Cú theơ các bước được tiên hành như sau: 3.1.2 Khạo sát đoơ thuaăn cụa giông.
3.1.8.Sạn xuât sinh khôi nâm men.
Sau khi đã chĩn được mođi trường cũng như thời gian và chê đoơ nuođi thích hợp cho nâm men Rhodotorula phát trieơn, lây mođi trường này đeơ nhađn giông cho sạn xuât.
Đeơ sạn xuât sinh khôi nâm men người ta có theơ áp dúng 2 phương pháp: phương pháp nuođi cây beă maịt và phương pháp nuođi cây chìm.
°Trong thí nghieơm này em chĩn phương pháp nuođi cây beă maịt đeơ thu nhaơn sinh khôi. Sở dĩ chĩn phương pháp này vì ở phương pháp này khođng đòi hỏi thiêt bị phức táp và đieău kieơn nuođi cây khođng nghieđm ngaịt, thích hợp cho sạn xuât đơn giạn, ở đieău kieơn phòng thí nghieơm.
°Do khođng có máy ly tađm neđn ở phương pháp nuođi cây chìm khạo sát ở 5l ta khođng tiên hành thu sinh khôi, đeơ thu sinh khôi ta cây dịch leđn men vào các mođi trường sạn xuât, nuođi qua 24 giờ, sây khođ, khi đó sẽ có được chê phaơm sinh hĩc chứa Rhodotirula spp.
Trong thí nghieơm này mođi trường cơ bạn dùng cho phương pháp nuođi cây beă maịt(MTSX) là cám gáo, cám baĩp và trâu (cho vào đeơ taíng đoơ xôp và đoơ thóang khí) cùng với vieơc boơ sung khóang .
Thành phaăn mođi trường sạn xuât
Mođi trường sạn xuât khođng boơ sung rư đường
MTSX 1:Cám gáo: 85 % Cám gáo: 85 % Trâu: 15 % (NH4)2SO4: 0,4 % KH2PO4: 0,05 % MgSO4: 0,05 %
Boơ sung nước đeơ mođi trường có đoơ aơm 60%
MTSX 2:Cám baĩp: 85 % Cám baĩp: 85 % Trâu: 15 % (NH4)2SO4: 0,4 % KH2PO4: 0,05 % MgSO4: 0,05 %
Boơ sung nước đeơ mođi trường có đoơ aơm 60% Mođi trường sạn xuât có rư đường
Cám gáo: 85 %
Trâu: 15 %
(NH4)2SO4: 0,4 %
KH2PO4: 0,05%
MgSO4: 0,05 %
Đieău chưnh mođi trường có đoơ aơm 60%
Chuaơn bị mođi trường leđn men bán raĩn với thành phaăn mođi trường như tređn phađn phôi vào các chai có dung tích 500 ml. Sau đó đieău chưnh veă đoơ aơm 60% sau khi đã cho rư đường 30% vào baỉng nước cât. Đem hâp tieơt trùng ở 121oC, 1amt trong 20 phút, đeơ nguoơi. Cho dịch nâm men đã nuođi cây với dung tích 5 lit ở mođi trường chĩn lựa vào các mođi trường này với lượng cây là 10%. Tiên hành troơn đeău roăi lây moêi mođi trường ra 10 g cho vào 99 ml nước muôi sinh lý 9‰ đã hâp tieơt trùng, tiêp túc pha loãng mău ở các noăng đoơ pha loãng khác nhau. Đem cây tređn mođi trường thách đĩa Sabouraud đeơ đêm sô lượng khuaơn lác có được sau khi cây. Tiêp túc nuođi cây trong 24 giờ ở nhieơt đoơ phòng, sau đó cũng tiên hành lây ra 10g mău này và cũng cây tređn thách đĩa Sabouraud đêm sô khuaơn lác có được. Sau đó đem sây khođ đêm lái sô lượng tê bào sau khi sây roăi đem bạo quạn, đêm lái sô khuaơn lác sau thời gian bạo quạn 10 ngày, 20 ngày, 30 ngày.
Nuođi cây nâm men Rhodotorula baỉng phương pháp leđn men chìm với mođi chĩn lựa.
Ông giông Rhodotorula sau 3-5 ngày nuođi cây được nhađn giông câp 1 trong bình 100 ml có chứa 50 ml mođi trường, nuođi tređn máy laĩc 200 v/phút, lượng giông cây là 10%. Sau đó được leđn men trong heơ thông leđn men 5l, có súc khí lieđn túc baỉng máy bơm khí, thời gian leđn men là 72 giờ. Khi mới cây giông vào bình ta tiên hành đêm sô lượng tê bào. Sau 72 giờ ta lái đêm sô lượng tê bào có được sau 72 giờ.