Kỹ thuật ương nuôi cá Khoang Cổ Đỏ (Amphiprion frenatus Brevoort, 1865) đến kích thước thương mại

Trong thập niên 90, chi phí xuất nhập khẩu cá cảnh và trang thiết bị phục vụ nuôi cá trên toàn cầu đạt 7,2 tỷ USD mỗi năm 23, và đến năm 2000 chi phí nhập khẩu cá cảnh và sinh vật cảnh đã vượt trên 50 tỷ USD. Cá nhập khẩu chủ yếu có nguồn gốc từ Châu Á (chiếm 65%), Châu Âu (19%), Nam Mỹ (7%) và Bắc Mỹ (6%) 59.Nước Mỹ là quốc gia điển hình trong hoạt động xuất nhập khẩu cá cảnh. Giá trị xuất khẩu thu được từ nguồn lợi cá cảnh của Mỹ năm 1989 là 8,6 triệu USD. Đến năm 1995, con số này tăng đến 19,8 triệu USD. Trong suốt thời gian từ năm 1994 đến 1998, Mỹ đã xuất khẩu cá cảnh sang 68 quốc gia với tổng giá trị xuất khẩu khoảng 80 triệu USD. Các quốc gia như Nhật Bản (33%), Canada (26%), Hồng Kông (9%), Brazil (6%) và Mexico (6%) là các quốc gia chủ yếu nhập khẩu cá cảnh từ thị trường Mỹ 32. Việc tăng trưởng nhanh chóng tổng giá trị thương mại cũng như chi phí xuất nhập khẩu cá cảnh đã phần nào minh chứng lợi ích kinh tế của lĩnh vực cá cảnh. Nhu cầu thị trường về cá cảnh và sinh vật cảnh biển ngày càng cao thì mối đe dọa ảnh hưởng đến các hệ sinh thái đặc biệt là hệ sinh thái rạn san hô ngày càng nghiêm trọng. Đông Nam Á là khu vực có rạn san hô phong phú, đa dạng nhất trên thế giới. Hiện nay, 88% diện tích san hô hiện đang bị đe doạ. Một trong những nguyên nhân chính gây ra tình trạng trên là phương thức đánh bắt cá một cách bừa bãi như sử dụng các loại thuốc nổ và chất độc cyanua để khai thác cá 68. Do vậy, việc nghiên cứu các đặc điểm sinh học sinh sản, cho sinh sản nhân tạo và sản suất giống các đối tượng cá cảnh biển là cần thiết nhằm giảm bớt áp lực khai thác làm hủy hoại môi trường tự nhiên và tiến tới phục hồi lại nguồn lợi chúng. Cá Khoang Cổ thuộc họ cá Thia Pomacentridae, bộ cá Vược Perciformes, đa dạng về chủng loại, phong phú về màu sắc và có khả năng thích nghi cao trong điều kiện nuôi nhân tạo nên chúng được nuôi làm cảnh khá phổ biến ở các khu du lịch, giải trí văn hóa cũng như ở qui mô gia đình.Vào những năm cuối thế kỷ 19 các nhà khoa học trên thế giới đã tập trung nghiên cứu về sinh học và sinh thái của một số loài cá Khoang Cổ như Amphiprion frenatus, Amphiprion bicinctus, Amphiprion chrysopterus, Amphiprion clarkii, Amphiprion melanopus, Amphiprion ocellaris. Một số nước cũng đã tiến hành nghiên cứu cho sinh sản nhân tạo chúng như Liên Bang Nga, Canada, Pháp, Đức, Thái Lan nhằm mục đích bảo vệ nguồn lợi tự nhiên và kinh doanh 21, 24, 51, 61, 62. Giá trị kinh tế của cá phụ thuộc vào màu sắc, kích cỡ và hình dáng. Hiện nay, giá một con cá Khoang Cổ Đỏ (giai đoạn giống) là 12 đến 14 USD 69.Ở Việt Nam, trên cơ sở kết quả nghiên cứu các đặc điểm sinh học cá Khoang Cổ Đỏ vào năm 2001 2002, phòng Công nghệ Nuôi trồng Viện Hải Dương Học đã tiếp tục nghiên cứu cho sinh sản nhân tạo cá Khoang Cổ Đỏ trong những năm tiếp theo Đến nay đã hoàn thiện được qui trình sản xuất giống và nuôi thương mại loài cá này

LỜI CẢM ƠN

Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, Khoa Nuôi trồng Thuỷ sản, PhòngĐào tạo Đại học và Sau Đại học Trường Đại học Nha Trang, Phòng Công nghệ Nuôitrồng, Phòng Hoá sinh Viện Hải Dương Học đã quan tâm giúp đỡ và tạo mọi điều kiệncho tôi làm việc trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Hà Lê Thị Lộc đã dìu dắt tôi trên conđường nghiên cứu khoa học, trực tiếp hướng dẫn tận tình, chu đáo trong suốt quá trìnhthực hiện đề tài và viết luận văn

Xin cảm ơn cô Nguyễn Thị Kim Bích, TS Nguyễn Thị Thanh Thuỷ, TS.Nguyễn Hữu Huân, TS Phạm Xuân Kỳ, TS Lê Anh Tuấn, TS Hoàng Thị Huệ An đãnhiệt tình hướng dẫn và đóng góp ý kiến trong quá trình thực hiện đề tài và viết luậnvăn

Xin cảm ơn KS Nguyễn Trung Kiên, KS Nguyễn Trí Tâm và các cán bộ ViệnHải Dương Học đã giúp đỡ tôi thực hiện đề tài

Xin gửi lời cảm ơn gia đình và bạn bè đã động viên, kích lệ tôi trong suốt quátrình học tập và thực hiện đề tài

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi Các số liệu, kếtquả trình bày trong luận văn hoàn toàn trung thực và chưa được ai công bố trong bất

cứ công trình khoa học nào khác

Các số liệu trong luận văn thuộc bản quyền của đề tài cấp tỉnh: “Hoàn thiện quy

trình sản xuất giống và nuôi thương mại cá Khoang Cổ Đỏ - Amphirion frenatus” –

Viện Hải Dương Học

Tác giả luận văn

Bùi Thị Quỳnh Thu

MỤC LỤC

Lời cảm ơn i

Lời cam đoan ii

Mục lục iii

Danh mục các chữ viết tắt v

Danh mục các bảng vi

Danh mục các hình vii

MỞ ĐẦU 1

Chương I - TỔNG QUAN 3

1.1 Những nghiên cứu về cá Khoang Cổ trên thế giới và ở Việt Nam 3

1.2 Đặc điểm sinh học của Cá Khoang Cổ Đỏ 5

1.2.1 Vị trí phân loại và hình thái 5

1.2.2 Phân bố 6

1.2.3 Đặc điểm cộng sinh 7

1.2.4 Đặc điểm dinh dưỡng 8

1.2.5 Đặc điểm sinh trưởng và tuổi 9

1.2.6 Đặc điểm sinh sản 10

1.2.7 Sự phát triển của ấu trùng và sự định cư 12

1.3 Vai trò của Astaxanthin trong nuôi trồng thuỷ sản 12

Chương II - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

2.1 Đối tượng, thời gian, địa điểm nghiên cứu 15

2.2 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 15

2.2.1 Nguồn nước thí nghiệm 15

2.2.2 Dụng cụ thí nghiệm 16

2.2.3 Nguồn cá thí nghiệm 16

2.2.4 Thí nghiệm ảnh hưởng mật độ nuôi 16

2.2.5 Thí nghiệm ảnh hưởng của độ mặn đối với cá thương mại 16

2.2.6 Thí nghiệm ảnh hưởng của các loại thức ăn 17

2.2.7 Chăm sóc và quản lý 21

2.3 Phương pháp thu thập và xử lý số liệu 21

2.3.1 Các thông số môi trường trong hệ thống nuôi 21

2.3.2 Xác định các thông số và công thức tính 21

2.3.3 Công thức pha độ mặn 22

2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 22

Chương III - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 23

3.1 Quá trình phát triển cá Khoang Cổ Đỏ kích thước thương mại 23

3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của mật độ nuôi đến sinh trưởng và tỷ lệ sống của cá Khoang Cổ Đỏ 24

3.2.1 Môi trường trong hệ thống bể thí nghiệm 24

3.2.2 Sinh trưởng và tỷ lệ sống của cá Khoang Cổ Đỏ ở các mật độ khác nhau 26

3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của độ mặn đến sinh trưởng và tỷ lệ sống của cá Khoang Cổ Đỏ 29

3.3.1 Môi trường trong hệ thống bể thí nghiệm 29

3.3.2 Sinh trưởng của cá Khoang Cổ Đỏ ở các độ mặn khác nhau 31

3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng của các loại thức ăn đến sinh trưởng, tỷ lệ sống và màu sắc của cá Khoang Cổ Đỏ 35

3.4.1 Môi trường trong bể thí nghiệm 35

3.4.2 Ảnh hưởng các loại thức ăn đến sinh trưởng của cá Khoang Cổ Đỏ 37

3.4.3 Ảnh hưởng của các loại thức ăn đến tỷ lệ sống 40

3.4.4 Ảnh hưởng của các loại thức ăn đến màu sắc 41

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 45

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

Art: Artemia

Ast: Astaxanthin

DO: hàm lượng oxy hoà tan (Dissolvel Oxygen)

GRL: sinh trưởng tuyệt đối về chiều dài (Growth Rate – Length)

GRwư: sinh trưởng tuyệt đối về khối lượng tươi (Growth Rate – wet weight)

L: lít

ppt: phần nghìn (part per thousand)

SGRL: sinh trưởng đặc trưng về chiều dài toàn thân (Specific Growth Rate – Length)TH: thức ăn tổng hợp

DANH MỤC CÁC BẢNG

TrangBảng 1: Một số yếu tố môi trường trong hệ thống bể nuôi 24Bảng 2: Sinh trưởng về chiều dài và khối lượng của cá Khoang Cổ Đỏ từ 1 tháng tuổi

ở các mật độ khác nhau 26Bảng 3: Tốc độ sinh trưởng đặc trưng về chiều dài và tỷ lệ sống của cá Khoang Cổ Đỏ

từ 1 tháng tuổi ở các mật độ khác nhau 27Bảng 4: Một số yếu tố môi trường trong hệ thống nuôi 29Bảng 5: Sinh trưởng về chiều dài và khối lượng của cá Khoang Cổ Đỏ khi nuôi ở các

độ mặn khác nhau 31Bảng 6: Tốc độ tăng trưởng đặc trưng về chiều dài của cá Khoang Cổ Đỏ khi nuôi ởcác độ mặn khác nhau 32Bảng 7: Một số yếu tố môi trường trong hệ thống nuôi 35Bảng 8: Sinh trưởng về chiều dài và khối lượng của cá Khoang Cổ Đỏ với các loạithức ăn khác nhau 37Bảng 9: Tốc độ sinh trưởng đặc trưng về chiều dài và tỷ lệ sống của cá Khoang Cổ Đỏvới các loại thức ăn khác nhau 38Bảng 10: Màu sắc cá thể hiện trong các nghiệm thức thức ăn khác nhau 41Bảng 11: Hàm lượng sắc tố của cá tại các nghiệm thức thức ăn khác nhau 43

DANH MỤC CÁC HÌNH

Trang

Hình 1: Cá Khoang Cổ Đỏ 6

Hình 2: Bản đồ phân bố địa lý của cá Khoang Cổ Đỏ 6

Hình 3: Cá Khoang Cổ Đỏ và Hải Quỳ 7

Hình 4: Phổ thức ăn của cá Khoang Cổ Đỏ tại Nha Trang – Khánh Hòa 8

Hình 5: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 15

Hình 6: Sơ đồ xử lý nguồn nước thí nghiệm 15

Hình 7: Sơ đồ bố trí thí nghiệm mật độ nuôi 16

Hình 8: Sơ đồ bố trí thí nghiệm độ mặn 17

Hình 9: Sơ đồ bố trí thí nghiệm về màu sắc cá 18

Hình 10: Sơ đồ quy trình tách chiết carotenoid và Astaxanthin 19

Hình 11: Quá trình phát triển cá Khoang Cổ Đỏ giai đoạn thương mại 24

Hình 12: Biến động nhiệt độ và độ mặn 25

Hình 13: Biến động hàm lượng oxy hoà tan và Nitrite 25

Hình 14: Chiều dài cá ở các nghiệm thức mật độ khác nhau 28

Hình 15: Khối lượng cá ở các nghiệm thức mật độ khác nhau 28

Hình 16: Tỷ lệ sống cá ở các nghiệm thức mật độ khác nhau 29

Hình 17: Biến động độ mặn và pH 30

Hình 18: Biến động hàm lượng DO và Nitrite 30

Hình 19: Chiều dài cá ở các độ mặn khác nhau 33

Hình 20: Khối lượng cá ở các độ mặn khác nhau 34

Hình 21: Tỷ lệ sống của cá ở các độ mặn khác nhau 34

Hình 22: Biến động nhiệt độ và độ mặn 36

Hình 23: Biến động hàm lượng DO và Nitrite 36

Hình 24: Chiều dài cá ở các nghiệm thức thức ăn khác nhau 39

Hình 25: Khối lượng cá ở các nghiệm thức thức ăn khác nhau 40

Hình 26: Tỷ lệ sống của cá ở cácnghiệm thức thức ăn khác nhau 40

Hình 27: Cá nuôi tại nghiệm thức thức ăn Tôm + Ast và Art 42

Hình 28: cá nuôi tại nghiệm thức thức ăn TH+ Ast và Art 42

Hình 29: Cá nuôi tại nghiệm thức thức ăn Art khô + Ast và Art 43

MỞ ĐẦU

Trong thập niên 90, chi phí xuất nhập khẩu cá cảnh và trang thiết bị phục vụnuôi cá trên toàn cầu đạt 7,2 tỷ USD mỗi năm [23], và đến năm 2000 chi phí nhậpkhẩu cá cảnh và sinh vật cảnh đã vượt trên 50 tỷ USD Cá nhập khẩu chủ yếu có nguồngốc từ Châu Á (chiếm 65%), Châu Âu (19%), Nam Mỹ (7%) và Bắc Mỹ (6%) [59]

Nước Mỹ là quốc gia điển hình trong hoạt động xuất nhập khẩu cá cảnh Giá trịxuất khẩu thu được từ nguồn lợi cá cảnh của Mỹ năm 1989 là 8,6 triệu USD Đến năm

1995, con số này tăng đến 19,8 triệu USD Trong suốt thời gian từ năm 1994 đến

1998, Mỹ đã xuất khẩu cá cảnh sang 68 quốc gia với tổng giá trị xuất khẩu khoảng 80triệu USD Các quốc gia như Nhật Bản (33%), Canada (26%), Hồng Kông (9%),Brazil (6%) và Mexico (6%) là các quốc gia chủ yếu nhập khẩu cá cảnh từ thị trường

Mỹ [32] Việc tăng trưởng nhanh chóng tổng giá trị thương mại cũng như chi phí xuấtnhập khẩu cá cảnh đã phần nào minh chứng lợi ích kinh tế của lĩnh vực cá cảnh

Nhu cầu thị trường về cá cảnh và sinh vật cảnh biển ngày càng cao thì mối đedọa ảnh hưởng đến các hệ sinh thái đặc biệt là hệ sinh thái rạn san hô ngày càngnghiêm trọng Đông Nam Á là khu vực có rạn san hô phong phú, đa dạng nhất trên thếgiới Hiện nay, 88% diện tích san hô hiện đang bị đe doạ Một trong những nguyênnhân chính gây ra tình trạng trên là phương thức đánh bắt cá một cách bừa bãi như sửdụng các loại thuốc nổ và chất độc cyanua để khai thác cá [68] Do vậy, việc nghiêncứu các đặc điểm sinh học sinh sản, cho sinh sản nhân tạo và sản suất giống các đốitượng cá cảnh biển là cần thiết nhằm giảm bớt áp lực khai thác làm hủy hoại môitrường tự nhiên và tiến tới phục hồi lại nguồn lợi chúng

Cá Khoang Cổ thuộc họ cá Thia Pomacentridae, bộ cá Vược Perciformes, đadạng về chủng loại, phong phú về màu sắc và có khả năng thích nghi cao trong điềukiện nuôi nhân tạo nên chúng được nuôi làm cảnh khá phổ biến ở các khu du lịch, giảitrí văn hóa cũng như ở qui mô gia đình

Vào những năm cuối thế kỷ 19 các nhà khoa học trên thế giới đã tập trung

nghiên cứu về sinh học và sinh thái của một số loài cá Khoang Cổ như Amphiprion frenatus, Amphiprion bicinctus, Amphiprion chrysopterus, Amphiprion clarkii, Amphiprion melanopus, Amphiprion ocellaris Một số nước cũng đã tiến hành nghiên

cứu cho sinh sản nhân tạo chúng như Liên Bang Nga, Canada, Pháp, Đức, Thái Lannhằm mục đích bảo vệ nguồn lợi tự nhiên và kinh doanh [21, 24, 51, 61, 62]

Giá trị kinh tế của cá phụ thuộc vào màu sắc, kích cỡ và hình dáng Hiện nay,giá một con cá Khoang Cổ Đỏ (giai đoạn giống) là 12 đến 14 USD [69].

Ở Việt Nam, trên cơ sở kết quả nghiên cứu các đặc điểm sinh học cá Khoang

Cổ Đỏ vào năm 2001 - 2002, phòng Công nghệ Nuôi trồng Viện Hải Dương Học đãtiếp tục nghiên cứu cho sinh sản nhân tạo cá Khoang Cổ Đỏ trong những năm tiếp theoĐến nay đã hoàn thiện được qui trình sản xuất giống và nuôi thương mại loài cá này

Được sự chấp thuận của Khoa Nuôi Thủy Sản và Viện Hải Dương Học, thời

gian qua tôi đã cùng tham gia thực hiện đề tài của Viện và Luận án Thạc sĩ “Kỹ thuật

ương nuôi cá Khoang Cổ Đỏ (Amphiprion frenatus Brevoort, 1865) đến kích

thước thương mại” là một phần trong nội dung của đề tài đã nghiên cứu.

Mục tiêu luận án:

Xác định các yếu tố dinh dưỡng, độ mặn, mật độ nuôi ảnh hưởng đến màu sắc,tốc độ tăng trưởng và tỷ lệ sống của cá Khoang Cổ Đỏ thương mại

Nội dung nghiên cứu:

1 Nghiên cứu ảnh hưởng của mật độ nuôi đến sinh trưởng và tỷ lệ sốngcủa cá Khoang Cổ Đỏ

2 Nghiên cứu ảnh hưởng của độ mặn đến sinh trưởng và tỷ lệ sống của cáKhoang Cổ Đỏ

3 Nghiên cứu ảnh hưởng của các loại thức ăn đến sinh trưởng, tỷ lệ sống

và màu sắc của cá Khoang Cổ Đỏ

Điểm mới của luận án:

Các thông số khoa học trong những thí nghiệm của Luận án Thạc sĩ đã gópphần nghiên cứu hoàn thiện qui trình sản xuất giống và nuôi thương mại loài cáKhoang Cổ Đỏ, là tài liệu tham khảo cho những nghiên cứu tiếp theo nhằm xây dựngquy trình sản xuất giống và nuôi thương mại cá Khoang Cổ nói riêng và các loài cárạn san hô nói chung

Chương I - TỔNG QUAN

1.1 Những nghiên cứu về cá Khoang Cổ trên thế giới và ở Việt Nam.

Cá Khoang Cổ được nuôi làm cảnh đã bắt đầu từ năm 1881 nhưng những hiểubiết về đặc điểm sinh học của chúng đến gần giữa thế kỷ XX mới được khám phá [38].Các nhà khoa học đã tiến hành nghiên cứu các đặc điểm sinh học và sinh thái học củacác loài cá cảnh biển như Allen (1972) đã nghiên cứu về sinh thái học của các loài cáKhoang Cổ [22] Gohar (1934), Fautin và Allen (1992) nghiên cứu về sự cộng sinh của

cá Khoang Cổ và Hải Quì [44, 39]; Frank (1996) nghiên cứu về điều kiện sinh thái của

cá Khoang Cổ [41]; Bell (1976) [29], Frakes (1982) [40], Brusle-Sicard, Reinboth(1990) [31], Godwin và Thomas (1993) [46], Godwin (1994a &1994b) [47, 48],Astakhov et al (2002) [24], đã nghiên cứu về các đặc điểm sinh sản và cho sinh sảnnhân tạo một số loài cá Khoang Cổ

Từ năm 1980 đến nay, một số nước đã nghiên cứu cho sinh sản nhân tạo thànhcông các loài cá Khoang Cổ do đặc điểm đáng chú ý của chúng là hầu như luôn sốngcộng sinh cùng Hải Quỳ

Tại Đức, Neugebauer (1969), đã cho sinh sản và ương thành công loài

Amphiprion akallopisos và loài Amphiprion ephippium Thể tích bể nuôi 400L với sự hiện diện của hải quỳ Stichodactyla giganteum Cá sử dụng rong Caulerpa làm thức

ăn, nhiệt độ nuôi: 24 – 260C Cá con sinh ra được nuôi bằng Nguyên sinh động vật cótiêm mao Euplotes và tảo xanh lục [39]

Alayse (1983) đã nuôi ấu trùng cá Amphiprion ocellaris bằng Luân Trùng Branchionus plicatilis và nauplii của Artemia Chất lượng dinh dưỡng của Luân Trùng

được nâng lên khi bổ sung thức ăn khô vào bể nuôi Phương pháp này đã cải thiện tỷ lệsống của ấu trùng từ 5% lên 40% sau 30 ngày tuổi [21]

Năm 1985, tại Berlin, các nhà khoa học cho sinh sản nhân tạo thành công thêm

3 loài là Amphiprion clarkii, Amphiprion frenatus và Amphiprion ocellaris mà không

có Hải Quỳ trong hệ thống nuôi với tỷ lệ sống cá con thấp (10%) [5]

Năm 1997 – 1999, các nhà khoa học tại vườn thú Moskva, Nga đã tiến hành

cho sinh sản nhân tạo thành công 5 loài cá khoang cổ: Amphiprion ephippium, Amphiprion melanopus, Amphiprion ocellaris, Amphiprion polymnus, Amphiprion frenatus có sự hiện diện của hải quỳ thích hợp với từng loài Luân Trùng Branchionus

plicatilis được dùng làm thức ăn cho cá ở giai đoạn đầu tiên Các loài tảo được sử dụng để nuôi luân trùng là Nanochloropsis sp., Dunaliella tertiolecta, Phaeodactylum, Rhodomonas salina [24].

Từ năm 2000, Thái Lan tiến hành sinh sản nhân tạo các loài cá Khoang Cổ

Amphiprion frenatus, Amphiprion clarkii, Amphiprion polymnus, Amphiprion perideraion, Amphiprion sandaracinos và Amphiprion ocellaris [25].

Mặc dù các nước trên đã nghiên cứu sinh sản nhân tạo và ương nuôi thành côngmột số loài cá Khoang Cổ nhưng nhìn chung tỷ lệ sống của cá vẫn còn thấp và chưakhép kín được vòng đời của chúng trong hệ thống nuôi nhân tạo

Ở nước ta, từ năm 1986 - 1998, các nhà khoa học đã nghiên cứu điều tra khu hệsinh thái rạn san hô, khu hệ cá quần đảo Trường Sa và phát hiện được 4 loài cá

Khoang Cổ là Amphiprion frenatus, Amphiprion clarkii, A perideraion và A polymnus [11, 12, 13, 14, 15, 16].

Năm 2000, Đào Tấn Hổ và cộng sự đã bổ sung thêm một loài cá Khoang Cổ

vào danh mục các loài cá biển Việt Nam là Amphiprion sandaracinos Năm loài cá Khoang Cổ cộng sinh với 8 loài Hải Quì gồm Entacmaea quadricolor, Stichodactyla gigantea, S mertensii, S haddoni, Heteractis aurora, H magnifica, H malu và H crispa [1].

Từ năm 2000 – 2001, Trương Sĩ Kỳ và cộng sự đã nghiên cứu thử nghiệm sinhsản nhân tạo cá Khoang Cổ vùng biển Khánh Hòa và đã có những kết quả bướcđầu [3, 19]

Năm 2005, Hà Lê Thị Lộc đã hoàn thành Luận án tiến sĩ sinh học với đề tài:

“Nghiên cứu cơ sở sinh học phục vụ cho sinh sản nhân tạo cá Khoang Cổ Amphiprion spp vùng biển Khánh Hoà” [5], tiếp tục nghiên cứu cho sinh sản nhân tạo loài cá Khoang Cổ Đỏ (Amphiprion frenatus).

Những nghiên cứu trên là cơ sở khoa học cho nghiên cứu tiếp theo (2006 2008) về hoàn thiện qui trình sản xuất giống và nuôi thương mại cá Khoang Cổ Đỏ màLuận án thạc sĩ là một phần của nội dung nghiên cứu này

-1.2 Đặc điểm sinh học của Cá Khoang Cổ Đỏ.

1.2.1 Vị trí phân loại và hình thái

 Hệ thống phân loại

Trên thế giới, đã có khá nhiều công trình nghiên cứu phân loại và đặt tên cho

loài cá này Ở Việt Nam, tên khoa học của loài cá Khoang Cổ Đỏ Amphiprion frenatus

Brevoort, 1856 được lưu trong Danh mục cá biển Việt Nam (tập III) do Nguyễn HữuPhụng và cộng tác viên biên soạn (1995) [10] được nhiều nhà khoa học chấp nhận

Giống cá Khoang Cổ : Amphiprion

Loài cá Khoang Cổ Đỏ : Amphiprion frenatus Brevoort, 1856

Tên tiếng anh: Tomato, Fire hoặc Bridled anemonefish

Tên đồng vật (synonym):

 Amphiprion frenatus Brevoort, Exp.Japan, Vol.2, 1856.

 Prochilus polylepsis Bleeker, Verh Holl Maatch Wetenssch, No.3, Vol.2, 1877.

 Amphiprion macrostoma Chevey, Travaux Inst Occanog Indo – China, Mem.

4, 1932

 Amphiprion polypepis Fowler và Bean (1928: 9) (Philippine), Okada và Ikeda

(1937: 89) (Ryukyus)

 Amphiprion melanopus Scott (1959:105) (Malaysia).

 Amphiprion ephippium Smith (1960:319, pl 33, fig 4) (Africa)

 Màu sắc

Toàn thân cá có màu đỏ cà chua sáng

Cá trưởng thành có một sọc trắng băng

ngang qua xương nắp mang Con cái thường

đen ở hai bên thân Phần miệng, bụng, ngực

và các vây màu đỏ Con đực toàn thân có

màu đỏ Giai đoạn con non (kích cỡ < 5cm)

trên cơ thể có hai sọc trắng trên thân: một

sọc ngang qua xương nắp mang, một sọc từ

giữa gốc vây lưng xuống khởi điểm vây hậu

môn [5] Marliave (1985) cũng thấy có sự thay đổi màu sắc tương tự trên cơ thể cáKhoang Cổ Đỏ giai đoạn con non và giai đoạn trưởng thành [53]

1.2.2 Phân bố

Trên thế giới, cá Khoang Cổ Đỏ phân bố ở vùng biển Indonesia, Malaysia, TháiLan, phía nam biển Nhật Bản, Trung Quốc, Đài Loan, phía đông Châu Phi [39] ỞViệt Nam, chúng phân bố vùng ven biển miền Trung và vịnh Thái Lan [10] Vùng biểnKhánh Hòa chúng hiện diện không nhiều (chiếm khoảng 7% tổng số lượng của cáKhoang Cổ) [5]

 Phân bố sinh thái

Ngoài tự nhiên, hầu hết các loài cá

Khoang Cổ đều sống quanh vùng rạn san

hô biển nhiệt đới, nơi có độ sâu từ 1 –

50m nước Đa phần chúng sinh sống ở

mực nước từ 5 – 15m Màu sắc sặc sỡ tùy

theo giai đoạn phát triển của cá thể Do

thiết bị lặn không đầy đủ, Hà Lê Thị Lộc

(2005), chỉ thu được cá Khoang Cổ Đỏ ở

độ sâu < 15m Ở độ sâu này, cá tập trung

nhiều trong khoảng từ 4 – 10m Nhiệt độ

nước ở vùng phân bố đo đạt được 260C - 280C, độ mặn dao động từ 32 – 35‰. Loài cá

Hình 1: Cá Khoang Cổ Đỏ

Hình 2: Bản đồ phân bố địa lý của cá

Khoang Cổ Đỏ [66]

này sống ở rạn san hô nên chúng là những loài hẹp muối và hẹp nhiệt Chất đáy vùng

cá phân bố có đáy san hô, đá, cát hoặc sỏi cát, nơi có Hải Quỳ cư trú [5]

Kết quả nghiên cứu trong phòng thí nghiệm ở các ngưỡng nhiệt độ khác nhau là

24 - 250C, 26 - 280C và 32 - 340C cho thấy nhiệt độ phù hợp để nuôi cá Khoang Cổ Đỏvới mục đích làm cảnh là 26 - 280C, cá thường xuyên hoạt động, bơi lội nhấp nhô, tạo

sự hấp dẫn cho hệ thống nuôi

Tương tự, kết quả thí nghiệm độ mặn phù hợp của cá Khoang Cổ trong hệthống nuôi cho thấy loài cá Khoang Cổ Đen Đuôi Vàng có thể thích nghi với sự daođộng độ mặn lớn, từ 20 - 45‰ (tỷ lệ sống trên 50%), nhưng độ mặn phù hợp nhất cho

cá nuôi chỉ từ 25 - 40‰ [5]

1.2.3 Đặc điểm cộng sinh

Cá Khoang Cổ có thể được bảo vệ an toàn nhờ các loài Hải Quỳ, tránh được sựtấn công của các loài ăn thịt khác Cá Khoang Cổ còn dọn sạch những vật bẩn ra khỏiHải Quỳ và qua những thí nghiệm cho thấy cá Khoang Cổ còn chăm sóc những xúc tucủa Hải Quỳ, giữ chúng luôn ở trong tình trạng sạch sẽ và khỏe mạnh [36]

Tuy nhiên, đôi khi có những cụm Hải Quỳ không có cá mà chúng vẫn có thểsống mà không cần đến cá Khoang Cổ [37] Ngược lại, đời sống của cá Khoang Cổ lạihoàn toàn tùy thuộc vào Hải Quỳ và không bao giờ tìm thấy cá Khoang Cổ sống trong

tự nhiên mà không có Hải Quỳ [1]

Ngoài tự nhiên, chỉ bắt gặp cá

Khoang Cổ Đỏ cộng sinh với một

loài Hải Quỳ Entacmaea quadricolor,

nhưng trong hệ thống nuôi nhốt, Hà

Lê Thị Lộc, (2005) đã tìm thấy cá

Khoang Cổ Đỏ còn có thể sống cộng

sinh với loài hải quỳ Heteractis malu.

Ngoài ra, trong hệ thống nuôi, cá

Khoang Cổ Đỏ có thể sống, sinh

trưởng và sinh sản bình thường mà không cần sự hiện diện của sinh vật cộng sinh HảiQuỳ [5]

Ngoài tự nhiên, mỗi ổ Hải Quỳ thường gặp một loài cá cộng sinh và cá Khoang

Cổ không thường xuyên trong Hải Quỳ trừ khi trốn tránh kẻ thù, nhưng trong điều

Hình 3: Cá Khoang Cổ Đỏ và Hải Quỳ [5]

kiện nuơi nhốt, nếu cĩ lồi Hải Quỳ ưa thích thì cặp cá Khoang Cổ Đỏ luơn luơn ẩntrong Hải Quỳ và chỉ ra ngồi khi ăn Trong các bể nuơi vào ban đêm, hầu như cáKhoang Cổ Đỏ nằm ngủ trong Hải Quỳ mà khơng ra ngồi.

1.2.4 Đặc điểm dinh dưỡng

Thành phần thức ăn quan trọng nhất của cá Khoang Cổ là sinh vật phù du Thức

ăn chính của chúng là bọn Chân mái chèo và các lồi rong tảo biển Hầu hết rong biển

thuộc ngành rong Đỏ (giống Hypnea) và rong Lục (Schizothrix Mexicana) Nhĩm Chân mái chèo thuộc bọn Calanoid (Paracaudacia truncata) và bọn Harparticoid (Tisbe furcata) chiếm chủ yếu Sau đĩ là bọn Tunicate, Amphipoda, Isopoda, Mollusca, trứng cá, giun…thỉnh thoảng cịn gặp cả trứng cá Khoang Cổ [39].

Theo Allen (1972), trứng cá Khoang Cổ cũng thỉnh thoảng bắt gặp trong bao tửcủa những cá bố mẹ đang chăm sĩc ổ trứng Những trứng hầu hết được nhặt ra đều đặn

từ tổ và được bố mẹ tiêu hĩa trong suốt thời gian ấp nở Sau khi cá đẻ trứng, cá đựcchăm sĩc trứng và ăn những trứng khơng thụ tinh hoặc bị hư hỏng [22] Một số tác giảkhác cho rằng trong điều kiện nuơi cho sinh sản nhân tạo, cá bố mẹ sẽ ăn trứng cá củamình nếu người nuơi khơng cách ly chúng ra khỏi ổ trứng [55]

Hà Lê Thị Lộc (2004), cho biết khi nghiên cứu thành phần thức ăn trong dạ dày

cá Khoang Cổ Đỏ A fenatus vùng biển Khánh Hịa cho thấy chúng là lồi ăn tạp Thành phần thức ăn chủ yếu trong dạ dày là bọn Copepoda (chiếm 34,61%), sau đĩ là

trứng cá các loại (11,2%) Ngồi ra,

cĩ nhiều chủng loại thức ăn khác

nhau được tìm thấy trong dạ dày như

bọn Hai mảnh vỏ Bivalvia,

Gastropoda, Nematoda, Isopoda,

Amphipoda, Cladocera, Mycidacea,

trứng và phơi cá, thậm chí cĩ cả

trứng của cá Khoang Cổ Đỏ [4]

Trong điều kiện sinh sản nhân

tạo, chế độ dinh dưỡng của cá

Khoang Cổ Đỏ gồm những thành

phần thức ăn cĩ nguồn gốc từ các lồi động vật giáp xác như: Brachionus plicatilis,

Nauplii của Artemia, Copepodaa, tơm, vi tảo và thức ăn tổng hợp…

Hình 4: Phổ thức ăn của cá Khoang Cổ Đỏ tại Nha Trang – Khánh Hịa [4]

T ảo 2%

Luci f er

0, 5%

Ostr acoda 3%

Myci dacea 1%

Vảy cá 11%

Rong 4%

Pol ychaeta 1%

T uni cata 10%

Khác

21, 5%

Copepoda 35%

T r ứng cá 11%

Năm 2008, Hà Lê Thị Lộc và Nguyễn Thị Thanh Thủy đã thử nghiệm ảnhhưởng của thức ăn đến tỷ lệ sống và tăng trưởng của cá Khoang Cổ Đỏ giống Kết quảcho thấy chế độ thức ăn có ảnh hưởng lớn đến tỷ lệ sống và sự tăng trưởng chiều dài

của cá Khoang Cổ Đỏ dưới một tháng tuổi Cá được ăn luân trùng (Brachionus plicatilis) kết hợp với tảo tươi (Nannochloropsis oculata) ngay từ một ngày tuổi và

Artemia khi cá 3 ngày tuổi, có tỷ lệ sống từ 70,83 – 72,50%, cao hơn đáng kể so với cá

sử dụng Artemia thay vì luân trùng chỉ đạt tỷ lệ sống từ 10,83 – 27,50% Cá được ăn

luân trùng kết hợp với tảo tươi (Nannochloropsis oculata) và Artemia, sau 30 ngày

tuổi có chiều dài trung bình là 19mm cao hơn đáng kể so với cá sử dụng thức ăn tổnghợp Frippak 300 thay vì Artemia (14mm) Thêm nữa, cá được ăn luân trùng ngay từ 1ngày tuổi ít bị phân đàn hơn so cá sử dụng Artemia thay vì luân trùng [7]

Tổng hợp các kết quả nghiên cứu về dinh dưỡng của cá Khoang Cổ của các tácgiả cho thấy: cá Khoang Cổ Đỏ là loài ăn tạp, thức ăn chủ yếu có nguồn gốc sinh vậtnổi, phổ thức ăn tương đối rộng và chuỗi thức ăn ngắn, đây là một trong những ưuđiểm của đối tượng nuôi Trong điều kiện nuôi nhốt và thuần hóa, cá Khoang Cổ Đỏ

có khả năng ăn thịt của tôm, mực, cá và con ruốc (những loại thức ăn dễ tìm kiếm)

1.2.5 Đặc điểm sinh trưởng và tuổi

Cá Khoang Cổ nhìn chung sinh trưởng tương đối chậm Theo Fautin và Allen(1992) tuổi thọ của chúng ngoài tự nhiên được xác định từ 6 tuổi đến 10 tuổi nhưngtrong nuôi nhốt chúng có thể sống trên 18 năm Thường con cái có kích thước lớn hơncon đực [39]

Sự sinh trưởng của cá Khoang Cổ khác nhau tùy từng loài, nhưng ngay những

cá thể cùng loài cũng có sự khác biệt Giai đoạn tiền trưởng thành, cá có tốc độ tăngtrưởng nhanh nhất [56] Tại Eniwetok, Allen (1972) đã làm thí nghiệm thấy rằng trongmột đàn cá nuôi, những cá lớn sẽ tăng trưởng nhanh hơn những cá nhỏ trong cùng mộtđàn do chúng cạnh tranh thức ăn mạnh mẽ hơn Kích thước của vật cộng sinh hải quỳcũng ảnh hưởng đến tăng trưởng của cá Khoang Cổ, cá sống cùng Hải Quỳ có kíchthước lớn sẽ tăng trưởng nhanh hơn cá sống trong Hải Quỳ có kích thước nhỏ [22]

Tại Việt Nam, trên cơ sở tính toán chiều dài nội suy, Hà Lê Thị Lộc, (2005) đãxác định được mức sinh trưởng chiều dài trung bình của các nhóm tuổi Ngoài tựnhiên, cá Khoang Cổ Đỏ ở giai đoạn còn non (nhỏ hơn một vòng tuổi) phát triển rất

nhanh, gấp hai lần mức tăng trưởng ở giai đoạn hai vòng tuổi Giai đoạn một vòng

tuổi, sinh trưởng chiều dài của cá A frenatus là 46,42mm Đến giai đoạn hai vòng tuổi,

chiều dài thân cá tăng được 26,64mm, mức tăng trưởng tương ứng là 53,08% Từ bađến bốn vòng tuổi, sinh trưởng chiều dài cá chậm lại, cá chỉ tăng từ 17,7mm đến11,78mm, tương ứng mức tăng trưởng chiều dài là 24,91% và 13,27%

Khi nghiên cứu về tốc độ tăng trưởng của đàn cá Khoang Cổ Đỏ trong bể nuôi,

Hà Lê Thị Lộc (2005) thấy tốc độ tăng trưởng của cá cao nhất trong hai tháng đầu Từ

2 đến 3 tháng tuổi, cá con đạt kích cỡ phù hợp để cung cấp cho thị trường Châu Âu, vì

cỡ cá quyết định đến số lượng cá vận chuyển do đó ảnh hưởng đến giá thành vậnchuyển Mặt khác ở giai đoạn này màu sắc cá Khoang Cổ Đỏ cũng rất đặc biệt: màu đỏcam tươi với hai sọc trắng trên thân (tháng thứ 4 sọc thứ hai dần biến mất) Cá lớnthường ít được thị trường ưa chuộng hơn do các tế bào sắc tố màu đen phát triển nhiềubao phủ 2 bên thân [5]

1.2.6 Đặc điểm sinh sản

 Mùa vụ sinh sản

Ở vùng nhiệt đới, những nghiên cứu của các tác giả như Allen (1972), Bailey

và cộng sự (1996) cho rằng các loài cá Khoang Cổ có khả năng sinh sản quanh năm[22, 26 ] Vùng biển cận nhiệt đới, sự sinh sản thường diễn ra vào mùa xuân và mùa hèkhi nhiệt độ nước lên cao nhất Bell (1976), Fautin và Allen (1992) [29, 39] TạiEnewetak Atoll (trung tâm Thái Bình Dương), sự đẻ trứng chịu ảnh hưởng trực tiếpcủa chu kỳ trăng, hầu hết tổ được làm khi trăng tròn hoặc khi gần tròn Theo Allen(1972) và Ochi (1985), sự sinh sản của cá Khoang Cổ thường diễn ra trong khoảngthời gian 6 ngày trước hoặc sau kỳ trăng tròn Ánh sáng trăng có thể là một tín hiệuđến kỳ sinh sản của cá Khoang Cổ Ngoài ra, vì ấu trùng mới nở có tính hướng quangnên ánh sáng trăng có lẽ hướng chúng bơi lên bề mặt nước Từ đó chúng có thể pháttán đi bởi sóng và dòng chảy khi triều lên [22, 57]

Theo Hà Lê Thị Lộc (2005), Cá Khoang Cổ Đỏ có thể tham gia sinh sản quanhnăm nhưng tỷ lệ tập trung từ tháng 01 đến tháng 08 trong năm Đỉnh cao nhất là tháng

03 và 05 với tỷ lệ cá tham gia sinh sản tương ứng theo tháng là 69,70% và 72,73% [6, 8]

 Giới tính

Theo kết quả nghiên cứu trước đây [6, 22, 55, 56] chứng minh rằng cá Khoang

Cổ là loại cá lưỡng tính với tính đực có trước, tính cái có sau tùy thuộc vào kích thước

cơ thể và sự phân bố xã hội trong một quần đàn nghĩa là tất cả các cá Khoang Cổ nhỏđều là con đực, đến một kích thước và một điều kiện thích hợp thì một số cá thể đực sẽchuyển sang cá cái

Theo Fricke (1979, 1983), Hattori (1991), sự chuyển đổi giới tính của cáKhoang Cổ diễn tiến theo ba chiều hướng sau [42, 43, 49]:

(1) Con đực chưa trưởng thành con cái chưa trưởng thành con cái trưởng thành.(2) Con đực chưa trưởng thành con đực trưởng thành con cái trưởng thành.(3) Con đực chưa trưởng thành con đực trưởng thành

 Sức sinh sản

Theo Hà Lê Thị Lộc (2005), sức sinh sản tuyệt đối của cá Khoang Cổ Đỏ daođộng khá lớn từ 1,367 đến 5,6871 trứng/cá thể cái Sức sinh sản có xu hướng tăng dầnkhi kích thước cơ thể cá tăng lên Sức sinh sản tuyệt đối trung bình của cá Khoang Cổ

Những nghiên cứu trước đây cho rằng trong tự nhiên, quá trình sinh sản của cáKhoang Cổ được tiến hành hầu như quanh năm, thời gian tham gia sinh sản thường

chịu ảnh hưởng của kỳ trăng tròn hàng tháng [20] Quá trình sinh sản diễn ra trướchoặc sau kỳ trăng tròn 6 ngày.

Nghiên cứu trong phòng thí nghiệm cho thấy sự sinh sản của cá Khoang Cổkhông bị ảnh hưởng của kỳ trăng tròn Một cặp cá bố mẹ có thể tham gia sinh sản liêntục Mỗi đợt sinh sản cách nhau từ 11 đến 14 ngày trong điều kiện cặp cá đó đượcchăm sóc tốt và môi trường nuôi ổn định [5]

1.2.7 Sự phát triển của ấu trùng và sự định cư

Quá trình nở diễn ra vào ban đêm, cá con vừa nở ra chìm xuống đáy, sau vàiphút, chúng bơi ngược lên Kích thước ấu trùng dài khoảng từ 3 - 4mm và toàn thântrong suốt ngoại trừ những điểm sắc tố trên thân, mắt và túi noãn hoàng [39]

Giai đoạn ấu trùng cá Khoang Cổ kéo dài từ 8 – 12 ngày Suốt giai đoạn này, ấutrùng sống trôi nổi trong tầng mặt của biển và chúng được dòng chảy đưa đi [22]

Kết thúc giai đoạn này khi ấu trùng cá xuống sống đáy và bắt đầu có màu sắccủa cá con Quan sát trong bể kính cho thấy quá trình biến thái diễn ra nhanh chóngchỉ trong một vài ngày Ở giai đoạn này, điều cần thiết cho cá con là tìm một vật cộngsinh Hải Quì thích hợp hoặc sẽ bị địch hại ăn thịt Đối với một vài loài cá, chúng phảimất vài giờ mới có thể thích nghi hoàn toàn với sinh vật cộng sinh Hải Quì [22]

1.3 Vai trò của Astaxanthin trong nuôi trồng thuỷ sản

Astaxanthin là một trong các sắc tố carotenoid tồn tại rất nhiều trong tự nhiên.Cho tới nay thuật ngữ Asthaxanthin vẫn chưa quen thuộc với nhiều người nhưng thựcchất nó đã được tìm thấy từ thế kỷ 19 Những năm gần đây, người ta đã phát hiện rađược các hoạt chất sinh học đặc biệt của Astaxanthin, nó có khả năng chống oxy hóacực mạnh, gấp hơn 10 lần so với Beta-caroten và gấp 80 - 550 lần so với Vitamin E [50]

Astaxanthin có vai trò quan trọng trong việc bảo vệ các tế bào chống sự oxyhoá, chống tác hại của các tia tử ngoại, tăng cường sức đề kháng, ảnh hưởng tốt đến sựtăng trưởng và khả năng sống sót của các loài thuỷ sản Astaxanthin còn tạo nên nhữngmàu sắc đặc trưng ở các loài thuỷ sản, một dấu hiệu quan trọng của sự thành thục vàhấp dẫn giới tính của các loài động vật

Astaxanthin được xem là một vitamine thiết yếu cho cá Hồi và các loài giáp xác[60], được dùng làm chất phụ gia trong nuôi cá hồi và tôm, nhằm tạo màu đỏ cam hấpdẫn nguời tiêu dùng (Bernhard, 1990), làm tăng khả năng sinh sản, tăng tỷ lệ sống của

trứng và tốc độ phát triển của tôm và ấu trùng (Sigurgisladottir et al, 1994), (Dall et al,1995) (trích – Trần Thị Luyến (2006)) [17].

Ngoài ra, chất tạo màu Astaxanthin giúp tăng hoạt động sinh trưởng, phát triểntuyến sinh dục, tăng khả năng chịu sốc, nâng cao giá trị thương phẩm của vật nuôi [2].Astaxanthin chính là nhân tố vi lượng khá quan trọng đối với động vật thủy sinh.Trong tự nhiên, Astaxanthin được tìm thấy trong cơ thể các sinh vật như trong vi tảo

nước ngọt Haematococcus pluvialis, trong nấm men Phaffia rhodozyma, trong tôm,

cua và một số loài cá như cá Hồng, cá Hồi….Astaxanthin trong cá Hồng, cá Hồi chủyếu tập trung ở phần cơ thịt, da và gan [63, 64, 65, 67]

Trong một nghiên cứu về cá hồi Atlantic salmon, khi nuôi cá với các nồng độAstaxanthin khác nhau ( từ 0 đến 200mg kg-1), Torrissen et al (1995) đã kết luận rằngkhông có sự sai khác về màu sắc trong thịt cá fillet khi tăng hàm lượng Astaxanthintrên 60mg kg-1 [60]

Năm 1997, Olsen và Mortensen đã nghiên cứu ảnh hưởng chế độ dinh dưỡng có

Astaxanthin và nhiệt độ đến thịt cá Hồi Salvelinus alpinus L Tác giả sử dụng cá có

khối lượng trung bình 150g được nuôi trong 6 nghiệm thức Astaxanthin (hàm lượng từ

<1, 19, 48, 70, 94, 192mg kg-1) tại 2 nhiệt độ khác nhau (80C và 120C) Kết thúc thínghiệm, khối lượng cá đạt được trung bình 320g (sau 102 ngày nuôi tại nhiệt độ 120C

và 126 ngày nuôi tại nhiệt độ 80C) và thấy ảnh hưởng rõ rệt nhất trên phần cơ đỏ của

cá khi nuôi cá với chế độ dinh dưỡng kết hợp Astaxanthin với hàm lượng70mgkg-1 [58]

Barbosa, Morais và Choubert (1999) đã nghiên cứu ảnh hưởng của nguồncarotenoid (nguồn từ tảo lục Haematococus plurlalis và nguồn Astaxanthin nhân tạo –CAROPHYLL pink 8% Astaxanthin) và hàm lượng chất béo (9% và 14%) đối với

hàm lượng Astaxanthin trong máu cá hồi Oncorhynchus mykis Cá hồi có khối lượng

150g được cho ăn 100 mg kg-1 kết hợp với 2 hàm lượng chất béo trong 5 ngày Kết quảcho thấy, Astaxanthin tập trung trong huyết thanh giao động từ 5,3µg/ml đến 9 µg/ml,hàm lượng Astaxanthin trong huyết thanh cao khi hàm lượng chất béo cao và khôngphụ thuộc vào nguồn Astaxanthin [27]

Chatzifotis et al (2005) đã nghiên cứu trộn Astaxanthin tỷ lệ 1,58% vào thức ăn

cho cá Pagrus pagrus ăn và sau 2,5 tháng thấy khu vực da phần vây lưng cá, sắc tố đỏ

tăng lên rõ rệt tương ứng với hàm lượng Astaxanthin tăng cao trong cơ cá so với các lôthí nghiệm khác [33].

Barclay et al (2005), đã thí nghiệm bổ sung thêm Astaxanthin vào thịt trai làm

thức ăn cho Tôm Hùm Bông Panulirus ornatus với liều lượng 30, 60, 90, và 120mg

kg- Sau 12 tuần nuôi, màu sắc của Tôm Hùm Bông tăng tỷ lệ thuận với hàm lượngAstaxanthin được bổ sung trong thức ăn nhưng tốc độ tăng trưởng và tỷ lệ sống khôngsai khác giữa các lô thí nghiệm [28]

Năm 2006, Lã Thị Nội thực hiện đề tài “Nghiên cứu công nghệ nuôi cấy nấm

men P rhodozyma làm thức ăn cho các đối tượng nuôi trồng thuỷ sản” Đề tài ứng dụng nuôi cá Kiếm Xiphophorus helleri ăn thức ăn đã bổ sung chế phẩm Phaffia được chiết xuất từ nấm men P rhodozyma với liều lượng 250mg kg-1 Kết quả cho thấy, sau

1 tháng nuôi, màu sắc cá từ màu vàng nhạt chuyển sang màu đỏ và màu đỏ cam rất rực

rỡ Tuy nhiên, chưa thấy sự sai khác về tốc độ sinh trưởng giữa lô đối chứng và lô thínghiệm [9]

Chương II - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng, thời gian, địa điểm nghiên cứu

 Đối tượng nghiên cứu: Loài cá Khoang Cổ Đỏ (Amphiprion frenatus).

 Thời gian nghiên cứu: Luận án được tiến hành từ tháng 08/2008 đến 08/2009.

 Địa điểm nghiên cứu: Tại trại thực nghiệm của Phòng Công Nghệ Nuôi Trồng,

Viện Hải Dương Học (Nha Trang)

2.2 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu

Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu

2.2.1 Nguồn nước thí nghiệm

Nước biển được bơm lên bể chứa, bể lắng, lọc qua tầng lọc cát, xử lý chlorine

25 – 30 ppm, sục khí 2 - 3 ngày, trung hòa bằng thiosulfat, sau đó lọc qua lưới lọc tảo,túi siêu lọc và đưa vào các bể thí nghiệm cá

Thí nghiệm mật độ

Thí nghiệm

độ mặn

Thí nghiệm thức ăn

Hình 6: Sơ đồ xử lý nguồn nước thí nghiệm

2.2.2 Dụng cụ thí nghiệm

Kính hiển vi quang học, kính hiển vi soi nổi, buồng đếm tảo, nhiệt kế, khúc xạ

kế, máy đo pH, Test-kit: nitrite, nitrat, ammoniac…

Thí nghiệm được bố trí trong các bể kính thể tích 20L

2.2.3 Nguồn cá thí nghiệm

Cá Khoang Cổ Đỏ có nguồn gốc từ sinh sản nhân tạo và đã đạt 1 tháng tuổi,kích cỡ trung bình: > 18mm, kích thước đồng đều và màu sắc tươi sáng, khỏe mạnh,không bị bệnh phồng mắt và vi khuẩn dạng sợi ký sinh

2.2.4 Thí nghiệm ảnh hưởng mật độ nuôi.

 Thức ăn là Nauplii của Artemia (mật độ 5 – 7 con/mL), bổ sung vi tảo

Nannochloropsis oculata mật độ 106tb/mL để ổn định môi trường và làm thức ăn cho

Artemia

 Bố trí thí nghiệm với 4 nghiệm thức Mỗi nghiệm thức lặp lại 4 lần

 Nghiệm thức 1: cá nuôi với mật độ 2 con/ L

 Nghiệm thức 2: cá nuôi với mật độ 3 con/L

 Nghiệm thức 3: cá nuôi với mật độ 4 con/L

 Nghiệm thức 4: cá nuôi với mật độ 5 con/L

2.2.5 Thí nghiệm ảnh hưởng của độ mặn đối với cá thương mại

 Mật độ phù hợp từ kết quả của thí nghiêm trên (3 con/L)

 Thí nghiệm các thang độ mặn gồm 8 nghiệm thức: 5‰, 10‰, 15‰,20‰, 25‰, 30‰, 35‰, 40‰ Mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần

Hình 7: Sơ đồ bố trí thí nghiệm mật độ nuôi Xác định được mật độ nuôi phù hợp

Nước đã xử lý Cá đủ điều kiện thí nghiệm

Thí nghiệm mật độ

Xác định tỷ lệ sống, đo tốc độ tăng trưởng Xử lý số liệu

 Thức ăn là Nauplii của Artemia (mật độ 5 – 7 con/mL), bổ sung vi tảo Nannochloropsis oculata mật độ 106tb/mL để ổn định môi trường và làm thức ăn cho

Nauplii của Artemia (đối chứng)

Nước đã xử lý Cá đủ điều kiện thí nghiệm

Thí nghiệm dinh dưỡng

Thức ăn tổng hợp + AstaxanthinXác định màu sắc, tỷ lệ sống, đo tốc độ tăng trưởng Xử lý số liệuXác định được công thức thức thức ăn tạo màu cho cá

Tôm +

Astaxanthin

Nauplii củaArtemia

Artemia (khô)+

Astaxanthin

Hình 9: Sơ đồ bố trí thí nghiệm các loại thức ăn

Phương pháp tách chiết và xác định hàm lượng carotenoid tổng số, hàm lượng Astaxanthin

Li tâm

Dịch chiết

Na2SO4 khan

Xác định Astaxanthin

 Cá Khoang Cổ Đỏ: cân 0,2g cho vào cối xứ, nghiền thật mịn Thêm 10ml

aceton rồi đồng hoá trong thời gian 3 – 5 phút bằng máy vortex

 Vortex: thêm 5ml dung môi aceton (aceton có chứa 200 mg BHT/lít), đậy kín,

Vortex trong 3 - 5 phút Thu riêng phần dịch chiết và phần bã

 Li tâm: dịch chiết aceton được li tâm ở 3000 vòng/phút, trong 5 phút, lấy phần

dịch aceton bên trên

 Bã: Gộp tất cả phần bã còn lại sau li tâm và vortex lại, chiết thêm lần nữa bằng

dung môi aeton

 Dịch chiết aceton: gộp tất cả dịch chiết aceton thu được trong các lần chiết trên

và định lượng đến một thể tích chính xác (Vml), đo độ hấp thụ (A) trên máy quangphổ UV- VIS (Spectrophotometer) ở bước sóng 454nm để xác định hàm lượngcarotenoid tổng số cá Khoang Cổ Đỏ theo công thức của May et al (2004) [54]

D2: Thể tích nước pha loãng (ml)

Dịch chiết PE: Phần bã sau khi được chiết bằng dung môi aceton lại được chiết

thêm 3 lần nữa với dung môi ete dầu mỏ Bã chiết lúc này gần như không màu

Xác định hàm lượng Astaxanthin: Tất cả dịch chiết PE được gộp lại và rửa 2

lần bằng nước cất Sau đó cho dịch chiết PE vào một bình sẫm màu, lắc kỹ với

Na2SO4 khan để hút hết nước còn lại Thu toàn bộ dịch chiết PE và xác định đến mộtthể tích chính xác (D ml) Xác định hàm lượng Astaxanthin bằng phương pháp đo độhấp thụ (A) trên máy quang phổ UV- VIS (Spectrophotometer) ở bước sóng 476nm[34]

Hàm lượng Astaxanthin trong mẫu được tính theo công thức của Kelly- Harmon(1972) [52]

2

1

.

Y

D m

D V A



G d E

D A

cm .

10

1 4



Trong đó:

Y: µg/g Astaxanthin/trọng lượng tươi

A: Độ hấp thụ A của dung dịch ở 476nm

D: Thể tích dịch chiết thu được (ml)

G: Trọng lượng tươi của sinh khối (g)

d: Bề dày của cuvet (d = 1cm)

E: Hệ số tắt của Astaxanthin (tức độ hấp thụ của dung dịch Astaxanthin 1% vớicuvet 1cm) trong dung môi PE

2.2.7 Chăm sóc và quản lý

Hàng ngày si phông thay nước các lô thí nghiệm, thay ½ lượng nước Đo yếu tốmôi trường, duy trì yếu tố môi trường ổn định trong các lô thí nghiệm Cho ăn 4lần/ngày: lúc 8g, 11g, 14g và 17giờ Định kỳ cân đo cá: 10 ngày / lần

2.3 Phương pháp thu thập và xử lý số liệu

2.3.1 Các thông số môi trường trong hệ thống nuôi

Các yếu tố môi trường trong các hệ thống nuôi được đo đạt hàng ngày vào lúc 9giờ và 14 giờ

 Nhiệt độ: đo bằng nhiệt kế thủy ngân, độ chính xác 10C

 Độ mặn: đo bằng khúc xạ kế, độ chính xác 1‰

 pH: đo bằng máy đo pH (HANNA pH meter)

 Hàm lượng nitrite và ammonia: xác định bằng Nitrit – Test (Aqua Nite)

và Ammonium – Test (Aqua AM) sản xuất tại Thái Lan

 Hàm lượng oxy hòa tan: xác định bằng test-kit

2.3.2 Xác định các thông số và công thức tính

Sinh trưởng tuyệt đối về chiều dài (GR L ): được xác định theo công thức

GRL = L2 – L1Trong đó GRL: sinh trưởng tuyệt đối về chiều dài tại thời điểm t (mm)

L1: chiều dài của cá tại thời điểm t1 (mm)

L2: chiều dài của cá tại thời điểm t2 (mm)

Tốc độ sinh trưởng đặc trưng về chiều dài toàn thân (SGR L ).

100 SGR

1 2

1 2

t t

LnL LnL







Trong đó: SGRL: tốc độ sinh trưởng đặc trưng về chiều dài toàn thân (% ngày).

L1: chiều dài cá ở thời điểm t1 (mm)

L2: chiều dài cá ở thời điểm t2 (mm)

Cá được đo bằng thước có độ chính xác 1mm

Sinh trưởng tuyệt đối về khối lượng: được xác định theo công thức

GRw = W2 – W1Trong đó GRw: sinh trưởng tuyệt đối về khối lượng tại thời điểm t (g)

W1: khối lượng của cá tại thời điểm t1 (g)

W2: khối lượng của cá tại thời điểm t2 (g)

Cá được cân bằng cân điện tử có độ chính xác 0,001g

Sc: Số cá còn lại khi kết thúc thí nghiệm (con)

Sđ: Số cá ban đầu (con)

Tỷ lệ sống của cá được xác định bằng phương pháp đếm trực tiếp

Toàn bộ số liệu thu được ở các thí nghiệm được xử lý trên phần mềm MS Excel

và SPSS 15.0 for window Sử dụng phân tích phương sai một yếu tố để đánh giá ảnhhưởng của mật độ nuôi lên sinh trưởng và tỷ lệ sống của cá Khoang Cổ Đỏ, ảnh hưởngcủa độ mặn lên sinh trưởng và tỷ lệ sống của cá Khoang Cổ Đỏ, ảnh hưởng của các

1

2 0 2

1

C - C

C - C



V V

loại thức ăn lên sinh trưởng, tỷ lệ sống và màu sắc của cá Khoang Cổ Đỏ Riêng những

số liệu về tốc độ sinh trưởng đặc trưng theo ngày được chuyển số liệu sang Ln

Chương III - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN

3.1 Quá trình phát triển cá Khoang Cổ Đỏ kích thước thương mại

Cá 30 ngày tuổi: hình dáng cơ thể giống cá trưởng thành, trên thân còn một

số chấm đen, cơ thể có màu cam tươi với 2 sọc trắng lớn trên thân Cá sống tụ tậpthành đàn Chiều dài trung bình toàn thân cá: 18,9 ± 0,23mm, khối lượng trungbình: 0,155 ± 0,0052g

Cá 40 ngày tuổi: hình dáng cơ thể giống cá 30 ngày tuổi, các chấm đen trên

thân biến mất gần hết Cá tụ đàn tập trung ở một góc bể Chiều dài trung bình toànthân cá: 20,8 ± 0.77 mm, khối lượng trung bình cá : 0,212 ± ,0093 g

Cá 50 ngày tuổi: tăng trưởng về chiều dài và khối lượng, màu sắc và các

đặc điểm khác không thay đổi Các chấm đen trên thân biến mất hoàn toàn Chiềudài trung bình toàn thân cá: 22,5 ± 0,28mm, khối lượng trung bình cá: 0,223 ±0,0059 g

Cá 60 ngày tuổi: cơ thể màu đỏ cam rất đẹp, cá bơi lội theo đàn, hoạt động

nhanh nhẹn và phản xạ rất nhanh với tiếng động Chiều dài trung bình toàn thân cá:24,4 ± 0,25 mm Khối lượng trung bình cá : 0,277 ± 0,0138g

Cá 70 ngày tuổi: chỉ tăng trưởng về chiều dài và khối lượng Sọc trắng trên

thân thu hẹp dần Chiều dài trung bình toàn thân cá: 25,6 ± 0,24mm, khối lượngtrung bình cá : 0,32 ± 0,012g

Cá 80 ngày tuổi: một số con trong đàn (tỷ lệ khoảng 5 %) có hiện tượng

mất dần sọc ngang trắng thứ 2 trên thân chỉ còn một sọc ngang trắng ở xương nắpmang Chiều dài trung bình thân: 27,3 ± 0,26 mm, khối lượng trung bình cá:0,397±0,0053g

Cá 90 ngày tuổi: một số con trong đàn (chiếm tỷ lệ khoảng 10 %) sọc

ngang trắng thứ 2 hoàn toàn biến mất Chiều dài trung bình thân: 29,4 ± 0,35mm.Khối lượng trung bình cá : 0,423±0,0044g