Luận văn thạc sĩ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BỆNH NẤM HẠI TRÊN CÂY RAU HỌ HOA THẬP TỰ VỤ THU ĐÔNG NĂM 2010 VÙNG GIA LÂM VÀ PHỤ CẬN

Luận văn thạc sĩ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BỆNH NẤM HẠI TRÊN CÂY RAU HỌ HOA THẬP TỰ VỤ THU ĐÔNG NĂM 2010 VÙNG GIA LÂM VÀ PHỤ CẬN

TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

KHOA CÔNG NÔNG HỌC -

NGUYỄN ðỨC HOẰNG

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BỆNH NẤM HẠI TRÊN CÂY RAU HỌ HOA THẬP TỰ VỤ THU ðÔNG NĂM 2010 VÙNG GIA LÂM VÀ PHỤ CẬN

LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP

Chuyên nghành: BẢO VỆ THỰC VẬT

Mã số: 60.62.10 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS ðỖ TẤN DŨNG

Lời cam đoan

Tôi xin cam đoan, đây là công trình nghiên cứu khoa học độc lập của tôi Các số liệu trong luận văn là trung thực và có nguồn gốc cụ thể, rõ ràng Các kết quả của luận văn chưa từng được công bố trong bất cứ công trình khoa học nào Mọi sự giúp đỡ đ8 được cám ơn Nếu có sai sót, tôi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm trước pháp luật

Hà Nội, ngày tháng năm 2011

Học viên

Nguyễn Đức Hoằng

Lời cảm ơn

Trong quá trình thực hiện luận văn này ngoài sự phấn đấu nỗ lực của bản thân, tôi còn nhận được sự quan tâm giúp đỡ tận tình của nhiều tập thể và cá nhân trong và ngoài trường

Trước hết, tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn đến các Thầy, Cô trong khoa Nông học – trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội đ8 tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và thực hiện luận văn

Đặc biệt, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới PGS.TS

Đỗ Tấn Dũng giảng viên bộ môn Bệnh cây và cán bộ trong bộ môn Bệnh cây

đ8 tận tình giúp đỡ tôi trong suốt thời gian nghiên cứu và viết luận văn, để tôi hoàn thành khoá học một cách tốt nhất

Tôi xin chân thành cảm ơn bà con x8 Đặng xá, Cổ Bi, Yên Thường, Đa Tốn, Yên Viên, Dương Xá, Đặng Xá, Đông Dư - Gia lâm - Hà Nội đ8 tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt quá trình điều tra và thu thập mẫu bệnh hại trên

Mục lục

Lời cam đoan i

Lời cảm ơn ii

Mục lục iii

Danh mục bảng vi

Danh mục hình viii

Danh mục các từ viết tắt xi

1.2 Mục đích, yêu cầu của đề tài 2

2.1 Tình hình nghiên cứu ngoài nước 3

2.1.1 Bệnh đốm vòng cải bắp (Alternaria brassicae và Alternaria

2.1.2 Bệnh lở cổ rễ và thối nâu (Rhizoctonia solani) 8

2.1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh thối hạch (do nấm Sclerotinia

2.1.4 Bệnh sưng rễ cải bắp (Plasmodiophora brassicae) 15

2.2 Tình hình nghiên cứu trong nước 16

2.2.1 Bệnh đốm vòng (Alternaria brassicae và Alternaria brassicicola) 16

2.2.2 Bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani) 18

2.2.3 Bệnh thối hạch (Sclerotinia sclerotiorum) 20

2.2.4 Bệnh sưng rễ cải bắp (Plasmodiophora brassicae) 21

3 vật liệu, NộI DUNG Và PHƯƠNG PHáP nghiên cứu 22

3.1 Địa điểm nghiên cứu 22

3.2 Vật liệu nghiên cứu 22

3.3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu 22

3.3.1 Điều tra thành phần bệnh hại rau họ hoa thập tự ngoài đồng ruộng 22

3.3.2 Đánh giá ảnh hưởng của các yếu tố sinh thái kỹ thuật đến sự phát

triển của một số bệnh nấm hại 23

3.3.3 Phương pháp nghiên cứu bệnh nấm hại rau trong phòng thí

3.4 Nghiên cứu, xác định các loài nấm gây bệnh 26

3.4.1 Khảo sát khả năng phòng trừ nấm Sclerotinia Sclerotiorum,

Rhizoctonia solani bằng chế phẩm sinh học nấm đối kháng

3.4.2 Khảo sát khả năng phòng trừ nấm Sclerotinia Sclerotiorum, Rhizoctonia solani bằng chế phẩm sinh học nấm đối kháng Trichoderma viride 27

3.5 Các chỉ tiêu theo dõi 28

4 KếT QUả NGHIÊN CứU Và THảO LUậN 30

4.1 Thành phần bệnh nấm hại cây rau họ hoa thập tự thu đông năm

2010 tại Gia Lâm và phụ cận 30

4.1.1 Thành phần bệnh nấm hại cây rau họ hoa thập tự thu đông năm

2010 tại Gia Lâm và phụ cận 30 4.1.2 Thành phần bệnh nấm hại cây rau cải bắp thu đông năm 2010

tại Gia Lâm và phụ cận 32

4.2 Nghiên cứu một số đặc điểm hình thái và đặc điểm sinh học của

một số bệnh nấm phổ biến hại trên rau họ thập tự 36

4.2.1 Đặc điểm triệu chứng, hình thái của một số loài nấm gây hại trên

4.2.2 Kết quả lây bệnh trong nhà lưới 43

4.2.3 ảnh hưởng của các môi trường nuôi cấy khác nhau đến sự phát

triển của nấm Alternaria brassicae, Sclerotinia Sclerotiorum,

4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của chế độ luân canh và thời vụ đến sự

phát triển của bệnh lở cổ rễ, bệnh thối hạch và bệnh đốm vòng hại

4.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của chế độ luân canh đến sự phát triển của

bệnh lở cổ rễ, bệnh thối hạch và bệnh đốm vòng 53

4.3.2 ảnh hưởng của thời vụ đến sự phát triển của nấm bệnh lở cổ rễ,

thối hạch, đốm vòng hại cây cải bắp 59

4.4 Kết quả phòng trừ sinh học bằng nấm T.viride đối với nấm R

solani, Sclerotinia sclerotiorum 64

4.4.1 Kết quả phòng trừ sinh học bằng nấm T.viride đối với nấm R

solani, Sclerotinia sclerotiorum trên môi trường PGA 64

4.4.2 Kết quả phòng trừ sinh học bằng nấm T.viride đối với nấm R solani, S.sclerotiorum trong điều kiện chậu vại 70

5 KếT LUậN Và Đề NGHị 74

Danh mục bảng

Bảng 4.1 Thành phần bệnh nấm hại cây rau họ hoa thập tựvụ thu đông

năm 2010 tại Gia Lâm và phụ cận 31

Bảng 4.2 Thành phần bệnh nấm hại cải bắp (Brassicae oleraceae var

Capitata lizg) vụ thu đông 2010 tại Đặng Xá - Gia Lâm - Hà

Bảng 4.5 Kết quả lây bệnh nhân tạobệnh thối hạch (Sclerotinia

sclerotiorum) trên cây cải bắp 45

Bảng 4.6 Kết quả lây bệnh nhân tạo bệnh đốm vòng (A brassicae ) trên

Bảng 4.9 ảnh hưởng của chế độ luân canh đến sự phát triển củabệnh lở

cổ rễ (Rhizoctonia solani) hại cây cải bắp vụ thu đông 2010 54

Bảng 4.10 ảnh hưởng của chế độ luân canh đến sự phát triển củabệnh

thối hạch (Sclerotinia sclerotiorum) hại cây cải bắp 56

Bảng 4.11 ảnh hưởng của chế độ luân canh đến sự phát triển củabệnh

đốm vòng (Al brassicae) hại cây cải bắp 57

Bảng 4.12 ảnh hưởng của thời vụ đến sự phát triểncủa lở cổ rễ

(Rhizoctonia solani) hại cây cải bắp 59

Bảng 4.13 ảnh hưởng của thời vụ đến sự phát triểncủa bệnh thối hạch

(Sclerotinia sclerotiorum) hại cây cải bắp 61

Bảng 4.14 ảnh hưởng của thời vụ đến sự phát triển củabệnh đốm vòng

(Al brassicae) trên cây cải bắp 62

Bảng 4.15 Hiệu lực đối kháng của nấm Trichodema viride với nấm

Sclerotinia sclerotiorum gây bệnh thối hạch cải bắp trên môi

trường PGA 64

Bảng 4.16 Hiệu lực đối kháng của nấm Trichodema viride với nấm

Rhizoctonia solani gây bệnh thối hạch cải bắp trên môi trường

PGA 67

Bảng 4.17 Hiệu lực phòng trừ bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani) bằng chế phẩm sinh học nấm đối kháng T.viride trong điều kiện chậu vại 70

Bảng 4.18 Hiệu lực phòng trừ bệnh thối hạch (Sclerotinia sclerotiorum)

bằng chế phẩm sinh học nấm đối kháng T.viride trong điều

kiện chậu vại 72

Danh mục hình ảnh

Hình 4.1 Triệu chứng bệnh đốm vòng (A brassicae) 35

Hình 4.2 Triệu chứng bệnh lở cổ rễ hại xu hào (Rhizoctonia solani) 35

Hình 4.3 Triệu chứng bệnh thán thư hại rau cải (Colletotrichum

Hình 4.7 Triệu chứng bệnh đốm vòng do nấm A brassicae 37

Hình 4.8 Bào tử nấm Al brassicae (độ phóng đại Xx200) 37

Hình 4.9 Triệu chứng thối hạch do nấm Sclerotinia sclerotiorum gây ra 38

Hình 4.10 Lớp nấm màu trắng và hạch nấm Sclerotinia sclerotiorum

đang hình thành trên cây cải bắp

39

Hình 4.11 Tản nấm và hạch nấm S sclerotiorum trên mt PGA 39

Hình 4.12 Sợi nấm Sclerotinia sclerotiorum (độ phóng đại Xx200) 40

Hình 4.13 Tản nấm R solani trên môi trường PGA 41

Hình 4.14 Sợi nấm Rhizoctonia solani (Độ phóng đại Xx200) 41

Hình 4.15 Kết quả lây bệnh nhân tạo bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani)

trên cây cải bắp

44

Hình 4.16 Kết quả lây bệnh nhân tạo bệnh thối hạch (Sclerotinia

sclerotiorum) trên cây cải bắp

46

Hình 4.17 Kết quả lây bệnh nhân tạo bệnh đốm vòng (A brassicae )

trên cây cải bắp

48

Hình 4.18 ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của nấm

Rhizoctonia solani

49

Hình 4.21 ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của nấm

Sclerotinia sclerotiorum

51

Hình 4.22 Tản nấm S sclerotiorum trờn mụi trường WA 52

Hình 4.23 Tản nấm S sclerotiorum trờn mụi trường CLA 52

Hình 4.24 Tản nấm S Sclerotiorum trờn mụi trường PCA 52

Hình 4.25 Tản nấm S Sclerotiorum trờn mụi trường PGA 52

Hình 4.26 ảnh hưởng của chế độ luân canh đến sự phát triển của bệnh lở

cổ rễ (Rhizoctonia solani) hại cây cải bắp vụ thu đông 2010

54

Hình 4.27 ảnh hưởng của chế độ luân canh đến sự phát triển của bệnh

thối hạch (Sclerotinia sclerotiorum) hại cây cải bắp

56

Hình 4.28 ảnh hưởng của chế độ luân canh đến sự phát triển của bệnh

đốm vòng (Al brassicae) hại cây cải bắp

58

Biểu đồ 4.29 ảnh hưởng của thời vụ đến sự phát triển của lở cổ rễ

(Rhizoctonia solani) hại cây cải bắp

59

Hình 4.30 ảnh hưởng của thời vụ đến sự phát triển của bệnh thối hạch

(Sclerotinia sclerotiorum) hại cây cải bắp

62

Hình 4.31 ảnh hưởng của thời vụ đến sự phát triển của bệnh đốm vòng

(Al brassicae) trên cây cải bắp

63

Hình 4.32 Hiệu lực đối kháng của nấm Trichodema viride với nấm

Sclerotinia sclerotiorum gây bệnh thối hạch cải bắp trên môi

trường PGA

65

Hình 4.33 nấm đối kháng T viride cấy trước S sclerotiorum 66

Hình 4.34 nấm đối kháng T viride cấy ủồng thời S sclerotiorum 66

Hình 4.35 Nấm ủối khỏng T viride cấy riờng rẽ 66

Hình 4.36 Hiệu lực đối kháng của nấm Trichodema viride với nấm

Rhizoctonia solani gây bệnh thối hạch cải bắp trên môi trường PGA

67

Hình 4.37 Tản nấm R solani trờn mụi trường WA 69

Hình 4.38 Tản nấm R solani trờn mụi trường CLA 69

Hình 4.39 Tản nấm R solani trờn mụi trường PCA 69

Hình 4.40 Tản nấm R solani trờn mụi trường PGA 69

Hình 4.41 Hiệu lực phòng trừ bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani) bằng

chế phẩm sinh học nấm đối kháng T viride trong điều kiện

chậu vại

70

Hình 4.42 Hiệu lực phòng trừ bệnh thối hạch (Sclerotinia sclerotiorum)

bằng chế phẩm sinh học nấm đối kháng T.viride trong điều

kiện chậu vại

72

DANH MôC C¸C Tõ VIÕT T¾T

1 mở đầu

1.1 Đặt vấn đề

Việt Nam nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, nóng ẩm quanh năm nên thuận lợi cho việc gieo trồng nhiều loại cây trồng, đặc biệt là các loại cây trồng cạn, đồng thời cũng tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của dịch hại, đặc biệt là bệnh hại Bệnh hại đ8 xuất hiện và gây hại ở hầu hết các cây trồng ở nước ta từ cây lương thực thực phẩm, cây rau hoa quả, cây cảnh cho đến cây dược liệu,

Theo tính toán của FAO đến năm 1986 thì sự tăng năng suất cây trồng nông nghiệp trên toàn thế giới (theo các chỉ tiêu tương đối) chậm hơn sự tăng thiệt hại do dịch hại gây ra khoảng 1,5 lần ở nhiều nước, thiệt hại do sâu, bệnh, cỏ dại trung bình là 20 - 30% tiềm năng năng suất cây trồng, điều này

có nghĩa là cứ gieo trồng 5 ha thì có ít nhất 1 ha không cho thu hoạch Thiệt hại do nấm, vi khuẩn, vius, mycoplasma gây ra là rất lớn trong đó thiệt hại lớn nhất do nấm, có đến 80% bệnh hại cây trồng là do nấm gây ra, 20% còn lại do

vi sinh vật khác

Các loại cây rau họ hoa thập tự như: Bắp cải, rau cải, xu hào là một trong những cây trồng chính bên cạnh cây lúa, do vừa có hàm lượng dinh dưỡng cao lại vừa có giá trị kinh tế nên ngày càng được phát triển và mở rộng

về cả qui mô lẫn diện tích Chính sự gia tăng này đ8 tạo điều kiện cho nhiều loại dịch hại xuất hiện và gây hại, đặc biệt phải kể đến các bệnh do nấm có

nguồn gốc trong đất như bệnh Bệnh đốm vòng (Alternaria brassicae), bệnh thối hạch cải bắp (Sclerotium rolfsii, S.sclerotiorum), bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani ), bệnh đốm lá (Cercospora brassicicola), bệnh thán thư (Colletotrichum higginanum), bệnh sương mai (Peronospora brassicae)

Cho đến nay việc phòng trừ bệnh gặp nhiều khó khăn, các biện pháp hoá học mặc dù có ưu điểm lớn là diệt trừ dịch hại nhanh chóng, triệt để và có khi còn là biện pháp mang lại hiệu kinh tế cao nhưng lại không thân thiện với môi trường Mặc dù khoa học hiện nay chưa có biện pháp nào khác có thể thay thế hoàn toàn biện pháp hoá học nhưng việc khuyến khích những biện

pháp khác nhằm hạn chế việc lạm dụng quá mức thuốc hoá học đang là xu hướng của bảo vệ thực vật hiện đại Theo đó, biện pháp sinh học sử dụng các sinh vật khác để tiêu diệt sinh vật gây hại cây trồng một cách có chọn lọc đ8

và đang được phát triển mạnh mẽ Đối với nấm hại cây trồng thì biện pháp phổ biến là sử dụng vi sinh vật đối kháng, mà thường là nấm đối kháng Một

số chế phẩm đ8 được ứng dụng rộng r8i để trừ các bệnh nấm hại cây trồng là:

Trichoderma viride, Trichoderma harzianum

Xuất phát từ những nhu cầu của thực tiễn sản xuất rau màu hiện nay,

được sự phân công của Bộ môn Bệnh cây - Khoa Nông học - Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, dưới sự hướng dẫn của PGS.TS Đỗ Tấn Dũng, chúng tôi

tiến hành thực hiện đề tài: “Nghiên cứu một số bệnh nấm hại trên cây rau

họ hoa thập tự vụ thu đông năm 2010 vùng Gia Lâm và phụ cận”

1.2 Mục đích, yêu cầu của đề tài

1.2.1 Mục đích

Điều tra, xác định thành phần và diễn biến một số bệnh nấm hại phổ biến trên cây rau họ hoa thập tự đặc biệt là cảI bắp, xu hào vụ thu đông tại Gia Lâm và vùng phụ cận Nghiên cứu đặc điểm triệu chứng, xác định nguyên nhân gây bệnh và một số đặc điểm về hình thái, đặc tính sinh học của một số loài nấm gây hại Khảo sát biện pháp phòng trừ bằng chế phẩm sinh học nấm

đối kháng T viride trong phòng thí nghiệm và chậu vại

1.2.2 Yêu cầu

Điều tra xác định thành phần và mức độ phổ biến của một số bệnh nấm hại cây rau họ hoa thập tự đặc biệt là cải bắp, xu hào vụ thu đông tại huyện Gia Lâm

Nghiên cứu đặc điểm hình thái, đặc tính sinh học của một số loài nấm hại

Điều tra diễn biến một số bệnh nấm hại gây ra như bệnh đốm vòng, thối hạch, lở cổ rễ, đốm lá, sương mai, thán thư trên cây cải bắp

Khảo sát khả năng phòng trừ một số bệnh nấm hại bằng chế phẩm sinh

học T viride trên môi trường và trong điều kiện chậu vại

2 TổNG QUAN TàI LIệU

2.1 Tình hình nghiên cứu ngoài nước

Dịch hại luôn là vấn đề nan giải và phức tạp đối với người trồng rau nói riêng và trong sản xuất nông nghiệp nói chung Rau họ hoa thập tự dễ bị nhiễm bởi nhiều tác nhân gây bệnh, điều này phụ thuộc vào nguồn bệnh, tình trạng phát triển của cây và điều kiện môi trường ở cùng thời điểm bệnh có thể xuất hiện gây hại ở vùng này mà không gây hại ở vùng khác phạm vi gây hại cũng như tính chất phức tạp của bệnh phụ thuộc vào bản chất của giống,

độ nhiễm bệnh, mức độ và khả năng kết hợp giữa cây ký chủ với nguồn bệnh dưới tác động của yếu tố môi trường

Rau họ thập tự thường nhiễm một số bệnh hại chính như đốm vòng, lở

cổ rễ, thối nâu, thối hạch, sưng rễ, héo vàng,… đây là nguyên nhân chính làm giảm năng suất và chất lượng rau

2.1.1 Bệnh đốm vòng cải bắp (Alternaria brassicae và Alternaria brassicicola)

Bệnh đốm vòng do hai loài nấm Alternaria brassicae và Alternaria brassicicola gây ra, nấm gây hại ở hầu hết các cây họ hoa thập tự như súp lơ,

cải canh, cải tàu, cải bắp, cải dầu, cải củ,…

Đây là bệnh hại rất phổ biến trong các vùng trồng rau ở các nước trên thế giới Bệnh có thể phá hại từ giai đoạn cây con, cây đ8 cuốn bắp Trên cây con, vết bệnh thường xuất hiện trên lá sò và thân non, màu đen, hình tròn hoặc hình bất định, bệnh nặng làm cây chết Trên cây đ8 lớn, vết bệnh hình thành trên lá hình tròn, có nhiều vòng đồng tâm màu nâu nhạt hoặc nâu sẫm, xung quanh có thể có quầng vàng Vết bệnh lớn, đường kính có khi đến 1cm, nhiều vết bệnh có thể liên kết với nhau thành hình bất định

Nấm gây bệnh chịu ảnh hưởng nhiều của thời tiết, nấm gây hại nặng cho cây trồng khi gặp điều kiện thời tiết mát mẻ, mưa nhiều và ở những khu vực có lượng mưa tương đối cao (Humpherson - Jone và Phelps, 1989) [20]

A.brassicae và A.brassicicola phá hại cây ký chủ ở tất cả các giai đoạn

sinh trưởng kể cả hạt Trên cây con vết bệnh xuất hiện trên thân màu đen, làm cho cây còi cọc hoặc làm chết rạp cây con (Valkonen và Koponen, 1990) [36]

Trên cây trưởng thành, bệnh hại chủ yếu ở phần lá già do chúng thường xuyên tiếp xúc với đất và dễ bị xây xát khi có mưa, gió lớn Khi bệnh xâm nhiễm vào lá già thường không gây thiệt hại lớn đến năng suất và bệnh có thể

được kiểm soát bằng cách loại bỏ các lá bị bệnh (Chuup và Sherf, 1960) [16]

Sự xâm nhiễm gây hại còn xảy ra trên các cây cải trước và sau thu hoạch, điển hình với triệu chứng đỉnh bông bị biến màu nâu ở súp lơ, bắp cải

bị thối

Alternaria brassicae và A brassicicola là nguyên nhân gây ra nhiều vết

đốm vòng trên lá cây họ hoa thập tự cả trên đồng ruộng và những cây hoang dại (Smith et al 1988) Hạt giống, cây con, lá và vỏ quả là những bộ phận thường bị hư hại Nấm có thể tìm thấy nhờ sự lớn lên của bề mặt hạt nhưng cũng có thể tìm thấy ở bên trong hạt Nấm hoại sinh tồn tại trên tàn dư cây trồng là một nguồn bệnh lớn (Jargen Kohl và Jan van der Wolf , 2005) [21]

Theo tác giả Chupp và Sherf, 1960 cho biết cả hai loài nấm này đều truyền qua hạt giống Chúng làm nhăn hạt, héo cuống quả trước khi hình thành hạt hoặc chúng tạo điều kiện cho vi khuẩn xâm nhiễm làm thối mềm than, cuống dẫn tới có thể làm chết cây Ngoài việc gây hại hạt giống cây trồng, chúng còn có thể tồn tại trong hạt giống, truyền bệnh cho cây vụ sau dẫn đến làm chết cây con (Rangel, 1945) [27]

• Nghiên cứu đặc điểm sinh học của nấm gây bệnh đốm vòng

Các tác giả S B Mathur và Olaga Kóngdal (2000) [28] đ8 mô tả cành

bào tử của nấm Al brassicae có màu oliu sáng hoặc màu nâu tối, bào tử

thường mọc riêng lẻ hoặc đôi khi mọc thành cụm Thể sợi nấm có màu trắng, mượt với các bào tử bao phủ lên hạt giống Bảo tử nấm thẳng, dạng chùy ngược, có vòi, bào tử có từ 6 - 19 vách ngăn ngang (thông thường có từ 11 - 15), có từ 0 - 8 vách ngăn dọc theo chiều dọc không đối xứng Bào tử nhẵn với

kích thước 75 - 35 x 20 - 30 àm, vòi có chiều dài bằng 1/3 - 1/2 chiều dài của bào tử

Tản nấm A brassicicola có màu đen sang bóng bao gồm bào tử dính

trên các chuỗi đơn, hẹp dài Hiếm khi sợi nấm phân nhánh và không thấy có thể sợi nấm trên hạt giống Bào tử thẳng, hình trụ thường thon dần về phía

đỉnh có từ 1 - 11 vách ngăn ngang, vách dọc hiếm thấy (S B Mathur và Olaga, 2000) [28]

Nấm A brassicicola hình thành bảo tử ở nhiệt độ 80 - 300C, tại đó bào

tử thành thục sau 13 - 14 giờ Nhiệt độ tối ưu là 180 - 300C ở đó bào tử được hình thành sau 13 giờ

Sự xâm nhiễm của nấm lên cây trồng chỉ xảy ra với điều kiện phải có giọt mưa, sương hoặc độ ẩm không khi cao Quá trình xâm nhiễm sẽ xảy ra tối thiểu sau 9 - 18 giờ (Humpherson - Jone và Phelps, 1989) [21]

Theo tác giả Chupp và Sherf (1960); Rangel (1945) cho rằng độ ẩm duy trì liên tục trong 24 giờ hoặc hơn sẽ đảm bảo cho sự xâm nhiễm thành công

Độ ẩm tương đối 91.5% hoặc cao hơn nấm sẽ hình thành được một lượng lớn bào tử thành thục sau 24 giờ

Bào tử nấm A brassicae nảy mầm được trong khoảng nhiệt độ từ 8 -

310C, nhưng hầu hết bào tử nấm nảy mầm nhanh chóng trong vòng 3 giờ khi nhiệt độ khoảng 21 - 280C (khoảng 98% bào tử nảy mầm) Khi nhiệt độ giảm khoảng thời gian cần thiết để 98% bào tử nảy mầm tăng (Degenhardt et al., 1982) [17]

Nấm gây bệnh đốm vòng tồn tại dưới dạng bào tử trên vỏ hạt hoặc sợi nấm trong hạt cũng như tàn dư cây bệnh Mẫu hạt cũ trên 20 tháng nhiễm nấm

Alternaria brassicae được lưu trữ ở 00C trong 14 tháng thấy sức nảy mầm của

bào tử nấm vẫn cao Nấm A brassicae trong mẫu bảo quản 6 tháng ở nhiệt độ

230 - 300C thấy bào tử vẫn còn hữu hiệu và còn khả năng lây nhiễm Đôi khi

trong hạt còn có những sợi nấm tiềm sinh, vì vậy khi đ8 xử lý bề mặt hạt cây

con vẫn có thể bị nhiễm bệnh (Rangel, 1945)

Bào tử Alternaria brassicicola có thể tồn tại trên bề mặt hạt khoảng 2

năm khi được bảo quản ở 100C, độ ẩm 50%, sợi nấm có thể tồn tại trong hạt khoảng 12 năm (Maude và Humpherson - Jones, 1980) Trên tàn dư cây bệnh, bào tử nấm tồn tại được khoảng 12 tuần Những ruộng cây trồng được thu hoạch trong vụ này sẽ là nguồn bệnh lây nhiễm bệnh cho các ruộng trồng xung quanh và cây trồng vụ sau (Humpherson - Jones, 1989) [21]

Các tác giả Tripathi và Kasuhik (1984) cho rằng nấm Alternaria brassicae và Alternaria brassicicola còn tồn tại dạng vi hạch (microsclerotia)

và hậu bào tử khi trên lá bệnh có một phần bị thối rữa Cả vi hạch và hậu bào tử

đều có thể được hình thành trong tế bào bào tử đính, chúng phát triển tốt nhất ở

điều kiện nhiệt độ thấp (30C) Bào tử hậu cũng có thể phát triển trong tế bào bào

tử đính trên đất tự nhiên ở nhiệt độ phòng (Tsuneda và Skoropad, 1977) [32]

Nấm gây bệnh đốm vòng lan truyền chủ yếu qua hạt giống, nhiễm bệnh nhờ bào tử trên vỏ hạt và các sợi nấm tiềm tàng trong hạt Các bào tử được phát tán nhờ gió, nước công cụ và động vật Tản nấm có thể sống được trên cây cỏ mẫm cảm và trên cây trồng lâu năm (Chupp và Sherf, 1960; Rangel, 1945; Maude và Humpherson - Jones, 1989) [24]

Nấm gây bệnh đốm vòng còn tồn tại trên tàn dư cây bệnh Trong một số nghiên cứu cho thấy các tác nhân gây bệnh trên tàn dư lá cây cải dầu và cải bắp có thể tồn tại lâu như trên lá bị bệnh còn tươi Với cải dầu tác nhân gây bệnh tồn tại được trong 8 tuần, còn đối với cải bắp là 12 tuần (Humpherson - Jones, 1989) [21] Theo nghiên cứu của tác giả Rangel (1945) cho rằng phương thức lây nhiễm qua tàn dư cây bệnh thường xảy ra ở giai đoạn vườn ươm

và cây con bị nhiễm bệnh ở vườn ươm có thể mang nguồn bệnh ra ruộng sản xuất

Dựa trên các nghiên cứu về đặc điểm phát sinh phát triển, đặc điểm sinh học của nấm gây bệnh đốm vòng, các tác giả đ8 đề xuất một số biện pháp quản lý dịch bệnh như sau:

+ Công tác dự tính dự báo: Trong nghiên cứu invitro người ta đ8 chỉ ra rằng nhiệt độ và sự nảy mầm của bào tử có mối quan hệ với nhau Nếu những mối quan hệ này được gắn với điều kiện đồng ruộng thì có thể dự đoán được

sự nảy mầm và quá trình phát triển kế tiếp theo của nấm, từ đó có kế hoạch phòng trừ trên diện rộng (Humpherson - Jones, 1989) [21]

+ Luân canh cây trồng: Bố trí luân canh với những cây trồng không thuộc họ thập tự và dọn sạch tàn dư cây bệnh, cỏ dại là ký chủ phụ của bệnh

đốm vòng Vì bào tử có thể sống trong mô lá từ 8 - 12 tuần, mô than khoảng

23 tuần nên những cánh đồng trồng lại ngay sau khi thu hoạch thường bị các tác nhân gây bệnh tấn công sớm từ giai đoạn đầu sinh trưởng của cây (Humpherson - Jones, 1989)

+ Chọn giống kháng bệnh: Các giống cây trồng khác nhau trong họ thập tự có tính kháng bệnh khác nhau nhưng không đáng kể

+ Sử dụng chế phẩm sinh học để phòng trừ: Nghiên cứu sơ bộ về xạ khuẩn cho thấy điều kiện thí nghiệm trong phòng và trên đồng ruộng, xạ

khuẩn Streptomyces arabicus đều có tác dụng diệt trừ nấm Alternaria brassicae và Alternaria brassicicola (Sharma và cộng sự., 1984; Sharma và

cộng sự., 1985) ở Phần Lan, người ta xử lý bề mặt hạt giống bằng

Streptomyces griseoviridis (15 mg/g hạt giống) mang lại hiệu quả phòng trừ

tốt (Valkonen và Koponen, 1990) [36]

+ Sử dụng thuốc hóa học: Có nhiều loại thuốc trừ nấm đ8 được thử

nghiệm cho hiệu quả phòng trừ tốt đối với nấm A brassicae Có khoảng 18 loại thuốc có tác dụng phòng trừ nấm A brassicae, trong đó Dithane M - 45

(Mancozeb) và Dithane Z - 78 (Zineb) là hai thuốc hóa học có tác dụng phòng trừ hữu hiệu nhất Có 7 loại thuốc hóa học có tác dụng kìm h8m sự phát triển của bệnh trên đồng ruộng: Benlate, Dithane m - 45, Dithane Z - 78, Zỉam, Dìolatan - 80, Thiram0 và Blitox - 50 Có thể xử lý bằng Benlate, Dithane M -

45, Dithane Z - 78

Theo tác giả Maude và cộng sự (1984) cho thấy: Hai thuốc Improdione

và Fenpropimorph có hiệu quả phòng trừ nấm Alternaria sp trên đồng ruộng

và trong xử lý hạt với liều l−ợng 0.25 lb a.i./100 lb hạt để trừ nấm Alternaria brassicicola (Valkonen and Koponen, 1990) [36]

2.1.2 Bệnh lở cổ rễ và thối nâu (Rhizoctonia solani)

Nấm Rhizoctonia solani cú khả năng lõy bệnh cho 230 loài thực vật trong

66 họ thực vật (Zasitras, 1998) Chỳng ủược phỏt hiện thấy trờn bắp cải, lỳa, ngụ, ủậu tương, ủậu nành, lạc, cà chua, bầu bớ… (Farretal, 1989)

Nấm R solani thuộc bộ nấm trơ Myceliales hoặc nhúm nấm trơ (Mycelia sterilia), giai ủoạn hữu tớnh là Thanatephorus cucumeris thuộc họ

Ceratobasidiaceae, bộ Ceratobasidiales, lớp nấm ủảm Basidiomycetes

Sợi nấm Rhizoctonia solani cũn non khụng màu trong suốt và mọc

thẳng trờn mụi trường nhõn tạo hay trờn bề mặt cõy trồng Cỏc nhỏnh của sợi nấm ngắn ủi và phỏt triển thành hạch Trong tự nhiờn, sợi nấm cú màu vàng nhạt rồi chuyển sang vàng nõu (Baruch Sneh và CTV, 1998) [15]

Hạch nấm Rhizoctonia solani màu nõu với cỏc hỡnh dạng kớch cỡ khỏc

nhau ðường kớnh hạch nhỏ (1àm) hoặc lớn (5-8àm) Hạch thường ủược hỡnh thành trờn bề mặt cỏc ký chủ, cỏc mụ thực vật hay trờn cỏc bộ phận của cõy trồng (Baruch Sneh và CTV, 1998) [15]

Triệu chứng gõy bệnh của nấm trờn cõy cải bắp: Lở cổ rễ, chết rạp cõy con, thối rễ, thối gốc thõn, hoặc thối lỏ Sau khi cõy con mọc nấm bắt ủầu xõm nhiễm gõy hại Tại gốc cõy sỏt mặt ủất chỗ bị bệnh cú vết màu thõm ủen hoặc màu nõu nhạt, làm cho tế bào mụ cõy bị huỷ hoại, mềm nhũn Giai ủoạn cõy con từ hai lỏ mầm và 1-2 lỏ thật cõy thường bị góy gục và chết

ðõy là một loại bệnh gõy thiệt hại lớn cho cõy cải bắp và một số cõy trồng khỏc vỡ thế nhiều tỏc giả ủó ủưa ra cỏc biện phỏp ủể phũng trừ bệnh hại

do nấm Rhizoctonia solani gõy ra như chọn tạo giống bệnh, canh tỏc, thuốc

hoỏ học…

Trong biện pháp chọn tạo giống chống bệnh người ta ñã sử dụng các phương pháp lai tạo, phương pháp chọn lọc cá thể ñể tạo ra các giống cây trồng

có khả năng chống chịu bệnh cao Stuteville và Erwin, 1990 cho rằng bệnh chết

rạp cây con do nấm Rhizoctonia solani gây ra có thể xảy ra trước và sau khi hạt

nẩy mầm, sự chống chịu của cây trồng ñược kiểm soát bởi các gen khác nhau Nhiều nghiên cứu về hiệu lực các loại thuốc hoá học ñối với nấm

Rhizoctonia solani cũng ñược tiến hành Thấy rằng nhóm hợp chất vô cơ có

tác dụng phòng trừ bệnh khá cao và thời gian hữu hiệu tương ñối dài nhưng không ức chế ñược hoàn toàn sự phát triển của nấm khi bệnh ñã xảy ra Chất kháng Polioxin cũng có hiệu lực phòng trừ cao Ngoài ra, thuốc trừ cỏ PCP

cũng tỏ ra hạn chế ñược bệnh do nấm Rhizoctonia solani gây ra

Hiện nay, nhiều nước ñã và ñang nghiên cứu ứng dụng một số nấm ñối

kháng như các loài nấm Trichoderma Loại nấm này có khả năng ức chế, cạnh

tranh, tiêu diệt ñược nhiều loài nấm gây bệnh ñặc biệt là nhóm nấm ñất

2.1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh thối hạch (do nấm Sclerotinia sclerotiorum)

Bệnh thối hạch gây ra bởi nấm Sclerotinia sclerotiorum Nấm này phân

bố rộng trên toàn thế giới (Purdy, 1979) Thối hạch gây thiệt hại nặng trên các cây họ ñậu Tỷ lệ bệnh trên các ruộng khác nhau là khác nhau dao ñộng từ 0-100% (Tu, 1986) [35]

Sclerotinia sclerotiorum sản sinh ra các sợi nấm màu trắng và hạch to

màu ñen trên thân và lá của nhiều cây trồng lá rộng, như cải bắp, ñậu tương, ñậu cô ve lùn và cô ve leo, cà chua, khoai tây, lạc, súplơ xanh, suplơ trắng và

xà lách (Shiva R và Beasley D, 2005)

Hầu như trên cải bắp bệnh gây hại trong tất cả các giai ñoạn sinh trưởng của cây, nhưng bệnh nặng nhất vào giữa ñến cuối vụ Bệnh xâm nhiễm vào lá già Vết bệnh ban ñầu có màu xám, thối ướt, hình tròn, bao phủ một lớp nấm màu trắng (Helene R Dillard, 1987) Sau ñó hạch nấm màu ñen ñược

Hạch nấm tồn tại trong ñất qua thời gian dài Trong ñiều kiện thuận lợi, hạch nấm nảy mầm ra quả thể ñĩa Các quả thể ñĩa tạo ra các bào tử túi xâm nhiễm vào cây (Erwin D.C và Ribeiro O.K, 1996) [18]

Các bào tử thường xâm nhiễm vào cây ở vị trí nách lá Các cánh hoa già cũng tạo ñiều kiện thuận lợi cho nấm bệnh trong quá trình xâm nhiễm (Erwin D.C và Ribeiro O.K, 1996) [18]

Nguồn bệnh ban ñầu là các bào tử túi, chúng nảy mầm trong ñiều kiện

ẩm ướt trên các tàn dư cây bệnh (Steadman, 1979) [30]

Nguồn bệnh thứ cấp là sự phát tán bệnh từ cây bệnh sang cây khoẻ Sau

ñó hạch nấm sẽ ñược hình thành trên thân cây bệnh (Tu, 1986) [33]

Sự lan truyền bệnh thối hạch phụ thuộc vào những yếu tố sau: nguồn bệnh trong ñất, ñộ ẩm ñất, lượng mưa, tưới tiêu, ñộ mẫn cảm của giống, ñộ cao luống, mật ñộ cây trồng Trên ñồng ruộng nhiễm bệnh khi gặp ñiều kiện không khí lạnh, ñộ ẩm cao có thể bùng phát thành dịch (Tu, 1987) [34]

Truyền bệnh thứ cấp từ cây bệnh sang cây khoẻ Tỷ lệ bệnh tăng khi mật ñộ cây trồng cao ðộ mẫn cảm của giống cũng là một nhân tố quan trọng trong quá trình lan truyền bệnh Những giống mẫn cảm như Fleetwood, tỷ lệ bệnh có thể từ 0-100% trong 4 tuần với bề rộng luống trồng 80 cm trong khi

ñó giống kháng ExRico 23 tỷ lệ bệnh chỉ từ 0-35% Lượng mưa cũng là một yếu tố rất quan trọng trong quá trình lan truyền bệnh (Tu, 1987) [34]

Qua các nghiên cứu trên các tác giả ñưa ra một số biện pháp phòng trừ bệnh thối hạch sau:

- Lựa chọn vùng trồng: Các vùng trồng khác nhau có tỷ lệ bệnh khác nhau dao ñộng từ 0 - 85% (Tu, 1986) Cần lựa chọn vùng trồng sạch bệnh hoặc tỷ lệ bệnh thấp ñể trồng cây

- Luân canh: Không nên luân canh những cây trồng là phổ ký chủ của

Sclerotinia sclerotiorum như cải bắp, ñậu tương, ñậu cô ve lùn và cô ve leo,

cà chua, khoai tây và xà lách kế tiếp nhau tại những vùng có mùa ñông lạnh

(Stirling G.R và Eden L.M, 2007)

Luõn canh với cỏc cõy trồng như ngụ, bụng, trỏnh ủể tỏn cõy quỏ dày (tàn dày làm ủộ ẩm bờn trong cao tạo ủiều kiện thuận lợi cho nấm bệnh xõm nhập) (Erwin D.C và Ribeiro O.K, 1996) [18]

- Xử lý hạt: Nấm Sclerotinia sclerotiorum cú khả năng tồn tại trờn hạt

dưới dạng sợi nấm tiềm sinh ở mày hạt, nội nhũ trong khoảng 3 năm Hạt nhiễm bệnh làm giảm khả năng này mầm của hạt 88 - 100% Cú thể xử lý hạt bằng Captan và thiophanate – metylen với hiệu lực trừ nấm 100% (Tu, 1989a) [35]

Nấm Rhizoctonia solani là tác nhân gây bệnh cho cây trồng có nguồn

gốc trong đất, là loài nấm phổ biến xuất hiện ở khắp các vùng trồng trọt trên thế giới (Janice Y Uchida, 2008) Theo Farr D F., et al (1989) chỉ riêng ở Mỹ

có đến hơn 500 loài thực vật là ký chủ của nấm này ở Nhật R.solani gây hại

hơn 142 loài thực vật thuộc 52 họ thực vật Một số cây ký chủ có thể kể đến như: đậu tương, đậu lima, đu đủ, dưa chuột, đặc biệt là cây họ cà, họ đậu, họ

bầu bí (Akira ogoshi, 1996) Với phạm vi ký chủ và phân bố rộng, R.solani

thực sự là một loài dịch hại nguy hiểm đe dọa nghiêm trọng đến nền sản xuất

nông nghiệp trên toàn thế giới

Nấm R solani đ8 được Decandolle mô tả đầu tiên vào năm 1815 khi đó

có tên là Rhizoctonia crocorum trong đó loài R solani là quan trọng nhất Tuy

nhiên bệnh chỉ được biết đến vào năm 1858, khi Julius Kuhn nghiên cứu bệnh

lở cổ rễ trên cây khoai tây (Paulo Ceresini, 1999) [26]

Triệu chứng gây bệnh hại của nấm R solani rất khác nhau, tùy từng bộ

phận như lở cổ rễ, thối rễ, chết rạp cây con, thối bẹ lá, thối gốc Tuy nhiên chúng chỉ tấn công vào phần dưới mặt đất của cây như rễ, trụ dưới lá mầm và

hạt giống (Paulo Ceresini, 1999) Đa số những triệu chứng do R solani gây ra thường được biết với cái tên “damping off” Hạt giống bị nhiễm nấm R solani

sẽ bị mất sức nảy mầm Giai đoạn cây con từ 2 lá mầm và 1 - 2 lá thật khi bị loài nấm này tấn công có thể bị đổ gục và chết Triệu chứng thường xuất hiện

trên cây bị bệnh là những chấm nâu, nâu đỏ ở gần phần thân sát mặt đất, rễ bị

thối Hạt giống bị nhiễm nấm R solani thường mất sức nảy mầm Bên cạnh đó nấm R solani cũng có khả năng xâm nhiễm qua thân, lá, quả, nơi có vị trí gần

mặt đất hoặc tiếp giáp với đất (Jaince Y Uchida, 2008)

Nấm Rhizoctonia solani gây bệnh lở cổ rễ được xác định là thuộc bộ

nấm trơ (Mycelia strerilia), nhóm nấm bất toàn (Fungi imperfecti) giai đoạn

hữu tính là Thanatephorus cucumeris thuộc họ Ceratobasidiaceae, bộ

Ceratobasidiales, lớp nấm đảm Basidiomycetes

Sợi nấm Rhizoctonia solani còn non không màu trong suốt và mọc

thẳng trên môi trường nhân tạo hay trên bề mặt cây trồng Các nhánh của sợi nấm ngắn đi và phát triển thành hạch Trong tự nhiên, sợi nấm có màu vàng nhạt rồi chuyển sang vàng nâu (Baruch Sneh và CTV, 1998) [15]

Sợi nấm sinh ra tạo thành các nhánh bên và hợp với sợi chính tạo thành một góc xiên, có màu tối Sợi nấm thắt lại một đoạn ngắn ở phần gốc, thường

có một vách ngăn ở phần gốc sợi nhánh Nấm R solani cũng sinh dạng sợi đặt

biệt, các tế bào kết lại với nhau tạo thành thể thống nhất, được gọi là

Monolioid Những tế bào Monolioid hòa lẫn với nhau tạo thành cấu trúc dày

đặc được gọi là hạch nấm, để chống lại điều kiện môi trường bất thuận, đảm bảo sống sót trong điều kiện bất lợi

Theo hai tác giả Abawi, GS và Martin, SB (1985) sợi nấm và hạch nấm

Rhizoctonia solani tồn tại từ vụ trước là nguồn bệnh cho vụ sau Hạch nấm R solani là những hạch nhỏ, màu nâu Nhiệt độ tối ưu cho nấm phát triển là

280C, ở nhiệt độ này đường kính tản nấm tăng được 2,1 mm/24 giờ (Abawi,

GS và Martin, SB, 1985)

Theo Baruch Sneh và ctv, hạch nấm có màu nâu, hình dạng và kích thước khác nhau, đường kính hạch nấm dao động từ 1 - 8 àm Hạch nấm thường được hình thành trên bề mặt ký chủ, trên bộ phận cây trồng và trên mô thực vật

Rhizoctonia solani được xem là một loài nấm phức tạp vì sự biến động

hình thái giữa các isolate của nấm này về khả năng gây bệnh, phổ ký chủ, các

đặc tính hình thái và sinh lý (Sneh và cs, 1991) Gần đây nhiều kỹ thuật sinh học phân tử đ8 được sử dụng để nghiên cứu sự đa dạng và mối quan hệ phát

sinh loài giữa các AG của R.solani Lie et al (1993) đ8 chia AG 1 thành 6

nhóm phụ (ISG 1A, 1B, 1C, 1D, 1E và 1F) dựa trên phân tích RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) của vùng rDNA - ITS (Internal Transcriped Spacer) và phân tích isozyme AG 4 được phân biệt thành 3 nhóm

phụ AG 4 - HIG, 4 - HIGII, 4 - HIGIII dựa trên các nghiên cứu về hai

DNA/DNA và phân tích axit béo (Stevens Johnk, J., Jones, R K 2001) Các

isolate của R.solani đ8 được Carling và cs (2002) nhận biết và chia thành 14

nhóm liên hợp (Anastomosis Group - AG) từ AG 1 đến Ag 13 và AG - BI

Nấm R solani chịu tác động của điều kiện nhiệt độ, ẩm độ, pH và hệ vi

sinh vật đất đến sự tồn tại và khả năng xâm nhiễm lan truyền (Mc Carter, SM 1993) Điều kiện nhiệt độ cho nấm sinh trưởng phát triển mạnh là 250 - 300C

Theo tác giả Kokalis - Burelle, N và cộng sự (1997) cho thấy nấm R solani sản sinh ra một số độc tố gây hại cho cây trồng như axit oxalic có thể

làm biến đổi màu ở hạt và gây các vết đốm trên lá vào giai đoạn đầu của bệnh Nấm là nguyên nhân chính gây ra bệnh thối hạt làm chết cây con, thối lá mầm, thối rễ, gây cháy lá khi nấm xâm nhập tiết ra enzyme cellutilitic pectinolitic và các độc tố thực vật

Do có phổ ký chủ rộng, khả năng gây hại lớn trên nhiều loại cây trồng

nên bệnh lở cổ rễ do nấm R solani gây hại nghiêm trọng ở hầu hết các vùng

Tuy nhiên để có hiệu quả phòng trừ nhanh các nhà nghiên cứu đ8 sử dụng các loại thuốc hóa học Các loại thuốc trừ nấm như Methyl thiophanate, Chlorothalanil,… được sử dụng một cách hợp lý đều có tác dụng phòng trừ

bệnh do nấm R solani gây ra (Janice Y Uchida, 2008)

Ngày nay, với xu thế sản xuất theo hướng an toàn nên con người đ8 chú trọng nhiều đến việc sử dụng các sản phẩm có nguồn gốc sinh học để phòng trừ dịch hại cây trồng Các sản phẩm này có ưu điểm là an toàn với môi trường, vật nuôi và con người, không tạo ra tính kháng và các nòi, chủng mới

đồng thời đảm bảo tính cân bằng trong hệ sinh thái

Nhiều nghiên cứu được tiến hành ở các nước trên thế giới như Anh, Pháp, Mỹ đ8 sử dụng các loài sinh vật có ích đặc biệt là các vi sinh vật đối

kháng trong đó có loài nấm Trichodecma sp được đánh giá rất cao

Qua các nghiên cứu trên các tác giả đ8 đưa ra một số biện pháp phòng trừ bệnh thối hạch như sau:

- Lựa chọn vùng trồng thích hợp: Theo tác giả Tu (1986) cho rằng các vùng trồng khác nhau có tỷ lệ bệnh khác nhau, dao động từ 0 - 85% Do vậy cần lựa chọn vùng trồng sạch bệnh hoặc vùng có tỷ lệ bệnh thấp để trồng cây

- Biện pháp luân canh: Luân canh với các cây trồng như ngô, bông,

không nên luân canh với những cây trồng là phổ ký chủ của Slerotinia sclerotiorum như đậu tương, đậu cô ve lùn, đậu cô ve leo, cà chua, khoai tây,

xà lách kế tiếp nhau ở những vùng có mùa đông lạnh (Erwin D.C và Ribeiro

O.K, 1996, Stirling G.R và Eden L.M, 2007) [18]

- Xử lý hạt: Do nấm Slerotinia sclerotiorum có khả năng tồn tại trên hạt

dưới dạng sợi Nấm tiềm sinh ở mày hạt, nội nhũ trong khoảng 3 năm nên làm giảm khả năng nảy mầm của hạt tới 88 - 100%, có thể xử lý hạt bằng Captan

và Thiophanate - metylen với hiệu lực trừ nấm 100% (Tu, 1989a) [35]

2.1.4 Bệnh sưng rễ cải bắp (Plasmodiophora brassicae)

Bệnh sưng rễ cải bắp do nấm Plasmodiophora brassicae gây ra Plasmodiophora brassicae còn gây hại trên nhiều cây họ thập tự như: súp lơ,

cải dầu, cải tàu,

Theo tác giả Sherf và MacNab (1986) [29] khi cây bị bệnh lá trở lên vàng, cây héo và còi cọc, lá dưới có thể bị rụng Triệu chứng quan trọng nhất

là rễ cây bị sưng, nấm hại cả rễ cái, rễ phụ, thậm chí cả phần thân dưới mặt

đất Rễ bị sưng phồng lên ở giữa và thắt lại ở dưới Bệnh có thể gây hại một phần hoặc toàn bộ hệ thống rễ

Nấm gây bệnh sưng rễ tồn tại qua đông dưới dạng bào tử tĩnh Khi thuận lợi chúng nảy mầm tạo các bọc bào tử động Bào tử động nảy mầm xâm nhiễm vào trong rễ và tạo các ổ bào tử tĩnh trong rễ, mỗi ổ bào tử tĩnh tạo ra một u sưng

Theo tác giả Sherf và MacNab (1986) [29] ở điều kiện đất lạnh, ẩm và chua thuận lợi cho nấm phát sinh phát triển Tuy nhiên nhiệt độ thích hợp cho

nấm Plasmodiophora brassicae phát triển khoảng 150 - 250C, trong đó nhiệt độ tối thích là 180 - 200C Trong điều kiện đất kiềm, nhiệt độ cao bệnh phát triển chậm

Cũng theo tác giả này bệnh sưng rễ có thể lan truyền qua dụng cụ canh tác, động vật, con người Những ruộng sản xuất có thể nhiễm bệnh qua cây giống, nước tưới (Sherf và MacNab, 1986) [29]

Từ đặc điểm phát sinh phát triển và khả năng lây lan của bệnh sưng rễ các nhà nghiên cứu đ8 đề ra biện pap để quản lý, phòng trừ dịch bệnh như sau:

Theo nghiên cứu của tác giả Myers và Campbell (1985) cha rằng: Sử dụng giống sạch bệnh kết hợp với chọn ruộng thoát nước tốt, đất sạch bệnh, không luân canh với những cây họ thập tự có hiệu quả cao trong phòng trừ bệnh sưng rễ Những ruộng bị nặng cần luân canh với những cây trồng không phải ký chủ của bệnh sưng rễ trong vòng 7 năm, giữ cho pH đất trên 7.2, có thể dùng giống chống chịu

Sau khi thu hoạch cần thu dọn sạch tàn dư cây bệnh có tác dụng làm giảm nguồn bệnh lây truyền cho vụ sau Xử lý đất, vườn ươm bằng Chloropicrin 14 - 21 ngày trước khi gieo trồng cũng có tác dụng hạn chế nguồn bệnh (Sherf và MacNab, 1986) [29]

2.2 Tình hình nghiên cứu trong nước

Nghề trồng rau ở Việt Nam đ8 được hình thành, phát triển từ rất lâu và trải dài từ Bắc đến Nam Các tỉnh thành trồng nhiều nhất là Hà Nội, Hải Phòng, Hưng Yên, Hải Dương, Bắc Ninh, Bắc Giang, Đà Lạt, Rau họ thập tự

là loại rau chủ lực ở vụ đông nước ta Nhưng hiện nay do xu hướng phát triển nghề trồng rau nên nông dân dần thay đổi sang trồng rau quanh năm Sự thay

đổi cơ cấu cây trồng này đ8 tạo điều kiện cho các loài dịch hại phát triển trong

đó có nấm gây bệnh

Tác giả Nguyễn Công Thuật (1996) [5] đ8 xác định có 3 bệnh hại chủ yếu trên rau họ thập tự trong đó có hai bệnh do nấm gây ra là bệnh đốm vòng

(Alternaria brassicae) và bệnh thối hạch (Sclerotinia sclerotiorum) Những

bệnh hại thứ yếu trên rau họ thập tự có 6 bệnh trông đó có 5 bệnh do nấm gây

ra bao gồm: bệnh sương mai (peronospora brassicae), bệnh thán thư (Colletotrichum higginsianum), bệnh đốm lá (Phyllosticta brassicae), bệnh mốc xám (Botris cinerea), bệnh sưng rễ (Plasmnodiophora brassicae)

2.2.1 Bệnh đốm vòng (Alternaria brassicae và Alternaria brassicicola)

Bệnh đốm vòng là bệnh hại rất phổ biến trong các vùng trồng cải bắp ở nước ta Bệnh hại từ giai đoạn cây con, cây đ8 cuốn bắp và trên nhiều cây họ thập tự khác (Vũ Triệu Mân, 2007) [14]

Trên cây con bệnh thường xuất hiện trên lá sò và thân non Trên cây đ8 lớn, vết bệnh hình thành trên lá hình tròn, có nhiều vòng đồng tâm màu nâu nhạt hoặc nâu sẫm, xung quanh có thể có quầng vàng Bệnh có thể xuất hiện ở cả giai đoạn thu hoạch, trong thời kỳ vận chuyển và bảo quản cải bắp trong kho làm lá bắp thối hỏng (Vũ Triệu Mân, 2007) [14]

Nấm gây bệnh Alternaria brassicae và Alternaria brassicicola, họ

Dematiaceae, bộ Moniliales, lớp nấm bất toàn Trên mô bệnh có lớp nấm mốc

đen, đó đám cành bào tử phân sinh và bào tử phân sinh Sợi nấm đa bào phân nhánh, màu vàng nâu Cành bào tử phân sinh ngắn, đa bào, màu nâu nhạt, thẳng hoặc uốn khúc, không đâm nhánh, mọc thành cụm hoặc riêng rẽ Bào tử phân sinh đa bào, có nhiều ngăn ngang và dọc, màu nâu, hình trái lựu đạn có vòi dài, kích thước khoảng 60 - 140 x 14 - 18 àm (Lê Lương Tề, 2007) [3] Nấm gây bệnh là loại bán ký sinh, xâm nhập vào cây qua vết thương xây sát và qua vết hại của côn trùng Nấm tồn tại trên tàn dư lá bệnh và trên hạt giống ở dạng sợi nấm và bào tử phân sinh Bào tử phân sinh lan truyền nhờ gió, nước mưa, nước tưới, côn trùng, dụng cụ và con người qua quá trình chăm sóc (Lê Lương Tề, 2007) [3]

Bệnh phát sinh phát triển thuận lợi trong điều kiện ẩm ướt, mưa nhiều, nhiệt độ khoảng 250C Bệnh cũng phá hại mạnh trên những ruộng cải bắp thấp, trũng , ứ đọng nước, mật độ trồng dày, nhất là các vụ trồng muộn Hầu như chưa có giống cải bắp nào có tính chống bệnh Nấm bệnh phá hại quả giống, sợi nấm có thể ăn sâu tới phôi hạt làm hạt lép (Lê Lương Tề, 2007) [3]

Một số biện pháp phòng trừ bệnh đốm vòng:

- Xử lý hạt giống bằng nước nóng (ở 480 - 500C ngâm trong 20 - 25 phút) bằng các thuốc diệt nấm trước khi gieo

- Vệ sinh đồng ruộng thường xuyên, tỉa bỏ và thu nhặt các lá bị bệnh

đưa ra khỏi đồng ruộng Tạo điều kiện thông thoáng trong ruộng

- Phòng trừ sâu hại để ngăn ngừa bệnh lây lan qua các vết thương do côn trùng

- Khi thu hoạch hạt giống cần phơi khô và lấy hạt ngay, tránh để kéo dài hạt dễ bị bệnh xâm nhập và gây hại cho vụ sau

- Xử lý tàn dư cây trồng sau khi thu hoạch, cày đất sớm và luân canh với cây trồng khác để hạn chế tác hại của bệnh

2.2.2 Bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani)

Nấm Rhizoctonia solani là một trong những loài nấm có nguồn gốc

trong đất quan trọng, có phạm vi ký chủ rộng với những triệu chứng gây hại phong phú, đa dạng trên các bộ phận khác nhau của cây trồng Từ trước tới nay chúng ta thường gặp loài nấm này gây hại trên lúa, ngô (gây triệu chứng khô vằn) hoặc các bệnh thối gốc, lở cổ rễ trên rất nhiều loại cây trồng cạn

Trong những năm gần đây đ8 phát hiện thấy nấm R solani gây hại trên nhiều

cây trồng thuộc họ thập tự (Brassicae) đặc biệt gây triệu chứng thối bắp cải (Brassia oleraceae và cappita Liz) ở vùng Hà Nội và các tỉnh lân cận, gây thiệt hại nghiêm trọng trong sản xuất (Nguyễn Kim Vân và ctv) [6]

Bệnh lở cổ rễ trên cải bắp nấm thường gây hại vào giai đoạn cây con Triệu chứng đặc trưng nhất là rễ, cổ rễ và gốc thân sát mặt đất bị thâm đen ở gốc thân, cổ rễ sau đó lan rộng ra rất nhanh bao bọc quanh cổ rễ, sau 5 - 6 ngày bị héo cây bệnh đổ gục chết lụi hàng loạt trên ruộng

Ngoài ra, nấm này còn gây triệu chứng thối bắp trên cây trưởng thành còn gọi là bệnh thối nâu, vết bệnh lúc đầu là những vết lá chết màu nâu vàng,

ở các lá ngoài và các sợi nấm màu trắng xám, sau đó vết bệnh lan rất nhanh và gây thối toàn bắp (Nguyễn Kim vân, Ngô vĩnh Viễn, 2001) [7] Theo điều tra, tỉ

lệ bệnh do nấm bệnh gây ra trên cây cải bắp ở vụ xuân vào giai đoạn chuẩn bị thu hoạch dao động từ 9 - 99% ở các vùng trồng rau xung quanh Hà Nội (vụ xuân 2002) (Trung tâm bệnh cây nhiệt đới - Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội)

Bệnh lở cổ rễ do nấm Rhizoctonia solani gây ra phát triển mạnh trên

môi trường nhân tạo ở nhiệt độ 25 - 300C Ban đầu tản nấm có màu trắng đục sau chuyển sang màu nâu sẫm (Nguyễn Văn Viên, Đỗ Tấn Dũng, 2003) Sợi nấm rất mịn ép sát bề mặt môi trường nuôi cấy, sợi nấm đa bào, phân nhánh

nhiều, ở chỗ phân nhánh hơi thắt lại, sát đó có vách ngăn, phân nhánh gần như vuông góc Sợi nấm có nhiều nhân (4 - 8 nhân) Hạch nấm khi còn non có màu trắng, khi già có màu nâu, thô Trong điều kiện ngoại cảnh thuận lợi, nấm

R solani có thể hình thành hạch non sau 3 - 4 ngày và hạch già sau 5 - 7 ngày

nuôi cấy Số lượng hạch nấm hình thành không nhiều, kích thước hạch nấm rất nhỏ (Đỗ Tấn Dũng, 2007) Đặc biệt, trong dự án Bệnh cây Việt - úc, các tác giả ở Trung tâm bệnh cây nhiệt đới (Đại học Nông Nghiệp Hà Nội) đ8 cùng

các chuyên gia úc phát hiện giai đoạn sinh sản hữu tính của nấm R solani là

đảm và bào tử đảm (Vũ Triệu Mân, 2007) [14]

Nấm R solani là loài nấm đa thực, bán hoại sinh điển hình Nấm có thể

phát sinh, phát triển trong phạm vi nhiệt độ khá rộng từ 100 ± 400C nhưng thuận lợi nhất ở 250 ± 300C, ở ẩm độ cao (Đỗ Tấn Dũng, 2001) ở nhiệt độ nhỏ hơn 100C và lớn hơn 380C thì nấm ngừng sinh trưởng Nấm hình thành hạch nhiều ở nhiệt độ 300 - 320C (Đường Hồng Duật, 1973) [2]

Hạch nấm và sợi nấm có thể tồn tại trên bắp tươi, lá già tàn dư trên ruộng và trên bề mặt đất, chúng chính là nguồn bệnh lan truyền từ vụ này sang

vụ khác Tuy nhiên, không phải tất cả các chủng nấm đều hình thành hạch nấm, nhưng cả hai loại hình thành hạch và không hình thành hạch đều gây bệnh cho cây trồng (Nguyễn Kim Vân và ctv) [6]

Nấm Trichoderma viride có hiệu lực phòng trừ bệnh rất cao đối với nấm Rhizoctonia solani (Lê Lương Tề và ctv, 2001) Khảo sát hiệu lực của nấm

đối kháng Trichoderma viride với các isolate nấm R solani gây bệnh lở cổ rễ trên môi trường nhân tạo PGA, cho thấy khi loài nấm đối kháng Trichoderma viride có

mặt trước nấm gây bệnh thì bản thấn nó có khả năng chiếm chỗ, cạnh tranh, ức

chế và tiêu diệt nấm R solani (Đỗ Tấn Dũng, 2007) [1]

Tiến hành luân canh cây trồng cạn với cây lúa nước từ 2-3 năm, cày bừa kỹ, để ải khô, bón vôi để tiêu huỷ tàn dư cây bệnh, lên luống cao dễ thoát nước, không gieo trồng quá sâu

Có thể dùng một số thuốc hoá học để phòng trừ bệnh lở cổ rễ như: Ridomil MZ 72WP, Topsin 70WP, Rovral

2.2.3 Bệnh thối hạch (Sclerotinia sclerotiorum)

Bệnh thối hạch do nấm Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) De Bary gây ra

Nấm thuộc họ Scloerotiniceae, bộ Helotiales, lớp nấm túi

Đây là một trong những bệnh hại khá phổ biến và có ý nghĩa kinh tế đối với cây cải bắp Bệnh phát sinh, gây hại trong điều kiện ẩm độ cao và thời tiết mát mẻ Nấm bệnh thường xâm nhiễm vào bắp gây thối bắp (Nguyễn Thị Lý

và ctv) [8]

Cây con bị bệnh, gốc thân sát mặt đất bị thối nhũn làm cây đổ gục trên ruộng Trên cây lớn vết bệnh thường bắt đầu từ các lá già sát mặt đất và góc thân Trên thân vết bệnh lúc đầu có màu vàng nâu, nếu trời ẩm ướt chỗ bị bệnh thối nhũn, nếu trời khô hanh chỗ bị bệnh khô teo có màu nâu nhạt hạch nấm

được hình thành bám vào bắp (Vũ Triệu Mân, 2007) [14]

Theo Phạm Thị Dung và ctv, bệnh thối hạch chỉ xuất hiện và gây hại vào cuối vụ đông và vụ xuân Nhiệt độ thích hợp cho chúng phát triển từ 18-220C

Nấm Sclerotinia sclerotiorum phát triển tốt trong điều kiện pH 4,5- 5,2

(Phạm Thị Dung và ctv) Điều kiện nhiệt độ có quan hệ chặt chẽ với khả năng hình thành quả thể đĩa và mức độ nhiễm bệnh Nhiệt độ từ 12 - 200C là thích hợp cho việc hình thành quả thể đĩa và sự nhiễm bệnh của cây trồng (Nguyễn Thị Lý và ctv) [8]

Nguồn bệnh chủ yếu bảo tồn ở dạng hạch nấm Bào tử túi lan truyền nhờ gió Ngoài gió thì nước mưa và nước tưới cây cũng là con đường lan truyền bệnh (Vũ Triệu Mân, 2007) [14]

Phòng trừ bệnh thối hạch theo quy trình phòng trừ tổng hợp Chú ý luân canh triệt để, vệ sinh đồng ruộng, ruộng trồng phải khô ráo, thoát nước tốt (Tạ Thu Cúc, 2001)

Bón vôi trên những diện tích bị hại nặng có thể là một trong những biện

pháp tốt có tác dụng hạn chế sự phát triển của nấm hạch Sclerotinia

Sclerotiorum (Phạm Thị Dung và ctv) [10]

Khi bệnh chớm phát sinh cần kịp thời phun thuốc phòng trừ Có thể dùng Aliette 80WP, Ridomil 68WP,…

2.2.4 Bệnh sưng rễ cải bắp (Plasmodiophora brassicae)

Các nhà khoa học nông nghiệp Lâm Đồng đ8 xác định hiện tượng “ra củ”

ở cây bắp cải là bệnh sưng rễ Bệnh do nấm Plasmodiophora brassicae Woronin

tồn tại trong đất dưới dạng bào tử, rồi tấn công vào bộ rễ, sống ký sinh và phát triển ở đấy, gây hại không chỉ trên cải bắp mà cả cây súp lơ, cải thảo, …

Tế bào rễ bị bệnh lớn gấp 3 lần tế bào cây bình thường Các u sưng lúc

đầu có màu sắc tương tự màu rễ cây sau chuyển sang màu nâu, thối mục (Vũ Triệu Mân, 2007) [14]

Nấm có thể xâm nhập trong suốt thời gian sinh trưởng của cây, nhưng thời

kỳ còn non là giai đoạn dễ xâm nhập và phá hại mạnh (Vũ Triệu Mân, 2007) [14]

Để phòng trừ bệnh cần chọn lọc giống, canh tác cải tạo đất trồng, chọn

đất trung tính hoặc hơi kiềm, bón vôi thích hợp ở vườn ươm và ruộng sản xuất Không luân canh với các cây trồng họ thập tự Khi thấy bệnh xuất hiện phải nhổ cả gốc rễ đem đốt hoặc vùi sâu trong các hố có vôi bột (Vũ Triệu Mân, 2007) [14]

3 vật liệu, NộI DUNG Và PHƯƠNG PHáP nghiên cứu

3.1 Địa điểm nghiên cứu

Phòng nghiên cứu Bộ môn Bệnh cây, Khoa Nông học, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội

Điều tra thành phần và diễn biến một số bệnh hại cây rau họ hoa thập tự

vụ thu đông năm 2010 vùng Gia Lâm

Thời gian thực tập từ 08/2010 đến 08/2011

3.2 Vật liệu nghiên cứu

Cây rau họ hoa thập tự được trồng tại huyện Gia Lâm vụ thu đông năm

2010

Môi trường nuôi cấy: WA, PGA, PCA, CLA

Mẫu bệnh hại là mẫu bệnh thu thập được từ ngoài đồng ruộng, mẫu bệnh còn tươi mới, các vết bệnh điển hình

Nấm đối kháng Trichoderma viride: Nguồn nấm T viride được bộ môn Bệnh cây - Khoa Nông Học - Trường ĐH Nông Nghiệp Hà Nội cung cấp

Dụng cụ thí nghiệm: Đĩa Petri, que cấy, đèn cồn, dao cắt nấm, panh, ống đong, bình tam giác, đĩa thuỷ tinh, lam kính, lamen, tủ lạnh, tủ định ôn, kính hiển vi, nồi hấp

Hóa chất: Agar, khoai tây, cà rốt, đường glucose, cồn và một số hoá chất thiết yếu khác

Hạt giống: Hạt giống cải bắp: Hà Nội

3.3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu

3.3.1 Điều tra thành phần bệnh hại rau họ hoa thập tự ngoài đồng ruộng

3.3.1.1 Phương pháp điều tra thành phần bệnh

Điều tra theo phương pháp nghiên cứu của Viện Bảo vệ thực vật năm

1997, điều tra theo phương pháp 5 điểm chéo góc, mỗi điểm điều tra 5m2

Quan sát triệu chứng điển hình của bệnh trên cây, đánh giá mức độ phổ

biến của bệnh trên đồng ruộng

Phân cấp bệnh trên lá (cây): chia 5 cấp bệnh

Điều tra bệnh thối hạch, bệnh lở cổ rễ theo phương pháp nghiên cứu Bảo

vệ thực vật của Viện Bảo vệ thực vật năm 1997, điều tra theo phương pháp 5

điểm chéo góc, mỗi điểm điều tra 50 cây và tính TLB (%)

3.3.1.2 Phương pháp điều tra diễn biến bệnh

Đối với bệnh thối hạch, bệnh lở cổ rễ: Điều tra định kỳ 7 ngày 1 lần, theo phương pháp năm điểm chéo góc, mỗi điểm điều tra 50 cây

Đối với bệnh đốm vòng: Điều tra định kỳ 7 ngày 1 lần, theo phương pháp 5 điểm chéo góc, mỗi điểm điều tra 5m2

3.3.2 Đánh giá ảnh hưởng của các yếu tố sinh thái kỹ thuật đến sự phát triển của một số bệnh nấm hại

Đánh giá các yếu tố ảnh hưởng đến sự phát triển của một số bệnh hại phổ biến trên rau họ hoa thập tự: Bệnh đốm vòng, bệnh thối hạch, bệnh lở cổ

rễ, bệnh đốm lá cải bắp

=> Ảnh hưởng của chế độ luân canh: Bố trí thí nghiệm theo 3 công thức

Giống thí nghiệm: Cải bắp Hà Nội

- Công thức 1: Lúa - su hào - cải bắp

- Công thức 2: Lúa - dưa chuột - cải bắp

- Công thức 3: Lúa xuân - lúa mùa - cải bắp

- Chỉ tiêu theo dõi: TLB % và CSB % qua các thời kỳ ủiều tra

=> Ảnh hưởng của thời vụ trồng: Nghiên cứu trên 2 thời vụ: chính vụ và vụ

muộn)

- Công thức 1: Vụ chính: Gieo cuối tháng 9 - 10, trồng giữa tháng 10

đến hết tháng 11, thu hoạch vào tháng 1 - 2 năm sau

- Công thức 2: Vụ muộn: Gieo tháng 11, trồng vào giữa tháng 12 để thu hoạch vào tháng 2 - 3 năm sau

- Điều tra mức độ phát sinh phát triển của bệnh

3.3.3 Phương pháp nghiên cứu bệnh nấm hại rau trong phòng thí nghiệm

3.3.3.1 Phân ly nuôi cấy nấm gây bệnh trên môi trường nhân tạo

Phương pháp để ẩm

Sau khi điều tra thu thập được mẫu bệnh (gốc, thân, lá) ngoài đồng ruộng, chúng tôi chọn mẫu có triệu chứng bệnh điển hình, rửa sạch, cắt thành mẫu thích hợp để trong hộp Petri có lót giấy ẩm, để ở nhiệt độ thích hợp sau 2

- 3 ngày có độ ẩm thường xuyên, đem kiểm tra dưới kính hiển vi để xác định tác nhân gây bệnh

3.3.3.2 Phương pháp chế tạo môi trường

Trong quá trình nghiên cứu chúng tôi đ8 sử dụng các loại môi trường nhân tạo PGA, PCA, CLA, WA

* Môi trường WA dùng để phân lập và nuôi cấy nấm

- Thành phần 1lít môi trường gồm có:

Agar : 20g nước cất : 1000ml

- Điều chế

Đun xôi nước cất sau đó cho Agar vào quấy đều cho tan hết rồi đổ vào bình tam giác sạch, bịt kín miệng bằng giấy bạc Cho môi trường vào hấp khử trùng trong nồi hấp ở nhiệt độ 121o C, 1,5 atm trong khoảng 30 phút Để nguội

đến 550 C rồi đổ ra các đĩa Petri (đĩa đ8 được khử trùng trong tủ sấy ở nhiệt độ cao 180oC trong 3 giờ)

* Môi trường PGA (Potato-Glucose-Agar)

- Thành phần 1 lít môi trường gồm có:

Agar : 20g Khoai tây : 200g

Đường Glucose : 20g Nước cất : 1000ml

- Điều chế

Chọn củ khoai tây không bị bệnh, gọt sạch vỏ, rửa sạch, cắt nhỏ, cho vào nồi và đổ 1000ml nước cất Đun cho đến sôi, để sôi 30 phút sau đó gạn lấy phần nước trong thêm nước cất cho đủ 1000ml, tiếp tục đun sôi, cho đường và agar vào khuấy đều, vừa cho vừa khuấy để tránh tạo hòn, khuấy cho đến khi môi trường lăn tăn sôi thì cho vào bình tam giác, hấp khử trùng môi trường ở

121 0 C, 1,5 atm trong thời gian 30 phút, sau khi hấp khử trùng môi trường, đổ môi trường ra đĩa petri (đ8 được khử trùng)

* Môi trường CLA

CLA là môi trường giá thể tự nhiên (Fisher et al 1982) được chuẩn bị bằng cách để các miếng lá cẩm chướng tiệt trùng (khoảng 1 mẩu cho 2ml thạch) trong một đĩa petri và sau đó đổ WA 2% đ8 tiệt trùng vào

Các miếng là cẩm chướng được chuẩn bị từ lá tươi không có dư lượng thuốc trừ nấm hoặc thuốc trừ sâu Ngay sau khi thu thập, lá được cắt thành những mẩu dài 5 - 8mm và sấy khô trong tủ sấy có thông gió ở khoảng 700C trong 3 - 4 giờ cho đến khi lá giòn, có thể làm khô trong lò vi sóng Những miếng lá khô được gói trong giấy nhôm hoặc hộp nhựa polycarbonate và khử trùng bằng phóng xạ gamma (25 kilograys) Các miếng lá đ8 được khử trùng

có thể dự trữ ở 2 - 50C tới 12 tháng trước khi dùng

3.3.3.3 Phương pháp phân lập nấm

- Mẫu bệnh điển hình ngoài đồng ruộng được phân lập và nuôi cấy trên các môi trường nhân tạo trong phòng thí nghiệm để thu nguồn nấm bệnh thuần khiết (Isolate) làm vật liệu nghiên cứu

- Cách phân lập nấm gây bệnh

+ Mẫu bệnh phân lập lấy từ các vết trên lá (thân, gốc) có triệu chứng

điển hình còn tươi mới đưa về phòng thí nghiệm, rửa sạch đất bụi bằng nước máy Dùng dao đ8 khử trùng cắt (0.2 - 0.3 mm) miếng cắt có phần mô khỏe và mô bệnh, sau đó khử trùng trong dung dịch CaOCl2 trong 1 phút tiếp tục rửa sạch bằng nước cất 2 đến 3 lần, rồi thấm khô bằng giấy lọc vô trùng Dùng

que cấy khử trùng (hơ trên ngọn lửa ngọn lửa đèn cồn) cấy mô lên môi trường nhân tạo Toàn bộ quá trình phân lập được thực hiện trong điều kiện vô trùng

và cách ly ở buồng cấy (khi phân lập phải khử trùng que cấy và hé mở đĩa petri trên ngọn lửa đèn cồn)

Sau khi nấm mọc, tiến hành cấy truyền sang các ống nghiệm khác đến khi thu được nguồn nấm thuần khiết (isolate)

3.4 Nghiên cứu, xác định các loài nấm gây bệnh

3.4.1 ảnh hưởng của các môi trường nuôi cấy khác nhau đến sự phát triển của nấm hại cải bắp

- Sử dụng các nguồn nấm thuần khiết (isolate) Cấy nấm vào giữa hộp petri (đường kính lỗ đục 5 mm) trên các môi trường PGA, PCA, CLA, WA Mỗi môi trường có 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại có 3 hộp petri

Chỉ tiêu theo dõi: Quan sát hình thái, màu sắc tản nấm, đo đường kính tản nấm (mm)

Sau khi thu được nguồn nấm thuần, chúng tôi tiến hành giám định nấm gây bệnh theo quy tắc Koch: lấy nguồn nấm cấy được trên các đĩa petri nhân sinh khối nấm bệnh trên môi trường trấu cám ẩm (đ8 được khử trùng) đem trộn lẫn với đất đ8 được khử trùng, gây sát thương vùng cổ rễ hoặc lá cây khoẻ

và trồng vào hỗn hợp môi trường trên

Từ vết bệnh nhân tạo đó, lại đem phân ly theo các bước như trên để kiểm tra xem nấm thu được đó có phải là nấm lây nhân tạo ban đầu không Đồng thời chúng tôi tiến hành khêu sợi nấm, bào tử được cấy trên môi trường nhân tạo để quan sát hình thái của sợi nấm, cành bào tử và bào tử phân sinh dưới kính hiển vi quang học

Thí nghiệm được bố trí gồm 3 công thức và lây ở các vị trí lá và cổ rễ

CT 1: Có sát thương

CT 2: Không sát thương

CT 3: Đối chứng

Mỗi công thức tiến hành trên 100 lá (lây trên lá), 30 cây (lây trên cổ rễ) mỗi cây lây 20 vết, mỗi công thức nhắc lại 3 lần Theo dõi ngày phát bệnh và tính tỷ lệ bệnh (%)

3.4.2 Khảo sát khả năng phòng trừ nấm Sclerotinia Sclerotiorum, Rhizoctonia solani bằng chế phẩm sinh học nấm đối kháng Trichoderma viride

3.4.2.1 Khảo sát khả năng phòng trừ nấm R solani và S sclerotiorum bằng chế phẩm sinh học nấm đối kháng T viride trên môi trường nhân tạo

Thí nghiệm gồm 4 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần nhắc lại 3 hộp petri

+ Công thức 1: T.v cấy trước nấm gây bệnh 24h

+ Công thức 2: T.v cấy sau nấm gây bệnh 24h

+ Công thức 3: T.v cấy đồng thời với nấm gây bệnh

kiện chậu vại

- Thí nghiệm phòng trừ bệnh lở cổ rễ cải bắp trong điều kiện chậu vại (trên nền đất phù sa đV khử trùng)

Thí nghiệm gồm 4 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần,

+ Công thức 1: Nhúng rễ cây con trong dung dịch nấm R solani trong

10 phút rồi đem trồng

+ Công thức 2: Nhúng rễ cây con trong dung dịch nấm T viride (10 phút) đem trồng, sau 2 ngày xử lý nấm R solani

+ Công thức 3: Nhúng rễ cây con trong dung dịch nấm T viride và nấm

R solani (10 phút) rồi đem trồng

+ Công thức 4: Nhúng rễ cây con trong dung dịch nấm R solani (10 phút) đem trồng, sau 2 ngày xử lý T viride

Chỉ tiêu theo dõi: Tính TLB % ở mỗi công thức, đánh giá hiệu lực phòng trừ

bệnh của nấm đối kháng T viride

- Thí nghiệm phòng trừ bệnh thối hạch cải bắp trong điều kiện chậu vại (trên nền đất phù sa đV khử trùng)

Thí nghiệm gồm 4 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần,

+ Công thức 1: Nhúng rễ cây con trong dung dịch nấm S sclerotiorum

trong 10 phút rồi đem trồng

+ Công thức 2: Nhúng rễ cây con trong dung dịch nấm T viride (10 phút) đem trồng, sau 2 ngày xử lý nấm S sclerotiorum

+ Công thức 3: Nhúng rễ cây con trong dung dịch nấm T viride và nấm

S sclerotiorum (10 phút) rồi đem trồng

+ Công thức 4: Nhúng rễ cây con trong dung dịch nấm S sclerotiorum (10 phút) đem trồng, sau 2 ngày xử lý T viride

Chỉ tiêu theo dõi: Tính TLB % ở mỗi công thức, đánh giá hiệu lực

phòng trừ bệnh của nấm đối kháng T viride

3.5 Các chỉ tiêu theo dõi