Nghiên cứu thành phần hóa học của cây rau răm polygonum odoratum lour , họ rau răm (polygonaceae)

BỘYTẾ TRƯÒTVG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI m NGUYÊN ĐỨC THUẬN NGHIÊN CỨU THÀNH PHÀN HOÁ HỌC CỦA CÂY RAU RĂM POLYGONUMOĐORATUMhOUR., HỌ RAU RĂM {POLYGONACEAE) (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ ĐẠI HỌC - KHOÁ 2002-2007) Người hướng dẫn : TS. Đỗ Quyên Nơi thưc hiên : Bô môn Dưo’c liêu- • • • • • Trường đại học Dưọ’c Hà Nội 9 • • • • Thời gian thực hiện : Từ 2/2007 đến 5/2007 Hà Nội, 5-2007 m LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình thực hiện khoá luận tốt nghiệp, tôi đã nhận được rất nhiều sự quan tâm, chỉ bảo tận tình của các thầy cô, gia đình và bạn bè. Những sự giúp đỡ quý báu đó đã giúp tôi hoàn thành khoá luận tốt nghiệp này. Nhân dịp khoá luận được hoàn thành, cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới; TS. Đ ỏ QUYÊN, giảng viên đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ và tạo mọi điều kiện cho tôi hoàn thành khoá luận tốt nghiệp. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, các kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu đã giúp đỡ tôi thực hiện khoá luận này. Cuối cùng, tôi xin cảm ơn gia đình và bạn bè đã động viên, khích lệ tôi rất nhiều trong suốt thời gian vừa qua. Hà Nội, ngày 22 tháng 5 năm 2007 Sinh viên Nguyễn Đức Thuận MỤC LỤC Trang Đăt vấn đ ề 1 Phần I. Tổng quan 2 1.1. Thực vậ t 2 1.1.1. Vị trí phân loại của cây Rau răm 2 1.1.2. Đặc điểm thực vật và phân bố chi Poỉygonum L 2 1.2. Thành phần hoá học của cây Rau răm 6 1.3. Tác dụng và công dụng 7 1.3.1. Tác dụng dược lý 7 1.3.2. Tính vị, công năng 9 1.3.3. Công dụng, cách dùng 9 Phần II. Thực nghiệm và kết quả 11 2.1. Nguyên liệu và phương pháp thực nghiệm 11 2.1.1. Nguyên liệu 11 2.1.2. Phương pháp thực nghiệm 12 2.2. Kết quả thực nghiệm và nhận xét 12 2.2.1. Định tính các nhóm chất ứong cây Rau răm 12 2 .2 .2 . Chiết xuất tinh dầu trong dược liệu 18 2.2.3. Quy trình chiết phân đoạn trong dược liệu 25 2.2.4. Định lượng cắn các phân đoạn 27 2.2.5. Định tính cắn các phân đoạn bàng SKLM 28 2.2.6. Phân lập các chất trong phân đoạn EtOAc 30 2.2.7. Phân lập các chất trong phân đoạn n- Hexan 33 2.2.8. Nhận dạng chất T I 33 Phần III. Kết luận 35 3.1. Kết luận 35 3.2. Đề xuất 35 Tài liệu tham khảo 36 Phụ lục CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT EtOAc Ethylacetat GC-MS Gas chromatography- Mass Spectroscopy HPLC High performance Liquid Chromatography n- BuOH n- Butanol TT Thuốc thử SKLM Sac ký lóp mỏng u v Ultra violet spectroscopy MeOH Methanol ĐẶT VẤN ĐẺ Từ lâu, nhân dân ta đã biết sử dụng nguồn dược liệu phong phú trong tự nhiên để phòng và chữa bệnh. Nguồn dược liệu đó có thể là những dược liệu quý hiếm nhưng cũng có thể đơn giản là những cây cỏ quanh ta. Người Việt Nam đã biết cách trồng những cây thuốc này trong vưòn nhà với nhiều mục đích khác nhau: làm rau gia vị, làm thuốc, Tuy rất dễ kiếm, dễ trồng song nếu biết cách sử dụng những cây cỏ này sẽ đem lại hiệu quả rất lớn trong phòng và chữa bệnh. Rau răm là một trong những loại cây như vậy. Người Việt Nam vốn đã rất quen thuộc với Rau răm và cũng không ít người biết được tác dụng của nó như: chữa rắn cắn, vết thương bầm tím, sưng đau hay chữa say nắng Tuy nhiên, những nghiên cứu về loài cây này còn sơ sài, chưa đầy đủ, nhất là những nghiên cứu về thành phần hoá học trong cây. Vậy, Rau răm có chứa những thành phần hoá học nào, hàm lượng từng thành phần ra sao, liên quan giữa cấu trúc hoá học và tác dụng sinh học của chúng như thế nào? Từ những lý do trên, với mục đích góp phần phát hiện và nâng cao giá trị sử dụng của dược liệu, tôi đã tiến hành đề tài: “Nghiên cứu thành phần hoá học của cây Rau răm Polygonum odoratum Lour., họ Rau răm (Polygonaceae)” với những nội dung sau: > Định tính các nhóm chất trong cây Rau răm. > Định tính và định lưọng các thành phần trong tinh dầu Rau răm > Chiết xuất và phân lập một chất trong cây Rau răm. > Nhận dạng chất phân lập được. Phần I. Tổng quan 1.1. Thực vật 1.1.1. Vị trí phân loại của cây Rau răm Theo các tài liệu [4], [6], [7], [10], [13], cây Rau răm thuộc chi Polygonum L., một chi nằm trong họ Polygonaceae (họ Rau răm). Vị trí của chi Polygonum L. trong hệ thống phân loại thực vật được tóm tắt như sau: Nghành Magnoliophyta (Ngọc lan)/ còn gọi là nghành Angiospermae (Hạt kín ) Lớp Magnolỉopsida (Ngọc lan)/ còn gọi là lóp Dỉcotyỉedoneae (Hai lá m ầm) Phân lớp Caryophyllidae (Cẩm chướng) Liên bộ Polygonanae (Rau răm) Bộ Poỉygonales (Rau răm) Họ Polygonaceae (Rau răm) Chi Polygonum L. Theo các tài liệu [8], [12], [14], [15], [16], tên khoa học của cây Rau răm là Polygonum odoratum Lour., ở Việt Nam, cây Rau răm còn được gọi với một số tên khác như Thuỷ liễu, Lão liễu, Phắc phèo (Tày). Tên nước ngoài là Fragrant knotweed, smart weed (Anh); renouée odorante, persicaire (Pháp). 1.1.2. Đặc điểm thực vật và phân bố chi Polygonum L. > Đặc điểm thực vật chi Polygonum L. Cỏ sống hàng năm hay lâu năm, cây bụi thấp, ít khi là cây nhỡ, có kích thước và hình dạng rất thay đổi. Lá mọc so le, có cuống hay không, thường nguyên, ít khi chẻ chân vịt, lá kèm dính thành dạng bẹ chìa có hình dạng thay đổi, hình trụ hoặc áp sát vào trục nhiều hay ít. Hoa lưỡng tính hay đoqn tính do tiêu giảm, đơn dộc hoặc tập hợp thành xim đơn ở nách lá, tạo thành bôn hay đầu đơn hoặc lại tập họp thành chùm hay chuỳ ở ngọn. Bao hoa thường gồm 5 mảnh dạng cánh hay dạng thảo có tiền khai nanh sấu, tồn tại quanh quả hoặc là 2-3 cái ngoài, đồng trưởng nhiều hay ít quanh quả bế. Nhị 8 (ít khi 4 - 7) đính ở gốc bao hoa, thường xen kẽ với các vẩy. Đĩa mật gồm nhiều vẩy nhỏ. Bầu trên hình lãng kính hoặc có 3 góc, mang 2, 3 vòi nhuỵ rời hoặc dính với nhau. Quả có vỏ, khá mảnh, mang gốc vòi nhuỵ tồn tại nằm trong bao hoa héo. Phôi ở bên, lá mầm hep. Gồm 150 loài, phân bố toàn cầu, chủ yếu là vùng ôn đới Bắc bán cầu. ở nước ta có 34 loài, nhiều loài được sử dụng [13], Chi Polygonum L. thuộc họ Rau răm, có 40 giống với khoảng 800 loài phân bố khắp thế giới nhưng chủ yếu ở vùng ôn đới [8]. M.H.Lecomte quyển 5 ghi 4 giống, 32 loài [16]. Theo tài liệu [4], họ Polygonaceae có khoảng 30 - 40 chi, 900 đến 1000 loài, phân bố chủ yếu ở vùng ôn đới bắc bán cầu. Việt Nam có khoảng 10 chi với trên 50 loài. Theo “Cây cỏ thường thấy ở Việt Nam”- tập 3 [8], chi Polygonum L. có 15 loài ở Việt Nam. Theo tài liệu “Cây cỏ Việt Nam”- tập I [12], chi Polygonum L. hiện có 42 loài ở Việt Nam. > Đặc điểm thực vật và phân bố một số loài trong chi Polygonum L. - Nghể răm {Polygonum flaccidum Meissn. hoặc Polygonum hydropiper L.) [8], [12], [14], [15] Cây thảo, cao 20 - 70 cm, sống hàng năm. Thân mọc đứng, phân nhánh nhiều, có gióng dài và nhẵn. Lá mọc so le, hình mũi mác hẹp, có cuống rất ngắn, gốc tròn, đầu thót nhọn, dài 4 - 6 cm, rộng 1-1,3 cm, hai mặt nhẵn hoặc có ít lông ở gân chính và ở mép, mặt trên đôi khi có vết rám hình chữ V; bẹ chìa mỏng, có lông. Cụm hoa mọc thành bông dài và mảnh, thường cong xuống; lá bắc hình phễu, có lông ở mép; hoa màu đỏ; nhị 6 , thọt. Quả hình bầu dục, bóng, đôi khi có 3 cạnh, có bao hoa tồn tại. Nghể răm là loài phân bố rộng khắp vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới châu Á, và một phần lãnh thổ châu Âu. ở châu Á, Nghể răm được ghi nhận ở Ấn Độ, Malaysia, Thái Lan, Philippin, Campuchia, Lào và Trung Quốc ở Việt Nam, Nghể răm có ở khắp các tỉnh, từ đồng bằng, trung du đến miền núi. > Nghể trắng {Polygonum barbatum L.) [8], [12], [14], [15] Cây thảo, sống lâu năm. Thân mập, rỗng, hơi phình ở các đốt, đôi khi bén rễ ở phần gốc. Lá mọc so le, hình mũi mác, lá ở ngọn hình dải; bẹ chìa hình trụ, mảnh, phủ lông tơ ở mặt ngoài; cuống lá rất ngắn. Cụm hao mọc ở ngọn thân thành bông dài, đôi khi thành chùm; lá bắc có nhiều lông tơ; bao hoa màu trắng hoặc hồng, nhị 5 - 8 không đều; bầu 3 cạnh. Quả hình 3 cạnh nhẵn. Nghể trắng phân bố rộng rãi ở vùng có khí hậu nhiệt đới nóng và ẩm thuộc Nam Á và Đông Nam Á. Cây cũng mọc rải rác ở Nhật Bản, nam Trung Quốc và Australia, ở Việt Nam, Nghể trắng thường gặp ở hầu hết các tỉnh từ đồng bằng đến trung du và vùng núi thấp. > Nghể bông {Polygonum orientale L.) [8], [12], [14], [15] Cây thảo, sống hàng năm, có lông tơ mềm. Thân hình trụ, cành toả rộng. Lá mọc so le hình bầu dục, thuôn, dài 30 - 35 cm, gốc tròn hay hơi hình tim, phiến hơi men theo cuống lá, đầu nhọn; bẹ chìa có lông, sớm rụng. Cụm hoa mọc ở ngọn thành bông dài, ngắt quãng ở phía dưới; lá bắc có lông dày; hoa 2 - 3 cái ở một mấu, bao hoa màu trắng; nhị 8 . Quả hình thấu kính, hơi tròn, tù ở gốc, đầu có mỏ ngắn, nhẵn bóng. Nghể bông phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới châu Á, gồm Ấn Độ, Indonesia, Thái Lan, Lào và nam Trung Quốc, ở Việt Nam, Nghe bông mọc rải rác ở hầu hết các tỉnh. Cây ưa sáng và thường mọc trên các ruộng nước, nơi nước nông ven bờ sông sối và ao hồ. > Cây Rau răm {Polygonum odomtim Lour.) [8], [12], [14], [15], [16] Rau răm thuộc loại cây thảo nhỏ, sống hàng năm, cao 10-30 cm. Thân bò, bén rễ ở các mấu; thân đứng mảnh, màu trắng hoặc tía, có khía mờ. Lá mọc so le hình mũi mác, gốc tròn, đầu thuôn nhọn, hai mặt nhẵn, mặt trên sẫm bóng, đôi khi có vết trắng hình chữ V, gân giữa có ít lông nhỏ; bẹ chìa mỏng, ngắn, ôm thân, có nhiều gân song song kéo dài thành những sợi nhỏ; cuống lá dính ở phần cuối của bẹ chìa. Hoa màu trắng, đôi khi pha hồng hoặc tím, mọc thành bông hẹp, mảnh; lá bắc dài hình phễu, có lông nhỏ ở mép; bao hoa gồm đài và tràng; nhị 8, thọt, không bằng nhau. Quả bế, nhỏ, có 3 cạnh, đầu nhọn, nhẵn bóng. Toàn cây có mùi thơm hắc. Mùa hoa quả : tháng 1 - 3 Rau răm là loại đặc hữu của Việt Nam, Lào và Campuchia; cây tồn tại trong quần thể hoang dại cũng như được trồng. Trên thực tế ở Việt Nam, Rau răm vẫn được coi là loại cây trồng tương đối phổ biến ở các địa phương để làm rau gia vị. Rau răm thuộc loại cây ưa khí hậu nhiệt đới và cận nhiệt đới. ở vùng đồng bằng, trung du và miền núi độ cao dưới 1000 m, cây vẫn sinh trưởng và phát triển tốt. Đen độ cao trên 1500 m, cây sinh trưởng chậm hơn, thậm chí còn bị chết khi nhiệt độ xuống gần 0°c. Rau răm ưa ẩm và hơi chịu bóng, có thể sống trong môi trường đất ngập nước, song không chịu được hạn. ở những cây không bị ngắt ngọn thường xuyên, có thể ra hoa quả hàng năm. Rau răm còn có khả năng mọc chồi gốc và chồi thân khoẻ. Do đó trong một đám Rau răm trồng, khó phân biệt được từng cá thể. Rau răm được trồng ở bờ ao, bờ mương, rãnh nước, ruộng ẩm khắp nơi. Cây được nhân giống bằng thân. Dùng các đoạn thân dài 15-20 cm hay bứng cả gốc đem trồng, tốt nhất là vào mùa xuân. Các đốt thân ra rễ bám sâu vào đất và đâm chồi. Cây phát triển mạnh vào mùa xuân - hè. Neu trồng lớn, có thể tìm chân ruộng trũng hay ao nông, cày bừa sục bùn, bón phân lót ròi trồng theo khóm với khoảng cách 10 X 20 cm. Rau răm thu hoạch quanh năm, trừ mùa đông, cây sinh trưởng kém. Khi thu, hái hết ngọn thành từng lứa, sau đó bón thúc. Nhân dân ta hay dùng cành và lá cây Rau răm để làm rau gia vị và làm thuốc. Thường dùng tươi, không chế biến gì khác. 1.2. Thành phần hoá học của cây Rau răm Theo tài liệu [15], Rau răm chứa tinh dầu màu vàng nhạt với thành phần chủ yếu là các alkan aldehyd. Theo Nguyễn Xuân Dũng và cộng sự, tinh dầu Rau răm chứa 50 chất, trong đó có 28 chất đã được nhận dạng, 3 chất chủ yếu là ß - caryophylen 36,5%, dodecanal 11,4% và caryophylen oxyd 8,2% [15]. Theo tài liệu [14], toàn cây chứa một tinh dầu màu vàng rơm nhạt, mùi thơm mát dễ chịu. Hoạt chất khác chưa rõ. Năm 1985, Roger Moser đã nghiên cứu tinh dầu Rau răm lấy giống ở Việt Nam đem về trồng ở Thụy Sĩ thấy trên sắc ký khí khối phổ có tới 38 pic trong đó chủ yếu (85%) là các aldehyd aliphatic và alcool. Theo tài liệu [17], thành phần tinh dầu của cây Rau răm gồm có các aldehyd: (Z)- 3- hexenal; (Z)-3 - hexenol; 3- sulfanyl- hexanal; 3- sulfanyl- hexan- 1- ol; decanal; undecanal; dodecanal, được xác định bằng phương pháp GC-MS-0 (Gas chromatography- Mass spectroscopy- Olfaction). Theo tài liệu [18], bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), người ta phát hiện ra 2 chất có công thức cấu tạo là: [...]... Dodecanedial, diacetate 8,1 2 6 Bicycla[7.2.0] undec-4-ene, 4,1 1,1 1- 1 0,2 9 trimethyl-8 -methylylene 7 a- Caryophyllene 1 3,2 1 8 Naphthalene, 2,3 , 4,4 a, 5,6 -hexahydro-l,4a- 9,9 5 dimethyl-7-[-1-methylethyl] 9 (-)- a- Panasinsen 4,2 4 10 1-[3-Methyl-2-butenoxy]-4-[ 1- 1 8,0 4 propenyl] benzene = Anethol 11 1,6 ,1 0-Dodecatriene, 7,1 1 -dimethyl-3- 5,7 1 methyllene 12 2[3H]-Naphthalenane, 4,4 a, 5,6 , 7,8 - 1 5,7 2 hexahydro- 4,4 a-dimethyl-6-[... lượng dược Độ âm % Khôi (g) liệu đã sấy khô dược liệu lượng (g) (%) 1 A 2,4 887 21 3,7 7 1 1,3 1 0,0 131 2 B 0,2 661 21 3,7 7 1 1,3 1 0,0 014 3 c 0,3 152 21 3,7 7 1 1,3 1 0,0 016 4 D 1,4 167 21 3,7 7 1 1,3 1 0,0 074 5 E 1 1,6 55 21 3,7 7 1 1,3 1 0,0 614 - Nhận xét % Khối lượng cắn ở các phân đoạn rất thấp 2.2.5 Định tính cắn các phân đoạn bằng SKLM cắn (A, B, c, D, E) được định tính bằng SKLM với nhiều hệ dung môi 5 khác nhau - Dịch... Chữa nôn mửa, tiêu chảy: Hạt Rau răm 20g, hương nhu 40g sắc uống Nếu bị nặng, dùng lá Rau răm tươi loại thân đỏ lOOg, thêm 300 ml nước, sắc lấy 200 ml, rồi thêm lOOg đậu x , sắc còn 100 ml chia làm 2 lần uống trong ngày > Chữa say nắng, ngất do khát, bán hôn mê; Rau răm tươi 50g giã vắt lấy nước cốt, đun sôi, cho uống Nếu nặng, dùng Rau răm 30g, sâm bố chính 20g, rễ đinh lăng lá nhỏ 16g, mạch môn lOg... cả sao vàng, sắc uống làm 2 lần > Chữa ghẻ l , chốc, sâu quảng, hắc lào; Rau răm ngâm rượu cho thật đặc, bôi, hoặc giã nát, đắp và băng lại Có thẻ dùng Rau răm phơi kh , đốt thành tro cùng với cói chiếu rồi rắc > Chữa tê bại, vết thương bầm tím, sưng đau: Rau răm tươi giã nát, trộn với long não hoặc dầu long não, xoa bóp > Chữa rắn cắn: Để chữa rắn cắn, người ta hái lấy khoảng 20 ngọn Rau răm giã nát... thơm, tính ấm, có tác dụng tán hàn, ích tr , tiêu thực, sát trùng Ăn Rau răm sống thì ấm bụng, mạnh chân gối, sáng mắt, ăn nhiều sinh nóng rét, thương tổn dến tu , làm giảm tinh kh , giảm tình dục Phụ nữ hành kinh mà ăn Rau ràm dễ sinh rong huyết [15] 1.3.3 Công dụng, cách dùng Chủ yếu nhân dân ta vẫn trồng Rau răm để làm gia vị Bộ phận dùng; cành và lá Theo các tài liệu [14 ], [15 ], Rau răm có các công... Silicagel cờ hạt 0,0 15 - 0,0 4 um - Đo phổ khối trên máy HP 5989- MS tại Phòng cấu trúc- Viện Hoá Học- Viện Khoa Học - Công nghệ Việt Nam 2.1.2 Phương pháp thực nghiệm - Định tính các nhóm chất chính và chiết xuất theo phưong pháp ghi trong các tài liệu Thực tập dược ỉiệu - phần hoả học [2] , Phương pháp nghiên cứu hoá học cây thuốc [11] và Bài giảng dược liệu (tập 1,2 ) [1 ], - Định tính bằng SKLM, phân lập... chạy GC-MS, xác định được 12 thành phần trong tinh dầu Rau răm cấu trúc hoá học của các chất được ghi đầy đủ trong phụ iục Tên và hàm lượng từng chất được tóm tắt trong bảng 3.4.(Sắp xếp theo thời gian lưu) (Phụ lục 1) Bảng 2.5 Hàm lượng các thành phần trong tinh dầu Rau răm STT Tên chât Hàm lượng (%) 1 ưndecane 2,6 3 2 Decanal 6,8 9 3 Benzene, l-methoxy-4-[l -propenyl] 2,8 5 4 ưndecanal 2,3 5 5 1,1 - Dodecanedial,...Hình 1.1 Tên khoa học: 2,3 - dihydro-3-[(4- hydroxyphenol) methyl]- 5,7 dihydroxy- 6 ,8 - dimethyl- 4H- 1- benzopyran- 4- one Hình 1.2 Tên khoa học: 2,3 - dihydro-3-[(4- hydroxyphenol) methyl]- 5,7 dihydroxy- 6 - methyl- 8 - methylacetatoxy- 4H- 1- benzopyran- 4- one Theo tài liệu [17 ],[ 18] trong thành phần của Rau răm còn có chất Polygodial có công thức hoá học như sau: Hình 1.3 Công thức... kéo hơi nước, phần còn lại đem phơi khô trong bóng râm, sau đó sấy ở nhiệt độ 50°c trong tủ sấy có quạt thông gió Sau khi sấy kh , dược liệu được bảo quản ở nơi khô ráo, thoáng mát Hình 2.1 Ảnh chụp cây Rau răm Hình 2.2 Ảnh chụp lá Rau răm Thuốc th , dung môi, hoá chất: các thuốc th , dung môi, hoá chất tại bộ môn dược liệu - Trường đại học Dược Hà Nội Dụng cụ: bộ dụng cụ cất kéo hơi nước, bộ cất thu... Theo dân gian, Rau răm có tác dụng chữa rắn cắn Người ta ngắt vài ngọn Rau răm, giã nát, vắt lấy nước uống Bã đắp lên nơi rắn cắn Thường trong vòng 15 phút sau đỡ đau và sau 3 giờ hết sưng tấy Ngoài ra, có người cho rằng Rau răm có tác dụng dịu tình dục cho nên những vị tu hành thường dùng Rau răm để giảm những cơn bốc dục Tại Campuchia, Rau răm đuợc coi là một vị thuốc thông tiểu, chữa sốt, chống nôn