đề cập đến từ năm 1857 Đến năm 1892 virus TMV được nhà bác học Nga Ivanopski phát hiện Lúc đó ông đang nghiên cứu về bệnh hoa lá thuốc lá và phát hiện thấy một loại “nguồn gây bệnh” không nhìn thấy dưới kính hiển vi quang học và có thể lọt qua ống lọc vi khuẩn Năm 1898, nhà bác học Đan Mạch M Baijerinck cũng đã phát hiện và xác nhận nguồn gây bệnh đó được mang tên tượng trưng là: “virus”, có nghĩa là “chất độc” Đến năm 1939, Kaushe Pfankuch và Ryska sử dụng kính hiển vi điện tử quan sát thấy virus đó là TMV Như vậy, virus TMV là virus thực vật được phát hiện sớm nhất Kể từ đó, việc nghiên cứu và phát hiện nhóm nguyên nhân gây

Hình 2.2 Amblyserus cucumeris Hình 2.3 Amblyseius degenerans

Hình 2.4 Hypoaspis aculeifer Hình 2.5 Orius insidiosus

bệnh mới này được phát triển nhanh chóng và thu được nhiều thành tựu to lớn Virus này được nhận biết sớm nhất là do nó có thể nhiễm vào cây dễ dàng, thể hiện triệu chứng bền vững và dễ nhận ra

2.2.2.2 Phân loại của TMV

TMV chưa được xếp vào họ nào TMV thuộc giống Tobamovirus, thuộc loài Tobacco Mosaic Virus

2.2.2.3 Sự phân bố của TMV

TMV có thể phân bố rộng khắp thế giới Người ta đã tìm thấy virus này ở: châu

Âu, Argentina, châu Úc, Đan Mạch, Pháp, Hungary, Iceland, Ấn Độ, Italy, Nhật Bản, Kenya, Hà Lan, Peru, Tây Ban Nha, Anh , Mỹ

2.2.2.4 Ký chủ của TMV

TMV có thể lây nhiễm cho hơn 30 họ cây thực vật hạt kín, chúng tấn công vào những cây có tầm quan trọng về kinh tế như: cà chua, ớt, cà tím, thuốc lá, cây dã yên (petunia), và cây cúc vạn thọ (marigold)

2.2.2.5 Đặc điểm cấu tạo của virus TMV

Virion của TMV không có vỏ Nucleocapsid hình gậy, thường là thẳng, dài khoảng 300nm, có đường kính khoảng 18nm Có thể quan sát được trục của nó, có đường kính là

2nm, vòng xoắn ốc của nó cao 2,3nm (Hình 2.7) Trọng lượng phân tử của virion là

49.800.000 Chúng có thể kết tinh và tích lũy trong dịch cây với nồng độ khá cao: 1g/lít TMV sinh sản tốt ở nhiệt độ 24 - 30oC TMV bị phân hủy ở pH < 1 và pH > 11, mẫn cảm với tia Rơnghen

Virion chứa 5% nucleic acid Virion chứa chỉ một phân tử RNA positive - sense sợi đơn thẳng Chiều dài tổng cộng của genome là 6.395 nucleotide (Goelet và cộng sự, 1982) Tỷ lệ cơ bản của các nucleic acid là 25,4% Guanine; 29,8% Adenine; 18,5% Cytosine; 26,3% Uracil Đầu 5’ của genome có mũ, trình tự là m7G5’ppp5 (’Gp) Genome TMV thiếu vùng poly A ở đầu 3’ Đầu 3’ có cấu trúc giống tRNA (nhận histidine) Nucleic acid không thuộc genome của virus không được tìm thấy trong virion

Sub - genomic mRNA được tìm thấy trong những tế bào nhiễm

Virion của TMV chứa 95% protein Genome của TMV mã hóa cho 6 protein bao gồm:

- 2 Replicases có trọng lượng là 126kDa và 183kDa

+ Protein 126kDa có 2 vùng: Vùng có khả năng gắn mũ ở đầu cuối N (có lẽ cần cho sự gắn mũ) có cấu trúc bậc hai đặc trưng của methyltransferase và guanylyltransferase Vùng thứ hai giống như helicase ở đầu C Hoạt động helicase sẽ cần

để loại bỏ cấu trúc bậc hai của RNA khuôn mẫu Nhưng hoạt động helicase vẫn chưa được chứng minh (Armando de Menezes Neto, 2005.)

+ Thêm vào 2 vùng của replicase 126kDa, protein 183kDa có vùng thứ ba: vùng chứa motif của RNA polymerase phụ thuộc RNA (RdRp) Có lẽ nó cung cấp hoạt động xúc tác cho sự tổng hợp RNA

- Protein di chuyển (Movement Protein) (MP) có kích thước 30kDa, có đuôi 264 amino acid và có hoạt tính sinh học khi được phosphoryl hóa

- RNA polymerase: kích thước 54kDa

- Charged protein có kích thước rất nhỏ, chỉ gồm 40 amino acid

- Protein vỏ (Coat Protein) (CP): kích thước 17,5kDa Đây là protein được biết đến nhiều nhất của TMV, có đuôi 159 amino acid (17,5kDa)

Protein bao quanh toàn bộ genome và bảo vệ RNA khỏi sự phân hủy bên trong và bên ngoài tế bào Các protein vỏ này gắn kết với toàn bộ khối RNA của TMV

Virion của TMV không chứa lipid Người ta tìm thấy dấu vết của ion kim loại trong phân tử virion Nucleic acid có khả năng nhiễm Genome tái bản trên những cấu trúc màng trong tế bào chất Protein được tổng hợp bởi ribosome thuộc tế bào chất Vị trí lắp ráp cho đến nay vẫn chưa được biết Protein vỏ được dịch bởi mRNA trong tế bào chất

Hình 2.6 A, B: virion của TMV; C,D: tinh thể TMV

(Nguồn : http://www.scisoc.org/feature/TMV/gallery.html) 2.2.2.6 Tính chất của TMV

Tỷ trọng nổi là 1,325g/cm3

trong CsCl (sau khi cố định với formaldehyde) Điểm đẳng điện ở pH 3,5 LIV: 3000 ngày DEP: log10 chia cho 3 - 6 Khả năng nhiễm qua nhựa không thay đổi khi xử lý với di - ethyl ether Khả năng nhiễm vẫn duy trì khi phân giải với protease, hay xử lý với phenol hoặc chất tẩy rửa

TMV ở dạng kết tinh thành tinh thể hình lục giác và tinh thể giữ tính độc rất lâu, sau 25 năm vẫn còn khả năng xâm nhiễm gây bệnh Sinh sản mạnh ở 24 - 30oC, nếu nhiệt

độ đến 37 - 38oC thì TMV không sinh sản nữa và ứng với lúc đó cây khó biểu hiện triệu chứng bên ngoài Virus chết khi sấy lá bệnh ở 140oC trong 30 phút Nhiệt độ làm mất hoạt tính: (Q10) Q10TMV = 93oC Ngƣỡng pha loãng của TMV : 10-6

A B

Các chỉ tiêu về tính chống chịu trên có thể dao động đôi chút do phụ thuộc vào các chủng virus khác nhau và các điều kiện với mức độ chính xác khác nhau

2.2.2.7 Đặc điểm truyền bệnh của TMV

TMV có khả năng xâm nhiễm cao TMV từ những cây khô có thể gây nhiễm đến

50 năm Bệnh truyền nhiễm dễ dàng qua con đường tiếp xúc cơ học, thông qua các vết thương xây xát Virus vận chuyển trong cây theo mạch dẫn Thời kì tiềm dục ở nhiệt độ

30oC là khoảng 5 ngày, trung bình 8 - 14 ngày, ở nhiệt độ thấp là 2 tháng Bệnh phát triển mạnh và thể hiện triệu chứng điển hình khi nhiệt độ 25 - 30oC, nếu nhiệt độ cao hơn 38o

C hay thấp hơn 18oC thì ít bệnh Khi đó, cây sinh trưởng tốt hơn

Bón đạm nhiều, cây sinh trưởng phát triển mạnh, sẽ có nhiều mô non và mềm, làm cho bệnh nặng hơn Cây dư ẩm, mọng nước dễ nhiễm bệnh hơn Bệnh lan nhanh vào giai đoạn nhổ cây con, trồng trọt, xới và ngắt ngọn

Cách thức lây lan là chỉ tiêu tối cần cho việc xác định từng loại virus TMV có thể lây lan từ sự tiếp xúc giữa các lá cây với nhau (Zaitlin và Israel, 1975)

2.2.2.8 Sự phát sinh phát triển của TMV

Virus không tồn tại trong hạt giống Sự nhiễm vào hạt dễ dàng xảy ra trong quá trình thu hạt từ phần thịt của quả cà chua Vì thịt của cà chua là nơi mà virus TMV được phóng thích ra từ quả bị nhiễm, rồi chúng dính vào bề mặt hạt và không gây ra tác động gì trong nhiều tháng Có khoảng 94% hạt cà chua mang TMV Virus tồn tại trong cây bệnh

tồn dư, chưa phân hủy nằm trong đất (Technical bulletin: greenhouse crop

manageenzymt series http://ipmofalaska.com)

Virus có thể kết tinh trong lá khô rụng trong đất, trong thuốc lá điếu và trong nhiều

ký chủ khác nằm trong 36 họ cây trồng nhưng chủ yếu là cây họ cà Phần lớn sự lây nhiễm bệnh khảm do TMV ngoài đồng ruộng đều bắt nguồn từ tàn dư của vụ trước hoặc

từ cỏ dại

Hiện nay, TMV đã tạo thành dịch bệnh trên cà chua và ớt chủ yếu là do sự truyền bệnh dễ dàng qua cơ học và qua cây bị nhiễm còn sót lại trong đất Nhựa cây bị nhiễm rất

dễ truyền bệnh do nồng độ TMV trong tế bào cây cao Thường thì nhiễm TMV bắt nguồn

từ cây con và trồng từ cây con thì bị bệnh nhiều hơn trồng trực tiếp bằng hạt

Người ta thấy rằng bào tử động của nấm Olpidium brassicae cũng truyền loại virus này Một số cây dùng làm cây chỉ thị cho TMV là cây rau muôi (Chenopodium quinoa), cây cà độc dược (Datura stramonium)

2.2.2.9 Triệu chứng bệnh do TMV

Mức độ biểu hiện triệu chứng TMV trên lá cà chua phụ thuộc vào tính nhạy cảm của cây, tính độc của dòng virus, giai đoạn phát triển của cây và điều kiện môi trường Trong nhà kính, triệu chứng biểu hiện rõ ràng hơn trên đồng ruộng Vào mùa đông khi mà cường độ ánh sáng thấp, ngày ngắn, nhiệt độ dưới 20oC làm cho cây thấp và lá vặn vẹo thành dạng lá dương xỉ Triệu chứng khảm cũng thường được thấy trên lá non Lá có những vùng xanh đậm và xanh nhạt Vùng xanh đậm có xu hướng trở nên dày hơn vùng xanh nhạt (Hình 2.7) Lá non bị biến dạng, cong xuống Cà chua bị nhiễm bởi những dòng TMV gây hoại tử hay nhiễm TMV cùng với những virus khác sẽ xuất hiện những vết hoại

tử trên cây và cây chết từng phần Những cây già có xu hướng hồi phục và phát triển tiếp tục mà không bị biến đổi gì nhiều Một số cà chua có thể chống chịu với TMV Khi đó triệu chứng biểu hiện nhẹ hơn, và sự nhiễm chỉ tạo ra tác động nhỏ đến sản lượng

Hình 2.7 Triệu chứng điển hình của TMV ở cà chua

(Nguồn: UC IPM Pest Management Guidelines: Tomato Diseases, 2003)

Ở bên trong tế bào, virion được tìm thấy trong tất cả các phần của tế bào chủ, trong

tế bào chất và trong nhân Virion có thể tìm thấy trong lục lạp Thể vùi có mặt trong các tế bào nhiễm Thể vùi là những tinh thể trong tế bào chất và những thể X vô hình Thay đổi

khác của tế bào là lục lạp bị tàn phá khi cây bị nhiễm hệ thống Sự thiếu lục lạp góp phần tạo ra những vùng có màu sáng hay những vùng bị mất diệp lục Sự tàn phá mô lá và cấu trúc tế bào dẫn đến sự giảm quang hợp của cây

2.2.10 Phòng trừ TMV

- Phun sữa toàn phần lên cây có thể bảo vệ cây không bị nhiễm TMV trong 10 ngày Nên phun trước khi trồng cây khi mà không thể ngăn công nhân sử dụng thuốc lá Phun với nồng độ khoảng 0,5kg sữa khô trong 4 lít nước ngay trước khi trồng cây

- Chỉ sử dụng hạt khỏe mạnh để sản xuất cây con trong vườn ươm Bất hoạt TMV dính trên bề mặt trái bằng cách nhúng hạt trong dung dịch HCl 2% trong khoảng 24 giờ hay dung dịch Trisodium phosphate (Na3PO4) 10% trong ít nhất là 15 phút hoặc xử lý hạt

ở nhiệt độ cao (85oC trong 24 giờ hay 70oC trong 2 - 4 ngày) trong quá trình thu hạt, sau

đó rửa và làm khô hạt để ngăn chặn những tác động có hại cho phôi bởi những hóa chất

ăn mòn

- Không trồng cây con bị nhiễm Những cây cà chua nhiễm nên đốt bỏ đi trước khi trồng lại

- Suốt quá trình sản xuất cây con và trồng cây, những dụng cụ, trang thiết bị, quần

áo có dính nhựa cây nên được làm sạch Khử trùng dụng cụ chăm sóc bằng Focmalin 1:

25 Rửa tay bằng xà phòng, đặc biệt là sau khi tiếp xúc với cây bệnh Cấm hút thuốc trong giờ làm việc vì TMV có thể nhiễm qua thuốc lá (những sản phẩm như thuốc điếu, thuốc nhai, xì gà)

- Như tất cả các virus khác, không thể cứu cây khi cây nhiễm bệnh Trước hết cần chứa cây trong túi cẩn thận, rồi đem chúng ra vùng khác và hủy bỏ Diệt các côn trùng hại Tiêu diệt côn trùng chủ yếu là rệp - vectơ truyền bệnh - bằng một số thuốc hóa học như: Butyl 10 WP, Fenbis 25 EC, Sapen alpha 5 EC, Netoxin 18 DD Không cần phun thuốc trừ bệnh vì không có hiệu quả

- Cần dọn sạch cỏ vì chúng là kí chủ cho TMV tồn tại Cà chua không được trồng luân canh với cây họ cà: ớt, khoai tây, thuốc lá và một số hoa như petunia, begonia

Bệnh khảm dưa chuột được mô tả đầu tiên vào năm 1916 (Doolittle, 1916), là một trong số những bệnh cây sớm nhất được biết là do virus gây ra (Jagger, 1916) Những bài thuyết trình về bệnh này xuất hiện sớm ở Mỹ, sau đó ở châu Âu và châu Phi (Price, 1934)

và các nước còn lại trên thế giới Trong thời gian đầu, những công cụ để xác định sự tồn tại của virus chuyên biệt rất hạn chế Sau đó, CMV cũng được biết là do Cucumber Mosaic Virus (CMV) gây ra (Kaper và Waterworth, 1981) Một số lượng rất lớn những bài mô tả chi tiết về đặc điểm sinh vật học của CMV được xuất bản (Edwardson và Christie, 1991; Kaper và Waterworth, 1981; Palukaitis và cộng sự, 1992; Roossinck, 1999) Nhiều dòng CMV đã được mô tả Dữ liệu di truyền hiện nay chứa trình tự của khoảng 60 protein khác nhau, và 15 trình tự genome virus hoàn chỉnh CMV có 3 nhóm phụ là IA, IB và II với khoảng 25% trình tự nucleotide là khác nhau giữa chúng (Roossinck và cộng sự, 1999) Vì vậy, CMV là virus có khả năng thích ứng cao, với khả năng tiến hóa lạ thường Khả năng này làm cho nó vừa là mối đe dọa cho nông nghiệp thế giới, vừa là mô hình lý tưởng cho nghiên cứu sự tiến hóa của những virus RNA

2.2.3.2 Phân loại CMV

Các tên khác nhau của virus này là: Banana Infectious Chlorosis Virus, Coleus Mosaic Virus (Creager, 1945; Holcomb và Valverde, 1991), Cowpea Banding Mosaic Virus, Cowpea Ringspot Virus, Cucumber Virus 1, Lily Ringspot Virus (Brierley và Travis, 1958), Pea Top Necrosis Virus, Peanut Yellow Mosaic Virus, Southern Celery Mosaic Virus (Doolittle, 1916; Price, 1935; Wellman, 1934), Soybean Stunt Virus (Hanada và Tochihara, 1982), Spinach Blight Virus, Tomato Fern Leaf Virus, Pea Western Ringspot Virus Người ta thường viết tắt là: CMV

Virus này thuộc họ Bromoviridae Họ Bromoviridae gồm có 5 giống là

Alfamovirus, Bromovirus, Ilarvirus, Cucumovirus, Oleavirus Trong giống Cucumovirus

rõ là: A - CMV, E - CMV, L - CMV, N - CMV, P - CMV, Z - CMV và WAI/WAII Dường như những dòng này có 2 nhóm kháng nguyên là ToRS và DTL (Devergne, 1975), có 2 thành viên thêm vào của giống này là Peanut stunt virus (PSV) và Tomato aspermy virus (TAV)

RNA3 của tất cả các thành viên của giống có thể được trao đổi với nhau trong khi

đó RNA1 và 2 chỉ có thể được trao đổi trong loài Những trình tự tương đồng cho thấy virus có quan hệ với Brome Mosaic Virus và trình tự của RNA1 và RNA2 cho thấy CMV

có quan hệ với Alfalfa Mosaic Virus và Tobacco Mosaic Viruses (Rezaian và cộng sự, 1985; Davies and Symons, 1987)

2.2.2.3 Phạm vi phân bố

CMV có thể phân bố khắp nơi trên thế giới Người ta tìm thấy CMV ở: châu Âu, châu Úc, Canada, Pháp, Ấn Độ, Nhật Bản, Triều Tiên, Ma - rốc, New Zealand, Phần Lan, Tây Ban Nha và Mỹ

2.2.3.4 Ký chủ

CMV gây nhiễm trên 1.000 loài cây, gồm các thành viên của 85 họ thực vật CMV

là loài virus có dãy kí chủ rộng nhất được biết đến cho đến nay

Một trong số những cây rau cải quan trọng bị ảnh hưởng bởi CMV là ớt (Capsicum

annuum L.), cà chua (Lycopersicon esculentum Mill.), chuối (Musa spp L.) Những cây

ký chủ khác là: dưa chuột, bí (squash), cần tây, tiêu, củ cải đường, khoai tây, dưa chuột ri, dưa hấu, dưa gang, thanh yên, cây bầu bí (gourd), đậu lima, đậu tằm, hành, cà tím, cây đại hoàng, cà rốt, cây thì là, cây củ cần, rau mùi tây (parsley) (Chupp and Sherf, 1960), cây mướp (Huang và cộng sự, 1987), cây atoso (Chabbouh and Cherif, 1990)

Ký chủ là cây cảnh gồm: cây cúc tây (China aster), cúc (chrysanthemum), cây phi yến (delphinium), hoa xô đỏ (salvia), cây phong lữ (geranium), gilia, hoa lai ơn (gladiolus), cây vòi voi (heliotrope), lan dạ hương (hyacinth), lily, cúc vạn thọ (marigold), cây sen cạn (nasturtium), cây dừa cạn (periwinkle), cây thuốc lá cảnh (petunia), cây giáp trúc đào (phlox), hoa mõm chó (snapdragon), tulip và cúc zinnia (Chupp and Sherf, 1960;

Agrios, 1978)

2.2.3.5 Đặc điểm cấu tạo của CMV

Dưới kính hiển vi điện tử CMV có dạng hình cầu, đường kính 28nm Virion của CMV không có vỏ (Hình 2.8) Có nhiều loại virion nhưng kích thước tương đối giống nhau Các nucleocapsid của CMV giống nhau và không phát hiện được thông qua thuốc nhuộm Có 32 capsomer trên một nucleocapsid CMV có nhiều chủng loại gây bệnh trên

nhiều loại cây trồng khác nhau Bao gồm các chủng Y, M, S, Q Chúng khác nhau về đặc tính sinh học