Đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học của cây Bạch hoa xà Nguyễn Tuấn Quang

Để nghiên cứu đầy đủ về thành phần hoá học của câychúng em tiến hành chọn đề tài: " Nghiên cứu thành phần hoá học của cây Bạch hoa xà" với 2 mục tiêu: - Sơ bộ nghiên cứu thành phần hoá h

Nguyễn tuấn quang

nghiên cứu thành phần hoá học của cây bạch hoa xà

(Plumbago zeylanica L Plumbaginaceae)

Khoá luận tốt nghiệp dợc sỹ đại học

Hớng dẫn khoa học:

TS Triệu Duy Điệt - Khoa Dợc liệu - Bộ môn DHQS

Hà Nội - 2003

Néi dung b¸o c¸o gåm:

Để nghiên cứu đầy đủ về thành phần hoá học của cây

chúng em tiến hành chọn đề tài: " Nghiên cứu thành phần hoá học của cây Bạch hoa xà" với 2 mục tiêu:

- Sơ bộ nghiên cứu thành phần hoá học trong các

bộ phận của cây.

- Xác định hàm lợng Plumbagin trong các bộ phận khác nhau của cây.

- Ph©n bè, thu h¸i, chÕ biÕn.

- Thµnh phÇn ho¸ häc

- C«ng dông cña BHX theo YHCT vµ theo KN d©n gian

*Theo YHCT: BHX cã vÞ cay, tÝnh nãng, cã t¸c dông th«ng kinh ho¹t huyÕt, s¸t khuÈn, tiªu viªm

* ë níc ta: «ng cha ta dïng c©y BHX ch÷a môn nhät, h¾c lµo, ch÷a chai ch©n, s¾c níc röa vÕt th¬ng, vÕt loÐt

- T¸c dông dîc lý vµ øng dông l©m sµng cña BHX

O

CH31

2 3 4

Tªn khoa häc: 2 methyl - 5hydroxy - 1,4 naphtoquinon

- Acetyl hoá Plumbagin tạo thành dẫn xuất acetyl có màu vàng, t0 nóng chảy: 117 - 1180C.

- Tan trong dung dịch kiềm cho màu đỏ do tạo thành ion phenolat

- Cho màu đỏ với muối sắt III clorid

nguyên vật liệu và phơng pháp NC

2.1 Nguyên vật liệu.

- Cây Bạch hoa xà

- Dung môi, hoá chất, thuốc thử

- Dụng cụ thí nghiệm

2.2 Phơng pháp nghiên cứu.

2.2.1 Sơ bộ xác định các nhóm hoạt chất: bằng các phản ứng hoá học trong ống nghiệm (theo phơng pháp phân tích của khoa dợc liệu - Trờng đại học dợc Rumania)

- Dịch chiết ether: flavonoid, quinon, alcaloid, tinh dầu, acid hữu cơ, phytosterol

- Dịch chiết cồn: quinon, flavonoid, alcaloid, acid hữu cơ, sterol, đờng khử, tanin, anthocynosid

- Dịch chiết nớc acid: alcaloid, tanin, đờng khử, saponin

2.2.2 §Þnh tÝnh c¸c nhãm hîp chÊt b»ng SKLM.

LÊy kho¶ng 1g dîc liÖu ë c¸c bé phËn kh¸c nhau cña

- B¶n máng dïng Silicagel G (cña viÖn KiÓm nghiÖm)chÕ t¹o thµnh nh÷ng b¶n máng cã kÝch thíc 520 cm, ho¹t ho¸

- Dung m«i ch¹y SK víi c¸c hÖ:

I) Benzen - Methanol - Níc ( 15- 1- 4)

II) Ether dÇu - Ethyl acetat (7 - 3)

III) Benzen - Methanol - Acid acetic ( 45-8-3 )

- Thuèc thö hiÖn mµu: KOH 10%/cån

2.2.3 ChiÕt xuÊt ph©n nhãm ho¹t chÊt quinon.

Ph©n lËp: Dïng ph¬ng ph¸p SK líp chÕ ho¸

2.2.4 Sơ bộ nhận dạng Plumbagin và các hợp chất thông

qua một số chỉ số lý hoá.

- Thể chất: cảm quan, hình dạng tinh thể, màu sắc, độ tan

- Đo điểm chảy tinh thể: trên máy Boetius HMK ( Đức) tại bộ môn DHQS

- SKLM với 3 hệ dung môi khác nhau

- Đo phổ tử ngoại: trên máy Cintra 40 ( Australia ) tại bộ

môn DHQS

2.2.5 Định lợng Plumbagin trong các bộ phận của cây bằng phơng pháp quang phổ tử ngoại.

* Xây dựng đờng chuẩn: A = k.C + b

* Xác định hàm lợng Plumbagin trong các bộ phận của cây

(%) 100

10

.

.

6

m

n

V k

b

A 

Công thức tính C% =

Kết quả và bàn luận

3.1 Sơ bộ xác định thành phần hoá học trong các bộ phận của cây.

Kết quả xác định STT Các nhóm hợp

chất cần tìm

Các phản ứng và thuốc thử Rễ Thân Lá

1. Quinon - Dung dịch KOH 10% +++ + +

2 Flavonoid - Dung dịch KOH 10%.

- Nhôm clorid.

- Cyanydin.

-

-

-

- - - -

- - - -

-5 Tanin - Dung dịch sắt III clorid 5%

+ +

+ +

3.2 Định tính nhóm hợp chất quinon bằng SKLM.

Hình 3.1: Sắc ký đồ của nhóm hợp chất quinon

Bảng 3.2: Giá trị Rf x 100 của các vết trên SK đồ:

* Nhận xét: Các hệ dung môi đều cho kết quả có 2 vết Vếtphía trên ở điều kiện ánh sáng bình thờng (vết ký hiệu P2) cómàu vàng đậm, soi phát quang dới ánh sáng tử ngoại có mầuhồng đỏ; vết phía dới (vết ký hiệu P1) mầu vàng nhạt, khi soiphát quang dới ánh sáng tử ngoại có màu vàng Vậy kết quảnày có thể nhận thấy: trong các bộ phận của cây Bạch hoa

xà có chứa hai chất thuộc nhóm Quinon

Màu sắc Rf x 100 của các vết trên

các hệ dung môi Các vết

Bình thường

Soi dưới đèn

Bột dược liệu

(Rễ/thân/lá) Chiết bằng cồn 900

3.3.2 Phân lập các chất của nhóm Quinon bằng

SK lớp chế hoá

Hình 3.3: Sắc ký đồ trên lớp chế hoá của nhóm hợp chất quinon.

- Đánh dấu, cạo riêng các phần silicagel P1 và P2 Tiến hành tơng tự thu đợc 10 bản chế hoá.

- Bột silicagel chứa chất P1 và chất P2 đều đợc chiết bằng ethanol 90 0 (theo sơ đồ hình 3.4)

Vết P 2 Vết P 1

Hình 3.4: Sơ đồ quy trình chiết xuất, tinh chế chất P2 sau

sắc ký lớp chế hoá.

Bột Silicagel cạo từ bản chế hoá

+ §o ®iÓm ch¶y tinh thÓ: kÕt qu¶: 78 - 790C.

+ §o phæ tö ngo¹i trong ethanol 900

H×nh 3.6: H×nh ¶nh phæ tö ngo¹i cña chÊt P2 trong ethanol 90o

3.5 Định lợng Plumbagin trong các bộ phận của cây bằng

ph-ơng pháp quang phổ tử ngoại.

3.5.1 Kết quả xây dựng đờng chuẩn.

Bảng 3.3 độ hấp thụ (A) ở bớc sóng 266nm

C (g/ml)

Mẫu 1 0,1379 0,2720 0,4068 0,5413 0,6759 0,8095 0,9450 Mẫu 2 0,1371 0,2715 0,4060 0,5414 0,6760 0,8099 0,9444 Mẫu 3 0,1372 0,2716 0,4066 0,5407 0,6755 0,8103 0,9448 Mẫu 4 0,1370 0,2721 0,4067 0,5408 0,6751 0,8104 0,9445 Mẫu 5 0,1379 0,2724 0,4061 0,5413 0,6754 0,8103 0,9449

`X 0,1374 0,2719 0,4064 0,5411 0,6756 0,8101 0,9447

SD 0,0004 0,0004 0,0004 0,0003 0,0004 0,0004 0,0003

2 4 6 8 10 12 14 C(g/ml) 0

Abs 0,9447

0,1374

Hình 3.7: Sự tơng quan tuyến tính giữa (C) và (A)

Sự tơng quan đợc biểu thị bằng phơng trình:

A = k.C + b, có r = 0,9999Với k = 0,06728; b = 0,00281Vậy A = 0,06728 C + 0,00281

3.5.2 Kết quả định lợng Plumbagin trong các bộ phận của cây.

Sau khi đo đợc độ hấp thụ (A), theo phơng trình:

(Rễ: 30g; thân: 20g; lá: 20g)

Sẽ tính đợc hàm lợng % Plumbagin trong các bộ phận của cây.Kết quả đợc trình bày ở bảng 3.4

(%) 100

10

.

.

6

m

n

V k

b

A 

C% =

Bảng 3.4 Kết quả độ hấp thụ (A) và nồng độ ( C ) tơng ứng của rễ, thân, lá Bạch hoa xà ở bớc sóng = 266nm.

Độ hấp thụ A

Mẫu 1 0,7991 0,2959 0,9431 0,03494 0,8516 0,00788 Mẫu 2 0,7978 0,2954 0,9428 0,03493 0,8524 0,00789 Mẫu 3 0,7973 0,2952 0,9427 0,03492 0,8527 0,00790 Mẫu 4 0,7977 0,2954 0,9425 0,03492 0,8518 0,00789 Mẫu 5 0,7985 0,2957 0,9444 0,03499 0,8523 0,00789

`X 0,7981 0,2955 0,9431 0,03494 0,8522 0,00789

SD 0,0007 0,0003 0,0008 0,0003 0,0005 0,00001

Vậy:% Plumbagin trong: Rễ cây= 0,2955  0,0003 (%)

Thân cây= 0,03494 0,0003 (%)Lá cây = 0,00789 0,00001 (%)

- Lá Bạch hoa xà có: Quinon và acid hữu cơ.

* Bằng sắc ký lớp mỏng silicagel G với 3 hệ dung môi khácnhau: Nhóm Quinon gồm 2 chất

* Chiết xuất, phân lập nhóm Quinon từ các bộ phận cây

Bạch hoa xà có 2 chất thuộc nhóm quinon là P1 và P2.Chất P2 kết tinh thành tinh thể hình kim màu vàng cam Dựavào các thông số lý, hoá (sắc ký lớp mỏng, điểm chảy tinh thể,phổ tử ngoại) đã sơ bộ xác định là Plumbagin

Chất P1 do lợng quá ít cha có điều kiện kết tinh đợc

4.2 Định lợng Plumbagin trong các bộ phận của cây cho kết quả:

Thân cây : 0,03494  0,0003 (%)Lá cây : 0,00789  0,00001 (%)

4.3 Kiến nghị:

Đề nghị tiếp tục nghiên cứu sâu thêm về thành phần hoá học trong các bộ phận riêng rẽ của cây Cải tiến quy trình chiết xuất và dung môi trong quá trình chiết xuất Plumbagin để nâng cao hiệu xuất của quá trình