luận văn tốt nghiệp ngành công nghệ sinh học: khảo sát khả năng tăng sinh khối của nấm men Rhodotorula

Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ – TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - Đề tài: KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN TĂNG SINH KHỐI CỦA NẤM MEN RHODOTORULA Spp LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH: VI SINH GVHD : TÔ MINH CHÂU KHÓA HỌC: 2006 – 2010 Thành phố Hồ Chí Minh tháng 12 năm 2010 SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến tất thầy, cô khoa Công Nghệ Sinh Học trường Đại học Mở-TP.HCM truyền đạt kinh nghiệm, kiến thức quý báu cho em suốt năm học vừa qua Đặc biệt với lòng biết ơn sâu sắc đến cô Tô Minh Châu thầy Ngyễn Văn Hanh tận tình hướng dẫn , góp ý tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp với tất tinh thần trách nhiệm lòng nhiệt tình Cô Thầy SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh PHẦN I: ĐẶT VẤN ĐỀ Công nghệ sinh học ngành khoa học trẻ so với ngành khoa học khác.Trong năm gần công nghệ sinh học ngành khoa học có bước đột phá lớn, phát triển mạnh mẽ ngành mũi nhọn Các thành tựu công nghệ sinh học có ứng dụng thiết thực có hiệu lónh lực y học, chân nuôi thú y, nuôi trồng thủy sản, công nghiệp thực phẩm…Đối tượng mà ngành công nghệ sinh học hướng đến vi sinh vật, mà vi sinh vật nguồn vô tận lại có lợi ích lớn người.Từ xa xưa người biết đến hoạt tính vi sinh vật, ngày việc ứng dụng tinh vi hoàn thiện Công nghệ sinh học chia thành nhiều ngành khác nhau, công nghệ vi sinh ngành khai thác tốt khả kỳ diệu thể vi sinh vật Thực chất coi vi sinh vật nhà máy nhỏ tinh vi Nhiệm vụ công nghệ vi sinh tạo điều kiện thuận lợi cho vi sinh vật hoạt động với hiệu suất cao Vì cần nghiên cứu tìm vi sinh vật có ứng dụng thiết thực đến đời sống người khai thác có hiệu Và việc tìm kiếm, khai thác nguồn lợi mãi không vô nghóa Một số vi sinh vật mà nhà khoa học tìm có ứng dụng rộng rãi ngành nuôi trồng thủy hải sản, chăn nuôi thú y, công nghiệp thực phẩm, nấm men Một giống nấm men mà em muốn đề cập đến nấm men Rhodotorula Nấm men Rhodotorula nhà khoa học biết đến từ năm 50 Ngòai việc tạo lượng lớn protein, vitamin, loại nấm men cung cấp lượng lớn carotenoid lọai sắt tố đỏ cam hòa tan dầu SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh Chúng dùng làm chất phụ gia, bổ sung vào thức ăn vật nuôi, làm phẩm màu dùng công nghiệp Thực tiễn khoa học chứng minh khả tuyệt vời vi sinh vật việc tổng hợp nên chất cần thiết cho đời sống người từ phụ phế liệu công nghiệp như: protid, axit amin, vitamin, Một số vi sinh vật có lợi có nấm men Rhodotorula, sinh khối chúng chứa lượng lớn protein, vitamin, dùng để bổ sung vào thức ăn cho người gia súc Như việc bổ sung sinh khối nấm men Rhodotorula glutilis vào phần thức ăn cho tôm vừa cung cấp khoáng , lipid vừa cung cấp carotenoid Cùng với phát triển công nghiệp đại, công nghệ sinh học mối quan tâm hàng đầu tất nước phát triển Thế Giới Họ tập trung nghiên cứu để tìm khai thác tối đa nguồn lợi từ vi sinh vật Sử dụng vi sinh vật để sản xuất chế phẩm sinh học, phân vi sinh, chất phụ gia, chiết suất protein, caroten, để thay cho nguồn trước điều khơi dậy ý tưởng mẻ công trình nghiên cứu nhiều người Và để tìm hiểu rõ đồng thời bước đầu tiếp cận với công tác nghiên cứu em tiến hành làm đề tài “Khảo sát điều kiện tăng sinh khối nấm men Rhodotorula spp” với mục đích tìm môi trường tối ưu để vừa thu lượng lớn sinh khối vừa tốn mặt tài thời gian SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh PHẦN II: TỔNG QUAN LÝ THUYẾT Sơ lược đặc điểm nấm men nói chung[2,4,6,9] 1.1 Hình thái kích thước nấm men Nấm men tên chung để nhóm nấm có cấu tạo đơn bào thường sinh sản vô tính theo lối nảy chồi Nấm men không chứa diệp lục tố phân bố rộng rãi tự nhiên Nhiều loài nhóm có khả lên men rượu áp dụng sản xuất rượu, bia, làm bánh mì Tế bào nấm men giàu protein, vitamin, đặc biệt vitamin nhóm B tiền vitamin D 2-bổ sung dinh dưỡng vào thức ăn gia súc dùng chế tạo số thực phẩm cho người Tuy nhiên có số nấm men gây bệnh cho người gia súc Candida albican, Cryptoccous gây hư hỏng thực phẩm Mycoderma Nấm men vi sinh vật điển hình cho nhóm nhân thật, tế bào nấm men thường lớn gấp 10 lần so với vi khuẩn, hình thái nấm men thay đổi tùy thuộc vào loài, tùy điều kiện nuôi cấy trao đổi chấùt ống giống, nấm men có hình thái đa dạng hình trứng, hình bầu dục, hình tròn, hình ống dài, hình thoi, hình chai, hình lưỡi liềm Kích thước tế bào nấm men thay đổi tùy theo giống loài, nói chung kích thước trung bình khoỷang 3-5ì5-10 àm 1.2 Caỏu taùo teỏ baứo naỏm men 1.2.1 Vách tế bào Khi non vách tế bào nấm men tương đối mỏng, tùy thuộc thời gian nuôi dưỡng mà vách tế bào dày lên Thành phần chủ yếu vách tế bào glucan mannan, thành phần lại protein, lipit, polyphotphat, enzyme, sắc tố ion vô cơ, đặc biệt vách tế bào chứa chất kitin SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh 1.2.2 Màng nguyên sinh chất Chất nguyên sinh thường có màu xám Khi tế bào non không nhận thấy già ta thấy có thay đổi rõ rệt Tế bào non chất nguyên sinh thường đồng hơn, già tế bào chất không đồng xuất nhiều không bào hạt volotin chất nguyên sinh thường có dạng lổn nhổn Trong thành phần chúng giống vi sinh vật khác chủ yếu cấu tạo từ nước, protit, gluxit, lipit muối khoáng, enzyme đồng thời quan Tế bào chất luôn chuyển động Thường chuyển động theo chiều xung quanh thành tế bào Ngoài phụ thuộc vào trạng thái sinh lý nấm men Như nấm men trạng thái hô hấp tế bào chất thường đồng không chứa chất lổn nhổn, trạng thái lên men thấy xuất nhiều chất làm tính đồng không bào Trong màng nguyên sinh chất có quan sau: a Ti thể Là hình cầu, hình que, hỡnh sụùi, kớch thửụực khoỷang tửứ 0,2-0,5ì0,4-1 àm Ti thể gồm lớp màng: màng màng ngòai Màng có hình sóng hay hình lược để tăng diện tích tiếp xúc, màng có hạt gọi hạt bản, bên ti thể chất dịch hữu Chức ti thể trạm lượng nấm men: + Nó tham gia thực phản ứng oxy hóa giải phóng lượng khỏi chất, làm cho lượng tích lũy dạng ATP + Giải phóng lượng khỏi ATP chuyển dạng lượng thành dạng lượng có ích cho họat động sống tế bào SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh + Tham gia vào việc tổng hợp nên số hợp chất protein, lipit, hydratcacbon, hợp chất tham gia vào cấu tạo màng tế bào + Ngòai ti thể chứa nhiều lọai men khác như: oxidaza, xitocromxidaza, peoxidaza, photphataza b Riboxom Số lượng riboxom thay đổi thụ thuộc vào loài, giai đọan phát triển điều kiện nuôi cấy Có loại riboxom: lọai riboxom 70S lọai 80S c Các vật thể ẩn nhập khác Không bào chứa enzyme thủy phân, polyphotphat, lipit, ion kim lọai, sản phẩm trao đổi chất điều hòa trình sinh trưởng phát triển tế bào nấm men Ngòai chứa số hạt dự trữ khác nhau, hạt lipit dạng hạt nhỏ, hạt glucogen, hạt tinh bột 1.2.3 Nhân Nhân tế bào nấm men nhân thật, nhân có phân hóa, có kết cấu hoàn chỉnh ổn định, có khả biểu tế bào tiến hóa, phân chia tế bào theo hình thức gián phân 1.3 Sinh sản nấm men Nấm men có hình thức sinh sản sau: Sinh sản nảy chồi Sinh sản nảy chồi hình thức sinh sản phổ biến nấm men Khi nấm men trưởng thành nảy chồi nhỏ, chồi lớn dần lên, phần nhân tế bào mẹ chuyển sang chồi, sau tách thành nhân Tế bào tạo thành tách khỏi tế bào mẹ dính tế bào mẹ tiếp tục nảy sinh tế bào SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh Sinh sản phân cắt Một số nấm men sinh sản phân cắt giống vi khuẩn, tế bào dài sau sinh vách ngăn đặc biệt phân cắt thành nhiều tế bào Sinh sản tạo bào tử túi Bào tử sinh túi nhỏ Tế bào tạo bào tử gọi túi bào tử hay nang bào tử Bào tử túi sinh theo phương thức sau:  Sư tạo bào tử vô tính: Nhân tế bào tế sinh bào tử phân chia trực tiếp tạo 2, 4, hay 16 nhân Các nhân bao bọc lớp màng dày trở thành bào tử nang Nang vỡ bào tử giải phóng  Sự tạo bào tử hữu tính:Tế bào nấm men sinh sản túi hay nang bào tử, túi có từ 2-4 bào tử Túi bào tử sinh tiếp hợp tế bào nấm men Khi tế bào khác giới đứng gần nhau, đầu tế bào mọc mấu lồi tiến sát vào nhau, tế bào tiếp hợp với hình thành hợp tử, sau có trình phối chất nguyên sinh phối nhân Nhân hợp tử phân chia thành hoặc nhân nhân với phần nguyên sinh chất tạo thành túi bào tử Nang bào tử hình thành hai tế bào nấm men tiếp hợp với  Tiếp hợp đẳng giao: Do tế bào nấm men giống tiếp hợp với mà tạo thành  Tiếp hợp dị giao: Do tế bào nấm men có hình thái kích thước không giống tiếp hợp với mà tạo thành Sự tạo bào tử bắn Ngoài hình thức sinh sản trên, nấm men có khả tạo thành bào tử bắn Loại bào tử sau tạo thành bắn đối diện SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh 1.4 Phân lọai nấm men[2,4] Từ trước đến có nhiều khóa phân lọai nấm men nhiều tác giả khác Hansen người đưa khóa phân lọai nấm men Đến năm 1952, J.Lodder với Kreger Van Rij tổng kết lại cách hoàn thiện vấn đề phân lọai nấm men Về khóa phân loại đến loài có khóa phân lọai Lodder khóa phân lọai thông dụng Thế Giới Theo khóa phân lọai Lodder (1971) nấm men chia làm 39 giống Nấm men nấm thuộc nhóm phân lọai thống Chúng thuộc ngành thực vật bật thấp Eumycophyta nằm lớp Ascomycetes Fungi Imperfecty 1.5 Ứng dụng loài nấm men sống Nấm men phân bố rộng rãi tự nhiên, đất, nước, không khí, môi trường có chứa đường, có pH thấp lương thực, thực phẩm, hoa quả, rau dưa, rỉ đường, đất ruộng mía, đất vườn ăn quả, đất có nhiễm dầu mỏ Sinh khối nấm men ứng dụng nhiều lónh vực nuôi trồng thủy hải sản, chăn nuôi thú y, dược phẩm Nhiều lọai nấm men ứng dụng rộng rãi để nấu rượu, nấu bia, sản xuất cồn, glixerin điều chế số hóa chất khác Nấm men sinh sản nhanh chóng, sinh khối chúng giàu protein chứa nhiều lọai vitamin Vì sử dụng rộng rãi ngành công nghiệp sản xuất thức ăn bổ sung cho người, gia súc thủy sản Nấm men sử dụng để làm nở bột mì, gây hương vị nước chấm, sản xuất số dược phẩm SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh Nấm men Rhodotorula spp 2.1 Khái quát chung [5,10,12] Năm 1921 A.Harden người phân lập lọai nấm men Rhodotorula mucilaginose Nấm men phân bố khắp nơi, đất, nước, không khí, ao hồ, khí đốt, người động vật có vú khác Cho đến người ta phân lập nhiều loài giống Rhodotorula có loài ứng dụng rộng rãi sản xuất lương thực, thực phẩm, chăn nuôi thú y Rhodotorula glutilis, Rh.minuta Rh.mucilaginosa 2.2 Đặc điểm hình thái sinh lý[2,3,5,10] 2.2.1 Phân lọai Theo khóa phân loại Lodder Kreger-Van-Rij(1971)Rhodotorula thuộc họ Sporobolomycetaceae Cơ sở để xếp Rhodotorula vào nhánh riêng có mặt hợp chất carotenoid tế bào nấm men khả đồng hóa inositol Rhodotorula thuộc giới nấm, lớp nấm bất toàn không sinh bào tử, sợi khuẩn ty hay sợi khuẩn ty giả 2.2.2 Cấu tạo Rhodotorula có cấu tạo đơn bào Theo Marquardt(1962) thành tế bào nấm men có lớp Lớp ngòai mỏng bao vây, lớp dày từ 130-1000A0 thành tế bào polysaccharide bền với phân hủy dung dịch KOH Nguyên sinh chất đặc, có chứa nhân tế bào có vỏ đặc thù lỗ xốp lưới nội mô, không bào chất béo dạng sệt bao quanh màng sẫm 2.2.3 Hình dạng kích thước SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang 10 Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu 6,9.109 4,3.109 6,9.108 3,8.107 10.106 430 đường 60Be Mt sản xuất có rỉ 6,7.109 3,4.109 2,3.108 8,2.106 7.106 486 đường 80Be Mt sản xuất có rỉ 6,5.109 3.109 2,8.108 9.106 6,2.106 484 đường 100Be MTsản xuất MTsản xuất 6.109 6,4.109 3,2.109 4.109 3,3.107 8.107 5,5.106 1,6.107 5,8.106 8.106 552 500 Số lượng tế bào x 106 Mt sản xuất có rỉ SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan 47 Môi trường Trang Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Biểu đồ 3.5: So sánh số lượng tế bào nấm men Rhodotorula spp lại sau thời gian bảo quản môi trường sản xuất khác Nhận xét: Dựa vào bảng kết biểu đồ so sánh nhận thấy môi trường khảo sát, môi trường sản xuất có rỉ đường 0Be sau 30 ngày bảo quản có số lần giảm thấp (430 lần).Vậy ta chọn môi trường vừa làm môi trường sản xuất vừa làm môi trường bảo quản SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan 48 Trang Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Hình 3.7: Môi trường sản xuất bán rắn Hình 3.8: Sản phẩm thu môi trường bán rắn Bảng 3.8: Kết số lượng tế bào nuôi thể tích 5l SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan 49 Trang Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Thời gian Số lượng tế bào/ml 3,1.108 72 72.108 Biểu đồ 3.6: So sánh số lượng tế bào nấm men Rhodotorula spp lúc sau 72 nuôi dung tích lit SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan 50 Trang Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Hình 3.9: Thí nghiệm lên men dung tích lit PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan 51 Trang Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Kết luận Thời gian qua hỗ trợ trang thiết bị phòng thí nghiệm tận dụng điều kiện thuận lợi, luận văn đạt số kết sau: Xác định nấm men Rhodotorula phát triển tốt pH = 5, nguồn đường gluccoza cho số lượng tế bào cao so với saccaroza nồng độ pepton, chiết nấm men xác định pepton g/l, chiết nấm men g/l Môi trường tối ưu tìm có thành phần môi trường sau: Gluccoza: 20 g/l Chiết nấm men: g/l Peptone: g/l KH2PO4 g/l (NH4)4SO4 : g/l Nước giá đỗ : : 200 g/l Thời gian tốt để thu sinh khối sau 72 nuôi cấy nuôi chế độ lắc Môi trường sản xuất tốt tìm có thành phần sau: Cám gạo: 85 % Trấu: 15 % (NH4)2SO4: 0,4 % KH2PO4: 0,05 % MgSO4: 0,05% Rỉ đường 6oBe: 30% Môi trường dùng làm môi trường bảo quản Thời gian bảo quản 30 ngày Đề nghị Do yếu tố khách quan luận văn số hạn chế đề tài sau cần nghiên cứu kỹ Ở xin đưa số đề nghị: -Ngoài môi trường tổng hợp sử dụng để nhân giống thu nhận sinh khối ta nên nghiên cứu khả tăng sinh khối nguồn nước thải nhà máy đường, nhà máy giấy hay phụ phế liệu từ công nghiệp dầu dừa SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan 52 Trang Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu - Do điều kiện phòng thí nghiệm hạn chế nên chưa khảo sát điều kiện nhiệt độ Nếu có điều kiện ta nên khảo sát lại yếu tố điều kiện tốt - Nên tiến hành nghiên cứu, chế tạo sản phẩm từ sinh khối vi sinh vật TÀI LIỆU THAM KHẢO SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan 53 Trang Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Phan Tú Anh, Đề tài :”Sinh tổng hợp sinh khối nấm men giuàu proteincarotenoid từ phụ phế liệu công nghiệp dầu dừa” Tô Minh Châu, giáo trình vi sinh sở, ĐH Mở Bán Công TP.HCM Nguyễn Lân Dũng cộng ,Phương Pháp Nghiên Cứu Vi Sinh Vật Học tập II, Nhà xuật khoa học kó thuật Hà Nội Nguyễn Đức Lượng, Công nghệ vi sinh, tập I, Nhà xuất ĐHQG TPHCM Nguyễn Đức Lượng, Công nghệ vi sinh, tập II, Nhà xuất ĐHQG TPHCM Nguyễn Đức Lượng cộng sự, Thí Nghiệm Công Nghệ Sinh học tập II, Nhà xuất ĐHQG TPHCM Tôn Nữ Minh Nguyệt, Đề tài: ”Sinh tổng hợp sinh khối nấm men giøàu protein carotenoid” Nguyễn Đức Lượng, Công nghệ vi sinh, tập II, Nhà xuất ĐHQG TPHCM Trần Thị Thanh, Vi sinh Công nghiệp, ĐHQG Hà Nội 10 Nguyễn Thị Ánh Tuyết, Đề Tài”Sản xuất chế phẩm vi sinh vật Rhodotorula glutilis giàu carotenoid bổ sung vào thức aên cho toâm” 11 www.doctorfungus.org/thefungi/Rhodotorula mucila ginosa.htm 12 www.doctorfungus.org/thefungi/Rhodotorula.htm 13 Krauze-I Hàm lượng protein carotenoid sinh khôi nấm men Rhodotorula SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan 54 Trang Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Phụ lục BẢNG ANOVA 1.Kết khảo sát ảnh hưởng chế độ nuôi tónh, lắc môi trường khác MT nuôi tónh nuôi lắc 12 20.6 49 132 57 11.6 52 88 112 260 MT 11.8 29 64 165 76 13.4 84 166 420 230 SVTH: Nguyeãn Thò Kim Loan MT 11.3 13.7 34 43 130 12.9 42 64 350 83 MT 12.3 27 53 76 99 11.6 48 77 270 110 MT 14.1 30 37 74 180 13.7 91 200 250 410 MT 11.8 35 48 120 77 13.5 87 210 360 310 MT RÑ 11.9 14.3 26 30 138 12.2 35 73 240 176 MT RÑ 11 15 55 112 69 11.9 29 86 250 97 MT RÑ 13 28 42 53 148 12.8 27 59 248 74 MT RÑ 10 11.6 25 39 109 49 11.6 25 39 109 49 MTTH 14.2 37 70 220 108 13.8 11.8 380 500 340 Trang 54 Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Anova: TwoFactor With Replication SUMMARY Count Sum Average Variance Nuôi lắc Count Sum Average Variance MT MT MT MT MT MT MT RÑ40Be MTTH Total 270.6 54.12 2249.372 345.8 69.16 3540.428 232 46.4 2363.895 267.3 53.46 1244.108 335.1 67.02 4471.352 291.8 58.36 1741.948 220.2 44.04 2817.123 262 52.4 1736.8 284 56.8 2824.7 233.6 46.72 1412.192 449.2 89.84 6544.628 55 3191.6 58.02909 2453.907 523.6 104.72 8973.792 913.4 182.68 24307.91 551.9 110.38 18624.17 516.6 103.32 9998.112 964.7 192.94 23234.87 980.5 196.1 21318.8 536.2 107.24 9444.188 473.9 94.78 8842.842 420.8 84.16 8984.828 233.6 46.72 1412.192 1245.6 249.12 50006.45 55 7360.8 133.8327 17202.18 10 794.2 79.42 5699.284 10 1259.2 125.92 15956.7 10 783.9 78.39 10465.1 10 783.9 78.39 5687.103 10 1299.8 129.98 16718.28 10 1272.3 127.23 15519.31 10 756.4 75.64 6558.983 10 735.9 73.59 5200.97 10 704.8 70.48 5456.615 10 467.2 46.72 1255.282 10 1694.8 169.48 32181.07 MS 158020.3 13316.06 6388.913 9822.487 F 16.0876 1.355671 0.650437 P-value 0.000127 0.21439 0.766621 F crit 3.949321 1.940044 1.940044 Total Count Sum Average Variance ANOVA Source of Variation Sample Columns Interaction Within SS 158020.3 133160.6 63889.13 864378.8 Total 1219449 SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan df 10 10 88 MT RÑ 60Be MT RÑ 80Be MT RĐ 100Be 109 Trang 55 Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Bảng kết khảo sát ảnh hưởng chế độ nuôi tónh, lắc môi trường chọn từ 11 môi trường nuôi tónh MT MT 15.1 23 49 156 250 11.3 69 193 380 320 12.5 28 87 180 176 12 38 86 450 290 nuôi lắc Anova: TwoFactor With Replication SUMMARY Count Sum MT MT MTTH 15 49 93 250 167 12.8 158 480 530 510 MTTH 483.5 493.1 574 96.7 6282.7 98.62 10341.12 114.8 8942.2 876 175.2 973.3 194.66 1690.8 338.16 35527.2 24868.78 56191.73 Count Sum Average Variance ANOVA Source of Variation Sample Columns Interaction Within 10 1359.5 135.95 20293.91 10 1466.4 146.64 18210.98 10 2264.8 226.48 42806.66 SS 131937 48947.94 31252.04 568614.9 df MS 131937 24473.97 15626.02 23692.29 Total 780751.9 Total Average Variance 15 1550.6 103.373 7375.184 nuôi lắc Count Sum Average Variance 15 3540.1 236.0067 38968.7 Total SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan 2 24 F 5.568774 1.032993 0.65954 P-value 0.026755 0.371232 0.526211 F crit 4.259677 3.402826 3.402826 29 Trang 56 Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu 3.Kết khảo sát ảnh hưởng mức pH khác đến số lượng tế bào số lượng tế bào x 106/ml sau 72 nuôi cấy lần lần lần TB 300 310 290 300 370 330 470 390 460 500 500 490 530 510 510 520 430 410 420 420 460 450 350 420 pH 3.5 4.5 5.5 Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count 3.5 4.5 5.5 ANOVA Source of Variation 4 4 4 Sum 1200 1560 1950 2070 1680 1680 SS Between Groups Within Groups 117300 19550 18 Total 136850 Variance 66.66667 3466.667 358.3333 91.66667 66.66667 2466.667 MS df Average 300 390 487.5 517.5 420 420 F 23460 1086.111 21.6 P-value 4.97E07 F crit 2.772853 23 4.Kết khảo sát ảnh hưởng nguồn đường Đường Glucoza Saccaroza số lượng tế bào x 106/ml sau 72 nuôi cấy lần lần laàn TB 610 580 490 560 520 490 520 510 SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang 57 Luận văn tốt nghiệp GVHD: Tô Minh Châu Anova: Single Factor SUMMARY Groups Glucoza Saccaroza Count 4 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 5000 8400 Total Sum 2240 2040 13400 df Averag e 560 510 MS 5000 1400 Variance 2600 200 F 3.571429 P-value 0.107679 F crit 5.987378 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ peptone chiết nấm men đến sinh khối tế bào Nồng độ peptone 2g/l 3g/l 4g/l số lượng tế bào x 106/ml sau 72 nuôi cấy laàn laàn laàn TB 600 590 630 630 640 630 670 620 650 640 740 680 Anova: Single Factor SUMMARY Groups 2g/l 3g/l 4g/l Count 4 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 8516.667 8750 Total 17266.67 SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Sum 2450 2560 2710 df Average 612.5 640 677.5 Variance 425 466.6667 2025 MS 4258.333 972.2222 F 4.38 P-value 0.046946 F crit 4.256495 11 Trang 58 Luận văn tốt nghiệp Nồng độ chiết nấm men 3g/l 2g/l 1g/l GVHD: Tô Minh Châu số lượng tế bào x 106/ml sau 48 nuôi cấy lần lần lần TB 600 590 630 630 640 630 670 620 650 640 740 680 Anova: Single Factor SUMMARY Groups 3g/l 2g/l 1g/l Count 4 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 8516.667 8750 Total 17266.67 SVTH: Nguyeãn Thò Kim Loan Sum 2450 2560 2710 df Average 612.5 640 677.5 Variance 425 466.6667 2025 MS 4258.333 972.2222 F 4.38 P-value 0.046946 F crit 4.256495 11 Trang 59 ... nguội cấy giống nấm men vào, ủ nhiệt độ phòng 24-48 quan sát SVTH: Nguyễn Thị Kim Loan Trang 22 Luận văn tốt nghiệp Châu GVHD: Tô Minh 3.1.4 Khảo sát khả tạo sinh khối nấm men Rhodotorula môi... trọng trình sinh trưởng nấm men Do em tiến hành khảo sát ảnh hưởng pH đến khả tăng sinh khối nấm men Rhodotorula với giá trị pH thay đổi từ 3,5 đến Điều kiện lên men: Thể tích dịch lên men 50 ml... thu nhận sinh khối sau 72 nuôi cấy 4.Yếu tố pH ảnh hưởng đến trình nhân giống thu sinh khối nấm men Rhodotorula spp Kết ảnh hưởng pH đến khả tăng sinh khối nấm men Rhodotorula môi trường tốt chọn