kỹ thuật vô trùng và các phương pháp lên men

KỸ KỸ THU THU Ậ Ậ T VÔ T T VÔ T RÙ RÙ NG V NG V À À CÁ CÁ C PHƯƠNG C PHƯƠNG PHÁ PHÁ P LÊN MEN P LÊN MEN Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 09.09.25.24.19/09.17.27.26.25 09.09.25.24.19/09.17.27.26.25 Email: Email: buihongquan@hui.edu.vn buihongquan@hui.edu.vn Website: Website: www.buihongquan.tk www.buihongquan.tk GBD giữ gìn màu xanh cho quê hương, xây dựng tương lai từ chất lượng cuộc sống Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 2 2 K K Ỹ Ỹ THU THU Ậ Ậ T VÔ TR T VÔ TR Ù Ù NG NG K K ỹ ỹ thu thu ậ ậ t vô tr t vô tr ù ù ng di ng di ệ ệ t s t s ạ ạ ch c ch c á á c t c t ế ế b b à à o v o v à à b b à à o t o t ử ử c c ủ ủ a vi sinh v a vi sinh v ậ ậ t trong môi trư t trong môi trư ờ ờ ng ban đ ng ban đ ầ ầ u u   Kh Kh ử ử tr tr ù ù ng ng   T T ẩ ẩ y tr y tr ù ù ng ng   S S á á t tr t tr ù ù ng ng Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 3 3 PHƯƠNG PH PHƯƠNG PH Á Á P KH P KH Ử Ử TR TR Ù Ù NG NG   V V ậ ậ t l t l ý ý   Hó Hó a h a h ọ ọ c c   Sinh Sinh họ họ c c Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 4 4 Phương Phương phá phá p v p v ậ ậ t l t l ý ý   Cơ Cơ   Nhi Nhi ệ ệ t t   Quang Quang   B B ứ ứ c x c x ạ ạ Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 5 5 Phương Phương phá phá p h p h ó ó a h a h ọ ọ c c   C C ồ ồ n n   Oxide ethylene: kh Oxide ethylene: kh ử ử tr tr ù ù ng d ng d ụ ụ ng c ng c ụ ụ plastic plastic   Phenol Phenol   Formaline Formaline Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 6 6 Cơ s Cơ s ở ở khoa h khoa h ọ ọ c c   Vô tr Vô tr ù ù ng tương đ ng tương đ ố ố i i   Vô tr Vô tr ù ù ng tuy ng tuy ệ ệ t đ t đ ố ố i i Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 7 7 VÔ TR VÔ TR Ù Ù NG TƯƠNG Đ NG TƯƠNG Đ Ố Ố I I   Vô tr Vô tr ù ù ng tương đ ng tương đ ố ố i l i l à à vô tr vô tr ù ù ng nh ng nh ữ ữ ng vi sinh v ng vi sinh v ậ ậ t t gây gây ả ả nh hư nh hư ở ở ng nghiêm tr ng nghiêm tr ọ ọ ng ng   Cơ s Cơ s ở ở : l : l ấ ấ n n á á t v t v à à c c ạ ạ nh trang trong sinh h nh trang trong sinh h ọ ọ c c   S S ử ử d d ụ ụ ng: trong qu ng: trong qu á á tr tr ì ì nh lên men truy nh lên men truy ề ề n th n th ố ố ng ng v v à à qu qu á á tr tr ì ì nh thu nh nh thu nh ậ ậ n sinh kh n sinh kh ố ố i vi sinh v i vi sinh v ậ ậ t d t d ù ù ng ng trong chăn nuôi ho trong chăn nuôi ho ặ ặ c trong qu c trong qu á á tr tr ì ì nh ch nh ch ế ế bi bi ế ế n n ti ti ế ế p theo p theo Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 8 8 LÊN MEN KHÔNG VÔ TR LÊN MEN KHÔNG VÔ TR Ù Ù NG NG   Đ Đ ể ể cho qu cho qu á á tr tr ì ì nh lên men di nh lên men di ễ ễ n ra c n ra c ó ó k k ế ế t qu t qu ả ả th th ì ì c c ầ ầ n ph n ph ả ả i i ngăn c ngăn c ả ả n s n s ự ự ph ph á á t tri t tri ể ể n c n c ủ ủ a c a c á á c cơ th c cơ th ể ể l l ạ ạ   Trong vi Trong vi ệ ệ c s c s ả ả n xu n xu ấ ấ t sinh kh t sinh kh ố ố i ( i ( như sinh kh như sinh kh ố ố i n i n ấ ấ m men, m men, sinh kh sinh kh ố ố i vi khu i vi khu ẩ ẩ n, t n, t ả ả o) o) thư thư ờ ờ ng ti ng ti ế ế n h n h à à nh lên men nh lên men không vô tr không vô tr ù ù ng ng   S S ự ự ph ph á á t tri t tri ể ể n c n c ủ ủ a c a c á á c cơ th c cơ th ể ể l l ạ ạ b b ị ị ngăn c ngăn c ả ả n m n m ạ ạ nh m nh m ẽ ẽ b b ằ ằ ng c ng c á á ch t ch t ạ ạ o ra nh o ra nh ữ ữ ng đi ng đi ề ề u ki u ki ệ ệ n nuôi sao cho ch n nuôi sao cho ch ủ ủ ng ng s s ả ả n xu n xu ấ ấ t c t c ó ó th th ể ể sinh trư sinh trư ở ở ng tr ng tr ộ ộ i hơn i hơn . V . V í í d d ụ ụ : nh : nh ờ ờ cơ ch cơ ch ấ ấ t t đ đ ặ ặ c hi c hi ệ ệ u hay pH môi trư u hay pH môi trư ờ ờ ng ng Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 9 9 VÔ TR VÔ TR Ù Ù NG TUY NG TUY Ệ Ệ T Đ T Đ Ố Ố I I   Tiêu di Tiêu di ệ ệ t to t to à à n b n b ộ ộ vi sinh v vi sinh v ậ ậ t gây t t gây t ạ ạ p, p, môi trư môi trư ờ ờ ng ng không ch không ch ứ ứ a m a m ầ ầ m m m m ố ố ng vi sinh v ng vi sinh v ậ ậ t t   Á Á p d p d ụ ụ ng: thu nh ng: thu nh ậ ậ n s n s ả ả n ph n ph ẩ ẩ m tinh khi m tinh khi ế ế t, c t, c ụ ụ th th ể ể ph ph ầ ầ n l n l ớ ớ n l n l à à s s ả ả n ph n ph ẩ ẩ m b m b ậ ậ c hai c hai Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 10 10 LÊN MEN VÔ TR LÊN MEN VÔ TR Ù Ù NG NG   Nhi Nhi ệ ệ m v m v ụ ụ thanh tr thanh tr ù ù ng l ng l à à tiêu di tiêu di ệ ệ t h t h ế ế t vi sinh v t vi sinh v ậ ậ t t c c ó ó m m ặ ặ t trong môi trư t trong môi trư ờ ờ ng (do c ng (do c ó ó s s ẵ ẵ n t n t ừ ừ trong trong th th à à nh ph nh ph ầ ầ n như nư n như nư ớ ớ c, nguyên li c, nguyên li ệ ệ u, không kh u, không kh í í v v à à trên b trên b ề ề m m ặ ặ t c t c á á c thi c thi ế ế t b t b ị ị ti ti ế ế p x p x ú ú c v c v ớ ớ i môi trư i môi trư ờ ờ ng) ng)   Nh Nh ữ ữ ng vi sinh v ng vi sinh v ậ ậ t n t n à à y còn s y còn s ố ố ng s ng s ó ó t s t s ẽ ẽ ph ph á á t tri t tri ể ể n n c c ạ ạ nh tranh v nh tranh v ớ ớ i ch i ch ủ ủ ng s ng s ả ả n xu n xu ấ ấ t, l t, l à à m h m h ỏ ỏ ng qu ng qu á á tr tr ì ì nh lên men nh lên men   C C á á c vi sinh v c vi sinh v ậ ậ t thư t thư ờ ờ ng c ng c ó ó s s ứ ứ c b c b ề ề n v n v ớ ớ i nhi i nhi ệ ệ t, m t, m ộ ộ t t s s ố ố c c ó ó m m ặ ặ t trong nguyên li t trong nguyên li ệ ệ u dư u dư ớ ớ i d i d ạ ạ ng b ng b à à o t o t ử ử . . Mu Mu ố ố n di n di ệ ệ t ch t ch ú ú ng ph ng ph ả ả i gia nhi i gia nhi ệ ệ t t t t ớ ớ i 120 i 120 o o C C – – 121 121 o o C trong v C trong v à à i ch i ch ụ ụ c ph c ph ú ú t t [...]... phải qua kiểm tra vi sinh vật định kỳ Phương pháp kiểm tra: kiểm tra vi sinh vật không khí trong phòng thí nghiệm Ths Bùi Hồng Quân Bù Hồ 21 CÁC PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN Trong quá trình thu nhận các sản phẩm sinh học nói chung và các chế phẩm diệt sâu hại nói riêng, tùy từng đối tượng vi sinh vật mà người ta áp dụng các phương pháp lên men khác nhau Các phương pháp lên men gồm: – Nuôi không liên tục Nuôi... amino acid hoặc các vitamin bị phá hỏng Những thành phần mẫn cảm với nhiệt có khi phải khử trùng riêng, sau đó mới trộn lẫn hoặc khử trùng theo phương pháp khác như lọc qua phin vô trùng Ngoài cách khử trùng theo phương pháp hơi nước gián đoạn này, người ta còn dùng phương pháp khử trùng bằng hơi liên tục bằng cách cho môi trường chảy qua thiết bị khử trùng chuyên dụng ở nhiệt độ 140oC trong vài phút Ths...KHỬ TRÙNG BẰNG NỒI HẤP Trong lên men từng mẻ các thiết bị sau khi làm vệ sinh được khử trùng bằng hơi nóng tới 120oC – 130oC Sau đó mới cho môi trường lỏng vào các nồi lên men khử trùng môi trường cùng với cả hệ thống khuấy và các đoạn đường ống, van tiếp cận Việc gia nhiệt cao có thể dẫn đến sự phá hủy các thành phần dinh dưỡng mẫn cảm với nhiệt và caramen hóa các nguồn đường cũng như xảy ra các phản... xuất một số enzyme Phương pháp này thường thích hợp cho một số nấm mốc và xạ khuẩn Việc nuôi thường được tiến hành trên các khay phẳng xếp chồng lên nhau và ủ trong các buồng chứa vô trùng đóng kín Giống được cấy vào bằng cách thổi bào tử vào bên trong buồng chứa Giống vi sinh vật hiếu khí sau khi cấy sẽ phát triển trên bề mặt và dần dần lan xuống phía dưới theo các kẽ hở giữa các cấu tử thành phần môi... trường đã lên men rút ra khỏi nồi lên men một cách liên tục với cùng một tốc độ Phương pháp đơn giản, dễ ứng dụng Sản xuất để thu sinh khối nấm men hoặc sản phẩm là các chất chuyển hóa gắn trực tiếp với sự phát triển của tế bào Ths Bùi Hồng Quân Bù Hồ 32 PHƯƠNG PHÁP NHIỀU CẤP Vi sinh vật được nuôi ở hệ thống nồi lên men đặt làm nhiều cấp Nồi thứ nhất được dùng cho vi sinh vật phát triển tốt nhất Các nồi... với formalin – Màng lọc: Thùng nuôi cấy (tủ cấy vô trùng) Điều kiện: thực hiện trước khi nuôi cấy Ưu điểm: ít tốn điện, đầy không khí một phí, hút không khí một phía Ths Bùi Hồng Quân Bù Hồ 19 PHÒNG VÔ TRÙNG Phòng vô trùng, phòng cấy, tủ cấy vô trùng Phòng vô trùng thổi khí vô trùng tạo áp suất ao bên trong phòng (người thực hiện: phả qua phòng riêng tắm và mặc quần áo chuyên biệt phủ toàn thân) Ths... các tế bào tiết ra chất chuyển hóa Môi trường dinh dưỡng mới được bổ sung vào nồi thứ nhất và từ đó lần lượt chày vào nồi tiếp theo Nồi lên men thường xuyên được cung cấp thêm dung dịch dinh dưỡng mới Cũng với tốc độ như vậy, môi trường đã bị sử dụng một phần và các tế bào đã được rút đi Ths Bùi Hồng Quân Bù Hồ 33 PHƯƠNG PHÁP NHIỀU CẤP Việc khuấy và thông khí nhằm trộn đều chất chứa trong nồi lên men( hệ... trong một thời gian dài Phương pháp nuôi gián đoạn thường được sử dụng cho sự lên men vô trùng Dễ dàng về mặt kỹ thuật Ths Bùi Hồng Quân Bù Hồ 23 NUÔI KHÔNG LIÊN TỤC – NUÔI CHÌM Dùng cho cả vi sinh vật kị khí và hiếu khí Đối với nuôi vi sinh vật kị khí trong quá trình nuôi không cần sục khí, chỉ thỉnh thoảng khuấy trộn Vi sinh vật hiếu khí thì phải sục khí liên tục Là phương pháp hiện đại đã được dùng... khoảng 60 – 90 phút và cứ sau 15 phút lại đảo môi trường 3 – 5 phút Ths Bùi Hồng Quân Bù Hồ 12 KHỬ TRÙNG MÔI TRƯỜNG LỎNG NUÔI CẤY CHÌM Khử trùng nồi lên men và hệ thống đường ống tiếp xúc với môi trường bằng hơi nóng Cho dịch môi trường đã pha chế vào nồi (lượng dịch bằng ¾ thể tích nồi và phải tính thêm phần nước ngưng khi cho hơi trực tiếp vào môi trường) Gia nhiệt tới nhiệt độ thanh trùng Giữ ở nhiệt... cấy vào môi trường được phân tán khắp mọi điểm và chung quanh bề mặt tế bào được tiếp xúc với dịch dinh dưỡng Đặc điểm này đòi hỏi trong suốt quá trình nuôi cấy phải khuấy và cung cấp oxy bằng cách sục khí liên tục Ths Bùi Hồng Quân Bù Hồ 24 Phương pháp nuôi cấy chìm được dùng phổ biến trong công nghệ vi sinh Men bánh mì Protein đơn bào Các chế phẩm vi sinh làm phân bón Thuốc trừ sâu Các enzyme Các . KỸ KỸ THU THU Ậ Ậ T VÔ T T VÔ T RÙ RÙ NG V NG V À À CÁ CÁ C PHƯƠNG C PHƯƠNG PHÁ PHÁ P LÊN MEN P LÊN MEN Ths. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng. B Ths. B ù ù i H i H ồ ồ ng Quân ng Quân 8 8 LÊN MEN KHÔNG VÔ TR LÊN MEN KHÔNG VÔ TR Ù Ù NG NG   Đ Đ ể ể cho qu cho qu á á tr tr ì ì nh lên men di nh lên men di ễ ễ n ra c n ra c ó ó k k ế ế t. kh ố ố i n i n ấ ấ m men, m men, sinh kh sinh kh ố ố i vi khu i vi khu ẩ ẩ n, t n, t ả ả o) o) thư thư ờ ờ ng ti ng ti ế ế n h n h à à nh lên men nh lên men không vô tr không vô tr ù ù ng ng   S S ự ự ph ph á á t