TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE-PROTEIN TỪ MỘT SỐ NẤM VIỆT NAM VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG

TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE- PROTEIN TỪ MỘT SỐ NẤM VIỆT NAM VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ  Thời gian thực hiện: 18 tháng ( Từ tháng 07/ 2004 đến tháng 12/2005) Cơ quan chủ trì: VIỆN CÔNG NGHỆ HÓA HỌC  Chủ nhiệm đề tài: TS. NGUY N CỬU KHOAỄ  Kinh phí Tổng số: 163.000.000đ Mục tiêu của đề tài ° Xác đònh hoạt tính kháng phân bào, là cơ sở khoa học cho việc sản xuất chế phẩm Polysaccharide-protein dùng để phòng và điều trò bệnh ung thư. ° Xác đònh hoạt tính kháng oxy hóa, để nghiên cứu ứng dụng trong phòng và chống lão hóa ở cơ thể con người. ° Tách chiết Polysaccharide-Protein từ một số nấm Việt Nam. ° Đối tượng nghiên cứu:  Nấm Linh Chi – tên khoa học Ganoderma lucidum  Nấm Vân Chi – tên khoa học Trametes versicolor  Nấm Bào Ngư – tên khoa học Pleurotus sajor-caju ° Hoạt tính sinh học được khảo sát:  Tính kháng phân bào  Tính kháng oxy hóa Tổng quan tình hình nghiên cứu thuộc lónh vực của đề tài  Tình hình nghiên cứu ngoài nước  Các nhà khoa học Nhật Bản, Mỹ và Trung Quốc đã công bố nhiều tài liệu về hợp chất của polysaccharide-protein được tách chiết từ các loài nấm dược (Linh Chi, Vân Chi ) có hoạt tính sinh học rất cao, có khả năng kháng nấm, kháng khuẩn, kháng tế bào ung thư và còn được sử dụng trong điều chế các vaccine chống virus.  Ngoài ra các cuộc thử nghiệm còn cho thấy các phân đoạn polysaccharide-protein còn có khả năng kéo dài sự sống của các bệnh nhân ung thư, trẻ hóa, kéo dài tuổi thọ cho con người.  Trong 5-10 năm gần đây các chế phẩm của polysaccharide- protein : PSK (Polysaccharide Krestin) và PSP (Polysaccharide Peptid) đã được bán rộng rãi ngoài thò trường và đã đứng đầu trong top 10 loại thuốc chống ung thư bán chạy nhất tại Nhật Bản với doanh số 556 triệu USD (năm 1985) và chiếm 25.2% tổng chi tiêu của người dân Nhật Bản cho việc chữa trò các bệnh ung thư (năm 1987).  Tình hình nghiên cứu trong nước:  Một loạt các nhà khoa học (GSTS Nguyễn Lân Dũng, PGS.TS Nguyễn Hữu Đống ) đã có các công trình về trồng nấm tại nước ta.  Vài nghiên cứu chi tiết thành phần loài và một số đặc điểm sinh học họ nấm Linh Chi ở Việt Nam và thăm dò hoạt tính chống oxy hóa của các dòch chiết từ nấm Linh Chi.  Hàng loạt các chế phẩm từ nấm Linh Chi, Vân Chi với các tên gọi khác nhau( Ling zhi, Ling zhi jing, Naturade Ken Reishi…) đã được nhập từ Nhật Bản, Trung Quốc, Hàn Quốc  Một số công ty dược phẩm trong nước (dược phẩm 24 hoặc công ty Khôi Nguyên) cũng có sản phẩm nấm dược, tuy nhiên mới chỉ ở dạng bột, trà hoặc dòch chiết đơn giản.  Các công trình nghiên cứu về nấm ở Việt Nam mới chỉ dừng ở mức độ phân loài nấm, kỹ thuật nuôi trồng nấm và nghiên cứu một số đặc tính sinh học của chúng, chưa có một công trình nào được nghiên cứu một cách hệ thống về thành phần, phương pháp tách chiết các phân đoạn polysaccharide-protein được cho là có hoạt tính sinh học cao của các loại nấm Việt Nam. Nội dung nghiên cứu  X ây dựng đề cương tổng q uát và chi tiết.  Thu thập và tổng hợp các tư liệu Polysaccharide-Protein có liên q uan đến đề tài.  Khảo sát sơ bộ một số thông tin kỹ thuật cơ bản về trồng, thu hoạch và sơ chế nấm Linh Chi, Vân Chi và Bào Ngư.  Tách chiết Polysaccharide-Protein từ nấm Linh Chi,Vân Chi, Bào Ngư.  Dùng các phương pháp hóa lý để xác đònh trọng lượng phân tử của các phân đoạn thu được.  X ác đònh thành phần đường tổng của các phân đoạn thu được.  X ác đònh thành phần acid amin trong protein của các phân đoạn thu được.  X ác đònh kháng phân bào của các phân đoạn thu được trên.  X ác đònh hoạt tính chống oxy hóa của các phân đoạn trên. Phương pháp nghiên cứu, cách tiếp cận vấn đề, kỹ thuật sử dụng  Tách chiết polysaccharide có chứa protein với các dung môi khác nhau ( H 2 O, MeOH, EtOH, …)  Sử dụng phương pháp đông khô ở nhiệt độ thấp nhằm giữ nguyên được hoạt tính của Polysaccharide-protein thu nhận được.  Sử dụng phương pháp sắc ký gel để tách các phân đoạn có trọng lượng phân tử khác nhau.  Sử dụng các phương pháp sắc ký khí (GC) để xác đònh các loại đường của Polysaccharide.  Sử dụng phương pháp phenol-sunfuric acid để xác đònh hàm lượng đường tổng.  Protein: xác đònh bằng phương pháp Lowry và sắc ký điện di hoặc sắc ký lỏng cao áp kết hợp với khối phổ.  Xác đònh hoạt tính kháng phân bào.  Xác đònh hoạt tính kháng oxy hóa bằng phương pháp DPPH. Thành Phần Hóa Dược Tổng Quát của Linh Chi Thành phần Hàm lïng(%) Nước 12 - 13 (trong cao mềm của Việt Nam thì tới 22.32%) Cellulose 54 - 56 Lignin 13 - 14 Hợp chất Nitơ 1.6 - 2.1 Chất béo (kể cả dạng xà phòng hóa) 1.9 - 2 Hợp chất Phenol 0.08 - 0.1 (có thể tới 0.4% trong cao) Hợp chất Strerol toàn phần 0.11 - 0.16 Saponin toàn phần 0.3-1.23 (Theo Lê Xuân Thám-Nấm Linh Chi, Cây thuốc quý) [...]... Nội dung hợp tác: Trao đổi tài liệu thông tin 2 Trung Tâm Sinh Học Công Nghệ Cao (Đại Học Boston Mỹ) Nội dung hợp tác :Trao đổi tài liệu thông tin và có thể thực hiện một số phương pháp phân tích hiện đại Dạng kết quả dự kiến của đề tài I II III Mẫu (Model, market) Qui trình công nghệ: Qui trình tách chiết polysaccharide-protein đối với từng loại nấm: Linh Chi, Bào Ngư, Vân Chi Báo cáo phân tích Sản phẩm:... trong chứa 9,8% Chưa có 50 tan nước 20% Chưa có 50 T T 5 6 7 8 Tên sản phẩm và chỉ tiêu chất lượng chủ yếu Phân đoạn polysaccharideprotein của nấm Vân Chi (F1) Phân đoạn polysaccharideprotein của nấm Vân Chi (F2) Các bản báo cáo kết quả hoạt tính kháng phân bào của 6 phân đoạn trên Các bản báo cáo kết quả hoạt tính kháng oxy hóa của 6 phân đoạn trên Đơn vò đo gr gr Mức chất lượng Cần đạt Mức chất lượng... phẩm trên và thử lâm sàng Các tác động của kết quả nghiên cứu  Bồi dưỡng, đào tạo cán bộ KH&CN  Kết quả nghiên cứu được sử dụng trong ngành y-dược  Nâng cao hiệu quả sử dụng nguồn dược liệu Việt Nam  Nâng cao đời sống của người nông dân Danh sách tổ chức/cá nhân tham gia thực hiện và phối hợp chính  Cơ quan phối hợp chính: Viện Sinh Học Nhiệt Đới Viện Hóa Học Các Hợp Chất Thiên Nhiên Khoa Sinh trường... kiến số lượng sản phẩm tạo ra trong chứa 9,8% Chưa có 50 tan nước 20% Chưa có 50 Phương thức chuyển giao kết quả nghiên cứu:  Chuyển giao kết quả nghiên cứu cho một công ty dược tại Tp HCM (Dược phẩm Bến Thành hoặc dược phẩm 26)  Hoặc chuyển giao cho Xưởng Thực nghiệm của Viện Công Nghệ Hóa Học để tiếp tục nghiên cứu giai đoạn 2 thử nghiệm hoạt tính chống tế bào ung thư trên chuột, xác đònh LD50 của. .. F3-2 F3-2a Lọc gel F3-2b 1 Xác đònh trọng lượng phân tử của Polysaccharide bằng:  Sắc ký gel với các cột Standar Dextran  Phương pháp đo áp suất thẩm thấu 2 Xác đònh thành phần của Polysaccharide  Xác đònh hàm lượng đường tổng bằng phương phápPhenol sulfuric acid  Xác đònh các thành phần đường: – – – Sắc ký khí Sắc ký lỏng cao áp ghép khối phổ Cộng hường từ hạt nhân 3 Xác đònh thành phần Protein... Sinh Học Nhiệt Đới Viện Hóa Học Các Hợp Chất Thiên Nhiên Khoa Sinh trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên  Cán bộ phối hợp chính T T Họ và tên Học vò/chức Ngành Đơn vò công tác danh KH chuyên môn 1 Hoàng Quốc Khánh TS Vi Sinh Viện Sinh học nhiệt Đới 2 Phạm Cao Thanh Tùng ThS Hóa Lý 3 Hoàng Thò Kim Dung ThS Hữu Cơ Viện Công Nghệ Hóa Học 4 Trần Ngọc Quyển CN Hữu Cơ Nt 5 Đái Huệ Ngân CN Hóa Lý Nt 6 Bùi Trọng... Thêm 5 V EtOH, lọc Dòch lọc 7 Đông khô F3-2 Cặn 7 Quy Trình Tách Chiết Tinh Quả thể nấm 1 Sấy khô ở 80oC Nghiền 2 Chiết với EtOH 85% x 16 lần Lọc Dich lọc Cặn Chiết với nước nóng 100oC x 4h x 8 lần Lọc Dòch lọc 1 Cặn 1 Chiết với Amonium oxalat 3%, đun hoàn lưu 3h, 5 lần, lọc Thêm 5 V EtOH, Lọc Dòch lọc 2 Cặn 2 Dòch lọc 3 Đông khô F1 Cặn 3 Chiết với NaOH 5%, ở 30oC x 12-30h, lọc Thêm 5 V EtOH, Lọc Dòch... protein của nấm Bào Ngư (F1) Phân đoạn polysaccharideprotein của nấm Bào Ngư (F2) Phân đoạn polysaccharideprotein của nấm Linh Chi (F1) Phân đoạn polysaccharideprotein của nấm Đơn vò đo Mức chất lượng Cần đạt Mức chất lượng Trong nước gr gr gr gr Tan nước khoảng protein Không trong chứa protein Tan nước khoảng protein Không trong chứa Thế giới Dự kiến số lượng sản phẩm tạo ra trong chứa 9,8% Chưa có 50 tan...Quy Trình Tách Chiết Thô Quả thể nấm 1 Sấy khô ở 80oC Nghiền 2 Chiết với EtOH 85% x 5 lần Lọc Dich lọc Cặn Chiết với nước nóng 100oC x 4h x 5 lần Lọc Cặn 1 Dòch lọc 1 Chiết với Amonium oxalat 1%, đun hoàn lưu 3h, 5 lần, lọc Thêm 5 V EtOH, Lọc Dòch lọc 2 Cặn 2 Dòch lọc 3 Đông khô F1 Cặn 3 Chiết với NaOH 5%, ở 30oC x 6-12h, lọc Thêm 5 V EtOH, Lọc Dòch... Phương pháp Bảng số liệu Vật liệu Tiêu chuẩn Tài liệu dự báo Thiết bò, máy móc Qui phạm Sơ đồ Dây chuyền công nghệ Đề án, qui hoạch triển khai Giống cây trồng Luận chứng kinh tế kỹ thuật Giống gia súc Chương trình máy tính Khác Yêu cầu kỹ thuật, chỉ tiêu chất lượng đối với sản phẩm tạo ra T T 1 2 3 4 Tên sản phẩm và chỉ tiêu chất lượng chủ yếu Phân đoạn polysaccharide protein của nấm Bào Ngư (F1) Phân . TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE- PROTEIN TỪ MỘT SỐ NẤM VIỆT NAM VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ  . về trồng nấm tại nước ta.  Vài nghiên cứu chi tiết thành phần loài và một số đặc điểm sinh học họ nấm Linh Chi ở Việt Nam và thăm dò hoạt tính chống oxy hóa của các dòch chiết từ nấm Linh. phòng và chống lão hóa ở cơ thể con người. ° Tách chiết Polysaccharide-Protein từ một số nấm Việt Nam. ° Đối tượng nghiên cứu:  Nấm Linh Chi – tên khoa học Ganoderma lucidum  Nấm Vân