Bài thuyết trình Tiểu luận môn Hóa sinh ứng dụng: Sinh tổng hợp kháng sinh Streptomycin

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN KHOA KHTN & CN BÀI TIỂU LUẬN MÔN: HÓA SINH ỨNG DỤNG NHÓM 1 1. Nguyễn Đình Thư 2. Nguyễn Thị Dung 3. Nguyễn Thị Trinh 4. Nguyễn Thị Hạnh 5. Nguyễn Thị Thùy Trinh 6. Nguyễn Thị Thanh Huyền 7. Nguyễn Khả Thị Giang 8. Lê Thị Huyền Trang 9. Trương Thị Hồng Oanh 10. Đỗ Thúy Kiều SINH TỔNG HỢP KHÁNG SINH STREPTOMYCIN 1. Khái quát 1. Khái quát 2. Lên men sản xuất 2. Lên men sản xuất 3. Tách chiết và tinh sạch 3. Tách chiết và tinh sạch 4. Ứng dụng 4. Ứng dụng STREPTOMYCIN 1. Khái quát  Kháng sinh là các chất có khả năng ức chế hoặc tiêu diệt vi sinh vật.  Streptomycin là một kháng sinh dùng phổ biến trong y học, thú y và bảo vệ thực vật. Nguồn gốc: Streptomyces griseus (Actinomyces streptomycin) Thuộc nhóm aminoglycosid, ức chế tổng hợp protein của vi khuẩn Phổ rộng, ức chế cả vi khuẩn Gram (+) và Gram (-) Phân lập: 19/10/1943 bởi Albert Schatz 1.1. Streptomycin D-glucose-6P 1L-myo-inositol-1P Myo-inositol Scyllo-inosose Scyllo-inosamine Amidino-Scyllo-inosamine-4P Scyllo-inosamine-4P Amidino-3-keto-Scyllo-inosamine Amidino-Scyllo-inosamine Amidinostreptamine-6P Amidinostreptamine Dihydrostreptomycin-6P Streptidine-6P D- Glucose-1P dTDP-glucose dTDP-4-oxo-6-deoxy-D-Glucose dTDP-4-oxo-L-rhamnose dTDP-L-rhamnose dTDP-L-dihydro-streptose Butirosin and neomycin biosynthesis Polyketide sugar unit biosynthesis O-1,4-α-L-dihydro-streptosyl-streptidine-6P Streptomycin-6P streptomycin Aminoglycosides NDP-N-methyl-L-glucosamine D - glucose Sơ đồ sinh tổng hợp streptomycin 1.2. Xác định hoạt tính kháng sinh của streptomycin Theo phương pháp của Loo, Y.H. et al., (1945) và Waksman S.A (1945) bằng phương pháp khuyếch tán trên thạch.  Môi trường khoáng: pH = 7,3  Trước khi xác định bổ sung thạch 1,5%, glucose 0,5% đã thanh trùng bằng phương pháp lọc và 1ml dung dịch muối vào môi trường thạch nóng chảy sau khi làm lạnh xuống 55 o C. Sau đó lắc đều và đổ 30ml môi trường vào đĩa peptri vô trùng(φ= 100mm) và để đông lại. Độ dày của môi trường thạch 2,0± 0.2mm.  Vi sinh vật kiểm định được sử dụng là E.coli. Giống ban đầu được bảo quản trong môi trường thạch nghiêng ở 4 o C. Thành ph nầ KH 2 PO 4 K 2 HPO 4 NaCl (NH 4 ) 2 SO 4 % 0,32 0,42 0,2 0,2 1.2. Xác định hoạt tính kháng sinh của streptomycin  Sau khi đục lỗ thạch, nhỏ dung dịch streptomycin cần xác định đã pha loãng đến nồng độ thích hợp vào lỗ thạch và xác định theo phương pháp của Dmitrieva, 1970.  Đối chứng sử dụng kháng sinh streptomycin base chuẩn.  1 đơn vị streptomycin tương đương 0,97mcg streptomycin base. 2. Lên men sản xuất streptomycin 2.1. Chủng giống sản xuất  Xạ khuẩn Streptomyces griseus [...]... 590đv/mg, hiệu suất đạt 84% từ streptomycin sunphat 3.2 Tách chiết bằng phương pháp trao đổi ion Dịch lên men Thu hoạch Lọc Loại bỏ tạp Streptomycin chất sunphat tinh khiết Qua cột Cô đặc chân nhụa không Pha loãng Sấy khô 4 Ứng dụng  Là kháng sinh đầu tiên và ứng đầu trong nhóm aminoglycosid điều trị bệnh lao  Streptomycin được dùng trong điều trị bệnh tularemia, dịch hạch  Phối hợp với tetracyclin trong... hòa bằng NaOH đến pH=7, lọc loại bỏ chất không hòa tan Dịch streptomycin sunphat sạch được đông và cô chân không ở 200 đến 600psi Sản phẩm là bột màu trắng có 600đv/ml, hiệu suất thu hồi 60%, độ sạch đạt 400đv/mg Điều chế streptomycin hydrochlorid  Quá trình điều chế tương tự như streptomycin sunphat nhưng thay HCl trong quá trình acid hóa  Streptomycin hòa tan trong aceton và tủa với aceton 75% ... bằng 10l nước Hỗn hợp dịch lọc với dịch rủa được trung hòa đến pH=7 bằng NaOH và khuấy với 1000g than hoạt tính trong 30 phút Than hoạt tính chứa streptomycin lọc ép với bột trợ diatomit và rửa sạch 2 lần với 10l nước Tách Streptomycin ra khỏi than hoạt tính bằng 3,5l aceton (5-10%) đã acid hóa đến pH=2,5 bằng H 2SO4 Dịch streptomycin được khuấy với 3 lần thể tích (28,5l) aceton để rửa streptomycin sunphat... đã acid hóa  Dung dịch tách chiết và dịch rửa đã được điều chỉnh pH = 7,7 bằng NaOH và cô đặc chân không đến còn 1/10 thể tích  Bổ sung 4 lần thể tích aceton để kết tủa streptomycin hydrochlorid  Hỗn hợp được làm lạnh qua đêm, lọc thu nhận kết tủa, hòa tan vào nước, đông lạnh và sấy khô chân không  Streptomycin hydrochlorid thu được là dạng bột hơi với năng suất thu được 43,5% Điều chế streptomycin. .. streptomycin hydrochlorid  Streptomycin hydrochlorid cũng được tạo ra từ streptomycin sunphat bằng cách cho 1g streptomycin sunphat (632000đv) hòa tan trong 7ml nước, pH = 3,2  Dung dịch CaCl2 (100ml) đã được bổ sung nhỏ giọt với khuấy liên tục đến một điểm kết tủa và kết tủa được loại bỏ bằng cách ly tâm và rửa sạch  Dịch lọc nhận được được làm lạnh đông và sấy khô Streptomycin hydrochlorid thu... trong điều trị bệnh Brucella và phối hợp với tetracyclin hoặc sulfonamid để điều trị bệnh sổ mũi ngựa (nhiễm khuẩn Mallomyces mallei)  Dùng đơn độc hoặc phối hợp với các thuốc chống nhiễm khuẩn khác để điều trị u hạch bẹn và da cam, lậu  Phối hợp với penicilin G hoặc ampicilin thường có hiệu quả trong điều trị viêm màng trong tim do Enterococcus và Strepxococcus  Streptomycin sunphat hấp thu từ ruột... men 2.3 Quá trình lên men sản xuất Phương pháp lên men: nuôi cấy chìm gồm 2 pha Pha1 Pha 2 • • • • Các bào tử nảy chồi và mọc thành sợi sau 6-8h Mỗi bào tử mọc một chồi, khuẩn ty thường mọc thẳng và phân nhánh rất yếu, tế bào chất kiềm Khuẩn ty không phát triển Cuối ngày thứ ba sợi xạ khuẩn bị chia nhỏ và bắt dầu tự phân 3 Tách chiết và tinh sạch 3.1 Tách chiết bằng dung môi  Điều chế streptomycin. ..2.2 Môi trường và điều kiện lên men  Môi trường: phải phù hợp với điều kiện nơi sản xuất và điều kiện phát triển của chủng giống  pH= 7,2 Thành phần Pepton Glucose NaCl ( g) Thành Cao thịt 3 5 10 5 Dextrose Cao thịt- pepton NaCl Kali phosphat phần (g) Amon MgSO4.7H2O... màng trong tim do Enterococcus và Strepxococcus  Streptomycin sunphat hấp thu từ ruột kém nên thường được sử dụng ở dạng tiêm  Liều bình thường là 0,5 – 1,0g/ngày  Tác dụng phụ: ảnh hưởng thính giác bài tiết, gây độc cho thính gác của thai nhi và tê liệt thần kinh cơ, khả năng gây độc ở trẻ em cao hơn ở người lớn Cảm ơn THẦY và các bạn đã lắng nghe! . TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN KHOA KHTN & CN BÀI TIỂU LUẬN MÔN: HÓA SINH ỨNG DỤNG NHÓM 1 1. Nguyễn Đình Thư 2. Nguyễn Thị Dung 3. Nguyễn Thị Trinh 4. Nguyễn Thị Hạnh 5. Nguyễn. dụng 4. Ứng dụng STREPTOMYCIN 1. Khái quát  Kháng sinh là các chất có khả năng ức chế hoặc tiêu diệt vi sinh vật.  Streptomycin là một kháng sinh dùng phổ biến trong y học, thú y và bảo vệ thực. thạch.  Môi trường khoáng: pH = 7,3  Trước khi xác định bổ sung thạch 1,5%, glucose 0,5% đã thanh trùng bằng phương pháp lọc và 1ml dung dịch muối vào môi trường thạch nóng chảy sau khi làm lạnh