Nghiên cứu tổng hợp và xác định hoạt tính sinh học của một số dẫn xuất hemiasterlin (tóm tắt + toàn văn)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HĨA HỌC - - PHẠM THẾ CHÍNH NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ DẪN XUẤT HEMIASTERLIN Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 62.44.27.01 TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HĨA HỌC Hà Nội, 2014 Cơng trình hồn thành Viện Hóa học- Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Văn Tuyến PGS TS Ninh Khắc Bản Phản biện 1: GS TSKH Trần Văn Sung – Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Phản biện 2: PGS TS Phạm Văn Thỉnh – Trường Đại học Sư phạm – Đại học Thái Nguyên Phản biện 3: GS TS Phạm Quốc Long – Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Luận án bảo vệ trước Hội đồng cấp Viện chấm luận án Tiến sĩ họp Phịng hội thảo - Viện Hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam - Số 18 - Hồng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Trung tâm thông tin - Thư viện, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Thư viện Trường Đại học Khoa học – ĐH Thái Nguyên A-GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Tính cấp thiết, ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài luận án Hemiasterlin tripeptit phân lập từ loài hải tiêu Hemiasterella minor, có hoạt tính chống ung thư ngưỡng nM (0,3 nM) nhiều dòng tế bào ung thư thực nghiệm [1] Hoạt tính gây độc tế bào hemiasterlin nhờ ức chế trình polyme hóa tubulin depolyme hóa microtubule gắn lên vị trí vinca peptit tubulin, làm ngưng trệ phân bào giai đoạn metaphase động học tế bào Tác động tương tự số thuốc gắn lên tubulin ứng dụng điều trị ung thư paclitaxel (3,9 nM) vinblastin (0,79 nM) [4] Mặt khác, hàm lượng thiên nhiên thấp cấu trúc độc đáo nên nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu tổng hợp nhằm tìm kiếm hợp chất có cấu trúc lý thú hoạt tính sinh học cao [1-9,34,35] Các nghiên cứu trước chủ yếu tập trung tổng hợp hemiaterlin xoay quanh cấu trúc nguyên bản, việc mở rộng hemiasterlin có cấu trúc với cấu hình phi thiên nhiên (R) block tạo trung tâm sinh học cịn quan tâm nghiên cứu Luận án tập trung tổng hợp hemiasterlin nhờ nhân N-metylindol bioisostere naphthalen benzofuran; tổng hợp hợp chất có cấu hình thiên nhiên (S) phi thiên nhiên (R) nguyên tử cacbon gắn với nhóm NH-metyl block tổng hợp dẫn xuất hemiasterlin có cấu trúc lược giản chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp (chứa hệ Michael) nhằm tìm kiếm hợp chất hemiasterlin Đối tượng nhiệm vụ luận án 2.1 Đối tượng nghiên cứu luận án Các hợp chất hemiasterlin có thay nhân N-metylindol bioisostere naphthalen benzofuran với cấu hình thiên nhiên (S) phi thiên nhiên (R) nguyên tử cacbon gắn với nhóm NH-metyl block Các hợp chất hemiasterlin có chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp block nhóm NH block Các hợp chất hemiasterlin có chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp block nhóm N-metyl block 2.2 Nhiệm vụ luận án 2.2.1 Nghiên cứu tổng hợp block hemiasterlin - Tổng hợp block nhờ thay nhóm N-metylindol naphthalen benzofuran - Tổng hợp block chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp 2.2.2 Nghiên cứu tổng hợp block dipeptit block 2-3 hemiasterlin - Tổng hợp block có chứa nhóm NH - Tổng hợp block có chứa nhóm N-metyl - Tổng hợp dipeptit block 2-3 chứa nhóm NH - Tổng hợp dipeptit block 2-3 chứa nhóm N-metyl 2.2.3 Nghiên cứu tổng hợp hemisterlin nhờ nhóm Nmetylindol naphthalen benzofuran - Tổng hợp dẫn xuất este, axit hemiasterlin nhờ thay nhóm Nmetylindol naphthalen benzofuran có cấu hình (S) ngun tử cacbon gắn với nhóm NH-metyl block - Tổng hợp dẫn xuất este, axit hemiasterlin nhờ thay nhóm Nmetylindol naphthalen benzofuran có cấu hình (R) ngun tử cacbon gắn với nhóm NH-metyl block 2.2.4 Nghiên cứu tổng hợp hemisterlin chứa hệ α,β-cacbonyl-Naxetyl liên hợp - Tổng hợp dẫn xuất este, axit hemiasterlin chứa hệ α,β-cacbonyl-Naxetyl liên hợp block đồng thời chứa nhóm NH block - Tổng hợp dẫn xuất este, axit hemiasterlin chứa hệ α,β-cacbonyl-Naxetyl liên hợp block đồng thời chứa nhóm N-metyl block 2.2.5 Xác định hoạt tính gây độc tế bào hemiasterlin Các hemiasterlin thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư thực nghiệm Tế bào ung thư biểu mô KB (Human epidermic carcinoma), ung thư gan Hep-G2 (Hepatocellular carcinoma), ung thư phổi LU (Human lung carcinoma) ung thư vú MCF-7 (Human breast carcinoma) Những đóng góp luận án 1) Luận án vận dụng hiệu phương pháp tổng hợp hữu đại như: phản ứng tổng hợp khử hóa Weinreb amit, phản ứng Wittig phản ứng tổng hợp peptit có sử dụng tác nhân hoạt hóa EDC HOBt tổng hợp chọn lọc lập thể dipeptit, mạch nhánh hemiasterlin 2) Luận án thiết kế tổng hợp thành công block hemiasterlin, bao gồm: block có cấu trúc lược giản chứa hệ α,βcacbonyl-N-axetyl liên hợp block có thay nhân N-metylindol bioisostere naphthalen benzofuran 3) Luận án tổng hợp thành công 32 dẫn chất tripeptit hemiasterlin, bao gồm: + dẫn xuất hemiasterlin với thay N-metylindol hemiasterlin naphthalen benzofuran, có cấu hình thiên nhiên (S) phi thiên nhiên (R) nguyên tử cacbon gắn với nhóm NH-metyl block + 24 dẫn xuất hemiasterlin có cấu trúc lược giản chứa hệ α,βcacbonyl-N-axetyl liên hợp (là hệ Michael sinh học) 4) Luận án xác định dẫn xuất hemiasterlin có hoạt tính gây độc tế bào đáng lưu ý với dòng tế bào KB Hep-G2, hemiasterlin có cấu hình (S,S,S) thể hoạt tính mạnh hemiasterlin có cấu hình (R,S,S) Đặc biệt phát hợp chất hemiasterlin 144a 144b có độc tính gây độc tế bào (IC50 = 0,0017-0,0019 µM) tương đương paclitaxel (0,0039 µM) Bố cục luận án Luận án có 154 trang bao gồm: Mở đầu: trang Chương 1: Tổng quan 27 trang Chương 2: Thực nghiệm 53 trang Chương 3: Kết thảo luận 58 trang Kết luận: trang Phần tài liệu tham khảo có 86 tài liệu lĩnh vực liên quan luận án, cập nhật dến năm 2014 Phần phụ lục gồm 83 trang gồm loại phổ chất tổng hợp Phương pháp nghiên cứu Các chất tổng hợp theo phương pháp tổng hợp hữu đại biết, có cải tiến vận dụng thích hợp vào trường hợp cụ thể Sản phẩm phản ứng làm phương pháp sắc kí cột kết tinh lại Cấu trúc sản phẩm xác định phương pháp phổ như: IR, 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC, HMBC, NOESY MS B-NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN Chương TỔNG QUAN Tổng quan gồm 27 trang, tổng kết tài liệu tình hình nghiên cứu phân lập phương pháp tổng hợp toàn phần hemiasterlin tác giả nước Chương THỰC NGHIỆM Thực nghiệm gồm 53 trang, trình bày chi tiết phương pháp nghiên cứu, quy trình tổng hợp, tinh chế, tính chất vật lý sản phẩm nhận như: điểm chảy, hình thái, màu sắc, hiệu suất phản ứng liệu chi tiết phổ MS, IR, 1H NMR, 13C NMR, HSQC, HMBC NOESY Chúng đưa phương pháp tổng hợp dãy hợp chất hemiasterlin nhờ thay nhóm N-metylindol naphthalen benzofuran với cấu hình thiên nhiên (S) phi thiên nhiên (R) nguyên tử cacbon gắn với nhóm NH-metyl block Chúng tơi đưa phương pháp tổng hợp hemiasterlin có chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp block đồng thời block có chứa nhóm N-metyl NH Chúng tơi xác định hoạt tính gây độc tế bào số hemiasterlin Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Hemiasterlin có hoạt tính chống ung thư mạnh nhờ ức chế q trình polyme hóa tubulin depolyme hóa microtubule Do hàm lượng thiên nhiên thấp cấu trúc độc đáo nên nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu tổng hợp nhằm tìm kiếm hợp chất có cấu trúc lý thú hoạt tính sinh học cao [1-9, 34, 35] Luận án tập trung tổng hợp hemiasterlin nhờ thay nhân N-metylindol bioisostere naphthalen benzofuran; tổng hợp hợp chất có cấu hình thiên nhiên (S) phi thiên nhiên (R) nguyên tử cacbon gắn với nhóm NH-metyl block tổng hợp dẫn xuất hemiasterlin có cấu trúc lược giản chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp (chứa hệ Michael) nhằm tìm kiếm hợp chất hemiasterlin 3.1 Tổng hợp block 3.1.1 Tổng hợp block nhờ thay nhóm N-metylindol naphthalen benzofuran Nguyên liệu tổng hợp azlacton andehit axetyl glyxin, phần lớn andehit thơm có sẵn, nhiên benzofuran-3-cacbandehit khơng có thị trường nên nghiên cứu tổng hợp andehit từ nguyên liệu 1-(2-hydroxyphenyl)etanon (125) Quy trình tổng hợp benzofuran-3-cacbandehit (129h) thực qua bốn bước phản ứng, tóm tắt sơ đồ 3.1 Sơ đồ 3.1 to phßng, 20h (CH3CO)2O, H2O Block có chứa naphthalen benzofuran tổng hợp từ phản ứng ngưng tụ N-glyxin axetyl với 0,75 đương lượng andehit 129a,h tạo thành azlacton 130a,h, mở vòng azlacton dung dịch NaOH 1N HCl 5N 12N nhận axit 131a,b, sau axit dimetyl hóa MeI có mặt xúc tác NaOH 10N nhận α,α-dimetylaryl 132a,b Cuối amin hóa α,α-dimetylaryl 132a,b metylamin THF, sau khử hóa BH3-pyridin nhận block 133a,b, sơ đồ tổng hợp block thực sau: Sơ đồ 3.2 Trên phổ H-NMR 133a xuất tín hiệu cộng hưởng proton dạng multiplet vùng trường thấp 7,80-7,86 ppm gán cho proton nhân naphthanyl, ngồi tín hiệu doublet có J = 8,5 Hz đặc trưng proton vị trí số 4’ nhân naphthalen Hai nguyên tử hydro vị trí 5’ 8’ nhân napthalen cộng hưởng 7,46 ppm tín hiệu triplet với số tương tác 7,0 Hz Tín hiệu vùng trường cao proton singlet 2,19 ppm đặc trưng nhóm metyl amino, hai nhóm α,α-dimetyl cộng hưởng 1,44 ppm (6H, s) Trên phổ IR chất 133a có động đặc trưng nhóm amin bậc II thể đỉnh hấp thụ 3248 cm-1, đỉnh hấp thụ nhóm cacbonyl 1669 cm-1 Ngồi phổ IR cịn xuất dao động hóa trị dao động biến dạng của liên kết C-H bão hòa, C-H C=C nhân thơm Các liệu phân tích phổ IR H-NMR cho phép khẳng định cấu trúc chất 133a Như vậy, tổng hợp thành công hai block (132a, b) có chứa naphthalen benzofuran thay cho nhóm N-metylindol qua đường tổng hợp azlacton nhờ bốn bước phản ứng 3.1.2 Tổng hợp block chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp Các azlacton 130a-g tổng hợp điều kiện tương tự hợp chất 130a,h (sơ đồ 3.2), thủy phân azlacton dung dịch NaOH 1N sau dung dịc HCl 5N nhận block chứa chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp 134a-g với hiệu suất từ 65-88% (sơ đồ 3.3) Sơ đồ 3.3 Cấu trúc hợp chất 134 chứng minh phương pháp phổ IR, 1H-NMR 13C-NMR Trên phổ 1H-NMR hợp chất 134b xuất đầy đủ tín hiệu cộng hưởng Tín hiệu cộng hưởng vùng trường thấp proton dị vòng furan-3-yl, tín hiệu proton 7,64 ppm gán cho vị trí H-2’, tín hiệu 7,39 ppm gán cho H-5’ tín hiệu 7,37 ppm gán cho vị trí H-4’ Cũng tương tự phổ azlacton, cấu hình Z liên kết olefin khơng thể phổ 1H-NMR tín hiệu nhóm metilen tín hiệu singlet cộng hưởng 6,51 ppm, khẳng định rõ phổ IR có tín hiệu dao động biến dạng đặc trưng liên kết đơi có cấu hình Z 1267; 1230 cm-1 Cấu hình Z-olefin mạch nhánh sản phẩm thủy phân azlacton điều kiện tương tự chứng minh tài liệu [42,43,67,69,71] Ngoài ra, 1H-NMR hợp chất 134b thấy rõ tín hiệu cộng hưởng nhóm metyl axetyl vùng trường cao có giá trị 2,10 ppm Trên phổ 13C-NMR hợp chất 134b thể đầy đủ tín hiệu cộng hưởng nguyên tử cacbon Trong nhóm cacbonyl NH-axetyl cộng hưởng 170,9 ppm, nhóm cacbonyl axit cộng hưởng 166,8 ppm Tín hiệu vòng furan-3-yl thể đầy đủ phổ, ngun tử cacbon vị trí C-5’ cộng hưởng 145,3 ppm, tín hiệu cộng hưởng 143,6 ppm gán cho vị trí C-2’, giá trị cộng hưởng C-3’ 123,3 ppm, vị trí C-4’ cộng hưởng 109,5 ppm Ngoài phổ xuất tín hiệu cộng hưởng nguyên tử cacbon bậc liên kết đơi 126,5 ppm, nhóm metilen cộng hưởng 119,0 ppm Mặt khác, liệu phổ MS IR khẳng định cấu trúc hợp chất 134b Như vậy, tổng hợp thành cơng block có chứa hệ α,βcacbonyl-N-axetyl hợp chất 134a-g nhờ thủy phân azlacton 130a-g với hiệu suất cao đạt 65-88% 3.2 Tổng hợp block Nhằm đa dạng hóa cấu trúc hemiasterlin, chúng tơi tiếp tục có thay đổi cấu trúc block nhờ việc tổng hợp block có chứa nhóm N-metyl NH Sơ đồ 3.4 Nguyên liệu 135 chuyển hóa thành Weinreb amit 136a, nửa sản phẩm 136a đươc metyl hóa nhận chất 136b Weinreb amit 136a,b khử hóa LiAlH4 THF nhận andehit 137a,b, sau dó thực phản ứng Wittig nhận block có chứa nhóm bảo vệ Boc 138a,b, cuối loại bỏ nhóm bảo vệ nhận block 139a,b Cơ chế hình thành sản phẩm 138a,b giải thích sau [31,46,74-78]: O Ph3P O Ph3P OEt R Boc N OEt O R BocN O PPh3 CO2Et ylit H anti-betain nhanh 137a R=H 137b R=metyl R BocN CO2Et - Ph3PO R BocN O PPh3 CO2Et anti-oxaphosphetan 138a R=H 138b R=metyl Sơ đồ 3.5 Cấu trúc sản 138a-b 139a-b chứng minh phương pháp phổ IR, 1H-NMR 13C-NMR Trên phổ 1H-NMR hợp chất 138a thể đầy đủ tín hiệu cộng hưởng Tín hiệu cộng hưởng proton doublet 6,51 ppm với số tương tác J = 9,5 Hz đặc trưng nhóm metin E-olefin Tín hiệu cộng hưởng proton multiplet 4,22 ppm đặc trưng nhóm metin liên kết với NH, nhóm metin mạch nhánh isopropyl cộng hưởng 1,44 ppm multiplet Ngoài ra, phổ xuất đầy đủ tín hiệu nhóm etoxy 4,17 (2H, q) 1,29 ppm (3H, t, J = 7,0 Hz) Hai nhóm metyl mạch nhánh isopropyl thể hai tín hiệu doublet 0,94 (3H, d, J = 7,0 Hz) 0,89 (3H, d, J = 7,0 Hz), ba nhóm metyl nhóm bảo vệ Boc cộng hưởng 1,43 ppm (9H, s) Như vậy, từ kết phân tích phổ 1H-NMR cho phép khẳng định cấu trúc hợp chất 138a Trên phổ 1H-NMR chất 139a tương tự chất 138a tín hiệu cộng hưởng nhóm bảo vệ Boc Như vậy, tổng hợp thành công hai block có chứa nhóm NH nhóm N-metyl dạng muối TFA chất 139a-b 3.3 Tổng hợp dipeptit block 2-3 Các phương pháp tổng hợp toàn phần hemiasterlin trình bày phần tổng quan, tổng hợp riêng lẻ block 1, Sau gắn block với block tạo thành dipeptit, cuối gắn block vào dipeptit block 2-3 tạo thành hemiasterlin [6,7,8] Trong luận án áp dụng phương pháp ghép nối để tổng hợp 10 hợp chất 141a Trên phổ 1H-NMR hai hợp chất 142a tương tự hai hợp chất 141a tín hiệu proton metyl nhóm bảo vệ 3.4 Tổng hợp hemiasterlin nhờ thay nhóm N-metylindol bioisostere naphthalen benzofuran Bioisostere nhóm đẳng cấu điện tử (isostere) cho tác dụng sinh học hay cịn gọi nhóm đẳng cấu sinh học Thay đổi bioisostere chiến lược quan trọng thiết kế phát triển thuốc, nhằm tìm kiếm thuốc có tương tác tốt với mục tiêu tác dụng, hạn chế độc tính tác dụng phụ thuốc [29, 30, 32] Chúng lựa chọn bioisostere nhân naphthalen benzofuran để thay cho nhóm N-metylindol hemiasterlin Naphthalen có đặc tính điện tử tương tự indol [26-30, 59-62] nên hy vọng hemiasterlin chứa bioisostere có hoạt tính tốt Benzofuran có đặc tính tương tự indol cặp điện tử chưa sử dụng nguyên tử nitơ có đặc tính điện tử N-metyl nhân indol hemiasterlin nguyên có liên kết hydro mạnh nên hy vọng có tương tác tốt với đích tác dụng [32] Các lý khích lệ tổng hợp hemiasterlin nhờ thay đổi nhân N-meylindol nhân naphthalen bezofuran nhằm tìm kiếm hemiasterlin có cấu trúc hoạt tính lý thú Các hemiasterlin kiểu tổng hợp nhờ ghép nối block axit N-metyl-α,α-dimetylarylpropanoic 133a-b với dipeptit block 2-3 142b để tạo thành hemiasterlin Mặt khác block 133a-b hỗn hợp racemic nên hemiasterlin tạo thành dạng thiên nhiên ((S)NH-metyl)) phi thiên nhiên ((R)-NH-metyl)) Với phương pháp tổng hợp thực nhiệm vụ tổng hợp hemiasterlin có cấu hình thiên nhiên phi thiên nhiên với thay đổi bioisotere khác 3.4.1 Tổng hợp este hemiasterlin Sơ đồ 3.7 12 Hợp chất 142b (block 2-3) phản ứng với 1,1 đương lượng chất 133a (block 1) có mặt tác nhân hoạt hóa PyPOP 2,5 đương lượng DIEA, phản ứng thực dung mơi DMF nhiệt độ phịng khoảng 18h nhận hemiasterlin 143a hemiasterlin 143a' với hiệu suất tương ứng 26% 23% Cấu trúc sản phẩm 143a 143a’ chứng minh kết hợp nhiều phương pháp phổ đại như: IR, 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC NOESY Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR hemiasterlin 143a 143a' thể đầy đủ tín hiệu cộng hưởng, hai phổ có dạng phổ tương tự giá trị cộng hưởng có khác rõ ràng Điều dễ hiểu hai hợp chất 143a chất 143a' cặp đồng phân dia lập thể khơng đối quang (diastereomer) nên có dạng phổ 1H-NMR tương tự nhau, phân tử hai hợp chất có nhiều trung tâm bất đối (ba trung tâm) nên tín hiệu cộng hưởng dễ dàng tách khỏi Trên phổ 1H-NMR hợp chất 143a’ tín hiệu cộng hưởng vùng trường thấp proton multiplet khoảng 7,78-7,84 ppm đặc trưng cho proton nhân naphthalen, tín hiệu hai proton vị trí 6’ 7’ nhân naphthalen thể dạng tín hiệu multiplet khoảng 7,47-7,50 ppm, tín hiệu proton vị trị H-1’ nhân napthalen cộng hưởng 7,61 ppm dạng doublet với số tương tác đặc trưng 2,5 Hz Tín hiệu cộng hưởng proton doublet 6,63 ppm với J = 9,0 Hz đặc trưng proton E-olefin (H-3); tín hiệu proton triplet 5,12 ppm gán cho vị trí H-4; tín hiệu 4,70 gán cho vị trí H-14; tín hiệu 4,21 ppm gán cho proton H-10 Nhóm etyl hợp chất 143a' có giá trị cộng hưởng 4,11 ppm (2H, q, CH2CH3) 1,23 ppm (3H, t, J = 7,0 Hz, CH3CH2) Tín hiệu đặc trưng nhóm Nmetyl block hợp chất 143a’ cộng hưởng 3,02 (3H, s) tín hiệu cộng hưởng nhóm N-metyl block hợp chất 143a’ cộng hưởng trường cao 2,04 ppm (3H, s) Tín hiệu vùng trường cao proton singlet 1,90 ppm đặc trưng cộng hưởng nhóm metyl liên kết với nối đơi E-olefin Hai nhóm gemdimetyl block thể 1,56 ppm 1,52 ppm Nhóm isopropyl block phân tử hợp chất 143a’ thể ba tín hiệu cộng hưởng, tín hiệu cộng hưởng nhóm metin (H-5) dạng multiplet 1,85-1,88 ppm, hai nhóm metyl hai cặp doublet cộng hưởng 0,87 ppm với J = 7,0 Hz 0,85 ppm với J = 7,0 Hz Nhóm tert-butyl block phân tử hợp chất 143a' tín hiệu singlet cộng hưởng 0,99 ppm (9H, s) Giá 13 trị độ chuyển dịch hóa học proton H-14 hợp chất 143a' chất 143a so sánh với liệu tài liệu [8,9,20] cho phép khẳng định cấu hình nguyên tử cacbon gắn với nhóm NH-metyl block hợp chất 143a' R hợp chất 143a có cấu hình S Để khẳng định cấu hình nhóm NH-metyl block chất 143a 143a' sử dụng phương pháp phổ hai chiều NOESY tìm tương tác proton nhóm proton khơng gian gần với Kết phân tích phổ NOESY khẳng định cấu hình nhóm ngun tử cacbon chứa nhóm NH-metyl block hợp chất 143a S hợp chất 143a' R, nghĩa hợp chất 143a' có cấu hình thiên phi nhiên hợp chất 143a có cấu hình thiên nhiên Các tương tác phổ NOESY khẳng định cấu hình hợp chất 143a 143a' thể hình vẽ sau [20]: 16 8' 7' 9' 6' 10' 5' 1' 17 2' 14 15 3' O 12 11 13 N 10 NH H N O O O 4' 143a Hình 3.1 Phổ 1H-NMR hợp chất 143a Ngồi ra, phổ 13C-NMR hợp chất 143a 143a' thể đầy đủ tín hiệu cộng hưởng 33 nguyên tử cacbon phân tử Giá trị cộng hưởng hợp chất 143a hợp chất 143a' hoàn toàn phù hợp với với hợp chất tương tự công bố tài liệu [8,9] 14 16 8' 7' 6' 5' 9' 10' 1' 17 2' 14 15 3' O 12 11 13 N 10 NH H N O O O 4' 143a' Hình 3.2 Phổ 1H-NMR hợp chất 143a' Cơ chế hình thành sản phẩm 143a 143a' nhờ xúc tác PyBOP có mặt DIPEA giải thích sau: Sơ đồ 3.8 Như vậy, nhờ phản ứng ghép nối block với dipeptit block 2-3, tổng hợp thành công hai este hemiasterlin 143a 143a' Tương tự, dipeptit 142b (block 2-3) phản ứng với 1,1 đương lượng chất 133b (block 1) có mặt tác nhân hoạt hóa PyPOP 2,5 15 đương lượng DIEA, dung mơi DMF nhiệt độ phịng khoảng 18h nhận hemiasterlin 143b hemiasterlin 143b' với hiệu suất tương ứng 24% 32% Cơ chế hình thành hemiasterlin 143b 143b’ giải thích tương tự hình thành hemiasterlin 143a 143a' Sơ đồ 3.9 Cấu trúc hemiasterlin 143b 143b’ chứng minh phương pháp phổ IR, 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC NOESY Cấu hình hemiasterlin 143b’ 143b chứng minh tương tự hemiasterlin 143a 143a’ so sánh với liệu tài liệu [69] Như vậy, nhờ phản ứng block hỗn hợp hai racemic 133a 133b với dipeptit block 2-3 có mặt tác nhân hoạt hóa PyBOP Chúng tơi tổng hợp thành cơng este hemiasterlin có thay nhóm N-metylindol bioisostere naphthalen benzofuran hai kiểu cấu hình thiên nhiên (S) phi thiên nhiên (R) nguyên tử cacbon gắn với nhóm NH-metyl block 3.4.2 Tổng hợp axit hemiasterlin Các hemiasterlin phân lập từ thiên nhiên thường dạng axit chúng tơi tiến hành thủy phân dẫn xuất este hemiasterlin để nhận dẫn xuất axit tác nhân thủy phân chọn lọc LiOH, nhằm tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học lý thú Este hemiasterlin 143a phản ứng với 10 đương lượng LiOH dung mơi MeOH/H2O (3:1), nhiệt độ phịng khoảng 10h nhận axit hemiasterlin 144a với hiệu suất 80% Sơ đồ 3.10 16 Phổ 1H-NMR hemiasterlin 144a xuất đầy đủ tín hiệu cộng hưởng tương tự 143a tín hiệu nhóm etyl Ngồi ra, phổ 13C-NMR thể tín hiệu cộng hưởng 31 nguyên tử cacbon, hai tín hiệu cacbon nhóm etyl giá trị khoảng 60 ppm 14,3 ppm Từ giữ liệu phân tích phổ cộng hưởng từ hạt nhân cho phép khẳng định cấu trúc axit hemiasterlin 144a Thành công việc tổng hợp dẫn xuất axit hemiasterlin 144a cho phép thủy phân este hemiasterlin 143a', 143b 143b’ 10 đương lượng LiOH hệ dung môi MeOH/H2O (3/1) nhận este axit 144a', 144b 144b’ với hiệu suất cao tương ứng 72%, 69% 68% (sơ đồ 3.11 sơ đồ 3.12) Cấu trúc sản phẩm xác định nhờ phương pháp phổ IR, 1H-NMR 13C-NMR Sơ đồ 3.11 Sơ đồ 3.12 Như vậy, tổng hợp thành công dẫn xuất axit hemiasterlin (144a-a’, 144b-b’) nhờ thủy phân dẫn xuất este hemiasterlin 143a-a', 143b-b’ với hiệu suất cao (68-80%) 3.5 Tổng hợp hemiasterlin có chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp Tổng hợp hemiasterlin có cấu trúc nguyên gặp nhiều khó khăn phải điểu khiển cấu hình (S) ngun tử cacbon chứa nhóm NH-metyl tổng hợp hệ α,α-dimetylaryl phải qua nhiều bước với hiệu suất thấp Khắc phục nhược điểm này, người ta tổng hợp hemiasterlin có cấu trúc lược giản thể hoạt tính cao [8] Mặt khác, peptit thiên nhiên chứa hệ α,β-cacbonyl liên hợp thường có hoạt tính mạnh [32,33], chúng làm trung tâm thu nhận nucleophin sinh học nhóm NH, NH2, protein, DNA, RNA…theo phản ứng Michael Từ ý tưởng đưa phương pháp tổng hợp hemiasterlin có cấu trúc lược giản chứa hệ α,β-cacbonyl-Naxetyl liên hợp làm trung tâm thu nhận nucleophin sinh học, nhằm tìm kiếm hemiasterlin có cấu trúc lược giản Ngồi ra, 17 hemiasterlin chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp có hai biến đổi block chứa nhóm NH N-metyl nhằm đa dạng hóa cấu trúc 3.5.1 Tổng hợp este hemiasterlin chứa nhóm NH block Các este hemiasterlin dạng tổng hợp nhờ phản ứng block có chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl dipeptit (block 2-3) có chứa nhóm NH block Dipeptit 142a (block 2-3) phản ứng với 1,0 đương lượng chất 134a-g (block 1) có mặt 1,1 đương lượng EDC, 1,1 đương lượng HOBt 2,0 đương lượng i-PrNHEt dung môi DMF nhiệt độ phòng khoảng 12h nhận este hemiasterlin 146a-g với hiệu suất 50% Sơ đồ 3.13 Cấu trúc hemiasterlin 146a-g chứng ming phương pháp phổ IR, MS, 1H-NMR 13C-NMR Hợp chất 146b chất rắn màu vàng sáng, có điểm chảy 130-131oC Trên phổ 1H-NMR hợp chất 146b xuất đầy đủ tín hiệu cộng hưởng Các tín hiệu cộng hưởng proton nhân furan-3-yl thể vùng trường thấp, tín hiệu 7,67 ppm đặc trưng proton H2’, tín hiệu 7,45 ppm gán cho vị trí H-5’ tín hiệu cộng hưởng 7,03 ppm gán cho vị trí H-4’ Tín hiệu trường thấp dạng singlet 6,83 ppm gán cho vị trí proton H-15, tín hiệu proton olefin 6,54 gán cho vị trí H-3 Tín hiệu proton multiplet 4,53-4,58 ppm gán cho vị trí proton H-4 Tín hiệu proton 4,38 ppm đặc trưng nhóm metin H-10 Tín hiệu nhóm etoxy cộng hưởng 4,14-4,20 ppm (2H, m, CH2 Et) 1,27 ppm (3H, t, J = 7,0 Hz, CH3 Et) Tín hiệu nhóm metyl axetyl dạng singlet cộng hưởng 2,19 ppm Tín hiệu nhóm metyl liên kết với olefin cộng hưởng 1,93 ppm (3H, s, CH3-C=CH) Tín hiệu multiplet cộng hưởng 1,72-1,77 ppm gán cho vị trí H-5, tín hiệu proton dạng doublet-doublet 0,86 ppm với số tương tác J = 7,5 Hz 13,5 gán cho vị trí 18 H-6 H-7 Tín hiệu proton singlet gán cho proton vị trí H12 12 O 4' 3' 5' O 1' 2' 15 14 11 O H N OEt 13 N 10 H O NHAc 146b Hình 3.3 Phổ 1H-NMR hợp chất 146b Mặt khác, phổ 13C-NMR hợp chất 146b xuất đầy đủ tín hiệu cộng hưởng 25 ngun tử cacbon Trong có tín hiệu cộng hưởng nhóm cacbonnyl bao gồm tín hiệu 169,9 ppm 162,3 ppm đặc trưng hai nhóm cacbonyl amit (C-13 C-9), tín hiệu 168,3 ppm đặc trưng nhóm cacbonyl axetyl, tín hiệu cộng hưởng 164,7 ppm đặc trưng nhóm este Tín hiệu cộng hưởng nguyên tử cacbon nhân furan-3-yl thể 148,9 ppm gán cho cacbon C-5’, tín hiệu 143,8 ppm gán cho vị trí C-2’, tín hiệu cacbon C-3’ C-4’ cộng hưởng 113,6 ppm 110,0 ppm Tín hiệu cộng hưởng 139,5 ppm đặc trưng nguyên tử cacbon vị trí C-14 Tín hiệu cộng hưởng 129,7 ppm gán cho cacbon C-3, tín hiệu cộng hưởng 126,9 ppm gán cho vị trí C-2, tín hiệu cộng hưởng 114,2 ppm gán cho vị trí C-15 Các nhóm metin hợp phần leuxin cộng hưởng 61,2 ppm (C-10) tín hiệu cộng hưởng nhóm metin (C-4) cộng hưởng 60,5 ppm Nhóm metylen etyl cộng hưởng 52,7 ppm nhóm metyl etyl cộng hưởng 14,2 ppm Các tín hiệu nhóm isopropyl hợp phần valin thể 34,7 ppm C-5, hai nhóm metyl C-6 C-7 cộng hưởng 18,6 ppm Tín hiệu 32,5 ppm nhóm N-axetyl Các tín hiệu vùng trường cao 26,6 ppm đặc trưng nhóm metyl hợp phần tert-leuxin, tín hiệu 13,0 ppm đặc trưng nhóm metyl liên kết với cacbon olefin 19 12 O 4' 3' 5' O 1' 2' 15 14 11 O H N OEt 13 N 10 H O NHAc 146b Hình 3.4 Phổ 13C-NMR hợp chất 146b Từ phân tích phổ cho phép khẳng định cấu trúc hợp chất 146b Cơ chế hình thành hemiasterlin 146b nhờ phản ứng với dipeptit 142a có mặt tác nhân EDC, HOBt i-PrNHEt dung mơi DMF giải thích sau: hợp chất 134b phản ứng với tác nhân hoạt hóa EDC tạo thành trạng thái trung gian thứ hoạt động, trạng thái trung gian nhanh chóng phản ứng với HOBt tạo thành trạng thái trung gian thứ hai hoạt động Trong dipeptit 142a có dạng muối đầu N chuyển thành amin tự có mặt tác nhân bazơ i-PrNHEt Nhóm amin nhanh chóng phản ứng với trạng thái trung gian thứ hai tạo thành sản phẩm hemiasterlin 146b Như vậy, nhờ phản ứng ghép nối block với dipeptit block 2-3, có mặt tác nhân hoạt hóa EDC, HOBt i-PrNHEt tổng hợp thành công dẫn xuất este hemiasterlin 146b có chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp đồng thời có chứa nhóm NH block Cấu trúc sản phẩm chứng minh phương pháp phổ đại, chế hình thành giải thích nhờ vai trị tác dụng tác nhân hoạt hóa Như vậy, tổng hợp thành công dẫn xuất este hemiasterlin 146a-g có chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp nhóm NH block Các dẫn xuất chất lần tổng hợp Cấu trúc sản phẩm chứng minh phương pháp 20 phổ đại Cơ chế hình thành sản phẩm giải thích với vai trò quan trọng tác nhân EDC, HOBt i-PrNHEt 3.5.2 Tổng hợp axit hemiasterlin chứa nhóm NH block Nhằm đa dạng hóa cấu trúc hemiasterlin, tiến hành nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất axit hemiasterlin có chứa hệ α,βcacbonyl-N-axetyl liên hợp nhóm NH block Các dẫn xuất axit hemasterlin tổng hợp nhờ phản ứng thủy phân chọn lọc este hemiasterlin LiOH Sơ đồ 3.14 Trên phổ H-NMR hợp chất 147a-g tín hiệu cộng hưởng đặc trưng nhóm etoxi so với hợp chất 146a-g tương ứng Ngoài phổ 13C-NMR hợp chất 147a-g tín hiệu cộng hưởng nguyên tử cacbon so với hợp chất 146a-g tương ứng, điều khẳng định hợp chất 147a-g sản phẩm thủy phân hợp chất 146a-g Phổ IR hợp chất 147a-g có dao động đặc trưng axit Tất dứ liệu phân tích phổ trê khẳng định cấu trúc axit hemiasterlin 147a-g Như vậy, tổng hợp thành công dẫn xuất axit hemiasterlin 147a-g nhờ phản ứng thủy phân este hemiasterlin 146a-g tác nhân thủy phân chọn lọc LiOH dung môi MeOH/H2O=2/1 Cấu trúc sản phẩm khẳng định nhờ phương pháp phổ đại IR, 1H-NMR 13C-NMR 3.5.3 Tổng hợp este hemiasterlin chứa nhóm N-metyl block Cũng với ý tưởng tổng hợp dẫn xuất hemiasterlin có chứa α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp block có chứa nhóm N-metyl, nhằm đa dạng hóa cấu trúc hemiasterlin Các hemiasterlin kiểu tổng hợp nhờ phản ứng block chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp với block 2-3 chứa nhóm N-metyl block 21 Dipeptit 142b (block 2-3) phản ứng với 1,0 đương lượng chất 134a-d,g (block 1) có mặt 1,1 đương lượng EDC, 1,1 đương lượng HOBt 2,0 đương lượng i-PrNHEt, dung mơi DMF nhiệt độ phịng khoảng 12h nhận este hemiasterlin 148a-e với hiệu suất 65-86% Sơ đồ 3.15 Cấu trúc hợp chất 148a-e chứng minh phương pháp phổ 1H-NMR, 13C-NMR, IR Trên phổ 1H-NMR hợp chất 148d xuất đầy đủ tín hiệu cộng hưởng Nhân thơm 1,3 hợp chất 148d cộng hưởng vùng trường thấp, tín hiệu proton 7,29 ppm doublet với số tương tác 8,0 Hz gán cho vị trí H6’, tín hiệu proton H-2’ dạng singlet 7,14 ppm, hai proton H-4’ H-5’ cộng hưởng 6,92 ppm tín hiệu doublet với số tương tác J = 8,5 Hz Tín hiệu proton vùng trường thấp 7,00 ppm gán cho proton vị trí H-15 Trong tín hiệu nhóm metin E-olefin (H-3) cộng hưởng 6,62 ppm có hai số tương tác đặc trưng 1,5 9,5 Hz Tín hiệu cộng hưởng proton 5,09 ppm gán cho vị trí H-10 Nhóm metin vị trí H-4 thể 4,95 ppm dạng tín hiệu doublet với J = 9,5 Hz Nhóm etoxi phân tử hợp chất 148d thể vị trí cộng hưởng tương ứng với nhóm metylen nhóm metyl 4,18-4,23 ppm (2H, m) 1,33 ppm (3H, t, J = 7,0 Hz) Tín hiệu cộng hưởng proton singlet 3,79 ppm đặc trưng nhóm OCH3 Tín hiệu đặc trưng nhóm N-metyl cộng hưởng 3,02 ppm, tín hiệu đặc trưng nhóm axetyl cộng hưởng 2,13 ppm Vùng trường cao có tín hiệu cộng hưởng proton singlet 1,91 ppm đặc trưng nhóm metyl liên kết với nhóm E-olefin Nhóm tert-butyl cộng hưởng 1,01 ppm tín hiệu singlet proton, proton vị trí H-6 H-7 cộng hưởng 0,88 0,86 ppm dạng tín hiệu doublet có số tương tác 7,5 Hz Phổ 13C-NMR hợp chất 148d thể đầy đủ tín hiệu cộng hưởng 29 nguyên tử cacbon Tín hiệu 171,6 ppm gán cho vị trí C-13, tín hiệu 169,2 gán cho nhóm cacbonyl axetyl, tín 22 hiệu 167,7 ppm gán cho nhóm cacbonyl este tín hiệu 164,7 ppm gán cho vị trí C-9 Tín hiệu 159,7 ppm đặc trưng nguyên tử cacbon C-3’ Vị trí C-2 C-3 cộng hưởng giá trị 138,5 125,1 ppm Nguyên tử cacbon vị trí C-14 cộng hưởng 134,9 ppm nguyên tử cacbon C-15 cộng hưởng vùng trường cao 114,4 ppm Ngoài phổ 13C-NMR xuất đầy đủ tín hiệu nhóm metyl vùng trường cao Sự phân tích phổ cộng hưởng từ cho phép khẳng định cấu trúc hợp chất 148d Như vậy, nhờ phản ứng ghép nối block với dipeptit block 2-3, có mặt tác nhân hoạt hóa EDC, HOBt i-PrNHEt tổng hợp thành công dẫn xuất este hemiasterlin 148a-e có chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp đồng thời có chứa nhóm N-metyl block 3.5.4 Tổng hợp axit hemiasterlin chứa nhóm N-metyl block Các dẫn xuất axit hemasterlin tổng hợp nhờ phản ứng thủy phân chọn lọc este hemiasterlin có chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp nhóm NH block LiOH Sơ đồ 3.16 Trên phổ H-NMR hợp chất 149a-e tín hiệu cộng hưởng đặc trưng nhóm etyl so với hợp chất 148a-e tương ứng, phổ 13C-NMR hợp chất 149a-e tín hiệu cộng hưởng nguyên tử cacbon so với hợp chất 148a-e tương ứng, điều khẳng định hợp chất 149a-e sản phẩm thủy phân hợp chất 148a-e Phổ IR hợp chất 149a-e có dao động đặc trưng axit Tất liệu phân tích phổ trê khẳng định cấu trúc axit hemiasterlin 149a-e Như vậy, tổng hợp thành công dẫn xuất axit hemiasterlin 149a-e nhờ phản ứng thủy phân este hemiasterlin 148a-e tác nhân thủy phân chọn lọc LiOH dung môi MeOH/H2O=2/1 Cấu trúc sản phẩm khẳng định nhờ phương pháp phổ đại IR, 1H-NMR 13C-NMR 23 3.6 Xác định hoạt tính gây độc tế bào hemiasterlin Các hemiasterlin tổng hợp nhờ thay nhân N-metylindol bioisostere naphthalen benzofuran thử nghiệm gây độc tế bào dòng tế bào ung thư người cung cấp từ sưu tập giống chuẩn Hoa Kỳ (American Type Culture Collection – ATCC) gồm: Tế bào ung thư biểu mô KB (Human epidermic carcinoma), ung thư gan Hep-G2 (Hepatocellular carcinoma), ung thư phổi LU (Human lung carcinoma) ung thư vú MCF-7 (Human breast carcinoma), nhằm tìm kiếm hemasterlin có hoạt tính mạnh Kết thử hoat tính gây độc tế bào tóm tắt bảng sau: Bảng 3.1 Hoạt tính gây độc tế bào hemiasterlin ST T Chất 143a 143a’ 143b 143b’ 144a 144a’ 144b 144b’ Ellipticine 10 Paclitaxel (nM) IC50 (µM) KB 0,013 0,181 0,013 0,760 0,0019 0,014 0,0017 0,043 1,26 3,9 Hep-G2 0,013 0,144 0,011 0,730 0,0019 0,034 0,0019 0,037 1,26 0,19 LU 132,2 25,5 54,9 >269 >269 205 193,4 42,3 1,82 - MCF7 >269 133,2 >269 >269 >269 >269 >269 >269 2,15 - Từ bảng nhận thấy có 8/8 mẫu hemiasterlin có độc tính tế bào với giá trị IC50 ngưỡng µM Các dẫn xuất hemiasterlin 143a, 143b,144a' 144b’ có độc tính với hai dịng tế bào KB Hep-G2 với giá trị IC50 khoảng 0,011-0,043 µM Đặc biệt dẫn xuất hemiasterlin 144a 144b có độc tính với hai dịng tế bào KB Hep-G2 khoảng 0,00170,0019 µM tương đương với Paclitaxel (3,9 nM = 0,0039 µM) mạnh nhiều lần so với chất đối chứng Ellipticine (1,26 µM) Mặt khác, từ bảng nhận thấy hemiasterlin (143a, 143b, 144a 144b) có cấu hình (S,S,S) có hoạt tính gây độc tế bào với hai dòng KB Hep-G2 mạnh hemiasterlin (143a’, 143b’, 144a’ 144b’) có cấu hình (R,S,S) hàng chục lần 24 Như vậy, việc phát hợp chất hemiasterlin tổng hợp nhờ thay nhân N-metylindol nhân naphthalen benzofuran có ý nghĩa khoa học Đặc biệt phát hai dẫn xuất hemiasterlin 144a 144b có độc tính tương đương paclitaxel KẾT LUẬN 1) Đã áp dụng phương pháp tổng hợp hữu đại như: phản ứng tổng hợp khử hóa Weinreb amit, phản ứng Wittig phản ứng tổng hợp peptit có sử dụng tác nhân hoạt hóa EDC HOBt tổng hợp chọn lọc lập thể dipeptit 142a 142b, mạch nhánh hemiasterlin 2) Đã thiết kế tổng hợp thành công block hemiasterlin, bao gồm: block có cấu trúc lược giản chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp (134a-g) block có thay nhân N-metylindol bioisostere naphthalen (133a) benzofuran (133b) 3) Đã tổng hợp thành công 32 dẫn chất tripeptit hemiasterlin, bao gồm: + dẫn xuất hemiasterlin (143a-a’, 143b-b’, 144a-a’, 144b-b’) với thay N-metylindol hemiasterlin naphthalen benzofuran, có cấu hình thiên nhiên (S) phi thiên nhiên (R) cacbon gắn với nhóm NH-metyl block + 24 dẫn xuất hemiasterlin (146a-g, 147a-g, 148a-e 149a-e) có cấu trúc lược giản chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp (là hệ Michael sinh học) 4) Đã nghiên cứu khẳng định cấu trúc 32 hemiasterlin phương pháp hóa lý đại như: IR, MS, 1H-NMR, 13C-NMR phổ 2D 5) Đã nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư thực nghiệm (KB, Hep-G2, LU MCF7) dẫn xuất hemiasterlin (143a-b, 143a’-b’, 144a-b 144a’-b’), kết cho thấy hợp chất thử nghiệm có hoạt tính gây độc tế bào đáng lưu ý với hai dòng tế bào KB, Hep-G2, hemiasterlin có cấu hình (S,S,S) thể hoạt tính mạnh hemiasterlin có cấu hình (R,S,S) Đặc biệt phát hợp chất hemiasterlin 144a 144b có độc tính gây độc tế bào (IC50 = 0,0017 – 0,0019 µM) tương đương paclitaxel (0,0039 µM) 25 CÁC CƠNG TRÌNH ĐƯỢC CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Chinh Pham The, Tuyet Anh Dang Thi, Thi Phuong Hoang, Quoc Anh Ngo, Duy Tien Doan, Thu Ha Nguyen Thi, Tham Pham Thi, Thu Ha Vu Thi, Mickael Jean, Pierre van de Weghe* and Tuyen Nguyen Van* “Synthesis of New simplified hemiasterlin derivatives with α,β-unsaturated carbonyl moiety”, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2014, 24, 2244-2246 (SCI, IF=2.337) Phạm Thế Chính, Đặng Thị Tuyết Anh, Hoàng Thị Phương, Phạm Thị Thắm, Ninh Khắc Bản, Ngô Quốc Anh, Nguyễn Văn Tuyến, Tổng hợp số mạch nhánh hemiasterlin, Tạp chí Hóa học 2013, 51(2AB) 11-16 Đặng Tuyết Anh, Phạm Thế Chính, Hồng Thị Phương, Phạm Anh Tuân, Ngô Quốc Anh, Nguyễn Văn Tuyến, Tổng hợp dẫn xuất hemiasterlin, Tạp chí Hóa học 2012, 50(5A), 179-183 Pham The Chinh, Dang Thi Tuyet Anh, Hoang Thi Phuong, Pham Thi Tham, Ninh Khac Ban, Ngo Quoc Anh and Nguyen Van Tuyen, Synthesis of several azlactones, Vietnam Journal of Chemistry 2013, 51(5A), 9-11 Pham The Chinh, Dang Thi Tuyet Anh, Hoang Thi Phuong, Pham Thi Tham, Ninh Khac Ban, Doan Duy Tien, Ngo Quoc Anh, Vu Thi Thu Ha and Nguyen Van Tuyen, Synthesis of amides by hydrolysis of azlactones, Proceedings of the 2nd VAST-KAST, NXb Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 2013, 170-176 (hội thảo quốc tế) 26 ... nên nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu tổng hợp nhằm tìm kiếm hợp chất có cấu trúc lý thú hoạt tính sinh học cao [1-9,34,35] Các nghiên cứu trước chủ yếu tập trung tổng hợp hemiaterlin xoay... 2.2.1 Nghiên cứu tổng hợp block hemiasterlin - Tổng hợp block nhờ thay nhóm N-metylindol naphthalen benzofuran - Tổng hợp block chứa hệ α,β-cacbonyl-N-axetyl liên hợp 2.2.2 Nghiên cứu tổng hợp. .. NH-metyl block + 24 dẫn xuất hemiasterlin có cấu trúc lược giản chứa hệ α,βcacbonyl-N-axetyl liên hợp (là hệ Michael sinh học) 4) Luận án xác định dẫn xuất hemiasterlin có hoạt tính gây độc tế