quy trình cụ thể tinh sạch sản phẩm PCR để dùng tạo dòng

PCR là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phân tử nhằm khuyếch đại (tạo ra nhiều bản sao) một đoạn DNA mà không cần sử dụng các sinh vật sống như E. coli hay nấm men. PCR được sử dụng trong các nghiên cứu sinh học và y học phục vụ nhiều mục đích khác nhau, như phát hiện cácbệnh di truyền, nhận dạng, chẩn đoán những bệnh nhiễm trùng,tách dòng gene, và xác định huyết thống.

Đề tài: quy trình cụ thể tinh

sạch sản phẩm PCR để dùng tạo dòng

GVHD: TS.ĐẶNG ĐỨC LONG Nhóm svth : Đoàn Ngọc Sinh Trần Duy Sơn Nguyễn Đình Tấn Nguyễn Thị Tâm Nguyễn Bá Thạch

Tổng quan

I Giới thiệu chung về PCR

II Tinh sạch

1 Nguyên lý chung của tinh sạch

2 Phân loại các phương pháp tinh sạch

3 Quy trình tinh sạch

4 kết luận

I Giới thiệu chung về PCR

 nhằm khuyếch đại (tạo ra

nhiều bản sao) một đoạn

DNA mà không cần sử

dụng các sinh vật sống

như E.coli hay nấm men.

nghiên cứu sinh học và y học phục vụ nhiều mục đích khác nhau, như phát hiện các bệnh

di truyền, nhận dạng, chẩn đoán những bệnh nhiễm trùng,

Nguyên liệu

II TINH SẠCH

Trong quá trình tinh sạch có sử dụng dung dịch đệm rửa giải phải đúng yêu cầu và liều lượng

Cột tinh sạch phải được điều chỉnh mức chinh xác

Thao tác đúng trình tự và cẩn thận trong quá trình thực hiện

ĐÚNG YÊU CẦU

1 nguyên tắc chung của tinh sạch

2 các phương pháp tinh sạch

Phương pháp Sepharose CL-6B Phương pháp Sephacryỉ S-3Q0/S-500

Phương pháp Sephadex 74 Phương pháp Sephadex G-50 Phương pháp guanidine-HCl

Phương háp kết tủa Phương pháp SPRIR Phương pháp điện đi agarose

Quy trình tinh sạch DNA từ gel

 Bước 1: Gel sau khi chạy điện di, được đưa lên hệ thống uv

 Bước 2: Dùng dao sắc cắt phần gel chứa band DNA cần

được tinh sạch cho vào eppendoft 1.5ml (đã cân trọng lượng trước)

 Bước 3: Cho capture buffer vào eppendorf chứa gel trên với

tỷ lệ l0mg gel ~ 10µl capture buffer

 Bước 4: Đậy nắp lại ủ ở 60°c cho đến khi agarose tan hết

(5-15 phút)

 Bước 5: Chuẩn bị cột GFX, đặt vào eppendorf tương ứng với

số mẩu cần tinh sạch

 Bước 6: Sau khi ủ, đem ly tâm để tập trung mẩu ở đáy

eppendorf

 Bước 7: Hút hết mẩu sau khi ly tâm cho vào các cột đã chuẩn

 Bước 8: Đem ly tâm 10000 vòng/phút trong 30giây ở 4°C.

 Bước 9: Cho thêm vào cột lượng wash buffer tương ứng (tỉ

lệ 1:5 theo thể tích mẫu tinh sạch), ly tâm 10000 vòng/phút trong 30 giây ở 4°C

 Bước 10: Lấy cột ra và đặt vào eppendoft 1.5ml mới

 Bước 11: Hút 50µl elution buffer nhỏ vào cột GFX

 Bước 12: ủ ở nhiệt độ phòng 1 phút

 Bước 13: Ly tâm 10000 vòng/phút trong 1 phút ở 4°C, lấy cột ra, đậy nắp lại

 Bước 14: Điện di sản phẩm tinh sạch với sản phẩm chưa tinh sạch trên gel agarose 0.8 %, hiệu điện thế 100V trong

30 phút để kiểm tra kết quả tinh sạch

Kết luận

 Điện di agarose là phương pháp dễ làm

và cho kết quả như mong muốn

 Quá trình tinh sạch sẽ đem lại sản phẩm sạch tối ưu sử dụng cho tạo dòng

 Sản phẩm sau khi được tinh sạch không còn lẫn tạp chất

=> Quá trình tạo dòng đạt hiệu quả cao.

Thank You !

Add your company slogan