nghiên cứu thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây đơn kim (bidens pilosa l., - họ asteraceae)

B GIÁO DC & O B Y T VIN DC LIU ==oo0oo== PHM VN VNG NGHIểN CU THÀNH PHN HịA HC VÀ MT S TÁC DNG SINH HC CA CÂY N KIM (BIDENS PILOSA L., H ASTERACEAE) LUN ÁN TIN S DC HC HÀ NI - 2014 B GIÁO DC & O B Y T VIN DC LIU ==oo0oo== PHM VN VNG NGHIểN CU THÀNH PHN HịA HC VÀ MT S TÁC DNG SINH HC CA CÂY N KIM (BIDENS PILOSA L., H ASTERACEAE) LUN ÁN TIN S DC HC   : 62.72.04.06 Ngi hng dn khoa hc: 1. GS.TS. Phm Thanh K 2. PGS. TS. Nguyn Th Bích Thu HÀ NI - 2014 LI CAM OAN Tôi xin cam đoan Lun án này là công trình khoa hc ca riêng tôi di s hng dn ca GS.TS. Phm Thanh K và PGS.TS. Nguyn Th Bích Thu. Các s liu, kt qu trình bày trong Lun án là trung thc, khách quan và cha tng đc ai công b trong bt k mt công trình nào khác. Tác gi lun án NCS. Phm Vn Vng LI CM N Trong quá trình nghiên cu và hoàn thành lun án này, tôi đã nhn đc rt nhiu s giúp đ quí báu ca các các tp th, thy cô giáo, các nhà khoa hc thuc nhiu lnh vc, cùng đng nghip, bn bè và gia đình. Trc ht, tôi xin bày t lòng bit n sâu sc ti GS.TS. Phm Thanh K, PGS.TS. Nguyn Th Bích Thu, nhng ngi thy đã tn tình hng dn, ht lòng ch bo và to mi điu kin giúp đ tôi trong sut quá trình hc tp, nghiên cu, hoàn thành lun án. Tôi xin trân trng cm n Ban lãnh o, Phòng Qun lý Khoa hc và ào to - Vin Dc liu; ng y, Ban giám đc Bnh vin Quân Y 17, đã to điu kin thun li cho tôi trong thi gian hc tp và và nghiên cu. Tôi cng xin bày t lòng bit n chân thành ti: GS.TS. Hoàng Vn Lng Ch huy trng Trung tâm Nghiên cu ng dng Sinh – Y – Dc, Phó giám đc Hc vin Quân Y. PGS.TS. V Mnh Hùng và các thy cô giáo, anh ch k thut viên - B môn Dc lý, Hc vin Quân Y. PGS.TS Phan Vn Kim và các cán b nghiên cu - Vin Hóa Sinh Bin, Vin Hàn lâm Khoa hc và Công ngh Vit Nam. PGS.TS Cao Vn Thu – B môn Vi sinh – Sinh vt, Trng i hc Dc Hà Ni. ã to mi điu kin giúp đ, đóng góp ý kin quí báu cho tôi hoàn thin lun án này. Cui cùng cho tôi gi li cm n sâu sc đn nhng ngi thân trong gia đình đã ng h và to mi điu kin tt nht cho tôi trong quá trình hc tp và hoàn thành lun án. Mt ln na tôi xin chân thành cm n tt c nhng giúp đ quí báu đó! NCS. Phm Vn Vng DANH MC CÁC KÝ HIU, CH VIT TT 13 C-NMR : Ph c ng t ht nhân carbon 13 (Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) 1 H-NMR : Ph cng t ht nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) Abs :  hp th ABTS : 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) ALT : Alanin aminotransferase APPH -azobis-[2-amidinopropan]-dihydroclorid AST : Aspartate aminotransferase BHT : Butylat hydoxytoluen br : Rng (broad) CAT : Catalase CK-MB : Là mt trong ba isoenzym cc tìm thy ch y COX : cyclooxygenase CS : Cng s CTCT : Công thc cu to CTC 50 : Concentration of the sample tolerated by 50% of the cultures exposed CTPT : Công thc phân t d : doublet dd : doublet of doublet dt : doublet of triplet DC (D/C) : Dch chit DVN : n Vit Nam DL : c liu DEPT : Distortionless enhancement by polarisation transfer DMSO : Dimethylsulfoxyd DPPH : 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl EC 50 : N ng 50% EI : n t (Electro Ionization) ELISA : Enzyme-linked immunosorbent assay ESI - MS : Ph kh   n t (Electron Spray Ionization Mass Spectrometry ) GC-MS : Sc ký khí - khi ph GGT : Gamma-glutamyltransferase (Gamma-glutamyl transpeptidase) GPx : Glutathione peroxidase GSH : Glutathione GTD : Gc t do HE : Henatoxylin-Eosin HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Coherence HR : High Resolution (Phân gii cao) HPLC : Sc ký lng hi   -performance liquid chromatography) HSQC : Heteronuclear Single Quantum Coherence IC 50 : N c ch 50% IL : Interleukin INF : interferon iNOS : inducible nitric oxyd synthetase J : Hng s  KL : Khng LPS : Lipopolysarcharid m : u (multiple) MDA : Malonyldialdehyd MIC : Minimum Inhibitory Concentration (N c ch ti thiu) MS : Ph khi MTT : 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid mult : multiplicity  bi tín hiu) m/z : Khn tích ion Na.CMC : Natri carboxy methyl cellulose NF-B : Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells NMR : Ph c ng t ht nhân (Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) NOS : nitric oxyd synthetase NRU : Neutral red uptake OD : Optical density PG : Prostaglandin PTM : Phn trên mt RPMI : Rothwell Park Memorial Instiue RT-PCR : Reverse transcription polymerase chain reaction SKLM : Sc ký lp mng SOD : Superoxyd dismutase TBA : Thiobarbituric acid TCA : Tricloroacetic acid TFB : Total flavonoid Bidens bipinnata L. TKH : Tên khoa hc TNF- : Tumor necrosis factor alpha MC LC L LI C DANH MC CÁC KÝ HIU, CH VIT TT DANH MC CÁC BNG DANH MC CÁC HÌNH T V 1 . TNG QUAN 3 1.1. Vài nét v đc đim thc vt chi Song nha (Bidens L.) 3 1.2. Công dng ca mt s loài thuc Song nha (Bidens L.) 4 1.3. Thành phn hóa hc chi Song nha (Bidens L.) 7 1.3 7 1.3.2.  17 1.3.3. Nhóm phenylpropanoid 21 1.3.4. Nhóm terpenoid 22 1.3.5. Nhóm cht khác 24 1.4. Tác dng ca mt s loài chi Song nha (Bidens L.) 26 1.4.1. Tác dng ch. 26 1.4.2. Tác dng c ch ung  28 1.4.3. Tác dng chng oxi hoá 29 1.4.4. Tác dng bo v gan 31 1.4.5. Tác dng kháng khun, kháng nm và kháng virus 32 1.4.6. Tác dng kháng ký sinh trùng 35 1.4.7. Tác dng chng ting 36 1.4.8. Tác dng chng viêm loét d dày 37 1.4.9. Tác dng chng tiêu ch 37 1.5. Nhng nghiên cu v loài Bidens pilosa L……………………… 38 1.5.1. Trên th gii 38 1.5.2.  Vit Nam 39    T LI     C 43 2.1. Nguyên vt liu nghiên cu……………………………………… 43 2.1.1. Nguyên liu nghiên cu 43 ng vt, vi sinh vt, dòng t bào thí nghim 44 2.1.3. Dung môi, hóa cht 45 2.14. Thit b và dng c dùng trong nghiên cu 45 2.2. Phng pháp nghiên cu 46 2.2.1. Nghiên cu thành phn hoá hc 46 2.2.2. Nghiên cu tác dng sinh hc 47 2.2.2.1. Th c tính cp 47 2.2.2.2. Th tác dng kháng khun, kháng nm tinh du lá 47 2.2.2.3. Th tác dng gim . 49 2.2.2.4. Th tác dng chng viêm 40 2.2.2.5. Th tác dng bo v gan 52 2.2.2.6. Th tác dc t  54 2.2.3. X lý s liu 55 T QU NGHIÊN C 56 3.1. Kt qu nghiên cu v thành phn hóa hc …………………… 56 3.1.1. nh tính các nhóm cht hu c trong cây n kim…………… 56 3.1.1.1. Phn trên mt 56 3.1.1.2. R. 57 3.1.2. Xác đnh các nguyên t vô c trong cây n kim………………. 59 3.1.3. Nghiên cu v tinh du chit xut t lá cây n kim………… 60 3.1.3.1. Xng tinh du trong lá cây  60 3.1.3.2. Phân tích thành phn tinh du lá cây  61 3.1.4. Chit xut và phân lp các hp cht t cây n kim…………. 63 3.1.4.1. Chit và phân lp các cht t r 63 3.1.4.2. Chit và phân lp các cht t phn trên mt 66 3.1.5. Xác đnh cu trúc hóa hc ca các hp cht phân lp đc 68 3.1.5.1. Hp cht BP1 68 3.1.5.2. Hp cht BP2 70 3.1.5.3. Hp cht BP3 72 3.1.5.4. Hp cht BP4 74 3.1.5.5. Hp cht BP5 76 3.1.5.6. Hp cht BP6 78 3.1.5.7. Hp cht BP7 79 3.1.5.8. Hp cht BP8 82 3.1.5.9. Hp cht BP11 84 3.1.5.10. Hp cht BP13 86 3.1.5.11. Hp cht BP15 88 3.1.5.12. Hp cht BP17 90 3.1.5.13. Hp cht BP18 91 3.1.5.14. Hp cht BP19 93 3.1.5.15. Hp cht BP20 98 3.1.5.16. Hp cht BP22 103 3.1.5.17. Hp cht BP23 106 3.2. Kt qu nghiên cu v đc tính và tác dng sinh hc 108 3.2.1. Th c tính c 108 3.2.2. Th tác dng kháng khun, kháng nm 109 3.2.3. Th tác dng chng  109 3.2.4. Th tác dng gi 114 3.2.5. Th tác dng bo v  115 3.2.6. Th tác dc t  118  121 4.1. V đi tng nghiên cu………………………………………… 121 4.2. V thành phn hóa hc…………………………………………… 122 4.3. V tác dng sinh hc………………………………………………. 129 KT LU 145 KIN NGH 147 DANH M TÀI LIU THAM KHO PH LC DANH MC BNG Bng 1.1 Công dng ca mt s loài thuc chi Song nha (Bidens L.)  5 Bng 1.2. Các hp cht auron và auron glycosid phân lp t chi Bidens… 7 Bng 1.3. Các hp cht chalcon và chalcon glycosid phân lp t chi Bidens 9 Bng 1.4. Các hp cht flavon và flavon glycosid phân lp t chi Bidens…. 12 Bng 1.5. Các hp cht flavanon và flavanon glycosid phân lp t chi Bidens 13 Bng 1.6. Các hp cht flavonol và flavonol glycosid phân lp t chi Bidens 13 Bng 1.7. Các hp cht acetylenic phân lp t chi Bidens……………………. 17 Bng 1.8. Các hp cht nhóm phenylpropanoid phân lp t chi Bidens 21 Bng 1.9. Các hp cht nhóm terpenoid phân lp t chi Bidens. 22 Bng 1.10. Các hp cht khác phân lp t chi Bidens. 24 Bng 3.1. Kt qu nh tính các nhóm cht hc. 56 Bng 3.2. Kt qu nh tính các nhóm cht htrong r cây  57 Bng 3.3. ng các nguyên t  trong r và  cây  kim 59 Bng 3.4. ng tinh d 60 Bng 3.5. Thành phn hóa hc ca tinh du lá cây  61 Bng 3.6. D liBP1 69 Bng 3.7. D liBP2 72 Bng 3.8. D liBP3 73 Bng 3.9. D liBP4 75 Bng 3.10. D liBP5 76 Bng 3.11. D liBP6 78 Bng 3.12. D liBP7 80 Bng 3.13. D liBP8 83 Bng 3.14. D liBP11 85 Bng 3.15. D liBP13 86 Bng 3.16. D liBP15 89 Bng 3.17. D liBP17 90 Bng 3.18. D liBP18 92 [...]... ether-7-O- -Dglucopyranosyl- - rhamnopyranosyl ]- -L- -D- xylopyranosid 84 quercetin 3-methyl ether-7-O- -Dglucopyranosylglucopyranosyl- - -D- rhamnopyranosyl ]- -L- -D- xylopyranosid 85 quercetin 7-O- -D glucopyranosyl- - -D-glucopyranosyl- -L-rhamnopyranosyl ]- -D-xylopyranosid 86 quercetin 7-O- -D- glucopyranosylglucopyranosylrhamnopyranosyl ]- - -D- -L- -D- xylopyranosid 87 quercetin 3-methyl ether-7-O-[... [28] 2-O- -D-Glucosyltrideca-11E-en- B.campylotheca [28] acetat 129 5-( 2-phenylethynyl )-2 -thiophen methanol 130 5-( 2-phenylethynyl )-2 glucosylmethyl-thiophen 131 3-Oxo-tetradeca-6t,12t-dien-8,10diyl-1-ol-isobutyrat 132 heptadeca-1, 8-1 5t-trien-11,13diyl-17-ol isobutyrat 133 2-O- -Glucosyltrideca-3E,11Edien-5,7,9-triyn-1,2,13-triol 134 2-O- -D-Glucosyltrideca3E,11E-dien-5,7,9-triyn-1,2-diol 135 2-O- -D-glucosyltrideca-3E,11Zdien-5,7,9-triyn-1,2-diol... benzyloxy-pentan-2,4-dion 145 caffeate, ethyl B pilosa [129], [27] 146 d-erythronic acid, 2-O-caffeoyl- 2- B pilosa [89] 2-O- B pilosa [89] 3-O- B pilosa [89] B pilosa [26], [27], C-methyl 147 d-erythronat methyl caffeoyl-2-C- methyl 148 d-erythronate,methyl caffeoyl-2-C-methyl 149 4-( acetyloxy )-3 -[ [ 3-( 3,4dihydroxyphenyl )-1 -oxo- 2- [106] propen-1-yl]oxy ]-2 -hydroxy-2methyl-butanoic acid 150 3-O-caffeoyl-2-C-methyl-D-... (5E )-1 ,5-tridecadien-7,9-diyn3,4,12-triol 106 (6E,12E )-3 -oxo-tetradeca-6,12dien-8,10-diyn-1-ol 107 (E )-5 -tridecen-7,9,11-triyn-1,2diol 108 (E )-6 -tetradecen-8,10,12-triyn1,2-diol 109 (2R,3E,11E )-3 ,11-tridecadien5,7,9-triyn-1,2-diol 110 1,2-dihydroxy-trideca-5,7,9,11tetrayn 111 (R )-1 ,2-dihydroxy-trideca3,5,7,9,11-pentayn 112 2- -D-glucopyranosyloxy-1hydroxy-5(E)-tridecen-7,9,11triyn [40], [41], [114], [122] 19 113 3- -D-glucopyranosyloxy- 1-. .. -D-glucopyranosyloxy-1hydroxytrideca-3,5,7,9,11pentayn 118 1-[ [(carboxy-acetyl)oxy] methyl ]-4 ,6,8,10-dodecatetraynyl- -D-glucopyranosid 119 (4E )-1 -[ [(carboxy-acetyl)oxy]methyl ]-4 -dodecen-6,8,10triynyl- -D-glucopyranosid 120 (4E )-1 -[ [(carboxy-acetyl)oxy]ethyl ]-4 -dodecen-6,8,10-triynyl-D-glucopyranosid 121 1-phenylhepta-1,3-diyn-5-en B pilosa [27], [106] 122 7-phenyl-2(E)-hepten-4,6-diyn- 1- B pilosa [122], [27] B pilosa. .. -O- 17 okanin 4 -O- -D-(4 ,6 - [134] B leucantha acetylglucosid) B pilosa [110] B pilosa [27], [106] diacetyl )- [123] glucopyranosid 18 okanin 4 -O- -D-(2 ,4 ,6 - triacetyl)-glucosid 19 okanin 4 -O- -D-(3 ,4 ,6 - triacetyl)-glucosid 20 okanin 4 -O- -D-(6 -trans-p- coumaroyl) glucosid 21 okanin 4 -O- -D-(4 -acetyl-6 - trans-p-coumaroyl)-glucosid B pilosa [27], [123] B bipinnata [130] B pilosa [27], [123]... [110] B pilosa [27], [106] B bipinnata [130] B pilosa [27], [106] B leucantha [110] 10 22 okanin 4 -O- -D-(2 ,4 -diacetyl- B pilosa [27], [106] B pilosa [27], [106] B pilosa [56] 6 -trans-p-coumaroyl)-glucosid 23 okanin 4 -O- -D-(3 ,4 -diacetyl6 -trans-p-coumaroyl)glucopyranosid okanin 4 -O-[ -D- glucopyranosyl- 24 - -D- glucopyranosid] 25 okanin 3 ,4 -di-O- -D-glucosid B pilosa [56] 26 okanin 4-methyl... L-rhamnopyranosyl- - -D- 17 glucopyranosid -dimethyl ether-7-O- 88 -D-glucopyranosylrhamnopyranosyl- B leucantha [110] B leucantha [110] B parviflora [81] -[ -L- -D- glucopyranosid -dimethyl ether-7-O- 89 -L-rhamnopyranosylrhamnopyranosyl- - -L- -D- glucopyranosid 90 quercetin 3-O- -L- rhamnopyranosid (quercitrin) 91 Kaempferol B parviflora [81] 92 Taxifolin B parviflora [81] 93 Quercetin-3-O- -D-... 4,5-di-O-caffeoylquinic -D-p-coumaric acid, 4-O-(6-O- 157 p-coumaroyl-glucopyranosyl) -D-p-coumaric acid, 4-O-(2-O- 158 [106] B pilosa [123] B pilosa [26], [27] B bipinnata [130] B bipinnata [130] B bipinnata [130] acetyl-6-O-p-coumaroylglucopyranosyl) 159 esculetin 160 7,8 dihydroxycoumarin 161 3,5-di-O-cafffeoylquinic acid methyl ester 162 4-O- -O-diacetyl- -O-p- coumaroyl- -D-glucopyranosyl) -p-coumaric acid... (Z )-6 -O-(4'',6''-diacetyl- - D-glucopyranosyl )-6 ,7,3',4 '- [123] tetrahydroxy 8 auron, (Z )-6 -O-(2'',4'',6''-triacetyl- B pilosa -D-glucopyranosyl )-6 ,7,3',4 '- [27], [106] [123] tetrahydroxy 9 auron, (Z )-6 -O-(3'',4'',6''-triacetyl- B pilosa -D-glucopyranosyl )- [27], [106] [123] 6,7,3',4'-tetrahydroxy 10 auron, (Z )-6 -O-(6-O-p-coumaroyl-D-glucopyranosyl )-6 ,7,3',4'tetrahydroxy 1.3.1.2 Chalcon và chalcon glycosid O B pilosa . cht Loài TLTK 1 2-[ ( 3,4 -dihydroxy-phenyl )- methylen ]-6 -hydroxy-3(2H )- benzofuranon B. pilosa B. parviflora [27 ], [106] [81] 2 auron, (Z )- 6,7 ,3 &apos ;,4 &apos ;- tetrahydroxy B. pilosa. : 3-( 4,5 -Dimethylthiazol-2-yl )- 2,5 -diphenyltetrazolium bromid mult : multiplicity  bi tín hiu) m/z : Khn tích ion Na.CMC : Natri carboxy methyl cellulose NF-B : Nuclear. tetrahydroxy B. pilosa B. bipinnata [27 ], [106] [130] 3 auron, (Z )-6 -O--D- glucopyranosyl- 6,7 ,3 &apos ;,4 &apos ;- tetrahydroxy B. pilosa [27 ], [106] [134]