Độ không đảm bảo đo trong phân tích vi sinh vật

Tính độ không đảm bảo đo của phương pháp đổ đĩa trong môi trường không chọn lọc không có chất chỉ thị (như môi trường PCA), với số khuẩn lạc đếm được là 120 ở độ pha loãng 104.Không tiến hành giai đoạn xác định.

NỘI DUNG

A Giới thiệu.

B Nội dung.

I Tiến trình đo lường độ không đảm bảo đo.

II Nguyên nhân của độ không đảm bảo đo.

III Đo lường độ không đảm bảo đo.

III.1 Đo lường độ không đảm bảo đo do nhân viên phân tích.

III.2 Đo lường độ không đảm bảo đo trong phương pháp đổ đĩa.

IV Ví dụ.

V Thẩm định.

C Kết luận.

• Thế nào là độ không đảm bảo đo?

• Ý nghĩa của độ không đảm bảo đo.

• Đo lường độ không đảm bảo đo như thế nào?

A GIỚI THIỆU

B.I TIẾN TRÌNH ĐO LƯỜNG ĐỘ KHÔNG

ĐẢM BẢO ĐO

Xác định đo lường Tìm nguồn không đảm bảo đo

Đơn giản hóa bằng cách nhóm các nguồn với các dữ liệu cụ thể

Tính toán kết hợp với độ không

• Mẫu

• Môi trường nuôi cấy và thuốc thử

• Tiến trình phân tích

• Thiết bị

• Nhân viên phân tích

B.II NGUYÊN NHÂN CỦA ĐỘ KHÔNG

ĐẢM BẢO ĐO

• Chỉ số lệch chuẩn

Trong đó:

Sr : Độ lệch chuẩn tính lặp lại

n : Số lần lặp lại

xi : Kết quả phân tích của mỗi lần thực hiện

B.III.1 ĐÁNH GIÁ, ĐO LƯỜNG ĐỘ KHÔNG ĐẢM BẢO ĐO DO NHÂN VIÊN PHÂN TÍCH

n

x x

• Đánh giá kiểm nghiệm viên:

Kết hợp độ không đảm bảo đo của nhân viên vào kết quả phân tích:

RSD: hệ số biến động

RSDr ≤ 7,7%

Sr Sr ≤ 0,1 0,1 < Sr < 0,15 Sr ≥ 0,15 Kết

• Đánh giá và đo lường độ không đảm bảo đo giữa các nhân viên trong phòng phân tích

Trong đó:

dj = xj – yj là sự khác nhau về kết quả giữa 2 kiểm nghiệm viên trong mỗi lần thực hiện 1 chỉ tiêu phân tích.

• Đánh giá sự tương đương giữa 2 kiểm nghiệm viên:

• Độ không đảm bảo đo giữa các nhân viên trong

luận Rất tốt Tốt Không chấp nhận

_ 1

2 _

1

x n

x x

RSD

n i

• Độ không đảm bảo đo toàn phần

• Với độ tin cậy 95%, k=2, khoảng đếm được tính như sau:

Số đếm thực tế ± [2(Số đếm x Độ không đảm bảo đo toàn phần)]

B.III.2 ĐO LƯỜNG ĐỘ KHÔNG ĐẢM BẢO

ĐO TRONG PHƯƠNG PHÁP ĐỔ ĐĨA

2 2

2 2

U C

• Tính độ không đảm bảo đo của phương pháp đổ đĩa trong môi trường không chọn lọc/ không có chất chỉ thị (như môi trường PCA), với số khuẩn lạc đếm được là 120 ở độ pha loãng 10-4.Không tiến hành giai đoạn xác định.

• Độ không đảm bảo đo của cân đo được khi hiệu chuẩn là 0,018 trong khoảng cân từ 1-250 grams của pipet 0,1ml: 0,000-0,009, pipet 1,0ml: 0,000-0,014; các ống nghệm là 0,015-0,043

IV VÍ DỤ

• (1) (f1): Cân mẫu ban đầu để có nồng độ pha loãng 10-1: – Cân 10gram mẫu và pha loãng cho đủ 100ml.

– Độ không đảm bảo đo của cân

100 10

10010

018 ,

0 100

018 ,

0 10

018 ,

0 10

2 2

• (2) (f2): Pha dãy dung dịch từ 10-1 đến 10-4:

– Pha loãng dịch cấy từ 10-1 thành 10-2

– Thực hiện như trên đối với mỗi bước pha loãng, ví

dụ ở đây là 3 lần f2, f3, f4

IV VÍ DỤ

32,

09

13,

01

028,

010

91

10)

(

2 2

2 2

IV VÍ DỤ

• (3) (f5): Cấy chuyển (dịch cấy 1ml):

 f5 = 1:1 = 1 (kết quả/g hay kết quả/ml)

• (4) (f6): Sự phân bố vi sinh vật trong ống pha loãng và trên đĩa (phân bố Poisson):

 Độ không đảm bảo đo là , với số CFU là

số khuẩn lạc đếm được trên đĩa

• (5) (f7): Kỹ năng đếm khuẩn lạc:

028 ,

0 1

028 ,

0 1

1

1 )

(

2 2

colonies

0 , 11 120

)

u

182 ,

0 )

( f7 =

u

Toång

• Như vậy: Đếm: 1.200.000 CFU/g

• Với độ tin cậy 95%, k=2:

• Số đếm với độ tin cậy 95%: 1.200.000 ± 511.296

• Hay kết quả nằm trong khoảng 688.704–1.712.496 tương đương từ 690.000 đến 1.800.000

IV VÍ DỤ

296

511

2 × Toång =

• Các nguồn không đảm bảo đo có ý nghĩa:

 Cân mẫu ban đầu để có nồng độ pha loãng 10-1

 Pha loãng dung dịch cấy từ 10-1  10-4

V THẨM ĐỊNH.

V.1 Độ chính xác

V.2 Độ chụm

V.3 Độ nhạy và độ đặc hiệu V.4 Độ chọn lọc

V.5 Tỉ lệ phát hiện

V.1 Độ chính xác

Độ chính xác thể hiện sự phân tán của kết quả phân tích xung quanh giá trị thực của chúng Sự chênh lệch giữa giá trị phân tích và giá trị thực càng nhỏ thì độ chính xác càng cao

Độ chính xác thể hiện tính ổn định của nhân viên phân tích

V.2 Độ chụm

Độ chụm là mức độ phân bố của các kết quả thử nghiệm riêng rẽ của cùng một mẫu đồng nhất được phân tích lập lại nhiều lần trên cùng một phương pháp thử.

Độ chụm của một phép thử thường được diễn tả bằng thuật ngữ “độ lệch chuẩn” RSD hay hệ số biến thiên của một chuỗi các phép đo.

V.3 Độ nhạy và độ đặc hiệu

Các định nghĩa:

Độ nhạy: tỷ lệ xác định đúng trên tổng số các chủng hoặc khuẩn lạc dương tính giả định.

Độ đặc hiệu: tỷ lệ xác định đúng trên tổng số các chủng hoặc khuẩn lạc âm tính giả định.

Tỷ lệ dương tính giả: tỷ lệ dương tính quan sát được sai với kết quả thực.

Tỷ lệ âm tính giả: tỷ lệ âm tính quan sát được sai với kết quả thực.

Các đại lượng:

(a): dương tính thực

(b): âm tính giả

(c): dương tính giả (d): âm tính thực

Âm tính (không điển

hình) Khẳng định là

Khẳng định là

+

d c

d

+

c a

d b

b

+

n

d a

V.4 Độ chọn lọc

Độ chọn lọc thực (Real Selectivity) là logarit của

tỷ lệ các số đếm khuẩn lạc của vi sinh vật đích thực (đã khẳng định là dương tính) trên tổng số khuẩn lạc.

Độ chọn lọc biểu kiến: là logarit của tỷ lệ các số đếm khuẩn lạc của vi sinh vật đích giả định (khuẩn lạc điển hình) trên tổng số khuẩn lạc.

Tỷ lệ phát hiện là độ thống nhất giữa số lượng vi sinh vật phát hiện được bằng phương pháp thử cần thẩm định

so với số phát hiện được bằng phương pháp tham chiếu (phương pháp chuẩn)

Quy trình xác định tỷ lệ phát hiện:

Dùng mẫu tự nhiên hoặc chủng vi sinh vật để so sánh

độ phát hiện của phương pháp thử so với phương pháp chuẩn.

Đếm lượng vi sinh vật đích trong mẫu đã cấy chủng Báo cáo giá trị mật độ trung bình bằng phương pháp thử.

Xác định số lượng vi sinh vật trong chủng chứng dùng những phương pháp phù hợp.

V.5 Độ thu hồi

• Do hiểu biết chưa thấu đáo, mong nhận được sự góp ý chân thành của thầy cô và anh chị.