Các phương pháp chuyển gen ở thực vật

Chuyển gen trực tiếp Chuyển gen bằng agrobacterium Chuyển gen bằng virus Chuyển gen súng bắn gen Chuyển gen bằng điện di Chuyển gen bằng silicon carbide Chuyển gen bằng vi tiêm... Quá tr

Các phương pháp chuyển

gen

Tạ Ngọc Ly

Nội dung

1 Chuyển gen gián tiếp

2 Chuyển gen trực tiếp

Chuyển gen bằng agrobacterium

Chuyển gen bằng virus

Chuyển gen súng bắn gen Chuyển gen bằng điện di Chuyển gen bằng silicon carbide Chuyển gen bằng vi tiêm

Chuyển gen nhờ Agrobacterium

rhizogenes

Plasmid Ti và T-DNA

Quá trình xâm nhiễm tự nhiên của Agrobacterium

Quá trình xâm nhiễm tự nhiên của Agrobacterium

Quá trình xâm nhiễm tự nhiên của Agrobacterium

Quá trình xâm nhiễm tự nhiên của Agrobacterium

Quá trình xâm nhiễm tự nhiên của Agrobacterium

Quá trình xâm nhiễm tự nhiên của Agrobacterium

Plasmid trống

Enzyme cắt giới hạn

Enzyme cắt giới hạn

Cây chuyển gen Tế bào phân chia

Gen mới

Vector hai nguồn

 Được lắp ghép trong Ecoli, sau đó chuyển toàn bộ vào Agrobacterium

 Vector 2 nguồn chứa T-DNA của Ti-plasmid đã loại bỏ các phần khác, một gen chọn lọc và một vùng để chèn gen đích Các phần này được gắn vào một vector có mang các yếu tố giúp quá trình nhân lên trong E.Coli

Giao phối bộ ba

General scheme for Agrobacterium-mediated transformation of cereal

plants

Chuyển gen nhờ virus

 Sanford đề xuất pp bắn gen bằng vi đạn lần đầu vào năm 1987

 Vi đạn được làm bằng vàng hoặc tungsten với kích thước 1-1,5 µm.

 Vi đạn trộn với DNA với tỉ lệ thích hợp, sau khi kết tủa DNA sẽ bao quanh vi đạn

 Hỗn hợp được làm khô trên một đĩa kim loại mỏng Đĩa được gắn vào đầu một viên đạn lớn khít với nòng súng Khi bắn viên đạn đi với tốc độ cao, một lưới thép sẻ cản viên đạn lớn lại, các hạt vi

đạn tiếp tục bay và xuyên vào tế bào mang theo DNA kết hợp với DNA tế bào.

Microparticle Bombardment

:The Gene Gun”

Súng bắn gen PDS-100He Nguyên tắc hoạt động

Gene guns

Gene gun

Súng bắn gen

Chuy n gen vàoprotoplast ể

1 Hai t bào khác nhau ế

Chuyển gen vào protoplast

 Mô thực vật đặt giữa hai cực của hệ điện di DNA

được hòa sẵn trong agarose, di chuyển theo điện trường xâm nhập vào mô thực vật, nhờ vật có thể chuyển gen ngoại lai và biểu hiện

 Thành công ở phôi lúa mì, phong lan và cúc

Tế bào với gen mới

Chuyển gen vào protoplast bằng

điện di

Chuyển gen vào

 Dùng pipet tiêm, tiêm DNA vào protoplast

Chuyển gen vào protoplast bằng siêu âm

 Sau khi tách protoplast

được xử lí nhẹ bằng siêu

âm có sự hiện diện của

DNA ngoại lai

 Sóng siêu âm giúp tế bào

đi vào tế bào và biểu hiện

Chuyển gen bằng silicon carbide

 Tinh thể silicon carbide có

độ cứng rất cao, khi lắc

với tế bào có tác dụng

như những mũi kim nhỏ

giúp DNA xâm nhập vào

trong tế bào và biểu hiện

 Không cần tạo protoplast

Phân tích cây trồng chuyển gen