Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của cây bù dẻ trơn (uvaria boniana), bù dẻ hoa vàng (uvaria hamiltonii), lãnh công màu hung (fissistigma cupreonitens) và lãnh công xám (fissistigma glaucesens) tt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN THANH TÂM T T T N NT N Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số: 9.44.01.14 NG Ệ N – 2020 Ọ Việ Ngƣời hƣ g g h ƣ h h h i ƣ Ph m Tự nhiên – T ƣờ g Đ i học Vinh Viện Nghiên cứu Tây Nguyên h họ PG T g Vă ựu TS Nguyễn Hữu Toàn Phan Ph iệ Ph iệ Ph iệ u c i Hội g h gi u Phòng b o v , tầng 6, Nhà Công ngh ca T h i gi h c T g h g Đ i h c Vinh g y h g h hi Thƣ iệ Thƣ iệ Ng i hƣ iệ gi Việ N ễ Th – T ƣờ g Đ i họ Vi h i: MỞ ĐẦU Lí chọ ề tài Vi t Nam nằm ù g Đô g Na Á có khí h u nhi ới gió mùa ẩm, h thực v a d ng phong phú Theo thống kê gầ ây h thực v t Vi t Nam có ê 10.000 i g ó có kh ng 3.200 loài c sử dụng y h c dân tộc 600 loài cho tinh dầu Đây gu n tài nguyên thiên nhiên r t quí báu ớc có tác dụng lớ ối với i sống sức khỏe g i Ở Vi t Nam, h Na (A aceae) có 201 i (29 chi) g ó hiều i ặc hữu h Alphonsea sonlaensis Ban, Artabotrys hienianus Ban, Artabotrys vietnamensis Ban, Artabotrys vinhensis Ast., Fissistigma taynghuyenense Ban, Fissistigma tonkinense (Fin & Gagnep.) Merr., Goniothalamus donnaiensis Fin&Gagnep., Goniothalamus vietnamensis Ban., Melodorum kontumense Ban, Chi Fissistigma Griff., chi quan tr ng h Na (Annonaceae), với kho ng 80 loài, phân bố rộng rãi châu Á Aus a ia ặc bi t khu vực Đô g Na Á h Ma aysia I d esia Th i a T u g Quốc, Campuchia, Lào Vi t Nam Một số loài thuộc chi Fissistigma thuốc chữa b nh e ắp, gan, gan lách to, thần kinh t a, viêm khớp, kháng viêm chống khối u Chi ù dẻ (Uvaria ) ộ chi h Na (A aceae) hế giới có kh g 175 i Vi Na có kh g 17 i C c huộc chi y chủ yếu dây e hay ụi hiế gỗ; Mặc dù h Na (Annonaceae) có giá trị kinh tế r ca cũ g h có ho t tính sinh h c quý c sử dụng rộng rãi dân gian, song vi c nghiên cứu thành phần hóa h c ch a c tiến hành nhiều Vi t Nam Vì ý d ó ch g ã ch ề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học ho t tính sinh học bù dẻ (Uvaria boniana), bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii), lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens) lãnh cơng xám (Fissistigma glaucesens) từ ó gó hầ x c ịnh thành phần hóa h c h p ch t tìm ngu n nguyên li u ch g h hóa d c Đ i ƣ ng nghiên cứu Đối ng nghiên cứu lu n án dịch chiết từ loài bù dẻ (Uvaria boniana Fin & Gagnep.), bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii Hook.f et Thoms.) lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens Merr & Chun) lãnh công xám (Fissistigma glaucesens (Hance) Merr.) Vi t Nam Nhiệm vụ nghiên cứu - Chiết ch n l c với dung mơi thích h ể hu c hỗn h p h p ch t từ loài dịch - Phân l x c ịnh c u trúc số h p ch t - Thử ho t tính sinh h c số h p ch t phân l Research methods c - Ph g h hu mẫu: Thu th ịnh danh, c t giử b o qu n mẫu khô nhi ộ phịng thí nghi m (20-30 C) - Ph g h ch i h chế ch t: Chiết nguyên li u; chiết với du g có ộ phân cực khác nhi ộ phòng h hexane, ethyl ace a e c f u a … Tách tinh chế ch t cách kết h p kỹ thu t sắc ký; sắc ký cột, sắc ký cột nhanh , sắc ký lớp mỏng, sắc ký lỏng hi u g ca (HPLC) - Ph g h x c ịnh c u trúc: c c h g h hổ tử ngo i, h ng ngo i, phổ khối phổ cộ g h ởng từ h t nhân chiều (1H-NMR, 13CNMR, 2D- 1H-1H-COSY, HMBC, HSQC) - Ph g h ho t tính sinh h c: C c Ph g h ho t tính kháng khuẩn chống oxi hóa Nhữ g gg p i lu n án Trong nghiên cứu này, ch g ôi ã hu c số kết qu sau: 1.Từ bù dẻ (Uvaria boniana Fin & Gagnep) ã hâ x c ịnh c u trúc h p ch t bao g m: uvaridacol G ; 4-methyl-4-[(2Z)-3’phenylprop-2’-en-1’-yl]cyclohex-2-en-1-one; 3,7- di e h xy que ce i 4’- O[α-L- rhamnopyranosyl-(1  2) -β-D- glucopyranoside; -sitosterol stigmasterol, 6-methoxyzeylenol; aristolactam AII; stigmasta-4,22-dien-3-on Các chất lầ ầ iê ƣ c phân l p từ loài Từ bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii H k.f e Th s.) ã hâ p x c ịnh c u trúc h p ch t bao g m: quercetin, luteolin-7-O-glucoside, luteolin-4’-O-glucoside, rutin, rhoifolin, glutinol, zeylenol, lupeol Các chất lầ ầ iê ƣ c phân l p từ loài Từ Lãnh công xám (Fissistigma glaucescens (Hance) Merr.) c c h g h sắc kí ã hâ p 06 h p ch g ó có 04 h p ch t ancaloit aristolactam BII, velutinam, aristolactam BI, pukatein 02 h p ch t flavonoid apigenin-8-C-β-D-galactopyranoside rutin Các chất velutinam, pukatein apigenin-8-C-β-D-galactopyranoside lầ ầ iê ƣ c phân l p từ loài 4 Từ dịch chiết methanol lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens Merr & Chun.) bằ g c c h g h sắc kí ã hâ c6 h p ch t bao g m 04 h p ch t flavonoid: 6-hydroxy-5,7,8-trimetoxy flavanon, 2’ 5’-dihydroxy-3’ 4’ 6’-trimetoxy chalcon, quercetin, rutin 02 h p ch t steroid: -sitosterol; -sitosterol-3-O--D-glucopyranoside Các chất 6hydroxy-5,7,8- i e x f , ’,5’-dihydroxy- ’,4’,6’-trimetoxy chalcon lầ ầ iê ƣ c phân l p từ lồi Thử ho t tính sinh h c kháng vi sinh v t ho t tính chống oxi hóa h p ch t s ch phân l c Cấu trúc lu n án Lu n án bao g m 152 trang với 24 b ng số li u hì h sơ với 136 tài li u tham kh o Kết c u lu n án g m: mở ầu (4 trang), tổng quan (49 a g) h g h hực nghi m (23 trang), kết qu th o lu n (62 trang), kết lu n (2 trang), danh mục cơng trình cơng bố (1 trang), tài li u tham kh o (9 trang) Ngồi cịn có phần phụ lục g m 188 phổ số h p ch t hƣơ g TỔNG QUAN i h h ổ g i iệ i g Tổ g qua ề chi Uvaria Cây Bù dẻ (U a ia ia a Fi & Gag e ) Cây Bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii Hook.f et Thoms ) Tổ g qua ề chi Lãnh công (Fissistigma) Cây lãnh công xám (Fissistigma glaucesens (Hance) Merr.), Cây lãnh màu (Fissistigma cupreonitens Merr & Chun) Với c c ội du g c ềc g : - Giới hi u ề ặc iể si h h c hâ ố - Nghiê cứu ê h h hầ hóa h c - i kê c c h í h si h h c ứ g dụ g P ƢƠNG P Đ i ƣ g 2.1.1 Thu m u hƣơ g P VÀ T ỰC NGHIỆM phƣơ g ph p ghiê ứu Mẫu bù dẻ (Uvaria boniana Fin & Gagnep.), bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii Hook.f et Thoms.), lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens Merr & Chun) lãnh công xám (Fissistigma glaucesens (Hance) Merr.), c thu hái n quốc gia Pù Huống, Pu Mát- Ngh An, Vi t Nam h g 08 2015 Mẫu c ịnh danh PGS.TS Trần Huy Thái, Vi n Sinh thái Tài nguyên Sinh v t Tiêu b c u giữ t i khoa Vi n Cơng ngh Hóa Si h Mơi g T g Đ i h c Vinh .1 phƣơ g ph p xử lý m u chi t Mẫu c thu hái vào mùa thích h g Mẫu l y c rửa s ch, s y thiết bị s y hi t 40 C Mẫu c chiết với dung mơi thích h p thiết bị chiế siêu â ể hu c dịch chiết .1 phƣơ g ph p phâ í h, phâ p h p chất Để hâ ích hâ ch cũ g h hâ p h p ch t, sử dụng h g h sắc ký h : Sắc ký ỏ g (T C); Sắc ký cộ h g (CC); Sắc ký cộ h (FC); Sắc ký ỏ g hi u g ca hâ ích iều chế (HP C); 1.4 Phƣơ g ph p h o sát cấu trúc h p chất C u trúc h p ch c kh o sát nh kết h c c h g h phổ: Phổ g i (UV); Phổ h ng ngo i IR; Phổ khối ng phun mù electron (ESI - MS), (HR-ESI-MS); Phổ cộ g h ởng từ h t nhân 1H-NMR; Phổ cộng h ởng từ h t nhân 13C-NMR; Phổ cộ g h ởng từ h t nhân DEPT, HSQC, HMBC; Phổ cộ g h ởng từ h t nhân COSY, NOESY 2.2 Hoá chất, dụng cụ thi t bị 2.2.1 Hoá chất Các dung môi ngâm chiết mẫu thực v t dung môi công nghi p hexan, e ua e hy ace a e ace e ớc c t Các dung môi sử dụng cho lo i sắc ký lớp mỏng sắc ký cột thuộc lo i tinh khiết phân tích (PA) Các du g c sử dụng là: 2.2.2 Dụng cụ thi t bị - Nhi ộ nóng ch y ê y Ya ac MP-S3; - Độ quay cực c ê y hâ cực kế Jasco DIP -370; - Phổ tử ngo i UV c ghi máy quang phổ Hitachi UV-3210, - Phổ khối ng (ESI-MS, HR-ESI-MS) c ê y B uke Dai ics APEX II 30eV s ec e he T ng Đ i h c Y Trung Quốc (Đ i Loan) máy micrOTOF-QII 10187 T g Đ i h c Khoa h c Tự hiê Đ i h c Quốc gia H Chí Minh; - Phổ cộ g h ởng từ h t nhân 1H-NMR c ê y B uke 500MHz 13 phổ C-NMR DEPT HMBC HSQC COSY NOESY c ê y Bruker 125 MHz (Vi n Hóa h c, Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam) máy Brucker AVANCE III-700 (khoa Hoá h c Đ i h c Quốc gia Che g Ku g Đ i a ) ới ch t chuẩn TMS; - Sắc ký cột sử dụng silicagen cỡ h t 60,70-230 Kieselgel 230-240 (Merck) - B n mỏ g c tráng kieselgel 60 ch t hiển thị dung dịch H2SO4 10% 110 C th i gian 10 phút, bằ g è ngo i hai ớc só g 254 368 ; dù g I (I2) hi n màu 2.3 Nghiên cứu h p chất từ bù dẻ (Uvaria boniana Fin & Gagnep) 2.3.1 Chi t xuất phân l p h p chất Lá khô loài bù dẻ (Uvaria boniana) (6 kg) c chiết với dung môi methanol nhi châ khô g ộ h g sau ó c t thu h i dung môi c t quay c cặn chiết (254 g) Cặn chiế hòa a t với c c du g ôi e hy ace a acetate (172 g) u a (33 g) Ca hâ n nhỏ ca hu ớc chiết lần hâ c cao chiế n ethyl ớc (40 g) n ethyl acetat tiến hành sắc ký cột silica gel với dung môi rửa gi i hexan: aceton (100:0 - 1:1 hâ ua g y (U1-U10).Phâ / ) hu c nhiều hâ n nhỏ Những c phân tích TLC gộp l i h h 10 hâ n n U1 (6,5 g), sắc ký cột với silica gel, hỗn h p dung môi rửa gi i hexa e : ace e (15:1) hu c hâ n nhỏ U1.1-U1.7 Phân n U1.1 (2,6 g) sắc ký cột silica gel rửa gi i hỗn h p dung môi hexane : ace e (15:1) hu c h p ch t UBM4 (38 g) Phâ ký cột silica gel với hỗn h p rửa gi i hexa e : ace UBM1 (12 mg) UBM2 (27 g) Phâ n U1.4 (2,5g) sắc e (9:1) hu n U2 (5,6 g), sắc ký cột với silica gel, dung môi rửa gi i chloroform: methanol (C:M) (50:1-10:1 hâ n nhỏ U21-U25 Phâ rửa gi i C:M=20:1 ( / ) hu c h p ch t / ) hu c5 n U22 (1,2 g) sắc ký cột silica gel, dung môi c UBM7 (19 g) Phâ n nhỏ U24 (0,84 g), sắc ký silical gel, dung môi rửa gi i C:M=15:1 hu c ch t UBM8 (14 g) Phâ (30:1-6:1 n U3 (4,8 g), sắc ký cột silica gel với dung môi rửa gi i C:M / ) hu c hâ n nhỏ Phâ silica gel, dung môi rửa gi i C:M (10:1) hu n U7 (1,9 g), sắc ký cộ si ica ge e (7:1) hu Dịch chiế n U34 (0,96 g), sắc ký cột c ch t UBM6 (15 mg) Phân c rửa gi i hỗn h p chloroform c h p ch t UBM5 (12 mg) ua c xử lý sắc ký cột silica gel với hỗn h p chloroform methanol (100:0, 40:1, 30:1; 10:1 4:1 2:1) hu n nhỏ Phâ e c phân n sắc ký cột silica gel, rửa gi i hỗn h p chloroform (10:1; 8:1) hu c h p ch t UBM3 (17 mg) 10 2.4 Nghiên cứu h p chất từ bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii) 2.4.1 Chi t xuất phân l p h p chất Lá khô bù dẻ h a g (U i ii) (1 kg) c chiết với methanol o 40 C, c t thu h i du g ôi hu c dịch chiết methanol (207 g), phân bố dịch chiế e g ớc c chiết lầ t với hexane, chloroform (CHC 3) e hy ace a e hu c cao chiế g ứng: n-hexane (UHH) (39,2 g), CHCl3 (UHC) (41 g) e hy ace a e (UHE) (35 7) ca ớc (UHW) (49,3g) Cao ethyl acetate (UHE) (35,7 g), sắc ký cột silica gel với dung môi rửa gi i hỗn h p CHCl3 MeOH (tỉ l 100:0 ế 0:100) hu c hâ n (UHE1-UHE6) Phâ UHE6 (8 g) c phân tích sắc ký sephadex LH-20 với dung môi rửa gi i MeOH H2O (1:1-1:0) hu c hâ n (UHE6.1-UHE6.4) Phâ n UHE6.3 (229 mg), sắc ký cột silica gel hỗn h p rửa gi i CHC MeOH (5:1 3:1 1:1) hu c hâ n nhỏ (UHE63.1- UHE63.4) Phâ UHE63.1 (65 g) c tinh chế cột RP18 rửa gi i bằ g MeOH H2O (1:1) hu c h p ch t UHM1 (15 mg) Ca ớc c sắc ký cột diaion HP-20 rửa gi i ớc bằ g ớc sau ó ửa gi i hỗn h p MeOH-H2O (25:75, 50:50, 75:25 v 100:0) hu c hâ n (UHW1-UHW5) Phâ n UHW3 (11,3 g) sắc ký cột silica gel rửa gi i CHCl3-MeOH (6:1 4:1 2:1 1:1) hu c hâ n (UHW3.1-UHW3.5) Phâ n UHW3.5 (1,5 g), sắc ký cột sephadex LH-20 với dung môi rửa gi i MeOH v H2O (1:1 1:0) hu c hâ n (UHW35.1-UHW35.4) Phân UHW35.4 (284 g) c tinh chế cột RP-18 rửa gi i MeOH H2O (1:1) hu c h p ch UHM4 (23 g) Phâ n UHW3.4 (702 mg), sắc ký cột sephadex LH-20 rửa gi i MeOH H2O (1:4-1:0) c hâ n (UHW34.1-UHW34.5) Phâ UHW34.4 (54 g) c tinh chế cột RP-18 rửa gi i MeOH H2O (1:4-1:1) hu c hâ n (UHW344.1UHW344.6) Phâ n UHW344.3 (36 mg), sắc ký cột silica gel rửa gi i dichlorometha e ace e (2:1) hu c h p ch t UHM2 (8 mg) UHM5 (12 g) Phâ n UHW3.2 (938 mg), sắc ký cột sephadex LH-20 rửa gi i MeOH H2O (1:4-1:0) c hâ n (UHW32.1-UHW32.5) Phâ n UHW32.4 (70 g) ã c tinh chế cột RP-18 rửa gi i MeOH H2O (1:1) hu c h p ch t UHM3 (11 mg) Cao chloroform (41,0 g) (UHC), sắc ký cột silica gel với dung môi rửa gi i hỗn h p CHCl3 MeOH (tỉ l 100:0 ế 0:100) hu c hâ n (UHC1-UHC5) Phâ C3 (10 83 g) c phân tích sắc ký sephadex LH-20 với dung môi rửa gi i MeOH H2O (1:1-1:0) hu c hâ n 10 16 16 .7 Phƣơ g ph p ho t tính 2.7.1 Ho t tính kháng vi sinh v t ki ịnh [53] Ho t tính kháng vi sinh v t kiể ị h c tiế h h ể h gi h t tính kháng sinh mẫu chiế c thực hi n phiế i ng 96 giếng (96we ic i e a e) he h g h hi i Vander Bergher Vlietlinck (1991), McKane & Kandel (1996) 2.7.2 Ho t tính ch ng ơxy hố Đây h g h ã c công nh ể x c ịnh nhanh ho t tính chống oxy hóa dựa kh g ẫy gốc tự t o DPPH (1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl) (Brand-Williams et al 1995, Shela et al 2003, Kumar et al 2013) Ch t thử c hòa dimethyl sulfoxide (DMSO 100%) DPPH c pha ethanol 96% Sự h p thụ DPPH ớc sóng  = 515 nm c x c ịnh bằ g y c ELISA sau nhỏ DPPH vào dung dịch mẫu thử phiế i ng 96 giếng Kết qu thử nghi c thể hi n giá trị trung bình nh t phép thử lặp l i ± ộ l ch chuẩn (p ≤ 05) hƣơ g K T QUẢ VÀ THẢO LU N 3.1 Cây bù dẻ (Uvaria boniana) 3.1.1 Phân l p m t s h p chất Lá bù dẻ (Uvaria boniana) c ngâm chiết dung môi methanol C t thu h i dung môi dịch chiế hu c cao thơ methanol Hịa tan cao methanol g ớc chiết phân bố với du g ôi c f hu c cao clorofom dịch ớc Từ dịch chiết bù dẻ (Uvaria boniana), bằ g c c h g h sắc ký cộ ê si ica ge ã hâ c h p ch x c ịnh h p ch t bằ g c c h g h hổ (b ng 3.1) B ng 3.1 Các h p ch c tách từ bù dẻ (Uvaria boniana) Ký hiệ Kh i h p Tên h p hấ ƣ g hấ 12 mg UBM1 Uvaridacol G 27 mg UBM2 4-Methyl-4-[(2Z)-3’-phenylprop-2’-en-1’-yl]cyclohex-2en-1-one Di e h xy que ce i 4’O[α-L17mg UBM3 3,7rhamnopyranosyl- (1  2) -β-D- glucopyranoside 38 mg UBM4 -Sitosterol 17 UBM5 UBM6 UBM7 UBM8 Stigmasterol 6-methoxyzeylenol Aristolactam AII Stigmasta-4,22-dien-3-on 12 mg 15 mg 19 mg 14 mg 3.1 X ịnh cấu trúc 3.1.2.1 H p chất UBM1 H p ch t UBM1 c phân l d ới d ng ch t rắ ịnh hình, khơng màu Cơng thức phân tử UBM1 c x c ịnh C21H20O7 phổ khối ng phân gi i cao (HR-ESI-MS) phân tích (m/z 385.1285 [M+H]+) Trong phổ H-NMR 13C-NMR cho th y tín hi u nhóm benzoyl, nhóm oxymethine, nhóm oxymetylen nhóm methine olefinic Tuy nhiên, chúng c x c ịnh dịch chuyển xuố g ù g ng th p H-2 δH 5.76 (1H, d, J = 8.0 Hz) dịch chuyể ê ù g ng cao H-3 δH 4.29 (1H, 13 t, J = 13,5, 7,0 Hz) Phổ C-NMR cho th y có 21 nguyên tử ca g ó có nguyên tử cacbon C-O, nguyên tử cac efi ic [δC 131,5 (C-5); 130,3 (C6)] hó e z y [δC 129,2 (C-1’); 130 (C-2’ C-6'); 127,3 (C-3’ C-5’); 131,1 (C-1’); 131 (C-2’’ C-6’’); 129,2 (C-3’’ C-5’’); 133 (C-4’); 133 (C4’’)] T g hổ HMBC UBM1, mối g qua d i proton H-7 δH 4,75 4,68 với C-2 (δC 76.3), C-6 (δC 130,3) C-1 (δC 75,5) ã g i ý liên kết C-2, C-6 C-7 với carbon b c bốn C-1 T ơng quan proton H-2 δH 76 c c hơ δH 8.07 (H-2, H-6) với carbon ester C 167,1 (C-7’’) ã vị trí hai nhóm benzoyl C-2 C-7 Các li u phổ nêu hoàn toàn phù h p với li u c báo cáo h p ch t uvaridacol G tài li u [19] Vì v y h p ch t UBM1 c x c ịnh uvaridacol G B ng Số li u phổ NMR h p ch t UBM1 δH (ppm, Vị δC δC (ppm) δH (ppm) [19] DEPT multi., J in [19] trí (ppm) Hz) C 75,5 74,3 5,76 (1H, d, J = 5,33( 1H, d, J CH 76,3 79,6 8,0 Hz) =10,5 Hz) 4,29 (1H, t, J = 4,16( dd, J = 10,5, CH 70,9 73,9 13.5, 7.0 Hz) 7,8 Hz) 4,43 (1H, t, J = CH 69,7 72,2 4,40 (m) 10,5, 4,5 Hz) 18 CH CH 7a CH2 7b 1’ C 2’ CH 3’ 4’ 5’ CH CH CH 6’ CH 7’ 1’’ C=O C 2’’ CH 3’’ 4’’ 5’’ CH CH CH 6’’ CH 7’’ C=O 5,95 (1H, dd, J = 11.5, 2,5 Hz) 5,79 (1H, d, J = 130,3 11,0 Hz) 4,75 (1H, d, J = 11,0 Hz) 68,0 4,68 (1H, d, J = 11,0 Hz) 129,2 8,03 (2H, d, J = 130,4 6,5 Hz) 127,3 7,49 (2H, m) 133,7 7,63 (1H, m) 127,3 7,49 (2H, m) 8,03 (2H, d, J = 130,4 6,5 Hz) 166,8 131,1 8,07 (2H, d, J = 131,4 6,5 Hz) 129,2 7,49 (2H, m) 133,8 7,63 (1H, m) 129,2 7,49 (2H, m) 8,07 (2H, d, J = 131,4 6,5 Hz) 167,1 131,5 130,2 129,7 67,0 129,3 129,7 128,5 133,3 128,5 129,7 7,95 (d, J = 7,8 Hz) 7,39 (m) 7,55 (m) 7,39 (m) 7,95 (d, J = 7,8 Hz) 166,2 129,9 130,0 128,7 133,9 128,7 130,0 167,9 Uvaridacol G (UBM1) 19 5,90 (dd, J = 10,5, 2,3 Hz) 5,74 (d, J = 10,5 Hz) 4,5 (d, J = 11,5 Hz) 8,03( d, J = 7.8 Hz) 7,39 (m) 7,55 (m) 7,39 (m) 8,03 (d, J = 7,8 Hz) Ng y ay c c h kh a h c qua â ế i c ì kiế c c c hâ u iê ch i ế u g h uyế ụy g iều ki di h d ỡ g h h ộ h g iế c ới ể iều ị iu g h y The Awa e cộ g c c h ch PC c hâ hâ U dac h u a idac A−C gây ộc hẹ ới c c dò g ế u g h uyế ụy PANC-1, PSN-1, MIA PaCa-2 KLM-1 ới c c gi ị PC50 g kh g 100-200 µM T g ó h ch PC d g di e ( )-g a dif aci i ch h í h ố ới c c dò g ế y ới gi ị PC50 ầ 14 32 17 32 μM [18] Nhó c gi ê cị hâ c u a idac E u a idac F u a idac H có c dụ g gây ộc yếu ới dò g ế u g h uyế ụy PANC-1 [19] Do ó ch g c xe hữ g c hâ iề g ể h iể huốc ới h g ế i c iều ị u g h uyế ụy g i Hình 3.1: Phổ 13C-NMR UBM1 20 Hình 3.2: Phổ 13C-NMR UBM1 3.2 Cây bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamilton) 3.2.1 Phân l p m t s h p chất Lá bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamilton) c ngâm chiết dung môi methanol C t thu h i dung môi dịch chiế hu c cao thơ methanol Hịa tan cao methanol g ớc chiết phân bố với du g ôi c f hu c cao clorofom dịch ớc Từ dịch chiết bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamilton) bằ g c c h g pháp sắc ký cộ ê si ica ge ã hâ c 10 h p ch x c ịnh h p ch t c c h g h hổ (b ng 3.10) B ng 3 Các h p ch c tách từ bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii) Ký hiệ h p hấ UHM1 UHM2 UHM3 UHM4 UHM5 UHM6 UHM7 Tên h p hấ Quercetin Luteolin-7-O-β-glucoside, Lu e i 4’-O-glucopyranoside Rutin Rhoifolin Glutinol Zeylenol 21 ƣ 15 mg mg 11 mg 23 mg 12 mg 15 mg 10 mg g Lupeol UHM8 17 mg 3.3 Cây lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens Merr & Chun.) 3.3.1 Phân l p h p chất Cây lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens) dung môi methanol, c t thu h i dung mơi dịch chiế Ca hơ c hịa a c ca e hy ace a e g c ngâm chiết c cao thô methanol ớc chiết phân bố với dung môi ethyl acetate thu g ứng Từ cao ethyl acetate lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens) bằ g c c h g h sắc ký cộ ê si ica ge x c ịnh h p ch t bằ g c c h g h h p ch B ng 3.4 Các h p chấ ã hâ c6 hổ (B ng 3.19) ƣ c tách từ lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens) Ký hiệ h p Tê hấ hấ Hàm ƣ g FCM1 -Sitosterol 25 mg FCM2 6-Hydroxy-5,7,8-trimetoxy flavanon 15 mg FCM3 2’ 5’-Dihydroxy-3’ 4’ 6’-trimetoxy chalcon 19 mg FCM4 Quercetin 13 mg FCM5 Rutin 14 mg FCM6 -Sitosterol-3-O--D-glucopyranoside 12 mg 3.4 Cây lãnh công xám (Fissistigma glaucescens (Hance) Merr.) 3.4.1 Phân l p h p chất Lá lãnh công xám (Fissistigma glaucescens (Ha ce) Me ) ngâm chiết dung môi methanol C t thu h i dung môi dịch chiế 22 c c cao hô e Ca e hy ace a e hu hơ c hịa a g c ca e hy ace a e ớc chiết phân bố với dung môi g ứng Từ cao methanol Lá lãnh công xám (Fissistigma glaucescens (Hance) Merr.) bằ g c c h g h sắc ký cộ ê si ica ge x c ịnh h p ch t bằ g c c h g h h p ch B ng 3.4 Các h p chấ Ký hiệ h p ã hâ c hổ (b ng 3.19) ƣ c tách từ lãnh công xám Tê hấ hấ Hàm ƣ g FGM1 Aristolactam BII 18 mg FGM2 Velutinam 18 mg FGM3 Aristolactam BI 16 mg FGM4 Pukatein 26 mg FGM5 Apigenin-8-C-β-D-galactopyranoside 20 mg FGM6 Rutin 24 mg 3.5 Ho t tính kháng vi sinh v t ki ịnh, ho t tính ch ng ơxy hố Các h p ch ã hâ c h gi h t tính sinh h c: kháng vi sinh v t kiể ịnh, chống ôxy hóa D ng mẫu h p ch t UHM2, UHM3, UHM5 í ã có hiều cơng bố ho t tính nên chúng tơi thử ho t tính ch t cịn l i, 3.5.1 Ho t tính kháng vi sinh v t ki ịnh Kết qu cho th y, h p ch t UBM2, UBM3, UHM7, FCM2, FGM1 khơng thể hi n ho t tính kháng vi sinh v t kiể ịnh, l i h p ch t khác có ho t tính kháng vi sinh v t kiể ịnh với chủng thí nghi m g ộ ghi (100 ( g/ml), H ch UHM8 c hâ ca chiế CHC nên h ch chí h ê h í h kháng vi sinh v t ca chiế CHC he kế qu ê 3.5.2 í h h g x h Kết qu cho th y thử ho t tính chống ơxy hóa h p ch t UBM6, UHM4, UHM7, FCM3, FGM2, FGM4 thể hi n kết qu âm tính với ho t tính chống oxy hóa, cịn l i ch t thể hi c ho t tính chống oxy hóa, Kết qu y cũ g g ới nh n xét hai cao chiết phâ n Ethylacetate 23 ớc có ho t tính n g ộ thử nghi m (các h p ch t UHM2, UHM5 phân l p từ ca ớc cũ g ã c cơng bố có ho t tính chống ơxy hóa) CÁC HỢP CHẤT PHÂN L P ĐƢỢC TỪ BÙ DẺ TRƠN (Uvaria boniana ) (1) Uvaridacol G (3) 3,7- Di e h xy que ce i glucopyranoside (4) -Sitosterol (2) 4-Methyl-4-[(2Z)-3’-phenylprop-2’ -en-1’-yl]cyclohex-2-en-1-one 4’- O- [α-L- rhamnopyranosyl- (1  2) -β-D- (5) Stigmasterol 24 (6) 6-Methoxyzeylenol (7) Aristolactam AII (8) Stigmasta-4,22-dien-3-on CÁC HỢP CHẤT PHÂN L P ĐƢỢC TỪ CÂY BÙ DẺ HOA VÀNG (Uvaria hamilton) OH OH OH OH 4' HO 1' O O HO OH O 3' 4' 1' O O OH O OH OH O (2) luteolin-7-O-glucoside (3)luteolin-4’-O-glucoside OH HO OH 3' O 4' OH O 1'' HO O O 1' O OH 6''' H3C O 5''' O O 1'' 3'' OH OH 1''' O O OH 3''' 10 OH 5'' 6'' 1''' HO HO OH O O OH H3C OH OH OH OH (4) rutin (5) rhoifolin 30 H3C CH3 29 20 19 CH3 12 25 18 CH3 CH3 10 23 CH3 (6) glutinol (7) zeylenol 25 15 16 28 27 HO HO 22 13 11 26 H3C 5'' OH 4' CH3 OH 1'' OH OH (1) quercetin HO 3'' 4' 1' O 1'' 5'' HO OH O OH O 24 (8) lupeol CÁC HỢP CHẤT PHÂN L P ĐƢỢC TỪ LÃNH CÔNG MÀU HUNG (Fissistigma cupreonitens) 29 28 23 HO 14 5' H3CO 6' 4' 5' 6, OCH HO O 2' 3' CH3O O OH (3) 2’ 5’-dihydroxy-3’ 4’ 6’-trimetoxy chalcon 5' 4' 6, HO O 2' 10 OH OH O O O O OH 3' OH OH O (4) Quercetin 6''' 3' 4' OH 1' 10 OH O 1' 2' 1' 6' (2) 6-hydroxy-5,7,8-trimetoxy flavanon 5' 1' 10 CH3O (1) -sitosterol OH O HO 15 10 CH3O 25 4' 2' 26 16 24 17 13 19 CH3O 27 20 12 11 3' 22 21 18 6" 5" 1'' HO 2" 3" 5''' CH3 4''' O 4" 1''' HO 2''' 3''' OH OH OH O HO HO OH OH (5) Rutin O OH (6) -sitosterol-3-O--D-glucopyranosit CÁC HỢP CHẤT PHÂN L P ĐƢỢC TỪ LÃNH CÔNG MÀU HUNG (Fissistigma glaucescens) O H3CO O NH 10 a H3CO 10 4a 5a 8a N O HO H R (1) Aristolactam BII (2) Velutinam (3) Aristolactam BI H OH OCH3 26 (4) Pukatein OH OH 2'' HO '' 5'' 5' 4'' O OH O 1'' HO 6' OH OH 2' O 4' 6, 3' 5' HO O 6''' 2' 3' OH 10 O OH O O O 6" 5" 1'' HO O OH 1' 2" 3" (5) Apigenin-8-C-β-D-galactopyranoside 27 5''' CH3 4''' O 4" 1''' HO 2''' 3''' OH OH (6) Rutin OH OH K T LU N Nghiên cứu thành phần hoá h c ho t tính sinh h c mẫu bù dẻ (Uvaria boniana Fin, & Gagnep,), bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii Hook,f, et Thoms,) lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens Merr, & Chun) lãnh công xám (Fissistigma glaucesens (Hance) Merr,) Vi Na ch g ôi ã hu c số kết qu h sau: 1,Từ bù dẻ (Uvaria boniana Fin, & Gagnep) ã hâ x c ịnh c u trúc h p ch t bao g m: uvaridacol G ; 4-methyl-4-[(2Z)-3’-phenylprop2’-en-1’-yl]cyclohex-2-en-1-one; 3,7- di e h xy que ce i 4’- O- [α-Lrhamnopyranosyl-(1  2) -β-D- glucopyranoside; -sitosterol and stigmasterol, 6methoxyzeylenol; aristolactam AII; stigmasta-4,22-dien-3-on Các chất lần ầ iê ƣ c phân l p từ loài 2, Từ bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii Hook,f, et Thoms,) ã hâ p x c ịnh c u trúc h p ch t bao g m: quercetin, luteolin-7-O-glucoside, luteolin-4’-O-glucoside, rutin, rhoifolin, glutinol, zeylenol, lupeol, Các chất lầ ầ iê ƣ c phân l p từ lồi 3, Từ Lãnh cơng xám (Fissistigma glaucescens (Hance) Merr,) c c h g h sắc kí ã hâ p 06 h p ch g ó có 04 h p ch t ancaloit aristolactam BII, velutinam, aristolactam BI, pukatein 02 h p ch t flavonoid apigenin-8-C-β-D-galactopyranoside rutin, Các chất velutinam, pukatein apigenin-8-C-β-D-galactopyranoside lầ ầ iê ƣ c phân l p từ loài 4, Từ dịch chiết methanol lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens Merr, & Chun,) bằ g c c h g h sắc kí ã hâ c6 h p ch t bao g m 04 h p ch t flavonoid: 6-hydroxy-5,7,8-trimetoxy flavanon, 2’ 5’-dihydroxy-3’ 4’ 6’-trimetoxy chalcon, quercetin, rutin 02 h p ch t steroid: -sitosterol; -sitosterol-3-O--D-glucopyranoside Các chất 6-hydroxy5,7,8- i e x f , ’,5’-dihydroxy- ’,4’,6’-trimetoxy chalcon lầ ầu iê ƣ c phân l p từ loài 5, h g i i n hành thử ho í h ê phâ n cao chi t h p chất phân l p ƣ c gồm ho t tính vi sinh v t ki ịnh, ho t tính ch ng oxi hóa Kết qu cho th y thử ho t tính chống ơxy hóa h p ch t UBM6, UHM4, UHM7, FCM3, FGM2, FGM4 thể hi n kết qu âm tính với ho t tính chống oxy hóa, l i ch t thể hi c ho t tính chống oxy hóa, Kết qu 28 y cũ g g ới nh n xét hai cao chiế hâ n Ethylacetate ớc có ho t tính n g ộ thử nghi m (các h p ch t UHM2, UHM5 phân l p từ ca ớc cũ g ã c cơng bố có ho t tính chống ơxy hóa) Với kết qu kháng vi sinh v t kiể ịnh, h p ch t UBM2, UBM3, UHM7, FCM2, FGM1 hi n ho t tính vi sinh v t kiể ịnh, cịn l i h p ch t khác có ho t tính kháng vi sinh v t kiể ịnh với chủng thí nghi m g ộ ghi (100 ( g/ ) H ch UHM8 c hâ ca chiế CHC ê h ch chí h ê h í h kháng vi sinh v t ca chiế CHC he kế qu ê 29 DANH MỤ ƠNG TRÌN ÊN N Đ N LU N ÁN Nguyễn Thanh Tâm Đ M h Dũ g Võ Cô g Dũ g Bùi V Nguyê Nguyễn Thị Thu H g V ựu, Nguyễn Huy Hùng, Trầ Đì h Thắng (2014), Các alkaloid flavonoid lãnh công xám (Fissistigma glaucescens (Hance) Merr,) Vi t Nam, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 52(5A) 55-61 H g V ựu, Nguyễn Thanh Tâm Đ M h Dũ g T ần L i L i, Nguyễn Huy Hùng, Trầ Đì h Thắng (2014), Các flavonoid steroit Lãnh công màu (Fissitigma cupreonitens Merr, & Chun,) Vi t Nam, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 52(5B) 662-667 Nguyen Thanh Tam, Nguyen Ngoc Tuan, Hoang Van Trung, Le Thi My Chau, Dinh Thi Trung Anh, Hoang Van Luu (2018), Chemical constituents from the leaves of Uvaria boniana in Vietnam, Vietnam Journal of Sciences and Technology, 56(5) Nguyen Thanh Tam, Nguyen Thi Dieu Thuan, Nguyen Thi Thu Hien, Pham Van Huyen, Nguyen Huu Toan Phan (2019), Flavonoids from the leaves of Uvaria hamiltonii (Annonaceae), Vietnam Journal of Chemistry, 57(4e3,4) 287290 Nguyễn Thanh Tâm, Nguyễn Thị Ngần, Hoà g V T u g H g V Lựu (2018), Thành phần hóa h c bù dẻ (Uvaria boniana) Vi t Nam, Tạp chí Khoa h c T g Đ i h c Vinh, 47 (4) 50-54 30 ... c nghiên cứu thành phần hóa h c ch a c tiến hành nhiều Vi t Nam Vì ý d ó ch g ôi ã ch ề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học ho t tính sinh học bù dẻ (Uvaria boniana), bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii),. .. Rutin OH OH K T LU N Nghiên cứu thành phần hoá h c ho t tính sinh h c mẫu bù dẻ (Uvaria boniana Fin, & Gagnep,), bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii Hook,f, et Thoms,) lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens... ng nghiên cứu lu n án dịch chiết từ loài bù dẻ (Uvaria boniana Fin & Gagnep.), bù dẻ hoa vàng (Uvaria hamiltonii Hook.f et Thoms.) lãnh công màu (Fissistigma cupreonitens Merr & Chun) lãnh công