các phương pháp chuyển gene ở dộng vật

[...]... trứng ở giai đoạn tiền nhân (pronucleus) - Trứng chín được thu nhận bằng phương pháp sử dụng kích dục tố theo chương trình đã được xây dựng cho mỗi loài hoặc bằng phương pháp nuôi cấy trứng trong ống nghiệm Sau đó thụ tinh nhân tạo để tạo ra trứng tiền nhân Bước 4: Chuyển gen vào động vật : -Phương pháp chuyển gene trực tiếp: Chuyển gene nhờ calcium phosphate Chuyển gene nhờ xung điện Chuyển gene. .. ổn định, do đó việc chuyển những gene mong muốn là không hề đơn giản, các nhà khoa học vẫn chưa bằng lòng với những gì đã có được vì chủ yếu chúng vẫn nằm trong điều kiện phòng thí nghiệm, khó ứng dụng đuợc ra sản xuất SO SÁNH KỸ THUẬT CHUYỂN GENE Ở VI KHUẨN, ĐỘNG VẬT VÀ THỰC VẬT GiỐNG NHAU • Mục đích tạo ra những sinh vật chuyển gene mang các đặc tính vượt trội hơn những sinh vật trước đó, phụ thuộc... mảnh - Phương pháp này cho kết quả rất cao nhưng số lượng tế bào được xử lý nhỏ do phải thao tác trên từng tế bào - Thường được dùng để đưa DNA vào hợp tử hoặc các tế bào phôi sớm - Chuyển gene vào tinh trung hoặc trứng khi đã thụ tinh nhưng chưa kết hợp thành hợp tử lưỡng bội - Việc chuyển gene chỉ thành công khi gene chuyển vào di truyền cho các thế hệ sau Qui trình: - Thiết kế cấu trúc gene chuyển, ... sợi đồng dạng và các enzyme + Enzyme phiên mã ngược ( reverse Transcriptase ), enzyme cài xen ( integrase ) giúp cho quá trình cài xen bộ gene của virus với genome tế bào vật chủ ở những điểm tương đồng 2 Cơ chế hoạt động của vector: - RNA của virus được loại bỏ các gene gag, pol, env và thay vào đó là gene cần chuyển - Vector retrovirus được đưa vào tế bào vật chủ bằng nhiều phương pháp khác nhau -... gene nhờ vi tiêm Chuyển gene nhờ liposome,… -Phương pháp chuyển gene gián tiếp: Chuyển gene nhờ virus: + vector retrovirus ( RNA ) + vector adenovirus ( DNA sợi kép ) + vector adeno-associated virus ( DNA sợi đơn ) + vector herpes simplex virus ( DNA sợi kép ) + vector baculovirus ( DNA vòng kép ),… a Phương pháp vi tiêm: Nguyên tắc: - Tiêm trực tiếp DNA ngoại lai vào nhân tế bào động vật nhờ dụng cụ... bào vật chủ  các sản phẩm protein của gene mục tiêu trong tế bào đích Bước 5: nuôi cấy phôi trong ống nghiệm Tế bào trứng tiền nhân  phôi dâu ( morula ) hoặc túi phôi ( blastocyst )  cấy chuyền vào con nhận được gây chữa giả Bước 6: Các phương pháp đánh giá động vật sau khi sinh ra từ phôi chuyển gene: - Southern blot Northern blot Western blot PCR RT-PCR Miễn dịch Elisa Bước 7: tạo nguồn động vật. .. Promoter ở tế bào động vật có nguồn gốc hoặc từ động vật như methallothionein (MT), thymidine kinase, ß-actin, amylase, insulin, ß-lactoglobulin, adiposite P2 hoặc từ virus động vật như Simian virus(SV40),Rous sarcoma virus (RSV) SƠ ĐỒ CẤU TRÚC BIỂU HIỆN GENE Enhancer: gen tăng cường SIG: trình tự tín hiệu ATG: vị trí khởi đầu phiên mã AAA: đuôi polyA Bước 3:Tạo cơ sở vật liệu biến nạp gen - Ở động vật. .. nguồn động vật chuyển gene một cách liên tục Phương pháp ELISA ( enzyme linked immunosorbent assay ) 1 Nguyên tắc: - Thông qua sự kết hợp của kháng thể và kháng nguyên trong huyết thanh - Kháng thể không gắn kháng nguyên sẽ bị rữa trôi - Nhận biết sự gắn này bằng một cơ chất đặc biệt làm thay đổi màu Đĩa plastic sử dụng để tiến hành xét nghiệm ELISA CÁ HỒI CHUYỂN GENE HOOCMON SINH TRƯỞNG GH Ở NGƯỜI cá...Hình 4.2: So sánh hai dạng gen chuyển Dạng genome bao gồm tất cả các đoạn exon xuất hiện một cách tự nhiên Các đoạn intron đến việc cắt ghép mRNA và biểu hiện của gen là một trình tự chỉ bao gồm các đoạn exon mã protein của gen và intron liên quan Dạng cDNA hoá Bước 2 : Tạo tổ hợp gene biểu hiện trong tế bào động vật: -Các vùng chức năng khác nhau của gen có nguồn gốc từ các loài khác nhau có thể được... thể được kết hợp lại với nhau trong ống nghiệm bằng cách sử dụng enzyme hạn chế và ligase -Bổ sung các trình tự polylinker chứa một số vị trí nhận biết các enzyme hạn chế khác nhau -Gen chuyển được đi kèm với các trình tự không mã hoá có vai trò điều hoà sự biểu hiện của gen Các yếu tố điều hoà cũng có thể nằm ở trong đoạn intron Yếu tố điều hoà ở gần đầu 5’ của gen là promoter, có vai trò quyết định . nhân. - Phương pháp chuyển gene trực tiếp: . Chuyển gene nhờ calcium phosphate . Chuyển gene nhờ xung điện . Chuyển gene nhờ vi tiêm . Chuyển gene nhờ. học các bệnh di truyền. - Chuyển gen liệu pháp nhằm chữa trị các bệnh di truyền (của người). 4. ĐỐI TƯỢNG CHUYỂN GENE: - Hầu hết các phương pháp chuyển