serminar phương pháp western blot

serminar phương pháp western blot

KHOA KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC CỬU LONG LỚP: CÔNG NGHỆ SINH HỌC GVHD : Ts. Bùi Chí Bảo NHÓM 5 HỌ VÀ TÊN MSSV NGUYỄN THỊ HẰNG 10.033.014 HUỲNH TRÚC LINH 10.033.025 NGUYỄN THỊ NHUNG 10.033036 LA PHƯƠNG THÙY 10.033.043 DƯƠNG THỦY TIÊN 10.033.044 DƯƠNG MINH TRIỀU 10.033.048 KHÁI NIỆM KHÁI NIỆM I KẾT LUẬN KẾT LUẬN V QUI TRÌNH QUI TRÌNH II Nội dung Nội dung 1 Chuẩn bị m uẫ 2 Chạy điện di 1 chiều với SDS page 3 Chuyển protein từ gel đến màng 5 Phát hiện và phân tích hình ảnh 4 Lai với antibody HỆ THỐNG V3 WESTERN WORKFLOW TM HỆ THỐNG V3 WESTERN WORKFLOW TM III ỨNG DỤNG ỨNG DỤNG IV • Western blot là kĩ thuật xét nghiệm protein trên polyacrylamide gel chuyển đến môi trường bền vững hơn và cố định • Là kỹ thuật lai giữa protein với protein(giữa kháng nguyên với kháng thể) protein kháng nguyên được phát hiện qua phản ứng tạo màu hoặc phát huỳnh quang Western blot bằng cách sử dụng một kháng thể nhận ra các protein được sửa đổi với lipoic acid. Mẫu có thể được lấy từ mô thực vậtđộng vật, bằng cách cắt ra thành nhiều mảnh nhỏ. Chúng ta cho thêm cát và dung dich đệm để ly trích ( thể tích tùy vào số lượng mẫu). 1. Chuẩn bị mẫu * Lysis buffer chứa:  Sodium hydroxide (NaOH): giúp phá vỡ các thành tế bào  Sodium Dodecyl Sulfate (SDS): hòa tan màng tế bào  Tris, pH 7.5 → nó sẽ phá vỡ các liên kết hydro giữa các base DNA, SDS cũng làm biến tính phần lớn các protein trong các tế bào, giúp tách các protein từ các plasmid sau trong tiến trình. Thêm các loại chất tẩy rửa, muối và các dung dịch đệm có thể được sử dụng để ly giải tế bào và hòa tan protein. II. Qui trình Thêm các loại chất tẩy rửa, muối và các dung dịch đệm có thể được sử dụng để ly giải tế bào và hòa tan protein.Chất ức chế Protease và phosphatase được thêm vào để ngăn chặn sự tiêu hóa của mẫu bởi các enzyme của riêng mình. Chuẩn bị mô thường được thực hiện ở nhiệt độ lạnh để tránh làm biến tính protein và suy thoái. Và một sự kết hợp của kỹ thuật sinh hóa và cơ khí - bao gồm các loại lọc và ly tâm. 1. Chuẩn bị mẫu [...]... thực vật Ứng dụng Western blot trong y tế:  Western blot cũng có thể được sử dụng như một thử nghiệm xác minh về nhiễm viêm gan B Company Logo Một số hình thức của bệnh Lyme thử nghiệm sử dụng Western blot www.themegallery.com  Các thử nghiệm khẳng định HIV sử dụng một western blot để phát hiện kháng thể chống HIV trong một mẫu huyết thanh của con người V KẾT LUẬN 1 Western blot là một kỹ thuật... tử nếu các tiêu chuẩn thích hợp được sử dụng Hệ thống máy chạy western blot của Biorad: V3 Western Workflow™ Bio-Rad's V3 Western Workflow là một phương pháp gồm năm bước để đơn giản quy trình western blotting Các quy trình làm việc V3 đầy đủ kết hợp kỹ thuật truyền thống với công cụ sáng tạo, chẳng hạn như TGX Stain ™ đúc sẵn gel, Trans -Blot ® Turbo hệ thống ™, và ChemiDoc ™ MP màn hình, để nhanh chóng... với protein V KẾT LUẬN 4 Western blot cho phép các nhà nghiên cứu xác định trọng lượng phân tử của protein và để đo số lượng tương đối của protein trong các mẫu khác nhau 5 Phương pháp này cho phép sự tách biệt của tất cả các protein tế bào trên một gel lớn.lợi thế lớn của phương pháp này là nó thường phân biệt giữa các đồng dạng khác nhau của một loại protein cụ thể 6 Western blot còn được sử dụng trong... thuật số và cho phép phân tích dữ liệu xa hơn như phân tích trọng lượng phân tử số lượng phân tử Huỳnh quang được coi là một trong những phương pháp tốt nhất để định lượng, nhưng ít nhạy cảm hơn chemiluminescence Phát hiện bằng phương pháp Chemiluminescent Phương pháp phát hiện Chemiluminescent phụ thuộc vào ủ màng lai  với một chất nền sẽ luminesce khi tiếp xúc với reporter trên kháng thể thứ cấp... kháng thể, các protein được chuyển từ trong gel lên một màng nitrocellulose hoặc polyvinylidene difluoride (PVDF ) Phương pháp chính để chuyển các protein và sử dụng một dòng điện để kéo protein gel vào PVDF hoặc màng nitrocellulose Các protein di chuyển từ bên trong gel lên màng Một phương pháp chuyển bao gồm việc đặt một màng trên gel, và một chồng giấy lọc Ngăn toàn bộ được đặt trong một dung dịch... nghiệm phần mềm ™ có thể được sử dụng để xác nhận dữ liệu phương Tây thấm qua bình thường hóa protein tổng số kết hợp với protein vệ sinh Bình thường hóa cho protein tổng số, tước và reprobing là không còn cần thiết Phần mềm hình ảnh phòng thí nghiệm cho kết quả định lượng thay vì bình thường hóa tương đối IV ỨNG DỤNG CỦA KỸ THUẬT WESTERN BLOT  Xác định sự hoạt động của gen thông qua sự có mặt của... dung dịch đệm nó di chuyển lên giấy bằng cách mao dẫn, đưa các protein với nó protein trên màng nitrocellulose hoặc PVDF 3 Chuyển protein từ gel đến màng Trong thực tế phương pháp này không được sử dụng vì nó mất quá nhiều thời gian; electroblotting được ưa thích.kết quả của hai quá trình "thấm", các protein được tiếp xúc trên bề mặt một lớp mỏng để phát hiện Cả hai màng tế bào được lựa chọn cho các thuộc... bằng đo màu Phương pháp phát hiện đo màu phụ thuộc vào ủ màng lai với một chất nền có khả năng  phản ứng với các enzyme (như peroxidase ) được ràng buộc với các kháng thể thứ cấp đó màng phản ứng này diễn ra bằng cách chuyển đổi thuốc nhuộm hòa tan thành một dạng không hòa tan của một màu sắc khác tủa thành các vết ngay bên cạnh các enzyme và qua xuất hiện vết trên màng Phát triển của blot sau đó dừng... MP ChemiDoc màn hình Điều này cho phép hình dung ngay được protein trên gel toàn bộ mà không cần nhuộm Stain-công nghệ là một giải pháp thay thế tiết kiệm thời gian để nhuộm Coomassie truyền thống, cung cấp một quy trình làm việc sắp xếp hợp lý 3 Chuyển protein - Trans -Blot Turbo hệ thống là một protein bộ máy chuyển giao nhanh chóng có thể làm giảm các bước chuyển giao ít nhất là 3 phút, trong khi... với công cụ sáng tạo, chẳng hạn như TGX Stain ™ đúc sẵn gel, Trans -Blot ® Turbo hệ thống ™, và ChemiDoc ™ MP màn hình, để nhanh chóng kiểm tra kết quả điện di và chất lượng chuyển giao trước khi đến western blotting, đơn giản hóa phân tích, định lượng protein để có được kết quả nhanh hơn 1 Tách biệt Protein - Mini-PROTEAN® TGX Stain-Free™ precast gels and Criterion™ TGX Stain-Free™ precast gels tách . nếu các tiêu chuẩn thích hợp được sử dụng. Phát hiện bằng phương pháp Chemiluminescent Hệ thống máy chạy western blot của Biorad: V3 Western Workflow™ Các quy trình làm việc V3 đầy đủ kết hợp. protein để có được kết quả nhanh hơn. Bio-Rad's V3 Western Workflow là một phương pháp gồm năm bước để đơn giản quy trình western blotting. . phân t .ố ượ ử Huỳnh quang được coi là một trong những phương pháp tốt nhất để định lượng, nhưng ít nhạy cảm hơn chemiluminescence Phương pháp phát hiện Chemiluminescent phụ thuộc vào ủ màng